JPS615799A - コラゲナ−ゼ活性測定用試薬 - Google Patents
コラゲナ−ゼ活性測定用試薬Info
- Publication number
- JPS615799A JPS615799A JP12504484A JP12504484A JPS615799A JP S615799 A JPS615799 A JP S615799A JP 12504484 A JP12504484 A JP 12504484A JP 12504484 A JP12504484 A JP 12504484A JP S615799 A JPS615799 A JP S615799A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- substance
- reagent
- collagenase
- luminescent substance
- fluorescence
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
コラゲナーゼは硬蛋白質の一種でおるコラ−ダンを分解
する酵素であるが、例えば膠原病に罹患すると血中のコ
ラゲナーゼ活性が゛上昇するところから、血清のコラゲ
ナーゼ活性を測定することによシ膠原病の検査を行なう
ことができる。本発明はこのコラゲナーゼ活性を測定す
る試薬に関するも°のである。
する酵素であるが、例えば膠原病に罹患すると血中のコ
ラゲナーゼ活性が゛上昇するところから、血清のコラゲ
ナーゼ活性を測定することによシ膠原病の検査を行なう
ことができる。本発明はこのコラゲナーゼ活性を測定す
る試薬に関するも°のである。
（従来の技術）
血吊のコラゲナーゼ活性が低いためにその測定法は高感
度でなければならない。従来、血中のコラゲナーゼ活性
は例えばラジオアイソトープを利用して測定されていた
。この方法は、例えば不溶性コラ−ダンにラジオアイソ
トープを標識し、これを血清に加えて反応させる。そし
て、一定時間後反応を停止させ、遠心してこの上清のラ
ジオアイソトープを測定するものである。
度でなければならない。従来、血中のコラゲナーゼ活性
は例えばラジオアイソトープを利用して測定されていた
。この方法は、例えば不溶性コラ−ダンにラジオアイソ
トープを標識し、これを血清に加えて反応させる。そし
て、一定時間後反応を停止させ、遠心してこの上清のラ
ジオアイソトープを測定するものである。
また、最近コラーゲンに螢光物質を結合させ、これを基
質に用いてコラゲナーゼ活性を測定する方法も報告され
ている（第２３回日本臨床化学会大会要旨録７２頁）。
質に用いてコラゲナーゼ活性を測定する方法も報告され
ている（第２３回日本臨床化学会大会要旨録７２頁）。
（発明が解決しようとする問題点）
ラジオアイソトープを用いる方法は安全性の観点から使
用場所、使用方法等が厳しく制限され、かつ操作が繁雑
であって大量検体の分析方法としては不適当であった。
用場所、使用方法等が厳しく制限され、かつ操作が繁雑
であって大量検体の分析方法としては不適当であった。
また、螢光物質を結合させた方法は未分解の基質を除去
しなければならないため操作が繁雑であるという問題点
があった。
しなければならないため操作が繁雑であるという問題点
があった。
（問題点を解決するための手段）
本発明者らはこれらの問題点を解決するべく種々検討し
た結果、コラゲナーゼの基質に発光物質とこの発光物質
を発光させる物質とを結合させ、この発光させる物質を
励起させることによシ発光物質を発光させる方法を案出
するに至９、この基質を利用すれば基質を分離せずにか
つ高感度にコラゲナーゼの活性を測定できることを見出
して本発明を完成した。
た結果、コラゲナーゼの基質に発光物質とこの発光物質
を発光させる物質とを結合させ、この発光させる物質を
励起させることによシ発光物質を発光させる方法を案出
するに至９、この基質を利用すれば基質を分離せずにか
つ高感度にコラゲナーゼの活性を測定できることを見出
