JPS6157597A - ムラミルペプチド活性エステル誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明はすぐれた抗腫賜作用を有する内戦人（１）（式
中、Ｒは水素スル炭素数２〜１ｏの脂肪酸残基ｔ″、　
Ａｃｙｌは炭素数２〜６の脂肪酸残基を、Ｘにアラニン
、Ｎ−メチルアラニン又はバリ／残基を、ｎは１〜６の
整ａを、Ｒ２に活性エステル残基を、Ｒ）：を炭素数１
〜１０の脂肪酸残基ｋｉｃ味する。）で示される化合物
に関する。上記本発明化合物の特徴である活性エステル
基、即ち、＋　ＣＯＲ２としてはｔ換フェニルエステル
基、７’Ｃとえはパラニド０フェニルエステル基、　　
２．４−　ジニトロ７エ二ルエステル！、　　２，４．
５−　ト９クロロフェニルエステル基、はンタクロ党フ
ェニルエステル基、ヘンタフルオロフェニルエステ＃基
、フェニルチオールエステル基等、又Ｎ−ヒドロキシア
ミン系エステル基、たとえばＮ−ヒドロキシサクシンイ
、ミドエステル基、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾ−ル
エステル基、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−４３
−ジカルボキシイミドエステル基、Ｎ−ヒドロキシ７タ
ルイミドエステル基、Ｎ−ヒドロキシモルホリンエステ
ル基、Ｎ−ヒト９０キシビはリジンエステル基環、又二
価官能性エステル基、たとえば２−ピリジルチオールエ
ステル基、２−ピリジルニス誉ル基、３−ピリジルエス
テル基。

８−キノリルエステル基、２−ヒドロキシフェニルエス
テル基等が挙げられる。

又脂肪酸残基とは脂肪族カルボ／酸のカルボキシル基よ
Ｊ　−ＯＨｔ−除いた基を意味し、その例としてはホル
ミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、バレリル、
ヘキサノイル、ヘプタ／イル、オクタノイル、ノナノイ
ル、デカノイル、インブチリル、インバレリル、ピバロ
イル、アクリロイル。

プロピオロイル、メタクリロイル、クロトノイル。

インクロトノイル等があげられる。

〈従来の技術〉 生体の免疫応答能全増強し抗腫瘍効果を期待する研究の
発展に伴ない、近年更に細分化された免疫学的抗腫瘍効
果の研究がなされるようになって来た。

即ち生体の免疫応答能の増強としては、体液性免疫、細
胞性免疫、マクａ７アージ等の増強が考えられ、このう
ち、細胞性免疫の増強については、特にエフェクターＴ
細Ｗ＜以下ＥＴ細胞と略称す。）を増強する試みが、検
討さｎている。

ＥＴ細胞が生体に誘導された場合、この細胞は生体中に
生起し九腫瘍細胞と特異的に反応し、該腫瘍細胞を破壊
するとされることから免疫学的抗腫瘍効果の研究では極
めて注目されるものでおる。

本発明者等は、生体中におけるＥＴ細胞の生成機構ｔ−
概略下記の如く考察した。

生体の正常細胞が腫瘍化した場合り腫瘍細胞には正常細
胞に含有される自己成分とは異なる新たな抗原（これｔ
一層温関連抗原と呼ぶ、）が生成される。一方、腫瘍細
胞が存在する生体をハプテン修飾自己細胞で免疫し九場
合、生体中ではハプテン反応性ヘルパーＴｍ廁が誘導さ
れる。この誘導され光ハプテン反応性へルー’　−Ｔ　
ａＩ胞は、腫瘍細胞と特異的反応性を有するＥＴ細胞の
生成を増強する。このＥＴ、１（ｌｌｉは２ＦｆＬ瘍関
連抗原を認識し、反応してＢ搗細胞を破壊する。

なお、ハプテンとはそのもの・単独では免疫原性がない
が、自己血清蛋白や自己細胞表面に結合させ免疫すると
強力に生体内でＴ細胞活性ｔ−ｐ導するものである。

以上の４！！講に基づく腫瘍特異免疫活性を呈するハプ
テンとしての役割をにない９る物質として、本発明者等
はこれまでにトリニトロフェノールを見い出し、前述の
反応機構を証明して１！九（ＪＪｒｐ−Ｍｅｄ、　１４
９　１８５−１９９（１９７９）及びＪ、工ｍｍｕｎｏ
ｌ。

１２４　８６３−８６９（１９８０））、Ｌかしながら
、本免疫ＩＲ法を人の腫瘍に適用するに際しては、封任
は毒性面等から泗足しうるものでは危い。

従って、本発明者等は腫瘍細胞と混合しただけでその表
面に容易に結合し、低毒性で多シ、腫瘍特異免疫を増強
しうる、臨床的に適用可能なハプテンとしての適性物質
の探索を試みた結果、前記式（Ｉ）で示されるムラミル
イプチドの活性エステル誘導体が目的にかなうことを見
い出し本発明を完成し上。

なお、従来よ夕結核菌は動物のみならず人にも非常に強
い免疫原性を有することが、ＢＣＧ　　ワクチン接種を
受けた人にツベルクリン蛋白や結核菌関連物質を皮下注
封するとツベルクリン型過敏症が惹起されることなどか
ら知られている。

従って、本発明化合物が、ＢＣＧ　と共通抗原性を有す
る碌らば、新たに本願発明化合物自体によるハプテン反
応比ヘルパーＴ細胞を誘導する工程を省略し穴かたちで
の１ｍ瘍特異免疫活性が、ツベルクリン反応自然陽転者
やＢＣＧ　ワクチン接種を受は九人には嬰待しえ、この
ことは臨床的に有利なものである。

