JPS6183200A - ヒト・インタ−フエロンβの精製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野１ 本発明はヒト・インターフェロンβ（以下、ＩＦＮ−β
と略す）の精製法に関する。

［従来の技術］ ＩＦＮ−−βはヒト細胞がウィルスや合成核酸などに刺
激されることによって、細胞が産生ずる抗ウィルス活性
や抗ｌＩ！Ｉ瘍活性をｂつ糖タンパク質である。ＩＦＮ
−βの産生にはヒト３８ｍｍ胞をポリ■：ボリＣなどの
インターフェロンインデューサーで刺激して産生ずる方
法と、ＩＦＮ−β遺伝子を大Ｍ菌や酵母などの微生物や
動物細胞に組み込んで産生させる遺伝子組換えによる方
法があり、現在どちらも開発が進んでいる。この［ＦＮ
−βを医薬品として利用するためには、細胞や微生物に
よって産生された粗ｒＦＮ−βを安全性が認められた純
度にまで精！！Ｊ純化しなければならない。

したがって、ｒＦＮ−βをいかに効率良く高純度に精製
分離するかがＩＦＮ−βを医薬品として開発する際の極
めて重要な技術となる。特に遺伝子組換え法により（ｑ
られたＩＦＮ−βを精製する場合には、微生物由来タン
パク質、異種動物由来タンパク賀が精製対象液に条間に
含まれているために、これらを完全に取り除く必要があ
り、高度な精製法が要求される。

ＩＦＮ−βを精製するためには各種のクロマトグラフィ
ーが開発され、特にＩＦＮ−βに親和性のある物質を結
合した担体を用いる、いわゆるアフィニティークロマト
グラフィーが良い成績を納めている。これらのアフィニ
ティークロマトグラフィーはＩＦＮ−βの糖鎖や構成ア
ミノ酸残基への親和性を利用しており、二段あるいは三
段のクロマトグラフィーの組み合せによってＩＦＮ−β
の精製が行われているが、収率や純度の点でまだ改良ず
べき余地が残っている。

アフィニティークロマトグラフィーの中で最も特異性が
高いものは抗ＩＦＮ−β抗体をリガンドとして用いる抗
体クロマトグラフィーであり、その試みもい＜°、つか
報告されている（　Ｏｋａｍｕｒａら、Ｂｉｏｃｈｅｍ
ｉｓｔｒｙ　、　１９．３８３１　（１９８０）、Ｈｏ
ｃｈｋｅｐｐｅｌ　　　ｒら　、　　Ｎａｔｕｒｅ　　
　、　　　２９　１　　、　　５００　　　（１９８１
）　、　Ｎｏｖｉｃｋら、Ｊ　、　ｇｅｎ、Ｖ　１ｒｏ
１．　、６４　。

９０５　（１９８３））。しかし、特異性が極めて高い
にもかかｂらず、抗体クロマトグラフィー一段ではまだ
完全純化は難しく、実用的には次に何らかの精製手段を
つなげる必要がある。

［発明が解決しようとする問題点］ ＩＦＮ−βの精製において、抗体クロマトグラフィーは
特異性が極めで高いにもかかわらず、いくつかの問題点
を残している。

まず、高特異性ではあるがこの方法だけではＩＦＮ−β
の完全純化は難しいことである。原理的には抗ＩＦＮ−
β抗体はＩＦＮ−βだけを吸着するが、実際には抗ＩＦ
Ｎ−β抗体を不溶化した担体にはＩＦＮ−β以外の夾雑
タンパク質も微ｍであるが吸着され、溶出液にそれが混
入することがある。また、リガンドである抗ＩＦＮ−β
抗体がわずかながらも溶出液中に離脱してくる恐れがあ
る。ＩＦＮ−βの完全純化のためには、これらの夾雑物
を除去しなければならず、抗体りＯマドグラフィーの次
に何らかの精製手段をつなげる必要がある。

次に、抗体りＯマドグラフィーで用いられる１ＦＮ−β
の溶出条件は、多くはｐＨ２，０〜３．０の酸性緩衝液
であり、ときには８１１度のカオトロピック塩や界面活
性剤を含む中性やアルカリ性緩衝液である。これらの溶
液系は、通常のイオン結合、水素結合を利用したりＯマ
ドグラフィーでは【ＦＮ−βの吸着を妨害してしまう場
合があり、他種のクロマト系につなげる場合には、ＩＩ
Ｈ調整、希釈、透析、脱塩などの操作を必要とする場合
が多い。このような操作はｆＦＮ−βのような生理活性
タンパク質には活性の損失やクンバク質の沈澱などの悪
影響を及ぼすことがあり、かつ大量処理の場合には技術
的困難さも伴うためできる限り避けることが好ましい。