して本発明を完成した。
すなわち、本発明は、発光物質とこの発光物質を発光さ
せる物質とが結合された、測定のコラゲナーゼによって
分解されうる一２７°チドよりなるコラケ°ナーゼ活性
測定用試薬に関するものである。
せる物質とが結合された、測定のコラゲナーゼによって
分解されうる一２７°チドよりなるコラケ°ナーゼ活性
測定用試薬に関するものである。
発光物質は後述の発光させる物質の作用によって発光す
るものであればよく、例えば、フルオレッセイン、４’
＋ ５’−ジメトキシフルオレッセイン、ローダミン、
Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトラメチルローダミ／、Ｎ、Ｎ
、ＮりＮ′−テトラエチルローダミン、フルオレスフア
ミン、ダンジルクロライド等の螢光物質、ルミノール、
インルミノール、アクリジニウム、これらの誘導体等の
化学発光物質などを利用できる。
るものであればよく、例えば、フルオレッセイン、４’
＋ ５’−ジメトキシフルオレッセイン、ローダミン、
Ｎ、Ｎ、Ｎ’、Ｎ’−テトラメチルローダミ／、Ｎ、Ｎ
、ＮりＮ′−テトラエチルローダミン、フルオレスフア
ミン、ダンジルクロライド等の螢光物質、ルミノール、
インルミノール、アクリジニウム、これらの誘導体等の
化学発光物質などを利用できる。
発光物質を発光させる物質（以下、励起物質という。）
の発光させる手段は問うところではなく、例えば励起物
質の発光体であって、エネルギー移動等によシ発光物質
を励起して発光させる物質Ｃ以下、励起発光物質という
。）あるいは触媒作用により発光物質を発光させる物質
などを利用することができる。
の発光させる手段は問うところではなく、例えば励起物
質の発光体であって、エネルギー移動等によシ発光物質
を励起して発光させる物質Ｃ以下、励起発光物質という
。）あるいは触媒作用により発光物質を発光させる物質
などを利用することができる。
励起発光物質の種類は励起対象の発光物質に応じて定ま
るが、この励起発光物質は前記の発光物質のなかから選
択すればよい。発光物質と励起発光物質の組合せの例と
しては、フルオレッセインとローダミン、フルオレッセ
インとイソルミノール、ローダば／とルミノールなどを
挙げることができる。
るが、この励起発光物質は前記の発光物質のなかから選
択すればよい。発光物質と励起発光物質の組合せの例と
しては、フルオレッセインとローダミン、フルオレッセ
インとイソルミノール、ローダば／とルミノールなどを
挙げることができる。
触媒作用によシ発光物質を発光させる物質の例としては
、ルミノール、Ｈ２Ｏ２に対するノｅ−オキシダーゼ、
イソルミノール、Ｈ２Ｏ２に対するマイクロ・や−オキ
シダーゼなどを挙げることができる。
、ルミノール、Ｈ２Ｏ２に対するノｅ−オキシダーゼ、
イソルミノール、Ｈ２Ｏ２に対するマイクロ・や−オキ
シダーゼなどを挙げることができる。
発光物質及び励起物質を結合させるペプチドは測定対象
のコラゲナーゼによって分解されうるものである。この
ペプチドは通常はコラーゲンである。コラーケ゛ンは種
々の動物由来のものかあシ、さらに最近はペプチド合成
によって得ることもできるがその種類を問わない。
のコラゲナーゼによって分解されうるものである。この
ペプチドは通常はコラーゲンである。コラーケ゛ンは種
々の動物由来のものかあシ、さらに最近はペプチド合成
によって得ることもできるがその種類を問わない。
発光物質及び励起物質をペプチドに結合させる方法は双
方の官能基を考慮して決定すればよい。
方の官能基を考慮して決定すればよい。
官能基は、アミノ基、カルボキシル基、水酸基、チオー
ル基、イミダゾール基、フェニル基などを利用すること
ができる。これらの官能基としては、ペプチドはヒドロ
キシプロリン残基等の水酸基、リノン残基等の塩基性ア
ミノ酸残基のアミノ基、アスノｅラギン酸残基やグルタ
ミン酸残基のカルボキシル基、システィン残基等のチオ
ール基、ヒスチジン残基等のイミダゾール基、フェニル
アラニン残基等のフェニル基などを挙けることができる