かかる観点で、本願発明化合物とＢＣＧ　との共通抗原
性について副ぺた結果９両者が共通抗原性を有すること
ｔ−確認し、本発明化合物のより一層とができる。

（式中、Ｒ□、Ｒ２，Ｒ３，ＡＣＹＩ　、　Ｘ及びｎは
前記と同じ、２　即ち、式（１）の化合物と式（至）で
示される化合物とを一般にペプチド合成化学で繁用され
る縮合方法、例えば混合酸無水物法及びカルボジイミド
法、好ましくはカルボジイミド法を採用して反応させる
ことによシ式（Ｉ）の化合物ｔ−製造することができる
。カルボジイミド法を採用した場合、反応は通常ジシク
ロへキシルカルボジイミドの存在下、例えばテトラヒト
四７ラン、クロロホルム、Ｍ、Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド、ピリジン等の単独又は混合溶媒中で約θ℃から約冊
℃、好ま“しくに約２０〜約４０℃でわ１時間から約２
日間行なわれる。

反応終了後、反応液をペプチド化学で繁用さｔ５処理手
段、例えば抽出、転溶、再沈澱、再結晶及びクロマトグ
ラフィー等のｆ＃製手法を利用することによ９本発明の
式（１）の化合物を得ることができる。

本発明化合物の製造に使用される式（ｎ）の原料化合物
は式 （式中、Ｒ３，、Ｘ及びｎは前記と同じｎ）で示される
化合物ＫＮ−アシルムラミン酸な反応させるか或いは式 （１式中、Ｒ１，、Ａｃ　ｙｌ　＝　Ｘ及びｎは前記と
同じ。）で示される化合物と式Ｒ−ＯＨ（至）　（式中
、Ｒ３は前記と同じ。　）で示される化合物と全縮合反
応させることによって製造することができる。

〈実施例〉 以下実施例を挙げて説明する。

実施例１ （１）　　Ｎ−（第三級ブチルオキシカルボニル−アラ
ニル−Ｄ−４ソグルタミ二ル）−Ｎ　−ヘンシルオキシ
カルボニル−リシンベンジルエステル４．００１を酢酸
４Ｑ＋＋＋Ｊに溶解し、パラジウム炭素の存在下、水素
気流中室温にて加水分解を行なう。

触媒ｔ−戸去し、涙液ｔ−濃縮する。残留物にエーテル
を加え析出する粉末をメタノール−エーテルから再結晶
することによ！ＯＮ　−（第三級ブチルオキシカルボニ
ル−アラニル−Ｄ−イングルタミニル）−リジン２．３
７１を得る。

（２）得られた上記化合物１．５０　ＪをＮ、Ｎ−ジメ
チルホルムアミ）’１２ｍｊに懸濁し、水冷攪拌下、酢
ｆＲ（Ｄ　Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２゜３
−ジカルボキシイミド活性エステル０．８９．９゜Ｎ−
メチルモルホリン０．４０１ｄを加える。３０分後、室
温に戻し一晩反応する。反応液を濃縮し、残留物にエー
テルを加え、析出する粉末を戸数する。次いでメタノー
ル−エーテルから再結晶することによ！！ＩＩＮ　−（
第三級ブチルオキシカルボニル−アラニル−Ｄ−イング
ルタミニル）−Ｎ　ｔ−アセチル−リジン１．６４ｇを
得る。融点１５４〜１５５Ｃ（分解）。〔α）Ｄ−１３
，１゜（ＣＯ，Ｓ、メタノール）。

計算値　Ｃ４９，５３，Ｒ７，７９，Ｎ１３．７５分析
値　Ｃ４９，４４，Ｒ７，４９，Ｎ１３．７３（３）１
−α−〇−ベンジルー４．６−０−ベンジリデン−Ｎ−
７セチルムラミン酸１．４１！ｉ及びＮ−ヒドロキシコ
ハク酸イミ１０．３８．Ｆをテトラヒドロ７ランに溶解
し、水冷攪拌下ジシクロへキシルカルボジイミド０．６
８！ｉを加える。３０分後室温に戻し、５時間攪拌反応
する。析出したジシクロヘキシル尿素を戸去する。涙液
を減圧濃縮し得られた残留物をＮ、Ｎ−ジメチルホルム
アミｒに溶解し、１−α−Ｏ−ベンジルー４゜６−０−
−、？ンジリデンーＮ−アセチルムラミン酸のＮ−ヒド
ロキシコハク酸イミドエステルのＮ、Ｎ〜ジメチルホル
ムアミド溶液を調製する。

工程（２）で得られたＮ　−（第三級ブチルオキシカル
ボニル−アラニル−Ｄ−イングルタミニル）−Ｎ　−ア
セチル−リジン１．６０．９をジクロルメタン３ゴに懸
濁し、水冷攪拌下トリフルオロ酢酸３Ｍを加える。５分
後、室温に戻し１時間反応する。反応液を減圧濃縮し、
残留物に水冷下５Ｎ塩酸−ジオキサン溶液０．６６ｍＡ
’を含むエーテル溶液３０ゴを加える。析出した粉末を
戸数り、、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド２０ゴに溶解
する。水冷攪拌下Ｎ−メチルモルホリン０，３３Ｍを加
える。この溶液に上記１−α−〇−ベンジルー４．６−
〇−ベンジリデン−Ｎ−アセチルムラミン酸のＮ−ヒド
ロキシコハク酸イミドエステルのＮ、Ｎ−ジメチルホル
ムアミド溶液及びＮ−メチルモルホリン０．３３ＩｒＬ
ｌを加える。３０分後、室温に戻し１晩反応する。反応
液を濃縮し残留物に水を加え、析出する粉末を戸数する
。

粉末を５％クエン酸水溶液及び水で洗浄後、Ｎ。

Ｎ−ジメチルホルムアミド−エーテルから再結晶するこ
とによ５Ｎα−（１−α−０−ベンジル−４，６−０−
に／ジリデンーＮ−アセチルムラミルーア２ニル−Ｄ−
イングルタミニル＞−Ｎ　ｅ−７セチルーリジン２．０
８．Ｐを得る。

