JPS6160617A - マイトマイシンｃ結合ヒト血清アルブミンとその製造方法 - Google Patents
マイトマイシンｃ結合ヒト血清アルブミンとその製造方法Info
- Publication number
- JPS6160617A JPS6160617A JP59180703A JP18070384A JPS6160617A JP S6160617 A JPS6160617 A JP S6160617A JP 59180703 A JP59180703 A JP 59180703A JP 18070384 A JP18070384 A JP 18070384A JP S6160617 A JPS6160617 A JP S6160617A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- serum albumin
- mitomycin
- human serum
- formula
- group
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、マイトマイシンＣを結合したヒト血清アルブ
ミン及びその製造方法に関する。
ミン及びその製造方法に関する。
マイトマイシンＣをヒト血清アルブミンに結合し、高分
子医薬とすることによって、マイトマイシンＣ親水性あ
るいは疎水性を変化させ体内への吸収性あるいは標的器
官への移行性が改良されることが考えられる。
子医薬とすることによって、マイトマイシンＣ親水性あ
るいは疎水性を変化させ体内への吸収性あるいは標的器
官への移行性が改良されることが考えられる。
また、体内においてマイトマイシンＣが高分子の臼ト血
濤アルブミンから徐々に解離・放出されるために、薬効
の長時間にわたる持続及び副作用の軽減が期待できる。
濤アルブミンから徐々に解離・放出されるために、薬効
の長時間にわたる持続及び副作用の軽減が期待できる。
マイトマイシンＣを血清アルブミンの１つであるウシ血
清アルブンミンに結合した結合体は、公知である、（Ｊ
、 Ｐｈａｒｉ。
清アルブンミンに結合した結合体は、公知である、（Ｊ
、 Ｐｈａｒｉ。
（３ｕｌｌ、、 ３０．２９５４ （１９８２） ）
、しかしながら、この結合体は以下に述べる２つの点で
、必ずしも治療剤として適当とは言い難い。
、しかしながら、この結合体は以下に述べる２つの点で
、必ずしも治療剤として適当とは言い難い。
即ら、第１に用いられている血清アルブミンがウシ由来
であるため、ヒトにくり返し投与した場合に、族ウシ抗
体が生成され薬剤が中和不活性化され、また血ン古病を
誘発するおそれがあること。
であるため、ヒトにくり返し投与した場合に、族ウシ抗
体が生成され薬剤が中和不活性化され、また血ン古病を
誘発するおそれがあること。
第２に、この結合体の’ＦＪ Ｍ工程においてマイトマ
イシンＣは蛋白質のカルボキシル基に、縮合剤カルボジ
イミドにより脱水的にアミド結合の形成を伴って結合さ
れているが、本工程においては蛋白分子同士の結合反応
がＤ１反応として伴うため、治療剤として好ましくない
高分子重合物質の生成を伴っていることである。
イシンＣは蛋白質のカルボキシル基に、縮合剤カルボジ
イミドにより脱水的にアミド結合の形成を伴って結合さ
れているが、本工程においては蛋白分子同士の結合反応
がＤ１反応として伴うため、治療剤として好ましくない
高分子重合物質の生成を伴っていることである。
本発明者等は、鋭意研究の結果、ヒト血清アルブミンを
用いて第１の問題点を解決するとともに、活性エステル
基をその構造中に含むマイトマイシンＣＬｆｆ導体をヒ
ト血清アルブミンに作用させると、高分子ｍ合物質の成
牛を伴わずに、新規物質であるヒト血清アルブミンとマ