。
ル基、イミダゾール基、フェニル基などを利用すること
ができる。これらの官能基としては、ペプチドはヒドロ
キシプロリン残基等の水酸基、リノン残基等の塩基性ア
ミノ酸残基のアミノ基、アスノｅラギン酸残基やグルタ
ミン酸残基のカルボキシル基、システィン残基等のチオ
ール基、ヒスチジン残基等のイミダゾール基、フェニル
アラニン残基等のフェニル基などを挙けることができる
。
一方、発光物質及び励起物質には必要にょシ予めアミン
基やカルボキシル基を導入しておくのがよい。これらの
官能基を結合させる方法としては、例えばアミノ基相互
間を結合させる場合には、ツインシアネート法、グルタ
ルアルデヒド法、ジフルオロベンゼン法、ベンゾキノン
法等数多く知うれている。また、アミン基とカルボキシ
ル基との間を結合させる方法としては、カルボキシル基
をサクシンイミドエステル化する方法のほがカルボジイ
ミド法、ウッドワード試薬法等が知られておシ、アミノ
基と糖鎖を架橋する過ヨウ素酸酸化法（Ｎａｋａｎｏ法
）もある。チオール基を利用する場合には、例えばもう
一方の側のカルボキシル基をサクシンイミドエステル化
してこれにシスナインを反応させてチオール基を導入し
、チオールａ 反応性二価架橋試薬を用いて双方を結合
することができる。フェニル基を利用する方法としては
ジアゾ化法、アルキル化法などがある。結合方法はこれ
らの例示に限られるものではなく、このほか例えばｒＭ
ｅｔｈｏｄ ｉｎ Ｉｍｔｎｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ
Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｊ（Ｃ，Ａ、Ｗｉｌ
ｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ＞１９７６、Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ、Ｎ、Ｙ、）あるいは「酵素免疫測定法」
（石川ら、医学書院、１９７８年）等の放置に記載され
ている方法のなかから適宜選択して利用することができ
る。発光物質及び励起物質はいずれもなるべく多く結合
させることが好ましい。発光物質と励起物質の結合モル
比は通常は１：１であるが励起効率などを考パ 慮して
適宜変更される。発光物質と励起、物質を結合させる順
序は問うところではなく、いずれが先であってもよく、
また両方を同時に結合させてもよい。反応後は、ケゞル
涙過法、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィーなどを適宜組み合わせて精製を行
ない、必要により凍結乾燥法等で乾燥する。
基やカルボキシル基を導入しておくのがよい。これらの
官能基を結合させる方法としては、例えばアミノ基相互
間を結合させる場合には、ツインシアネート法、グルタ
ルアルデヒド法、ジフルオロベンゼン法、ベンゾキノン
法等数多く知うれている。また、アミン基とカルボキシ
ル基との間を結合させる方法としては、カルボキシル基
をサクシンイミドエステル化する方法のほがカルボジイ
ミド法、ウッドワード試薬法等が知られておシ、アミノ
基と糖鎖を架橋する過ヨウ素酸酸化法（Ｎａｋａｎｏ法
）もある。チオール基を利用する場合には、例えばもう
一方の側のカルボキシル基をサクシンイミドエステル化
してこれにシスナインを反応させてチオール基を導入し
、チオールａ 反応性二価架橋試薬を用いて双方を結合
することができる。フェニル基を利用する方法としては
ジアゾ化法、アルキル化法などがある。結合方法はこれ
らの例示に限られるものではなく、このほか例えばｒＭ
ｅｔｈｏｄ ｉｎ Ｉｍｔｎｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ
Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ Ｊ（Ｃ，Ａ、Ｗｉｌ