融点２３５〜２３６Ｃ（分解）。〔α〕っ＋５９．７゜
（Ｃ０，２，Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド）。

元素分析値　Ｃ４□Ｈ５６Ｎ６０１３・１３／４Ｈ２０
として計算値　Ｃ５６，４４，Ｈ６，８７，Ｈ９，６３
分析値　Ｃ５６，４７，Ｈ６，６６、Ｈ９，３３（４）
上記化合物１．５０ＩＩを酢酸４０ゴに溶解し、パラジ
クム炭素存在下、水素気流中室温にて加水素分解を行な
う。触媒を戸去し、Ｆ液を濃縮する。残留物にエーテル
を加え析出する粉末を戸数する。次いでシリカゲルクロ
マトグラフィーに付シ、クロロホルム−メタノール−酢
酸（４：１：０．１）で溶出し精製する。目的画分を濃
縮し、残留物の水２０１１１７溶液を強酸性イオン交換
樹脂（Ｈ型）のカラムに通し、゛通液を凍結乾燥するこ
とによ、９Ｎ　−（Ｎ−アセチルムラミル−アラニル−
Ｄ−イングルタミニル）−Ｎ−アセチル−リジン０．９
６！１を得る。融点１４０〜１４２ｔＺ’（分解）。〔
α〕っ＋１１．６゜（００，２，水、１日後）。

元素分析値Ｃ２□Ｈ４６Ｎ６０１３　”　１　”／２Ｈ
２０トシテ計算値　Ｃ４７，０２，Ｈ７，１６、Ｎｌ　
２．１８分析値　Ｃ４６，８６，Ｈ６，９８，Ｎ１２．
１４（５）上記化合物０．２０Ｊ及び３−ヒドロキシピ
リジン３４ｍ９をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド１ｄに
溶解する。氷冷侃押下ジシクロへキシルカルホシイミド
ｒ　ｓｍｐを加える。３０分後室温にもどし１晩反応す
る。析出したＮ、Ｎ−ジシクロヘキシル尿素を戸去し、
Ｆ液を濃縮する。残留物にエーテルを加え、得られる粉
末をＮ、Ｎ−ジメチルホルムアミド−エーテルから再結
晶し、Ｎａ−（Ｎ−アセチルムラミル−アラニル−Ｄ−
イングルタミニル）−Ｎ−アセチル−リジン３−ピリジ
ルエステル０．１６．Ｆを得る。

ＩＲ（臭化カリウム）：　３２９０，２９４０，１７６
０゜１６４０．１５４５ｃｍ　　。

融点１４９〜１５２Ｃ（分解）。

〔α〕＋３４．５°（ｃｇ、４．Ｎ、Ｎ−ジメチルホル
ムアミド）。

元素分析値Ｃ３□Ｈ４９Ｎ７０１３・２１／４Ｈ２０と
して計算値　０４９．２６．Ｈ６，９１，Ｎ１２．５６
分析値　Ｃ４９，５０，Ｈ６，６７、Ｎ１２．３０実施
例２ （１１Ｎ　−（第三級ブチルオキシカルボニル−アラニ
ル−Ｄ　−イングルタミニル）　−！ｊ　シン１．５０
１及び酪酸のＮ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン、２，
３−ジカルボキシイミド活性エステル１．０１１を実施
例１の工程（２）と同様に反応させることによりＮ−（
第三級ブチルオキシカルボニル−アラニル−Ｄ−イソグ
ルタミニル）−Ｎ　−ブチ、リルーリジ／Ｌ５７１を得
る。融点８４〜８７Ｃ（分解）。〔α）Ｄ−１２，２°
（ｃ　０．９　＋メタノール）。

元素分析値Ｃ２３Ｈ４□Ｎ５０８・１／２　Ｈ２０とし
て計算値　Ｃ５２，６６、Ｈ８，０７，Ｎ１３．３５分
析値　Ｃ５２，９０，Ｈ８，１１，Ｎ１３．０９（２）
上記化合物１．５０１１を実施例１の工程（３）と同様
に反応させることによりＮａ−（１−α−Ｑ−ベンジル
ー４．６−０−ベンジリデン−Ｎ−アセチルムラミル−
アシエル−Ｄ−イソグルタミニε ル）　−Ｎ　　−、／チリルーリジン２．２５１ｆ得る
。

融点２２７〜２２８Ｇ（分解）。〔α〕。＋５６．３（
ｃｏ、２．Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド）。

元素分析値Ｃ４３Ｈ，。Ｎ６０□３−Ｈ２０（！：　Ｌ
テ計算値　Ｃ５８，２２，Ｈ７，０４，Ｈ９，４７分析
値　Ｃ５７，９８，Ｈ６，８９，Ｈ９，４３（３）上記
化合物２．１０１１を実施例１の工程（４）と同様に反
応させることによｆｉＮ　−（Ｎ−７セテルムラミルー
７ラニルーＤ−イングルタミニル）−Ｎ　−ブチリル−
リジン１．２６Ｊ’を得る。

融点１４２〜１４４’Ｃ（分解）。〔α］　　＋１５．
８゜（Ｃ！０．７．水、２日後）。

元素分析値Ｃ２，Ｈｓ　０Ｎ５０ｊ　３・１１／２　Ｈ
２０計算値　Ｃ４８，５３，Ｈ７，４４，Ｎ１１．７１
分析値　Ｃ４８，８１，Ｈ７，１７，Ｎ１１．８１（４
）上記化合物０．２１’を実施例１の工程（５）と同様
に反応させることによｊＯＮ　−（Ｎ−アセチルムラミ
ル−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ−ブチリル
−リジン３−ピリジルエステル０．１７ｆｉを得る。

