JPS6182760A

JPS6182760A - 抗血栓性医用材料

Info

Publication number: JPS6182760A
Application number: JP59204399A
Authority: JP
Inventors: 喜温三浦; 和久宮本; 清仁八木; 広田　晃一
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1984-09-29
Filing date: 1984-09-29
Publication date: 1986-04-26

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野コ本発明はＵＣ血栓性医用材料に関し、詳しくは、、トロ
ンボモジュリンまたはプロティンＣを固定した抗ぼ１【
栓性材料に関する。

［従来技術］人工臓器等の医用材料を＋り用する際、血液との接触に
よって惹起される血栓は大きな問題の１っである。例え
ば、血液体外循環を行なう場合、血液ポンプおよび人工
「ｎ行回路において血栓が生しる。従って血栓を藍起せ
ず血液適合性の良好な抗１ｒ１［栓性医用材料の開発が
望まれている。

現在、人工透析、人工心肺なとを使用する場合、抗凝血
薬（例えばヘバリノ）か投与されているが、これには副
作用なとの欠点かある。

近年、トロンボモジュリンと呼ばれる血管内皮細胞由来
の蛋白質が、抗血液凝固作用を持つことが見い出された
。

［発明の目的コ本発明の目的は、このトロンボモノニリンおよびプロテ
ィンＣを利用して、材料自体で十分な抗血液凝固作用を
有する抗血栓性材料を提供することにある。

［発明の構成］本発明の要旨は、トロンボモノニリンまたはプロティン
Ｃを生理学的に許容し得ろ担体に固定して成る抗血栓性
＋４科に存する。

本発明において用いる、トロンボモジュリンおよびプロ
ティンＣは既知の物質であり、前者はたとえばＰｒｏｃ
、　Ｎａ１１．八ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　Ｖｏ
１７８、Ｎｏ、４．ｐｐ２２４９−２２５２に記載され
ており、後者は牛の全面なとから容易に採取する二とが
できる（後記実１点例参照）。

生理学的に許容１．得る担体とは、生体に対してガ質的
に極めて有害な作用を及はさない物質てあり、人工＠器
、血液ポツプまたは人工血行回路なとの材料として、あ
るいはこれらの器具のコーチノグオ科として現在使用さ
れている物質または将来使用されろであろう物質をいう
。この様な物質としては、例えばポリヒドロキノエチル
メタクリレート、ボリヒニルアルコール、ノリコーノ、
エボキノ虜脂、ボリスチレノ、塩化ビニル、ナイロン、
テトロン、セロハノ、ポリウレタン、ポリテトラフルオ
ロエチレン、ポリビニルビロリトン、ポリプロピレノ、
ボ１．１エチレン、ポリ弗化ビニル、ポリイノブチレノ
、ネオブレ／、ポリ塩化ビニリデン、づξり上チレノテ
レフタレート、ポリカーボネート、ポリサルホノ、ポリ
エチレノナフタレート、ポリビニルホルマール、ポリビ
ニルブチラート、アクリル樹脂、ニトロセルロース、ゼ
ラチン、セルロース、アクリルアミド、コラ−ケン、ア
セタール荀十月ｈ、ポリエステル、ポリアミド、ポリメ
チルペノテノ、フィブリノ、ポリ酢酸ビニル、ボリアマ
イト、ポリアクリロニトリル、ポリへノンイミダゾール
、ポリグリフール酸なとの人工医月１高分子材料または
天然材料を挙げることかできる。

これら構成単位から成る共重合物、および前記材料のブ
レットら使用することかできる。

担体の形状は使用目的に応して浜面状、管状、粒子状、
繊維状またはメツツユ状てうってよく、その表面は平滑
、粗面、多孔性なと、いかなる形状のものであってもよ
い。

酵素と担体を結合させる固定化法としては、固定寿命の
点から、共存結合法か好ましい。共存結合法として、ア
ンド結合法、臭化ノアン活性化法、カルボッイミド活性
化法、アミド基の０−アルキル化結合法などが挙げられ
、臭化ノアン活沈化法か特に好ましい。

［発明の効果１本発明の抗血栓材料は例えば、血行回路、反応器なとの
直接血液と接触する人工臓器の一叩に使用すれば、血液
凝固による血栓を回避することかでき、安心して治療を
施ずことかてきる。また、この材料は直接血液内に投入
することら可能である。本医用材料使用の際には、血栓
防止のための薬剤をＺ要としない。