ｌｉａｍｓ ｅｔ ａｌ＞１９７６、Ａｃａｄｅｍｉｃ
Ｐｒｅｓｓ、Ｎ、Ｙ、）あるいは「酵素免疫測定法」
（石川ら、医学書院、１９７８年）等の放置に記載され
ている方法のなかから適宜選択して利用することができ
る。発光物質及び励起物質はいずれもなるべく多く結合
させることが好ましい。発光物質と励起物質の結合モル
比は通常は１：１であるが励起効率などを考パ 慮して
適宜変更される。発光物質と励起、物質を結合させる順
序は問うところではなく、いずれが先であってもよく、
また両方を同時に結合させてもよい。反応後は、ケゞル
涙過法、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティ
ークロマトグラフィーなどを適宜組み合わせて精製を行
ない、必要により凍結乾燥法等で乾燥する。
本発明の試薬を用いてコラケ゛ナーゼの活性を測定する
方法としては、この試薬を適宜濃度の溶液とし、検体の
コラゲナーゼ溶液を加えて酵素反応させ、発光物質を発
光させて螢光光度計などで測定すればよい。励起物質に
励起発光物質を用いたときには励起発光物質の発光を測
定して消光度を求めてもよい。
方法としては、この試薬を適宜濃度の溶液とし、検体の
コラゲナーゼ溶液を加えて酵素反応させ、発光物質を発
光させて螢光光度計などで測定すればよい。励起物質に
励起発光物質を用いたときには励起発光物質の発光を測
定して消光度を求めてもよい。
反応温度及びｐＨは、コラゲナーゼカ５最も作用しやす
いところが好ましく、通常２０〜４５℃程度、ｐＨ５〜
８５程度が適当である。ｐＨを一定に保っために緩衝液
を用いることは好ましい。反応時間は通常５〜６０分間
程分間上い。
いところが好ましく、通常２０〜４５℃程度、ｐＨ５〜
８５程度が適当である。ｐＨを一定に保っために緩衝液
を用いることは好ましい。反応時間は通常５〜６０分間
程分間上い。
発光物質を発光させる方法は公知の方法によればよく、
例えば励起発光物質を利用する場合にはこの励起発光物
質の励起光を照射すればよい。
例えば励起発光物質を利用する場合にはこの励起発光物
質の励起光を照射すればよい。
測定はレートアッセイによって行なってもよく、終点法
によって行なってもよい。
によって行なってもよい。
本発明の試薬ヤ測定しうるコラケ゛ナーゼの種類は特に
制限されるものではないが、本発明の試薬はコラケ゛ナ
ーゼの活性を高感度で測定できるところから例えば血中
のコラゲナーゼ活性の測定用試薬として好適である。
制限されるものではないが、本発明の試薬はコラケ゛ナ
ーゼの活性を高感度で測定できるところから例えば血中
のコラゲナーゼ活性の測定用試薬として好適である。
（作用）
本発明の試薬の作用をＲプチドに２種の螢光物質（１，
１，Ｌ２）を結合させた場合を例に述べると、コラゲナ
ーゼが作用する前はＬｌの励起光を照射すると仁のＬｌ
が励起され、Ｌｌの光増感このＬｌからＬ２にエネルギ
ー移動が起ってＬ２が励起され、Ｌ２から螢光が発せら
れる。試薬のペグチドがコラゲナーゼによって分解され
るとＬｌとＬ２の間の距離が犬きくなってしまうためＬ
ｌによるＬ２の励起がほとんど起らなくなり、従ってＬ
２からの螢光を生じなくなる。Ｌｌからの螢光とＬ２か
らの螢光は波長が異なるところから反応液について特別
な分離操作を行なわなくともＬｌまたはＬ２からの螢光
を区別して測定でき、従って被ゾチドの分解量を求める
ことができる。
１，Ｌ２）を結合させた場合を例に述べると、コラゲナ
ーゼが作用する前はＬｌの励起光を照射すると仁のＬｌ
が励起され、Ｌｌの光増感このＬｌからＬ２にエネルギ
ー移動が起ってＬ２が励起され、Ｌ２から螢光が発せら
れる。試薬のペグチドがコラゲナーゼによって分解され
るとＬｌとＬ２の間の距離が犬きくなってしまうためＬ
ｌによるＬ２の励起がほとんど起らなくなり、従ってＬ
２からの螢光を生じなくなる。Ｌｌからの螢光とＬ２か
らの螢光は波長が異なるところから反応液について特別
な分離操作を行なわなくともＬｌまたはＬ２からの螢光