ＩＲ（臭化カリシＡ）：　３３００，２９４５，１７６
０゜１６５０、１５４０ｃｒＩＬ−１ 融点１１７〜１２０Ｃ（分解）。〔α：ｌｏ＋３８．５
゜（００，４，Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド）。

元素分析値Ｃ３４Ｈ５３Ｎ７０□３・３Ｈ２０として計
算値　Ｇ４９．６９．Ｈ７，２４，Ｎ１１．９３分析値
　Ｃ４９，６８，Ｈ７，２０，Ｎ１１．９８実施例３ （１）　　Ｎ　−＜ＷＥ三級ブチルオキシカルボニル−
アラニル−Ｄ−イソグルタミニル）−１ｊシン１．１０
１及びヘキサン酸のＮ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン
−２，３−ジカルボキシイミド活性エステル０．６９．
９を実施例１の工程（２）と同様に反応させることによ
シＮ　−（第三級メチルオキシカルボ−ルーア２ニル−
Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ　−ヘキサノイル−リジン
Ｌ１７１を得る。

融点１１６〜１１８Ｃ（分解）。〔α〕Ｄ−１２，１゜
（ａｘ−ｉｓメタノール）。

元素分析値０２５Ｈ４５Ｎ５０ｇ・１／２Ｈ２０として
計算値　Ｃ５４，３３，Ｈ８，３９，Ｎ１２．６７分析
値　０５４．５１．Ｈ８，２６，Ｎ１２．８２（２）上
記化合物１．００！ｌを実施例１の工程（３）と同様に
反応させることによ、９Ｎ　−（ｔ−α−０−インジル
−４，６−０−ベンジリデン−Ｎ−アセチルム２ミルー
ア之ニルーＤ−イングルタミニル）−Ｎ　−ヘキサノイ
ル−リジン１．５３．！Ｆを得る。

融点２２１〜２２２Ｃ（分解）。〔α几　＋５６．１゜
（００，２＊”　ｒ　Ｎ−ジメチルホルムアミド）。

元素分析値Ｃ４５Ｈ６４Ｎ６０□３・１１／２Ｈ２０と
して計算値　Ｃ５８，４９，Ｈ７，３０，Ｈ９，０９分
析値　ａｓ　８．４７．　Ｈ７，１２，Ｈ９，０５（３
）上記化合物１．３０．９を実施例１の工程（４）と同
様に反応させることによ＃）Ｎ　−（Ｎ−アセチルムラ
ミル−アラニル−Ｄ−イングルタミニル）−Ｎ　　−ヘ
キサノイル−リジン０．５ｆｌｌを得る。

融点１４４〜１４６Ｃ（分解）。〔α）　　＋１４．６
゜Ｃｃｏ、ｒ、水、２日後）。

元素分析値Ｃ３１Ｈ５４Ｎ６０１３　・Ｈ２ｏトＬテ計
算値　ｃｓｏ、ｓａ、Ｈ７，６６、Ｎ１１．４１分析値
　Ｃ５０，６１，Ｈ７，４９，Ｎ１１．１９（４）上記
化合物０．１’５Ｉｔ−実施例１の工程（５）と同様に
反応させることＫよｆｉＮ”−（Ｎ−アセチルム２ミル
ー７２ニルーＤ−イングルタミニル）−Ｎ　−ヘキサノ
イル−リシン３−ピリジルエステル０．１１１金得る。

ＩＲ（Ａ死力＋Ｊｒ）ム）：　３２９５．２９２５．１
７６０゜１６４０．１５４０（Ｘ−” ８点１４６〜１４８ｃｌＮ）。（α、ｌ　２５＋３３．
７゜ＣＯｏ、４．Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミど）。

元素分析値Ｃ３６Ｈ５７Ｎ７ｏ１３・２Ｈ２０トシテ計
算値　Ｃ５１，９７，Ｈ７，３９，Ｎ１１．７８分析値
　Ｃ５２，２２，Ｈ７，１３，Ｎ１１．８０実施例４ Ｎ　−（Ｎ−アセチルム２ミルーアラニルーＤ−イソグ
ルタミニル）−Ｎ　Ｍ−オクタノイル−リジン０．１５
．Ｆを実施例１の工程（５）と同様に反応させることに
よりＮ　−（Ｎ−アセチルムラミル−アラニル−Ｄ−イ
ノグルタミニル）−Ｎ　−オクタノイル−リジン３−ピ
リジルエステル０．１３．Ｆを得る。

工Ｒ（Ａ化カリ’）ム）：　３３００，２９２５，１７
６０゜１６４０、１５４０ＣＩｒＬ。

融点１１５〜１１８Ｃ（分解）。

〔α）、＋３７．６°（Ｃ！０．４．Ｎ、Ｎ−ジメチル
ホルムアミ　ド）。

元’ｌｌ析値Ｃ３８Ｈ，Ｎ７０１３°２Ｈ２ｏとして計
算値　Ｇ５３．０７．Ｈ７，６１，Ｎ１１．４０分析値
　Ｃ５２，０８，Ｈ７，４７，Ｎ１１．５６実施例５ α Ｎ　−（Ｎ−アセチルムラミル−アラニル−Ｄ−イング
ルタミニル）−Ｎ　−ブチリル−リジン５０グ及び２−
メルカプトピリジン８．９りを実施１’ｌｌｌの工程（
５）と同様に反応させることによ、９Ｎ　−（Ｎ−アセ
チルムラミル−アラニル−Ｄ−イングルタミニル）−Ｎ
　−ブチリル−リジン２−ピリジルチオールエステル４
５■をｉる。