本発明は上記の抗体りＯマドグラフィーの問題点を解決
し、［ＦＮ−βの精製法において抗体クロマトグラフィ
ーの高特異性を損うことなく、ＩＦＮ−βをａ純度かつ
高収率で精製することを目的とする。

［問題点を解決するための手段］ 本発明は、ｒＦＮ−β溶液を抗ＩＦＮ−β抗体を不溶化
した担体に接触させる工程、該担体への吸着物を溶出剤
にて溶出させる工程、溶出物をブルー色素を結合させた
担体に接触させる工程、および該ブルー色素担体に吸着
した［ＦＮ−βを溶出剤にて溶出させる工程からなるＩ
ＦＮ−βの精製法である。

ここで言うＩＦＮ−βとは、ヒト培養細胞をウィルスや
合成核酸などで刺激させることにより産生されるＩＦＮ
−β、および遺伝子組換え技術を用いてｒＦＮ−β構造
遺伝子を組み込んだ大腸菌、酵母などの微生物や、ハム
スター、サルなどの動物細胞により産生されるｒＦＮ−
βを指す。

精製初段のリガンドに用いられる抗ＩＦＮ−β抗体は、
ＩＦＮ−βを結合し得る抗体であれば特に限定されない
が、常法により動物に免疫して得られる抗体あるいは細
胞融合技術によるモノクローナル抗体を指す。これらの
抗体の不溶化には、セルロース、アガロース、架橋デキ
ストラン、ポリアクリルアミド、多孔性ガラスなどの担
体が用いられ、不溶化反応はいずれもペプチド中のアミ
ノ基あるいはカルボキシル基と導入された活性化置換基
との結合により行われる。主な活性化＠換基として、シ
アン化ブロム活性基（たとえば、“’ＣＮＢｒ活性化セ
ファロース４Ｂ”：ファルマシア社）、Ｎ−ヒドロキシ
スクシンイミドエステル基（たとえば゛′活性化ＣＨ−
セファロース４Ｂ″；ファルマシア社、“アフィゲル−
１０”：バイオシラド社）、ヒドラジド誘導体（たとえ
ばパオイパーギットＣ″；ローム・ファーマ社）、アン
ヒドリド基（たとえば゛オイバーギットＡ°′；ローム
・）１−マ社）などが挙げられる。

抗ＩＦＮ−β抗体を不溶化した担体（以下、抗ＩＦＮ−
β抗体不溶化担体と略す）を用いた抗体クロマトグラフ
ィーの実際の操作は次のように行う。すなわら、まずヒ
ト細胞培養上清、遺伝子組換え大腸菌破砕遠心上滑ある
いは遺伝子組換え動物細胞培差上清などの粗ｒＦＮ−β
溶液を抗ＩＦＮ−β抗体不溶化担体と接触吸着させる。

吸着法はバッチ法、カラム法どららＣも可能であるが、
カラム法の方が吸着効率が高い。吸着条件はｐＨ５へ７
９、のぞましくはｒｌＨ６〜８であり、１Ｍ程度の無機
塩は存在していても吸着に影響はない。

吸着後、適当な中性緩衝液で十分に担体を洗って夾雑タ
ンパク質を除去した後、ｐｌ」２〜３の酸性Ｍ　ｔＩｊ
液あるいはカオトロピック塩や界面活性剤を含む中性か
アルカリ性緩衝液で吸着したＩ　Ｆ　Ｎ　−βを溶出さ
せる。多くの場合、酸性緩衝液が用いられ、その組成は
、たとえば０．１Ｍクエン酸、０．１〜０．２Ｍグリシ
ン塩酸などであり、適宜無機塩（たとえば０．５〜１Ｍ
塩化ナトリウム）や水溶性有機溶媒（たとえばグリセロ
ールやエチレングリコール）、界面活性剤（たとえば゛
トリトンＸ−１００”）などを加えることもある。どの
ような組成の酸性緩衝液を選択するかは、目的とするＩ
ＦＮ−βの溶出効果、その緩衝液中にお番プるＩＦＮ−
βの安定性、リガンドである抗体への影響、そして次に
つづくクロマト系への適応性などを考慮する必要がある
。これらの点を考慮すると、ＩＦＮ−βの溶出にはイオ
ン強度が０．０５以下でＩ）ｌ−１１，５〜３．０の酸
性緩衝液が好ましく用いられる。このような酸性緩衝液
としては、たとえば塩酸、硫酸、ギ酸、酢酸、クエン酸
などが挙げられる。これらの酸性緩衝液は、高疎水性の
■ＦＮ−βの溶出には効果的で収率は定量的であり、安
定性にも優れ、少なくとも４℃、１力月間同液中で活性
の損失は起こらなかった。また、水溶性有１幾溶媒や界
面活性剤を含まないためリガンドである抗体、の変性作
用も少なく、かつイオン強度が低く緩衝作用が弱いため
、次につづくクロマト系への適応のために中和、透析、
脱塩などの操作が多くの場合不要となる。