イトマイシンＣの結合体が得られることを知見し、第２
の問題点も解決して、本発明に到達した。
用いて第１の問題点を解決するとともに、活性エステル
基をその構造中に含むマイトマイシンＣＬｆｆ導体をヒ
ト血清アルブミンに作用させると、高分子ｍ合物質の成
牛を伴わずに、新規物質であるヒト血清アルブミンとマ
イトマイシンＣの結合体が得られることを知見し、第２
の問題点も解決して、本発明に到達した。
即ち、本発明は一般式［Ｉ］
で表わされる殺細胞性修飾免疫グロブリン及び一般式［
［］ 清アルブミンと反応ざじることを特徴とするその！ｌ製
造方法ある。
［］ 清アルブミンと反応ざじることを特徴とするその！ｌ製
造方法ある。
一般式［Ｉ ］ ｄ３よび［Ｉ［］において、Ｒは２価
の有践基を表わすが、好ましくは炭素ｖ１２〜７個のア
ルキレン阜であり、エチレン塁、トリメチレン基、テト
ラメチレン基、ペンタメチレン暴、２−メチルトリメチ
レン基等を挙げることができる。
の有践基を表わすが、好ましくは炭素ｖ１２〜７個のア
ルキレン阜であり、エチレン塁、トリメチレン基、テト
ラメチレン基、ペンタメチレン暴、２−メチルトリメチ
レン基等を挙げることができる。
特に好ましいのはトリメチレン基である。また一般式［
ｎ］において、Ｘで表わされる活性エステルのアルコー
ル残塁としては、サクシンイミジル基、５−ノルボルネ
ン−２，３−ジカルボキシイミジル基、フタルイミジル
！：Ｇ、ｐ−ニトロフェニル基、２．４−ジニトロフェ
ニル基、 ２，４．５− トリクロロフェニル塁、ペ
ンタクロロフェニル基等を挙げることができる。
ｎ］において、Ｘで表わされる活性エステルのアルコー
ル残塁としては、サクシンイミジル基、５−ノルボルネ
ン−２，３−ジカルボキシイミジル基、フタルイミジル
！：Ｇ、ｐ−ニトロフェニル基、２．４−ジニトロフェ
ニル基、 ２，４．５− トリクロロフェニル塁、ペ
ンタクロロフェニル基等を挙げることができる。
ヒ１へ血清アルブミンは、分子中にＮ末端アミノ酸のα
−アミ１塁１個とリジン残塁の側鎖に由来するε−アミ
１塁５９個を有しているので、かかるアミン基を利用す
ることにより、１分子のヒト血清アルブミンに多数のマ
イトマイシンＣ分子を効率良く結合させることができる
。６０個のアミノ基すべてが、マイ１−マイシンＣとの
結合に利用司能であるが、好ましくは、１〜４０個のア
ミノ基を利用する。
−アミ１塁１個とリジン残塁の側鎖に由来するε−アミ
１塁５９個を有しているので、かかるアミン基を利用す
ることにより、１分子のヒト血清アルブミンに多数のマ
イトマイシンＣ分子を効率良く結合させることができる
。６０個のアミノ基すべてが、マイ１−マイシンＣとの
結合に利用司能であるが、好ましくは、１〜４０個のア
ミノ基を利用する。
本発明の一般式［Ｉ］で表わされるマイトマイシンＣ結
合ヒト血清アルブミンは、一般式［１［］で表わされる
マイトマイシンＣ誘導体をヒト血清アルブミンと反応せ
しめることにより製造される。
合ヒト血清アルブミンは、一般式［１［］で表わされる
マイトマイシンＣ誘導体をヒト血清アルブミンと反応せ
しめることにより製造される。
本反応は、ヒト血清アルブミンのｐＨ５〜８の緩衝液の
溶液（蛋白ｍ度は好ましくは０．５〜１００■／ｄに調
製する）に、ゼロ〜４０℃で艮拌しながら、少量の溶媒
、例えば、Ｎ、Ｎ−ジメチルボルムアミド、エタノール
、アセトン等に溶かした一般式［Ｉ］で表わされるマイ
トマイシンＣ誘導体（好ましくは前者１モルに対し１〜
１００モル）を添加し、１５分〜２４時間行われる。そ
の後、反応混合物をゲル辿過あるいは透析することによ
って未反応のマイ１ヘマイシンＣ誘尋休と低分子反応生
成物を除き、マイトマイシンＣ結合ヒト血清アルブミン
を粕πすることができる。
溶液（蛋白ｍ度は好ましくは０．５〜１００■／ｄに調