ＩＲ（臭化カリウム）：　３３５０，２９２５，１８２
０゜１６５０．１５４０ｃｒＩＬ　。

融点１４２〜１４４Ｇ（分解）。

〔α〕っ＋３９．０°（００，４，Ｎ、Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド）。

元素分析値Ｃ３４Ｈ５３Ｎ７０□２Ｓ・１１／２Ｈ２０
として計算値　Ｃ５０，３５，Ｈ６，９６，Ｎ１２．０
９分析値　Ｃ５０，５２，Ｈ７，１６，Ｎ１１．９２実
施例６ （１）　　Ｎ　−（Ｎ−７セチルムラミルーバリルーＤ
−イングルタミニル）−リジン０．１Ｅｌ及び酢酸のＮ
−ヒドロキシ−５−ノルボルネンｚ、３−シカルボキシ
イミビ活性エステル６３ｍ９を実施例１の工程（２）と
同様に反応させることにより　Ｎ（Ｅ−（Ｎ−アセチル
ムラミル−バリル−Ｄ−イングルタミニル）−Ｎ　−ア
七チル−リジン０．１３！１を得る。

融点１３５〜１３８Ｃ（分解）。

〔α〕っ　＋１４．５°　（ｃｏ、ｓ、水、１日後）・
。

元素分析値Ｃ２９Ｈ５ＯＮ６ｏ１３・２”／２Ｈ２０と
して計算値　Ｃ４７，３４，Ｈ７，５３，Ｎ１１．４２
分析値　Ｃ４７，５３，Ｈ７，３３，Ｎ１１．４６（２
）上記化合物７３１ｎ９を実施例１の工程（５）と同様
に反応させることＫよｆｉＮ　−（Ｎ−アセチシム２ミ
ルーバリルーＤ−イングルタミニル＞　−Ｎ　ｇ−アセ
チル−リジン３−ピリジルエステル６６ｍ２を得る。

ＩＲ（臭化カリ７ム）：　３２９５，２９３０，１７６
０゜１６５０．１５４０ｃ＋ｙｔ　　。

〔α〕っ＋３４．５°　（００，４，Ｎ、Ｎ−ジメチル
ホルムアミド）。

元素分析値Ｃ３４Ｈ５３Ｎ７０１３・２”／２Ｈ２０と
して計算値　ｃｓｏ、ｚ４．Ｈ７，１９，Ｎ１２．０６
分析値　０５０．２４．Ｈ７，１６，Ｎ１２．１２実施
例７ （１）　　Ｎ　−（Ｎ−アセチルムラミル−Ｎ−メチル
ア２ニル−Ｄ−イングルタミニル）−リジン０．９０Ｉ
及び酪酸のＮ−ヒト９０キシ−５−ノルボルネン−２，
３−ジカルボキシイミド活性エステル０．４２！ｉを実
施例１の工程（２）と同様に反応させることによシＮ　
　−（Ｎ−７セテルムラミルーＮ−メチルアラニル−〇
−イングルタミニル＞　＋　Ｎ　ｅ−ブチル−リジン０
．７５１１を得る。

融点１１１〜１１３Ｃ（分解）。

〔α）２５＋４．３°（００，５，水、１日後）。

元素分析値Ｃ３０Ｈ５２Ｎ６０１Ｂ”　Ｈ２０として計
算値　Ｃ４９，８５，Ｈ７，５３，Ｎｉｌ、６３分析値
　Ｃ４９，７８，Ｈ７，４８，Ｎ１１．８４（２）上記
化合物０．４１１ｔ−実施例１の工程（５）と同様に反
応させることＫよｊ５Ｎ　−（Ｎ−アセチルムラミル−
Ｎ−メチル７ラニルーＤ−イソダルタミ二ル）−Ｎ　−
ブチリル−リジン３−ピリジルエステル０．３６ＪＦを
得る。

ＩＲ（Ａ化１ｊ）ム）：　３３００．２９２５．１７６
０゜１６５０．１５４０ｃｎ　　。

〔α）、＋１０．５°　（ｃｏ、４．Ｎ、Ｎ−ジメチル
ホルムアミド）。

元ｇｆｊｌｆＴ値Ｃ３５Ｈ５５Ｎ７ｏｌ　ｓ”　”　”
／２ＨｚＯトＬテ計算値　Ｃ５１，９８，Ｈ７，１８，
Ｎ１２．１３分析値　Ｃ５１，９４，Ｈ７，１８，Ｎ１
２．００実施例８ （１）　　Ｎａ−（１−Ｕ−０−ペン）ルーＮ−７−ｂ
：チルム２ミルーアラニルーＤ−イングルタミニル）−
Ｎ　’　、＋　ヘア　）ルオキシカルボニルーリジンー
ベンジルエステル６．６５１ｋＮ、Ｎ−）ｉｆルホルム
アミｌ−４０ゴに溶解する。氷冷攪拌下ギ酸０．６３，
９．Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノピリジン０．８７Ｊ、１−
ヒドロキシベンゾトリアゾール０．９６９及びジシクロ
へキシルカルボジイミド１．４７１！を加える。３０分
後、室温に戻し一晩攪拌反応する。析出したシフクロヘ
キシル尿素を戸去、Ｆ液を減圧濃縮し、残留物に水を加
え析出する、粉末を戸数する。粉末を５チクエン酸溶液
、水、５％炭酸水素ナトリウム溶液及び水でぶ次洗浄後
、シリカゲルクロマトグラフィーに付す。クロロホルム
−メタノール（９：１）で溶出する目的画分を濃縮しク
ロロホルム−メタノール−エーテルから再結晶すること
によ、９Ｎ　　−（１−α−０−ベンジル−６−０−ブ
チリル−Ｎ−７セチルムラミルーアラニルーＤ−イング
ルタミニル）−Ｎ　−ヘンシルオキシカルボニル−リジ
ンにンジルエステル３．２６　ｐ　を得ル。