精製ステップ二段目に導入されるべきクロマト系は、タ
ンパク質の分離能が高く、かつ高収率であることが必要
とされる。この点、タンパク質の精製に多くの場合用い
られるイオン交換り０７１−グラフィー（たとえばスル
ホブ［ｌピル基によるイオン交換クロマトグラフィー）
はＩＦＮ−βと夾雑タンパク質の分離が悪く、また収率
も低く不適であった。またＩＦＮ−βの精製法として報
告されているアフィニティークロマトグラフィーでも、
フンカナバリンＡをリガンドしたクロマトグラフィーは
糖鎖をもたない遺伝子組換え望ＩＦＮ−βには不適であ
る。

本発明者らは、抗体クロマトグラフィーおよびその溶出
液の利点を活かしながら、かつわずかに残っている夾雑
タンパク質を効果的に取り除くことが可能な二段目の精
製ステップに導入すべくクロマトグラフィーを鋭意研究
の結果、ブルー色素を結合させた担体（以下、ブルー色
素結合担体と略す）を用いたブルークロマトグラフィー
がこれらの要求に適うことを見出した。

ブルークロマ１〜グラフイーのリガンドとして使われて
いるブルー色素は一般名をＣＩリアクティブブルー２と
いい、ＣＩＢＡ−ＧＥ　ＩＧＹ社から“シバクロンブル
ーＦ３ＧΔ″またはパシバクロンブル−３Ｇ　Ａ　”と
いう商品名で市販されている青色色素である。構造式は
下図のとおりであり、Ｊａｎｋｏｗｓｋｙら　（［３ｉ
ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、１５　．５１８２（１９７６）
）によってヒトおよび動物のＩＦＮ−βの精製に有効で
あることが報告された。。

実際のクロマトに用いるブルー色素結合担体としては、
“ブルー・セファ０−スＣＬ　−６Ｂ　”（フン７ルマ
シアン［）、“マトレ・ンクスゲル・ブル−Ａ”（アミ
コン社）および゛アフｒゲル・ブルー″（バイオラッド
社パなどの商品名で市販されているブルーアがロースゲ
ルが適当であり、容易に入手することができる。

抗体クロマトグラフィーで得られた部分精製ＩＦＮ−β
は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア水
等のアルカリ溶液、または高Ｓ度の中性ｕＩ！７液を加
えてＩ）ｌ−１５，０〜９，０とした後、あるいは溶出
された酸性緩衝液（ｐＨ２，０〜３．０）ままでブルー
色素結合担体と接触させると、速やかにブルー色素結合
担体に吸着される。中和操作によるＩＦＮ−β活性の損
失を防ぐためには、溶出後の酸性緩衝液のまま吸着させ
ることが好ましい。

使用するブルー色素結合担体容量は１１ゲル当り１〜１
０ｍｇタンパク質を付加するとして算定するのが適当で
、カラム法の場合、単位体積当りの流速（Ｓ　／　Ｖ　
）は１〜１０／ｈｒで行われる。ＩＦＮ−β吸着後はブ
ルー色素結合担体をリン酸緩衝液（１）８６〜９〉、さ
らには１Ｍ塩化ナトリウムと３０％以下のエチレングリ
コールまたはプロピレングリコールを含む緩衝液（１）
８６〜９〉で洗うことにより、ＩＦＮ−β以外の夾雑タ
ンパク質のほとんどすべてを除去することができる。吸
着したＩＦＮ−βの溶出には、体積比で３０〜６０％の
１チレングリコールまたはプロピレングリコールを含み
、かつ０．５〜２Ｍの塩化ナトリウムを含むＩ）８５以
上の緩衝液が用いられ、好ましくは（ｌＨ６〜９で用い
られる。ａｍ液の塩組成、塩濃度および液量は特に限定
されるものではなく、そのｌ）Ｈを保持するのに必要な
組成、濃度および吸着されたＩＦＮ−βが実質的に回収
されるのに必要な損が用いられる。