製する）に、ゼロ〜４０℃で艮拌しながら、少量の溶媒
、例えば、Ｎ、Ｎ−ジメチルボルムアミド、エタノール
、アセトン等に溶かした一般式［Ｉ］で表わされるマイ
トマイシンＣ誘導体（好ましくは前者１モルに対し１〜
１００モル）を添加し、１５分〜２４時間行われる。そ
の後、反応混合物をゲル辿過あるいは透析することによ
って未反応のマイ１ヘマイシンＣ誘尋休と低分子反応生
成物を除き、マイトマイシンＣ結合ヒト血清アルブミン
を粕πすることができる。
本発明における原料物質の１つであるヒト血ｔｉ′Ｉア
ルブミンとは、ヒトの休Ｍ（ｆｊに血ｔｉｓ ）の中で
最も含量の高い蛋白質である血清アルブミンをいう。ヒ
ト血清アルブミンは、エタノール分画法。
ルブミンとは、ヒトの休Ｍ（ｆｊに血ｔｉｓ ）の中で
最も含量の高い蛋白質である血清アルブミンをいう。ヒ
ト血清アルブミンは、エタノール分画法。
イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過法などの公知
の手段によって精製され工業的に供給される。
の手段によって精製され工業的に供給される。
本発明において用いる一般式［Ｉ］で表わされるマイト
マイシンＣｍ４体は、例えば、次に示す合成ルートによ
りマイトマイシンＣと二ｉ！基性カルボン耐の酸無水物
を出発原料として合成することができる。好適に用い得
るｎり無水物としては、コハク酸無水物、グルタル酸無
水物５３−メチルグルタル酸無水物等を挙げることがで
きる。
マイシンＣｍ４体は、例えば、次に示す合成ルートによ
りマイトマイシンＣと二ｉ！基性カルボン耐の酸無水物
を出発原料として合成することができる。好適に用い得
るｎり無水物としては、コハク酸無水物、グルタル酸無
水物５３−メチルグルタル酸無水物等を挙げることがで
きる。
ＯＯ
マイトマイシンＣテトラヒドロフラン
○
Ｈ３ＣＮ
活性エステルのアルコール部に由来する残基としては、
例えば、 り 本発明において得られたマイトマイシンＣ結合ヒト血清
アルブミンは、悪性１！Ｉ！瘍に対し強い増殖抑制活性
を有する。
例えば、 り 本発明において得られたマイトマイシンＣ結合ヒト血清
アルブミンは、悪性１！Ｉ！瘍に対し強い増殖抑制活性
を有する。
以下、実施例により本発明を詳述する。
実施例１
一７−アミノー９ａ−メ１〜キシマイト号ン（イ） マ
イトマイシンＣ結合ヒト血清アルブミンの製造 ０．１Ｍ食塩を含む０．１ＭリンＩ！！！Ｉ！ｉ液（ｐ
Ｈ７，５） １２．９ｍに溶解したヒト血清アルブミン
溶液（１５，８ｉ９ ／ ｔｄ ）に、Ｎ、Ｎ−ジメチ
ルホルムアミド０．６８ ｍに溶解した１ａ −（４−
サクシンイミジルオキシカルボニルブチリル）−７−ア
ミノ−９ａ−メトキシマイトサン６７＃１９をゆるやか
な撹拌下に少蚤ずつ添加し、以後４℃で６時間反応させ
た。最初の２時間のみ、ゆるやかに撹拌し、たくヒト血
清アルブミンと上記マイトマイシンＣ誘導体のモル比は
１：４０となる。）ａ反応液は、リン酸緩衝化生理食塩
水に平衡化したセフアデックスＧ−２５のカラム（１，
Ｏｘ ４４α）に３回に分けてかけ、未反応の試薬及び
低分子反応生成物を除いて、目的°とするマイトマイシ
ンＣ結合ヒト血清アルブミン１３９１ｇ（アルブミン相
当）を得た。
イトマイシンＣ結合ヒト血清アルブミンの製造 ０．１Ｍ食塩を含む０．１ＭリンＩ！！！Ｉ！ｉ液（ｐ
Ｈ７，５） １２．９ｍに溶解したヒト血清アルブミン
溶液（１５，８ｉ９ ／ ｔｄ ）に、Ｎ、Ｎ−ジメチ
ルホルムアミド０．６８ ｍに溶解した１ａ −（４−
サクシンイミジルオキシカルボニルブチリル）−７−ア
ミノ−９ａ−メトキシマイトサン６７＃１９をゆるやか
な撹拌下に少蚤ずつ添加し、以後４℃で６時間反応させ