融点２１６〜２１８Ｃ（分解）。

〔α）　　＋５３．５°（００，４，メタノール）。

元素分析値Ｃ５□Ｈ６８Ｎ６０□５・１／２Ｈ２０とし
て計算値　Ｇ６０．４０．Ｈ６，８６，Ｎ８．２９分析
値　Ｃ６０，５７，Ｈ６，７５，Ｎ８．３９（２）上記
化合物５．２８．Ｆを酢酸２００ｄに溶解しパラジウム
炭素の存在下、水素気流中、室温にて加水素分解を行な
う。触媒を戸数し、Ｆ液を濃縮する。残留物をセファデ
ックスＬＨ−２０ゲル濾過クロマトに付す。０．２Ｍ酢
酸溶液で溶出し、目的画分を凍結乾燥することによ、ｊ
７Ｎ−（６−０−７’チリル−Ｎ−７セチルムラミルー
アラニルーＤ−イングルタミニル）−リジン２．９５１
１を得る。

融点１２６〜１２８Ｃ（分解）。

〔α〕っ＋２４．６°（００，４，水、１日後）。

元素分析値０２９Ｈ５ＯＮ６０１３・２Ｈ２０！：Ｌテ
計算値　Ｃ４７，９３，Ｈ７，４９，Ｎ１１．５６分析
値　Ｃ４７，９９，Ｈ７，４０，Ｎ１１．２９（３）上
記化合物１．００，９ｔ−Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミ
ド１０．ｄに溶解し、氷冷攪拌下ギ酸のＮ−ヒドロキシ
−５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミドエス
テル０．３６．９及びＮ−メチルモルホリン０．３２ｍ
を加える。３０分後、室温に戻し１晩攪拌する。反応液
を製編し、残留物をシリカゲルクロマトに付す。クロロ
ホルム−メタノール（７：３）で溶出させ、目的画分を
ａ縮しエーテルを加えて析出する粉末を戸数する。粉末
を水に溶解し強酸性イオン交換樹脂（Ｈ型）のカラムに
通す。通液を凍結乾燥しα Ｎ−（６−０−ブチリル−Ｎ−アセチルムラミル−アラ
ニル−Ｄ−イングルメミニル）−Ｎ　−ホルミル−リジ
ンｏ、６６ｙｔ得る。

融点１２３〜１２６Ｃ（分解）。

〔α］　　＋１８．８°　（００，４，メタノール）。

元素分析値Ｃ３ｏＨ５ｏＮ６０□４・３／４Ｈ２０とし
て計算値　Ｃ４９，２１，Ｈ７，０９，Ｎ１１．４８分
析値　Ｃ４９，１２，Ｈ７，０５，Ｎ１１．５５（４）
上記化合物０．４０．９を実施例１の工程（５）と同様
に反応させることによｆｉＮ　−（５−０−ブチリル−
Ｎ−７セチルムラミルーアラニルーＤ−イングルタミニ
ル）−Ｎｇ−ホルミル−リシン３−ピリジルエステル０
．４１．Ｆを得る。

ＩＲ（臭化カリウム）：　３３００，２９２５，１７６
０゜１７３０、１６６０．１５４０ｃｒｒＬ。

〔αへ十２７．８°　（Ｃｏ、５．Ｎ、Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド）。

元Ｘ分析値Ｃ３５Ｈ５３Ｎ７０１４・２Ｈ２０トＬテ計
算値　Ｃｓｏ、ｓａ、Ｈ６，９１，Ｎ１１．７９分析値
　Ｃ５０，７９，Ｈ６，９５，Ｎ１１．９２実施例９ （１）　　Ｎ　−（６−０−ブチリル−Ｎ−７セチルム
ラ２ミル−アラニル−Ｄ−（ングルタミニル）−リジン
０．９０＃及び酪酸のＮ−ヒドロキシ−５−ノルボルネ
ン−２，３−ジカルボキシイミｒ活性エステル０．３９
．９を実施例８の工程（３）と同様に反応させることに
よｐＮ　−（６−０−ブチリル−Ｎ−アセチシムラミル
ーア２ニルーＤ−イングルタミニル）−Ｎ　−ブチリル
リジン０．９０．９を得る。

融点８３〜８６Ｃ０ 〔α〕っ＋１８．５°（ｃｏ、６．水、１日後）。

元素分析値Ｃ３３Ｈ５６Ｎ６０□４・１／２Ｈ２０とし
て計算値　Ｃ５１，４９，Ｎ７．４７．Ｍｌｏ、９２分
析値　Ｃ５１，３８，Ｎ７．１９．Ｎ１０．８３（２）
上記化合物０．４０ｊｌを実施例１の工程（５）と同様
に反応させることによ、９Ｎ　−（６−０−ブチリル−
Ｎ−アセチルムラミル−アラニル−Ｄ−イングルタミニ
ル）−Ｎ　−ブチリル−リジン３−ピリジルエステル０
．４０．９４−得る。

ＩＲ（臭化カリウム）：　３３００，２９２５，１７６
０゜１７３０．１６６０．１５４０ｃｍ　　。

〔α〕。＋２４．６°　（００，５，Ｎ、Ｎ−ジメチル
ホルムアミド）。

元素分析値Ｃ３８Ｈ５９Ｎ７０□４・２Ｈ２０１ｚｌ／
ｚ計算値　Ｇ５２．２２．Ｎ７．２７．Ｎ１１．２２分
析値　Ｃ５２，１０，Ｎ７．０４．Ｎ１１．０５〈発明
の効果〉 以下本発明化合物の生物活性を試験例１−３で詳細に説
明する。