このようにして水沫で精製されたＩＦＮ−βは高濃度で
あり、抗体である免疫グロブリンの混入は酵素免疫測定
法（ＥＩＡ）では認められなかった。すなわら、抗体ク
ロマトグラフィーでｒＦＮ−βを低イオン強度の酸性緩
衝液で定ｍ的に高収率で溶出し、つづいてＩＦＮ−βを
ブルー色素結合担体に吸着さけ得る方法を見出したこと
により、ＩＦＮ−βに特異性の高い二種類のアフィニテ
ィークロマト法を組み合わせることにより、簡便にして
高品位の精製ＩＦＮ−βを得る本発明を完成し　Ｉこ　
。

［発明の効果］ ＩＦＮ−βは現在、抗腫瘍剤および抗ウィルス剤として
の期待からその臨床評価のために大量に供給されること
が社会的にも要請されている。１ＦＮ−βの今までの量
的制約の原因は、細胞による産生量自体が少ないこと、
高収率、高精製度で行える精製法の開発が難しかったこ
とである。しかしながら、遺伝子操作技術により、生産
量的には大量に供給されることが可能となってきた現在
、高性能な精製法を開発することが大きな課題であった
。

本発明方法でｆｉ製されたＩＦＮ−βは極めて高純度で
あり、夾雑タンパク質や免疫グ１コブリンの混入は放射
性免疫測定法（ＲＩＡ）や酵素免疫測定法（ＥＩＡ）で
は認められなかった。すなわち、抗体クロマトグラフィ
ーで高度に精製し、さらにブルークロマトグラフィーに
よりわずかに残存している夾雑タンパク質を除去できる
ことを見出した。しかもこのとき、抗［ＦＮ−β抗体不
溶化担体からＩ　Ｆｌｕ−βを低イオン強度の酸性緩衝
液で溶出させることにより、ｒＦＮ−βを安定な条件で
直接ブルークロマトグラフィーに適用できることを見出
した。本発明は、特異性と分離能の高い二種類のアフィ
ニティークロマトグラフィーを何ら特殊操作を加えるこ
となく直結し、簡便にして高品位の精製ＩＦＮ−βをｊ
ｑる方法である。

これまで述べてきたように、本発明はＩＦＮ−βの精製
法において新技術を提供づるものである。

数あるアフィニティークロマトグラフィーのうち、抗体
クロマトグラフィーはその高い特異性のゆえに注目され
てはきたが、実用に際しては、精！！ｉ！度の不足、抗
体のリークのおそれ、低ｐＨで高イオン強度溶出液の後
処理、などの問題が残っていた。

本発明は抗体クロマトグラフィーとブルークロマトグラ
フィーを組み合せ、これらの問題を一挙に解決するもの
である。

したがって、本発明による精製法ｒは抗体クロマトグラ
フィーの高特異性が十分に活かされ、高精製度、高収率
でＩＦＮ−βの精製が可能であり、本発明方法により得
られる精製ＩＦＮ−β標品は高品位で安全性の高いもの
である。しかもりＯマド操作も簡便で、再現性も高く大
量処理にも適う精製法である。

以下、実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。実施例中の［ＦＮ−β活性は、ヒト羊賎由来のＦＬ細
胞と水胞性口炎ウィルス（ＶＳＶ）を用いた細胞変性効
果（ＣＰＥ）阻止法により測定し、標準ＩＦＮ−βによ
り国際単位（ＩＵ）に換算したちのである。

実施例１ ヒト正常二倍体線維芽１ａ胞を５％胎児牛血清を含むイ
ーグル最小必須培地で十分培養増殖させた後、ポリ■：
ボリＣ、シクロヘキシイミド、アクチノマイシンＤを用
いた超誘発法でＩＦＮ−βを産生させた。精製原液とな
る誘発後の培養上清には、２．Ｏｘ　１０４ＩＬＪ／ｗ
＋ｌのＩＦＮ−β活性と１００μｇ−ｍｌのタンパク質
が含まれていた。