こ実施例コ以下に本発明の実施例を挙げて更に詳細に説明ずろか、
本発明は実施例に何ら限定されるものではない。

実施例］精製生柿をバイオミキサーでホモジナイズし、超遠心（３０
０００９，４０分）にかけ、沈澱部分を採り、界面活性
剤ドライド：／Ｘ　−１００（ｌｏｈｍ　＆Ｈａａｓ　
Ｃｏ肚製、アメリカ）を用いてトロンボモノニリンを可
溶化した。

臭化ノア／で活性化した粉末状セファロース４Ｆ３（Ｐ
ｈＡｒｍａｃｉａ　Ｆｉｎｅ　Ｃｈｅｍｉｃａ１社製、
スウェーデン）をトロノヒノ溶液に加えて固定化し、ノ
イソブロピルフ（７スフエートてトロノヒノヲ羊活性化
した後、カラムに充填した。このカラムにより、トロン
ボモノニリンとトロノヒノのｔＪＩ相性を［り用してア
フぞニティークロマトクラフィーを１ｆつノニ。

過星文精製したトロノボモノニリン分画１１１０．を、ＯＩＭ
　ＮａＨＣＯｓｌｏ、５Ｍ　ＮａＣ（ｌて膨潤させた臭
化ノアン活性化セファロース４Ｂに加え、４°Ｃて１２
〜１６時間穏やかに攪拌した。固定化セファロース４Ｂ
をガラスフィルターて２集し、０５Ｍ　ＮａＣ０，を含
むＯ，ｌ　ＭＮａＨＣＯｓ水溶液、更に０．５Ｍ　Ｎａ
ＣＱを含むｏ、ｉＭ酢酸緩衝液（ｐＨ４０）で２回洗浄
した後、０．１４５Ｍ　ＮａＣＱを含むトリス−塩酸緩
衝液（ｐＨ７ｌｌ　）中に保（Ｔ　Ｌ　を為活性測定家兎耳静脈から採血したクエン酸処理全血を２５００７
で１５分間メな心し、その上／Ｉ′Ｉ（乏血小板血漿、
ＰＰＰ）をｍり、　ｐ　ｐ　ｐとトａ／ヒノ（０，３３
Ｕ／ｆｆｃ）とトロンポモジュリノ固定化セファロース
を混和し、フィブロメーターを（り用して、血液凝固時
間の延長を観察した。なお、比較として、トロンボモノ
ニリンを固定化していないセフｆロースについてら血液
凝固時間の延長を測定した。

も１１果を第１ノくに示４゛。

第１表実施例２位置 ′μの全Ｌｆｌｌ　Ｉ　Ｑに０　、１　Ｍクエン酸ナト
リウム１２５ａ＆を加え、遠心分離後、上清に１Ｍ塩化
バリウム８０２Ｑを加え、さらに遠心分離後、沈澱を１
５０ｖ、Ｑの０９％塩化ナトリウム溶液に懸濁した。

遠心分離後、１５０肩ｅの０　、２　Ｍエヂレノノアミ
ノ四酢酸溶液に沈澱を溶解し、硫安塩析を行った（４０
〜６７％）。得られた沈澱を水に溶解し、リン酸緩ｉ桁
液に体して透析を行った。その後、ＤＥ７＼［らセファ
ロースを用いて、更に精製した。溶出してきたプロティ
ンＣ分画を液体窒素で凍結した後、凍結乾燥処理して濃
縮した。

倣星匝固定化は」こ施例１にＮ、！！　Ｕて（Ｊ−）た。

活性測定Ｊｌｌ、質としてベブチノルメヂルクマリンアミト（Ｂ
ｏｃ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｒｇ−ＭＣＡ）を用
い、これにプロティンＣを作用さＵ−るとアルギニノ（
Ａ　ｒｇ）とメチルクマリノアミド（ＭＣＡ）の間のペ
プチド結合が切断される。それにより遊離したアミノメ
チルクマリノか蛍光を発するので、それを蛍光光度計を
用いて測定することによりプロティンＣの活性を算出す
る。

本実施例においては、対照試料として、固定化後に未反
応の活性基をブロックずろためのトリエタノールアミノ
をプロティンＣの代イっりに固定化したゲルを用いた。

結果を第２表に示す。

第２表

Claims

【特許請求の範囲】

１、トロンボモジュリンまたはプロテインＣを生理学的
に許容し得る担体に固定して成る抗血栓性材料。