試験例で使用した本発明化合物は下記の通シである。

本発明化合物ＩＮ−（Ｎ−アセチルムラミル−アラニル
−Ｄ−イングルタミニル）−Ｎ　　−アセチル−リシン
３−　ヒ９シルエステル 本発明化合物２Ｎ　−（Ｎ−ア七チルムラミルーア２ニ
ルーＤ−イングルタミニル）−Ｎ　　−ブチリル−リシ
ン３−ピリジルエステル 本発明化合物３Ｎ−（Ｎ−アセチルムラミル−アラニル
−Ｄ−イングルタミニル）−Ｎ　　−ヘキサノイル−リ
ジン３−ピリジルエステル 本発明化合物４Ｎ−（Ｎ−７セテルムラミルーバリルー
Ｄ−イソグルタミニル）−Ｎ　−アセチル−リジン３−
ピリジルエステル 本発明化合物５Ｎ−（Ｎ−アセチルムラミル−Ｎ−メチ
ルアラニルーＤ−イングルタミニル）−Ｎ　−ブチリル
−リジン３−ピリジルエステル本発明化合物６　　Ｎ−
（６−０−ブチリル−Ｎ−アセチルム、９ミルーアンニ
ル−Ｄ−インクルタミニル）−Ｎ　　−ホルミル−リシ
ン３−ピリジルエステル 本発明化合物７　Ｎ“−（６−Ｏ−ブチリル−Ｎ−７セ
チルムラミルーアラニルーＤ−イングルタミニル）−Ｎ
　ｅ−ブチリル−リジン３−ピリジルエステル試験例１ 本発明化合物とＢＯＧとの共通抗原性の確認及びハプテ
ンとしての適性確認 、ＭＤＰ関連ハプテン修飾自己細胞の調製本発明化合物
１の１〜５ｍＭと赤血球を除いたマウスの同系牌細胞ｌ
Ｏ個とを３７Ｃ１２０分間振盪培養し、次いでこの細胞
を５チ牛脂児血清含有培養液ＲＰＭ１１６４０で洗浄し
、Ｎ　−（Ｎ−アセチルムラミル−アシエル−Ｄ−イン
グルタミニル）−Ｎ６−アセチル−リジン修飾同系牌細
胞〔以下、ＭＤＰ−Ｌｙｙ（Ｌ２）修飾同系肺細胞と称
す。〕、即ちＭＤＰ関連ノ・ブテン修飾自己細胞を調製
した。

又同様に本発明化合ｑｈ２〜７で修飾した下記同系牌細
彪を調製した。

本発明化合物２よシ；　ＭＤＰ−Ｌｙｚ　（Ｌ４　）修
飾同系肺細胞 本発明化合物３よシ；　ＭＤＰ−ＬｙＪ？（Ｌ６　）修
飾同系肺細胞 木兄”Ａ　化合物４　Ｊ：　Ｄ　ｐ　ＭＤ　Ｐ　（Ｖ　
）　−Ｌｙ’　（Ｌ２　）修飾同系肺細胞 本発明化合物５よシ；　ＭＤＰ（ＭｇＡｔα）−Ｌｙｚ
（Ｌ４）修飾同系肺細胞 本発明化合物６よシ；　Ｌ４−ＭＤＰ−Ｌｙｙ　（Ｌｌ
　）修飾同系肺細胞 本発明化合物７よ、９；　Ｌ４−ＭＤＰ−Ｌｙｙ（Ｌ４
）修飾同系肺細胞 上記方法で調製されたＭＤＰ関連ハプテ／修飾自己細胞
を刺激細胞として用いた。

Ｏ応答細胞の調製 被験生体の反応性を反映する細胞として応答細胞■及び
同■を下記の如く調製した。即ち、１５０ＲＸ線照射を
行なった後、ＢＭ、１ｍ９を３週間間隔で２回皮下投与
したＧ３Ｈ／ＨｇＮマウスから牌細胞を取シ出し、これ
を応答細胞■とする。又前記免疫をほどこさない未処置
のＣ３Ｈ／ＨｇＮマウスから牌細胞を取シ出し、これを
応答細胞■とする。

、ＢＯＧとの共通抗原性の確認及びハプテンとしての適
性確認 各応答細胞４Ｘ１０５／ウエルと各刺激細胞４×１０５
／クエルとを混合し７アルコ／マイクロカルチヤープレ
ート（３０７２）中３７Ｃで５日間培養する。培養開始
後４日月に培養液中に０．５〜１μＣｉ／ウエルのトリ
チウムチミジンを加える。５日月に細胞を分離し、細胞
中にとシこまれたトリチウムチミジン量を測定した。コ
ントロールである応答細胞■を用いた場合に比べ応答細
胞■を用い。

た場合にトリナウムチミジ／の取込み量が増加すること
は、Ｔ細胞の増殖反応が惹起されたこと、即ち、試験に
供された本発明化合物がＢＣＧと共通抗原性を有しかつ
ハプテンとして適性を有することを意味する。結果を表
ＩＫ示す。

表Ｉ　　ＭＤＰ関連ハプテン修飾同系牌細牌細験例数 例ＯＧ免疫マウスの牌細胞中に本発明化合物で活性化さ
れるヘルパーＴ細胞が存在するか否かの検討 Ｏ試験モデルの調製 （１）ヘルパーＴａｌｌ１！ｌ源ノ調製Ｇ　３　Ｈ／Ｈ
ｇ　ＮマウスにＢＯＧ　１■を３週間間隔で２回皮下投
与し免疫する。免疫マウスの牌細ＪＪＩｌｉｌを分離し
、８５０　ＲＸ線照射を行ないヘルパーＴ細胞源（３，
０Ｘ１０／ウエル）とした。なお、非免疫Ｃ３Ｈ／Ｈｇ
　Ｎ’ｖクスのＷ４細胞を分離し、同じくＸ線照射した
ものをコントロール（３，０Ｘ１０６／ウエル）とした
。