を区別して測定でき、従って被ゾチドの分解量を求める
ことができる。
（発明の効果）
本発明の試薬は単にコラケ゛ナーゼを接触せしめるだけ
でよく、光度計などの測定機器の感度が高いところから
コラケ゛ナーゼの活性を高感度で測定できる。操作方法
が簡単なところから特に臨床分析など大量検体の検査に
利用することができる。
でよく、光度計などの測定機器の感度が高いところから
コラケ゛ナーゼの活性を高感度で測定できる。操作方法
が簡単なところから特に臨床分析など大量検体の検査に
利用することができる。
（実施例〕
実施例１
ｐｒｏ −Ｇｉｎ −Ｇｌｙ −１１ｅ −Ａｌａ −
Ｇｌｙ −Ｇｌｎ−’Ｄ −Ａｒｇ −ＯＨの合成コラ
ーケ゛ｙ ｉ ｏ ｏ ｍｙを１０ｍ１の０．５ＭＮａ
２ｃｏ３ 緩衝液ｐＨ９，５に溶かし、これにフルオレ
ッセインインチオシア不一ト２０■を含むＤＭＦ溶液５
００μｌを加えて４℃で６時間反応−させた。この反応
液を充分水洗したセフ了デックスＧ−２５カラムに流し
てケ゛ル濾過し、未反応のフルオレッセインを除去した
。次に、アミン化ローダミン２０η及び水溶性カルボジ
イミドｚｏｍｇをこのフルオレッセイン結合合成コーラ
グン溶液１０ｍ１に加え、ＰＨを４．５〜５．０に維持
しながら室温で２時間反応させた。反応液を０．２ Ｍ
ＮａＣＡ及び５ ｍ Ｍ ＣａＣＺ２を含む０．２Ｍ
）リスーＨＣ１緩衡液ｐ８７．８で平衡化したセファデ
ックスＧ−２５カラムに流して未反応のアミン化ローダ
ミン及び水溶性カルはノイミドを除去し、目的の基質を
得た。
Ｇｌｙ −Ｇｌｎ−’Ｄ −Ａｒｇ −ＯＨの合成コラ
ーケ゛ｙ ｉ ｏ ｏ ｍｙを１０ｍ１の０．５ＭＮａ
２ｃｏ３ 緩衝液ｐＨ９，５に溶かし、これにフルオレ
ッセインインチオシア不一ト２０■を含むＤＭＦ溶液５
００μｌを加えて４℃で６時間反応−させた。この反応
液を充分水洗したセフ了デックスＧ−２５カラムに流し
てケ゛ル濾過し、未反応のフルオレッセインを除去した
。次に、アミン化ローダミン２０η及び水溶性カルボジ
イミドｚｏｍｇをこのフルオレッセイン結合合成コーラ
グン溶液１０ｍ１に加え、ＰＨを４．５〜５．０に維持
しながら室温で２時間反応させた。反応液を０．２ Ｍ
ＮａＣＡ及び５ ｍ Ｍ ＣａＣＺ２を含む０．２Ｍ
）リスーＨＣ１緩衡液ｐ８７．８で平衡化したセファデ
ックスＧ−２５カラムに流して未反応のアミン化ローダ
ミン及び水溶性カルはノイミドを除去し、目的の基質を
得た。
５．０ｍ９／ｒｎ１．のこの基質溶液２ｍｌに血清１０
０ μｔ。
０ μｔ。
を加えて３７℃で反応させた。反応中５分ごとに波長４
７０ ｎｍの励起光を照射し、５８０ ｎｍの螢光を測
定した。
７０ ｎｍの励起光を照射し、５８０ ｎｍの螢光を測
定した。
得られた結果を第１図に示す。
実施例２
可溶性ヒト胎盤コラーゲン（シグマ社製品）１００■を
０．５Ｍ炭酸緩衝液ＰＨ９，５に溶かし、これにフルオ
レッセインインチオシアネート及び口−ダミンインチオ
シアネート各５ ｍｇを含む０．１Ｍ炭酸緩衝液ｐＨ９
，５１ｍｇを加えて０℃で６時間反応させた。この反応
液を予め０．２ Ｍ ＮａＣｔ及び５ｍＭＣａ Ｃｔ２
を倉む０．２Ｍ）リス−塩酸緩衝液ｐＨ７，８で平衡化
したセファデックスＧ−２５カラムでグルテ過して未反
応の上記螢光物質を除去し、目的の基質を得た。
０．５Ｍ炭酸緩衝液ＰＨ９，５に溶かし、これにフルオ
レッセインインチオシアネート及び口−ダミンインチオ
シアネート各５ ｍｇを含む０．１Ｍ炭酸緩衝液ｐＨ９
，５１ｍｇを加えて０℃で６時間反応させた。この反応
液を予め０．２ Ｍ ＮａＣｔ及び５ｍＭＣａ Ｃｔ２
を倉む０．２Ｍ）リス−塩酸緩衝液ｐＨ７，８で平衡化
したセファデックスＧ−２５カラムでグルテ過して未反
応の上記螢光物質を除去し、目的の基質を得た。
この基質１ ｎ（９を含む溶液１ｍｌに血清５０μＬを
加えて３７℃で反応させ、波長４７０ ｎｍの励起光を
照射して５５０ ｎｍ及び５８０ ｎｍの各螢光の変化
を測定した。
加えて３７℃で反応させ、波長４７０ ｎｍの励起光を