この培養上清４Ｑを、ＩＦＮ−βで感作したマウス牌臓
細胞とマウスミエローマ細胞との融合細胞により産出さ
れた抗ＩＦＮ−βのマウスモノクローナル抗体（特願昭
５８−１９３３７号）を不溶化させたアガロースカラム
１ｍ１（１０φ×１３ａｍ）に４℃、流速１０ｉ１／ｈ
ｒで流した。素通り液には加えたタンパク質量の９９％
が含まれていたが、ｒＦＮ−β活性は認められなかった
。つづいて抗体カラムを５０％エチレングリコールを含
む１５ｍＭ酢ＷＩＩＷＪ’ｆＭ液（Ｄ　ｌ−４４，Ｏ）
　２０１テ洗浄した後、１５１１１Ｍ塩Ｈ（イオン強度
０，０１５、Ｉ）Ｈ２，０）　１０ｎ＋ｌでＩＦＮ−β
を溶出した。ｒＦＮ−β活性の回収率は９７％、比活性
は１，０００倍上昇した。

ＩＦＮ−β活性を含む抗体カラムからの溶出液をさらに
“マドレックスゲル・ブル−Ａ　”カラム１　ｍｌ　（
１０φ：１３　ｍｓ）に４℃、５ｍｌ／ｈｒで流して■
ＦＮ−βを吸着させた。吸着後１Ｍ塩化ナトリウムと３
０％エチレングリコールを含む２０ｍＭす＞Ｈ緩衝液（
ｔ）Ｈ７，４）２０ｍｌで洗浄した後、１Ｍ塩化ナトリ
ウムと６０％エチレングリコールを含む２０ｍＭリン酸
緩衝液（ｐＨ７，４）１０ｍ１でＩ　ＦＮ　、−βを回
収した。ＩＦＮ−β活性の回収率は９０％で、比活性は
さらに３倍上界した。

この結束、精製原液に対するＩＦＮ−β活性の回収率は
８７％で、比活性は３．０００倍上界した。

この精製ＩＦＮ−β標品は、ドデシル硫酸ナトリウム含
ず１ポリアクリルアミドゲル電気泳動で均一なタンパク
７１バンドどして現れ、リガンドであるマウス免疫グ［
１プリンは酵素免疫測定法（ＥＩＡ）による分析で検出
されなかった。

実施例２ ［ＦＮ−β構造遺伝子を組み込んだハムスター細胞を１
０％の胎児牛血清を含む’ａｌｐｈａ　　（−）　”（
０１８００社＞　ＩＱ　ｍ　ｍ　Ｆ　ｉ８　ｍ　Ｌ／、
Ｉ　ＦＮ−１１３活性を含む培養上清を精！ｌＪ原で（
夕とした。この培養上清には２．２　ｘ１０４　ＩＬＩ
／ｍｌのＩＦＮ−β活性と３．６ｍｑ／ｍｌのタンパク
質が含まれていた。

この培養上清１αを、実施！ＩＡ１で使用したマウスモ
ノクローナル抗体を不溶化させたアガロースカラム１ｍ
１（１０φｘ１３ｍｍ）に、４℃、流速１０ｍ１／ｈｒ
で流した。素通り液には加えたタンパク質量の９９％が
含まれていたが、ＩＦＮ−β活性は認められなかった。

つづいて抗体カラムを５０％エチレングリコールを含む
１５１１１Ｍｌ’ｌｔ酸緩衝液（ＯＨ４，０）２０ｍｌ
で洗浄した後、１５ｍＭ塩Ｍ（イオン強度０．０１５、
ｐＨ２，０）１０ｍｌでＩＦＮ−βを溶出した。ＩＦＮ
−β活性の回収率は９８％、比活性は８，３００倍上昇
した。

ｆＦＮ−β活性を含む抗体カラムからの溶出液をざらに
゛マドレックスゲル・ブルーＡ　”カラム１ｍ１（１０
φｘ　ｉ　３．＋ｎｍ）に４℃、５　ｍｌ／　ｈｒテ流
してＩＦＮ−βを吸着させた。＠着後１　　ｍＭ塩化ナ
トリウムと３０％エチレングリコールを含む２０１１１
Ｍリンｌ［衝液（＋１．ｌ−１７゜４）２０ｍｌｒ−洗
浄した後、１Ｍ塩化ナトリウムと６０％エチレングリコ
ールを含む２０ｍＭリンＭ１ｍ衝液（ｐｌ−１７，４＞
１０１でＩＦＮ−βを回収した。ＩＦＮ−βの回収率は
８７％で、比活性はさらに７倍上昇した。