（２）応答細胞（ＥＴ細胞源）の調製 Ｃ３Ｈ／ＨｇＮマウスよシ分離した牌細胞（１，５×１
０６／ウエル）を使用した。

（３）抗原刺激細胞の調製 腫瘍関連抗原のモデルとしてのトリニトロベンゼンスル
ホネート（ＭＤＰ関連化合物以外のハプテンである。以
下ＴＮＰと称す）　０．５　ｍＭで修飾した同系牌細胞
（２Ｘ１０５／ウエル）、１ｍＭＭＤＰ−Ｌｙ、ｒ（Ｌ
２　）修飾同系牌細胞（２Ｘ１０’／ウエル）及び前二
者の混合物の三踵類を用意した。

ＯヘルパーＴ細胞誘導確認試験 前記ヘルパーＴ細胞源、応答細胞及び抗原刺激細胞とを
混合し５日間培養した。培養後、培養細胞に標的細胞と
してＸ−５５６３同系腫瘍細胞（ＴＮＰを結合させ更に
Ｃｒ　　でラベルした）とを混合しクロミウム５１遊離
法で、Ｘ−５５６３同系腫瘍細胞の細胞破壊状態を調べ
細胞障害能として表わした。本試験で細胞障害能が犬で
あるということは、ＥＴ細胞が誘導されたこと、さかの
ぼれば、本発明化合物で活性化されるヘルパーＴ細胞が
ＢＯＧ免疫マウスの牌細胞中に存在することを意味する
。試験結果は下表の通シであシ、ＢＯＧ免疫マウスの牌
細胞中には、本発明化合物反応性ヘル、Ｊ−Ｔ輔胞が存
在することが証明された。

表２　８ＣＧ免疫牌細胞中にみられるＴＮＰ基反応性Ｅ
Ｔ細胞の生成増強をきた す本発明化合物反応性ヘルパーＴ細 胞活性 上表は、抗原刺激細胞として、ＴＮＰ修飾同系牌細胞と
ＭＤＰ−ＬｙＪ′（Ｌ２　）修飾同系牌細胞との混合物
を使用した場合の結果であプ、本試験条件下では、各々
の単独を使用した場合、結胞障害活性の有意な生成は認
められなかった。

試験例３ 本発明化合物の抗腫瘍免疫増強能 Ｏ試験動物：　Ｃ３Ｈ／ＨｇＮ−ｒウスＯ生体内での腫
瘍特異的ＥＴ細胞の調製本発明化合物ｌを用いて藤原等
の方法（Ｊ。

Ｉｍｍｔｂｎｏｌ、　１２４８６３−８６９（１９８０
））に従いＭＤＰ−Ｌｙｓ（Ｌ２）　　修飾同系腫瘍細
胞Ｘ５５６３（マイトマイシン処理）を調製する。

マウスを１５０ＲＸ線照射後、ＢＣＧ１ｍ９を２回皮下
投与し免疫する（マウス牌細胞中でのＭＤＰ関連ハプテ
ンに反応性を有するヘルパーＴ細胞の誘導を目的とする
）。次いでこの免疫マウスに１×１０７個の前記ＭＤＰ
−Ｌｙｓ（Ｌ２）修飾同系腫瘍細胞、Ｘ５５６３　（マ
イトマイシン処理）を５回腹腔内投与する（ここでＭＤ
Ｐ−Ｌｙｚ（Ｌ２）修飾同系腫瘍細胞で免疫するのはマ
ウス牌細胞中での腫瘍関連抗原に反応性を有するＥＴ細
胞の生成の増強を目的とする。）。上記処置をほどこし
たマウスの牌細胞、（２×１０個）をと）出し実験群と
する。対照としてマウスに前記ＭＤＰ−Ｌｙ＆（Ｌ２）
修飾同系腫瘍細胞Ｘ５５６３（マイトマイシン処理）を
５回腹腔内投与だけしたものの牌細胞（対照群−１）及
び全く処置をほどこさないマウスの牌細胞（対照群−２
）を調製した。

Ｏ抗腫瘍免疫増強試験 前記調製を行なったＥＴ細胞とＸ５５６３腫瘍生細胞（
Ｉ　Ｘ　１０個）とを混合し、別に用意した未処置マウ
スに皮内注射し、該マウスＭ瘍の生育度を経口的に腫瘍
径として測定した。なお対照群についても同様の操作を
おこなった。結果は表３に示される通シ、実験群の場合
において顕著な腫瘍生育阻止効果、即ち本発明化合物の
抗腫瘍免疫増強能が認められた。又同様の実験金、本発
明化合物６を用いて調製した。Ｌ４−ＭＤＰ−Ｌｙｓ（
Ｌｌ）修飾同系腫瘍細胞で実施した場合の結果を表４に
示す。なお、かかる抗腫瘍免疫活性はＸ５５６３腫瘍細
胞に対して特異的であシ、他の腫瘍細胞、例えば同系腫
瘍細胞でちるＭＨ１３４腹水肝腫瘍細胞に対しては前記
ＥＴ細胞は効果を示さない。

本試験で本発明化合物が適切な免疫方法によシ、腫瘍特
異的ＥＴａＮｊｌの生成をきたすヘルパーＴ細胞を誘導
し、生体の抗１１ｉｎ瘍免疫能を増強しうる化合物であ
ることが証明された。

表３　腫瘍増殖抑制効果（ＭＤＰ−Ｉ、ｙ、ｔ（Ｌ２）
修飾同系腫瘍細胞） 表４　＠瘍増殖抑制効果（Ｌ４−ＭＤＰ−Ｌｙ＆（ＬＬ
）修飾同系腫瘍細胞） （ほか３名）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ で示される化合物（式中、Ｒ＿１は水素又は炭素数２〜
   １０の脂肪酸残基を、Ａｃｙｌは炭素数２〜６の脂肪酸
   残基を、Ｘはアラニン、Ｎ−メチルアラニン又はバリン
   残基を、ｎは１〜６の整数を、Ｒ＿２は活性エステル残
   基を、Ｒ＿３は炭素数１〜１０の脂肪酸残基を意味する
   。）。