た。最初の２時間のみ、ゆるやかに撹拌し、たくヒト血
清アルブミンと上記マイトマイシンＣ誘導体のモル比は
１：４０となる。）ａ反応液は、リン酸緩衝化生理食塩
水に平衡化したセフアデックスＧ−２５のカラム（１，
Ｏｘ ４４α）に３回に分けてかけ、未反応の試薬及び
低分子反応生成物を除いて、目的°とするマイトマイシ
ンＣ結合ヒト血清アルブミン１３９１ｇ（アルブミン相
当）を得た。
３６０ｎｍにおける吸光度から、結合したマイトマイシ
ンＣ残基の′ａ度は９７９μｇ／ＩＩ！ｉ！であり、一
方バイオ・ラド プロティンアッセイによる蛋白１ｍの
定量（エム ブランドフＡ−ド（Ｍ 、 ３ ｒａｔＨ
ｏｒｄ）、アナリテイカル バイオケミストリー（Ａｎ
ａｌｉｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ）第７
２巻、第２４８頁、 Ｉ’１）７６年参照）からヒト血
清アルブミンのｍ度は７，７５１１１９／＃ｄ！となっ
た。これから、ヒト血清アルブミン１分子当りマイトマ
イシンｃ９ｉｍの結合数は平均２５ｉｉｉｌと推定され
た。
ンＣ残基の′ａ度は９７９μｇ／ＩＩ！ｉ！であり、一
方バイオ・ラド プロティンアッセイによる蛋白１ｍの
定量（エム ブランドフＡ−ド（Ｍ 、 ３ ｒａｔＨ
ｏｒｄ）、アナリテイカル バイオケミストリー（Ａｎ
ａｌｉｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ）第７
２巻、第２４８頁、 Ｉ’１）７６年参照）からヒト血
清アルブミンのｍ度は７，７５１１１９／＃ｄ！となっ
た。これから、ヒト血清アルブミン１分子当りマイトマ
イシンｃ９ｉｍの結合数は平均２５ｉｉｉｌと推定され
た。
（０） マイトマイシンＣ結合ヒト血清アルブミンの
ｉｎ ｖｉｖｏ 奸１ｉＡ増殖抑制活性１群５四のＢＡ
ＬＢ／Ｃヲードマウスの腋下皮下に、株化ヒト肝）Ｉｉ
ｓｃｉ−７の１ＭＲ角をトロカール別で移植した後、１
４日目より週２回計８回、上記（イ）で製造したマイト
マイシンＣ結合ヒト血清アルブミン（マイトマイシンＣ
相当で、１回当り１μび）、または対象サンプルを、腹
腔内投与した。１１瘍増殖抑ａ、ＩＩ活性の観察は、腫
瘍塊の長径と短径を経時的に測定することにより行った
。
ｉｎ ｖｉｖｏ 奸１ｉＡ増殖抑制活性１群５四のＢＡ
ＬＢ／Ｃヲードマウスの腋下皮下に、株化ヒト肝）Ｉｉ
ｓｃｉ−７の１ＭＲ角をトロカール別で移植した後、１
４日目より週２回計８回、上記（イ）で製造したマイト
マイシンＣ結合ヒト血清アルブミン（マイトマイシンＣ
相当で、１回当り１μび）、または対象サンプルを、腹
腔内投与した。１１瘍増殖抑ａ、ＩＩ活性の観察は、腫
瘍塊の長径と短径を経時的に測定することにより行った
。
結果を第１図に示した。図に示されるとうり、対象サン
プルとしてリン酸緩衝化生理食塩水を投与した群で移植
１４日目以降急速に、ｌｉｉ瘍が増殖していたのに対し
、マイトマイシンＣ結合ヒト血清アルブミン投与群は、
−回１μび（マイトマイシンＣ相当）で、ｆｆ！瘍の増
殖がほぼ半分に抑制され、製造したマイトマイシンＣ結
合ヒト血清アルブミンの充分な抗腫）ｇ効果がぽ明され
た。
プルとしてリン酸緩衝化生理食塩水を投与した群で移植
１４日目以降急速に、ｌｉｉ瘍が増殖していたのに対し
、マイトマイシンＣ結合ヒト血清アルブミン投与群は、
−回１μび（マイトマイシンＣ相当）で、ｆｆ！瘍の増
殖がほぼ半分に抑制され、製造したマイトマイシンＣ結
合ヒト血清アルブミンの充分な抗腫）ｇ効果がぽ明され
た。
第１図は、本発明のマイトマイシンＣ結合ヒト血清アル
ブミンの、ヒト肝Ｉ［ｔ′＃ＡＬｉ−７に対するｉｎ
ｖｉｖｏの増殖抑制を示す。 横軸に時間（移植機の日数）をとり、縦軸に相対的腫瘍
サイズ（１／２短径２×長径の値の１４日目の値に対づ