この結果、精製原液に対するＩＦＮ−βの回収率は８５
％で、比活性は約５８．０００倍上昇した。

この精製ｒＦＮ−β標品は、ドデシル硫酸ナトリウム含
有ポリアクリルアミドゲル電気泳動で均一のタンパク質
バンドとして現れ、リガンドであるマウス免疫グロブリ
ンは酵素免疫測定法（ＥｌΔ）による分析で検出されな
かった。

実施例３ ＩＦＮ−β構造遺伝子を組み込んだ大腸菌を十分培養増
殖させた後、高圧により菌体を破砕した。

さらに、ポリエチレンイミンを加えて核酸を除去した後
、６０％飽和硫安を加えてタンパク質を塩析し、０．５
ＭＪｇ化ナトリウムを含む１０＋ＩＩＭリン酸緩衝液（
ｐｌ−１７，４＞で再懸濁したものを精製原液とした。

この菌体抽出液には５．０Ｘ１０６ＩＵ／ｍｌのタンパ
ク質が含まれていた。

この菌体抽出液１０ｍ１を、実施例１で使用したマウス
モノクロ−犬ル抗体を不溶化させたアガロースカラム１
　ｍｌ　（１０φｘ１３ｍｍ）に４℃、流速１　ｍｌ／
ｈｒで流した。素通り液には加えたタンパク質量の９９
％が含まれていたが、ＩＦＮ−β活性は認められなかっ
た。つづいて抗体カラムを５０％エチレングリコールを
含む１５ｍ　Ｍ酢酸緩衝液（ｐ　ｆ−ｌ　４．０）　２
Ｏｎ＋ｌで洗浄した後、１５ｍ　Ｍ塩酸（イオン強度０
，０１５、ｐｌ−１２，０）　１ＱｍｌでＩＦＮ−βを
溶出した。ＩＦＮ−β活性の回収率は９５％、比活性は
１５Ｃ１上昇した。

Ｉ　ＦＮ−−β活性を含む抗体カラムからの溶出液をさ
らに“マドレックスゲル・ブル−″カラム１１（１０φ
ｘ１３　ｍｍ）に４℃、５　ｍｌ／　ｈｒで流してＩＦ
Ｎ−βを吸着させた。吸着後１Ｍ塩化ナトリウムと３０
％エチレングリコールを含む２０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ
Ｈ７，４＞　２！０＋＋＋Ｉで洗浄した後、１Ｍ塩化ナ
トリウムと６０％エチレングリコールを含む２Ｏｎ＋Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ７，４＞　１０ｍｌでＩＦＮ−βを
回収した。ＩＦＮ−β活性の回収率は９０％で、比活性
はさらに４倍上昇した。この結果、精！Ｆ！Ｊｉｌｉ４
液に対するｆＦＮ−β活性の回収率は、８６％で、比活
性は６００倍上昇した。

この精製ＩＦＮ−β標品は、ドデシル硫酸ナトリウム含
有ポリアクリルアミドゲル電気泳動で均一なタンパク質
バンドとして現れ、大腸菌由来夾雑タンパク質は放射性
免疫測定法（ＲＩＡ＞による分析で検出限界（含有率０
．００１％）以下であった。またりがンドぐあるマウス
免疫グロブリンも酵素免疫測定法（Ｅ　ＩＡ）による分
析で検出されなかった。

比較例１ 抗体カラムから溶出した実施例１の溶出液を、さらに“
スルボブロビルセファデックスＣ２５”（ファルマシア
社）２ｍｌ（１０φｘ２５＋ｙｕｎ）に４℃で吸着させ
た。つづいて５ｍＭリン酸緩衝液（ＤＩ−１’７．４）
　２０ｍｌで洗浄した後、０．５Ｍ塩化ナトリウムを含
む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐ）−１ｇ、ｏ）４０ｍｌを
流し、ＩＦＮ−β活性のある両分を集めた。ｒＦＮ−β
回収率は２０％で、ｔＦＮ純度はドデシル硫酸ナトリウ
ム含有ポリアクリルアミドゲル電気泳動による分析で９
２％であった。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）ヒト・インターフェロンβ溶液を抗ヒト・インタ
   ーフェロンβ抗体を不溶化した担体に接触させる工程、
   該担体への吸着物を溶出剤にて溶出させる工程、溶出物
   をブルー色素を結合させた担体に接触させる工程、およ
   びブルー色素担体に吸着したヒト・インターフェロンβ
   を溶出剤にて溶出させる工程からなるヒト・インターフ
   ェロンβの精製法。