照射して５５０ ｎｍ及び５８０ ｎｍの各螢光の変化
を測定した。
得られた結果を第２図に示す。図中、白丸及び点線は５
５０ ｎｍの螢光強度の変化を、そして黒丸及び実線は
５８０ ｎｍの螢光強度の変化をそれぞれ示している。
５０ ｎｍの螢光強度の変化を、そして黒丸及び実線は
５８０ ｎｍの螢光強度の変化をそれぞれ示している。
図面はいずれも本発明の試薬を用いて得られた結果を示
すものであシ、第１図は反応時間と螢光強度の変化を、
そして第２図は血清希釈率と螢光強度の変化をそ”れぞ
れ示している。 、第１図 反皮・吟ｍ（釦 １／８１／４１／２ 片負楕 １１１Ｌ瑣壽釈キ
すものであシ、第１図は反応時間と螢光強度の変化を、
そして第２図は血清希釈率と螢光強度の変化をそ”れぞ
れ示している。 、第１図 反皮・吟ｍ（釦 １／８１／４１／２ 片負楕 １１１Ｌ瑣壽釈キ
Claims (2)
- （１）発光物質とこの発光物質を発光させる物質とが結
合された、測定対象のコラゲナーゼによって分解されう
るペプチドよりなるコラゲナーゼ活性測定用試薬 - （２）発光物質が螢光物質である特許請求の範囲第１項
記載のコラゲナーゼ活性測定用試薬
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12504484A JPS615799A (ja) | 1984-06-20 | 1984-06-20 | コラゲナ−ゼ活性測定用試薬 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12504484A JPS615799A (ja) | 1984-06-20 | 1984-06-20 | コラゲナ−ゼ活性測定用試薬 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS615799A true JPS615799A (ja) | 1986-01-11 |
| JPH0563159B2 JPH0563159B2 (ja) | 1993-09-09 |
Family
ID=14900443
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12504484A Granted JPS615799A (ja) | 1984-06-20 | 1984-06-20 | コラゲナ−ゼ活性測定用試薬 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS615799A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0719480U (ja) * | 1993-09-10 | 1995-04-07 | 悟郎 遠藤 | 飾り棚ユニット |
| CN102809541A (zh) * | 2012-05-14 | 2012-12-05 | 浙江省海洋开发研究院 | 一种胶原蛋白酶酶活的测定方法 |
-
1984
- 1984-06-20 JP JP12504484A patent/JPS615799A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0719480U (ja) * | 1993-09-10 | 1995-04-07 | 悟郎 遠藤 | 飾り棚ユニット |
| CN102809541A (zh) * | 2012-05-14 | 2012-12-05 | 浙江省海洋开发研究院 | 一种胶原蛋白酶酶活的测定方法 |
| CN102809541B (zh) * | 2012-05-14 | 2014-12-31 | 浙江省海洋开发研究院 | 一种胶原蛋白酶酶活的测定方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0563159B2 (ja) | 1993-09-09 |
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