る相対値）をとった。横軸矢印は、マイトマイシンＣ結
合ヒト血清アルブミンを投与した日を示ｙ、−ｃ←−は
リン酸緩衝食塩水投与群の、−一脅一はマイトマイシン
Ｃ結合ヒト血清アルブミン投与群の平均１１ｉ瘍サイズ
の推移を示す。 第１図 旺趨軸龜６較
ブミンの、ヒト肝Ｉ［ｔ′＃ＡＬｉ−７に対するｉｎ
ｖｉｖｏの増殖抑制を示す。 横軸に時間（移植機の日数）をとり、縦軸に相対的腫瘍
サイズ（１／２短径２×長径の値の１４日目の値に対づ
る相対値）をとった。横軸矢印は、マイトマイシンＣ結
合ヒト血清アルブミンを投与した日を示ｙ、−ｃ←−は
リン酸緩衝食塩水投与群の、−一脅一はマイトマイシン
Ｃ結合ヒト血清アルブミン投与群の平均１１ｉ瘍サイズ
の推移を示す。 第１図 旺趨軸龜６較
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、一般式［ I ］ ▲数式、化学式、表等があります▼・・・・・・［ I
］ 〔式中、ＨＳＡはヒト血清アルブミンを表わしＲは、２
価の有機基を表わす。ｎはヒト血清アルブミン当りの結
合数を表わし、１〜６０である。〕 で表わされるマイトマイシンＣ結合ヒト血清アルブミン
。 ２、式［ I ］において、Ｒが炭素数２〜７のアルキレ
ン基を表わす特許請求の範囲第１項記載のマイトマイシ
ンＣ結合ヒト血清アルブミン。 ３、式［ I ］において、Ｒがトリメチレン基を表わす
、特許請求の範囲第１項または第２項記載のマイトマイ
シンＣ結合ヒト血清アルブミン。 ４、一般式［II］ ▲数式、化学式、表等があります▼・・・・・・［II］ 〔式中、Ｒの定義は式［ I ］の場合と同じである。Ｘ
は活性エステルのアルコール部に由来する残基を表わす
。〕 で表わされるマイトマイシンＣ誘導体を、ヒト血清アル
ブミンと反応させることを特徴とする、一般式［ I ］ ▲数式、化学式、表等があります▼・・・・・・［ I
］ 〔式中、ＨＳＡはヒト血清アルブミンを表わし、Ｒは２
価の有機基を表わす。ｎはヒト血清アルブミン当りの結
合数を表わし、１〜６０である。〕 で表わされるマイトマイシンＣ結合ヒト血清アルブミン
の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59180703A JPS6160617A (ja) | 1984-08-31 | 1984-08-31 | マイトマイシンｃ結合ヒト血清アルブミンとその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59180703A JPS6160617A (ja) | 1984-08-31 | 1984-08-31 | マイトマイシンｃ結合ヒト血清アルブミンとその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6160617A true JPS6160617A (ja) | 1986-03-28 |
Family
ID=16087835
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59180703A Pending JPS6160617A (ja) | 1984-08-31 | 1984-08-31 | マイトマイシンｃ結合ヒト血清アルブミンとその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6160617A (ja) |
-
1984
- 1984-08-31 JP JP59180703A patent/JPS6160617A/ja active Pending
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