JPS6192586A - Ｌ−リジンの製造法 - Google Patents
Ｌ−リジンの製造法Info
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- JPS6192586A JPS6192586A JP21245684A JP21245684A JPS6192586A JP S6192586 A JPS6192586 A JP S6192586A JP 21245684 A JP21245684 A JP 21245684A JP 21245684 A JP21245684 A JP 21245684A JP S6192586 A JPS6192586 A JP S6192586A
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- Japan
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- lysine
- caprolactam
- amino
- corynebacterium
- brevibacterium
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
し産業上の利用分野］
本発明はＬ−リジンの製造法に関するものである。
［従来の技術］
従来、発酵法によるリジンの製造法として、ブレビバク
テリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ） ｍに属
し、５−（２−アミノエチル）−Ｌ−システィン（ＡＥ
Ｃ）耐性またはハロ置換−ε−カプロラクタムに対し耐
性を有する菌を使用づる方法が公知−Ｃある（特公昭４
８−２８０７８号公報、特公昭５３−４５３９１号公報
）。
テリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ） ｍに属
し、５−（２−アミノエチル）−Ｌ−システィン（ＡＥ
Ｃ）耐性またはハロ置換−ε−カプロラクタムに対し耐
性を有する菌を使用づる方法が公知−Ｃある（特公昭４
８−２８０７８号公報、特公昭５３−４５３９１号公報
）。
この方法も工業的には相当源れた方法ではあるが、なお
し−リジン生成蓄ｆｉ！を能を向上させると言う点にお
いて、改良１べき余地があった。
し−リジン生成蓄ｆｉ！を能を向上させると言う点にお
いて、改良１べき余地があった。
［発明が解決しようとしている問題点１そこで、本発明
者らは上記問題の改良を目的に鋭意検討したところ、新
たに見い出した特定の変異菌を使用すれば、し−リジン
の生成％積が（働めで向上すると言う事実を見い出し本
発明を完成した。
者らは上記問題の改良を目的に鋭意検討したところ、新
たに見い出した特定の変異菌を使用すれば、し−リジン
の生成％積が（働めで向上すると言う事実を見い出し本
発明を完成した。
［問題を解決するための手段］
本発明の上記目的はブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍ ）属まＩＣはコリネバクテリウム（
Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒ ｉｕｍ ）属に属し、Ｌ−
α−アミノ−ε−カプロラクタムに対し耐性を右し、か
つし−リジン生成蓄積能を有する変異菌を培養し、その
后地中に蓄積したＬ−リジンを採取するによっ−Ｃ達成
できる。
ａｃｔｅｒｉｕｍ ）属まＩＣはコリネバクテリウム（
Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒ ｉｕｍ ）属に属し、Ｌ−
α−アミノ−ε−カプロラクタムに対し耐性を右し、か
つし−リジン生成蓄積能を有する変異菌を培養し、その
后地中に蓄積したＬ−リジンを採取するによっ−Ｃ達成
できる。
以下、本発明の組成および効果を詳述する。
本発明に使用される微生物はブレビバクテリウム（３ｒ
ｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ） ｆｉｉとコリネバクテ
リウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の何れか
に属する微生物である。ま／Ｃ、これらの屈に属する微
生物であっても、し−α−アミノ−ε−カプロラクタム
に対し耐性を右するものに限られる。これらの微生物は
、ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム（Ｂｒｅ
ｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｏｆｅｒｍｅｎｔ
ｕｎ＋） （Ａ Ｔ Ｃ。
ｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ） ｆｉｉとコリネバクテ
リウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の何れか
に属する微生物である。ま／Ｃ、これらの屈に属する微
生物であっても、し−α−アミノ−ε−カプロラクタム
に対し耐性を右するものに限られる。これらの微生物は
、ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム（Ｂｒｅ
ｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｌａｃｔｏｆｅｒｍｅｎｔ
ｕｎ＋） （Ａ Ｔ Ｃ。
Ｃ−１３８６９、以下ＴＭ−１１１８と称する）やコリ
ネバクゾリウム・グルタミクム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕＩＩＩＡ Ｔ ＣＯ
−１３２８６以下ＴＭ−１１１７と称する）にＬ−α〜
ルアミノ−ε−カプロラクタム以下ＬＡＧと称する）耐
性を付与することによって１与られた変異株であり、既
に微工研寄託番号第７６９３号および第７６９４号とし
てそれぞれ登録されている。
ネバクゾリウム・グルタミクム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕＩＩＩＡ Ｔ ＣＯ
−１３２８６以下ＴＭ−１１１７と称する）にＬ−α〜
ルアミノ−ε−カプロラクタム以下ＬＡＧと称する）耐
性を付与することによって１与られた変異株であり、既
に微工研寄託番号第７６９３号および第７６９４号とし
てそれぞれ登録されている。
なお、本発明に言う光学活性なし−α−アミノーε−カ
プロラクタムとはα位の不整炭素上に立体選択的にアミ
ノ基が導入されたもので、［α１２０； ４０の旋光
度を有するものを言う。
プロラクタムとはα位の不整炭素上に立体選択的にアミ
ノ基が導入されたもので、［α１２０； ４０の旋光
度を有するものを言う。
り
本発明に使用される微生物は、いわゆるグルタミン酸生
産菌として知られている代表的な微生物、すなわちブレ
ビバクテリウム（Ｂ ｒｅＶｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ）
属またはコリネバクゾリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ）属に属する微生物を親株として通常の変異誘
導法ならびにスクリーニング法によって採取される。
産菌として知られている代表的な微生物、すなわちブレ
ビバクテリウム（Ｂ ｒｅＶｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ ）
属またはコリネバクゾリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ）属に属する微生物を親株として通常の変異誘
導法ならびにスクリーニング法によって採取される。
具体的には紫外線照射やＮ−メチル−Ｎ′−二トローＮ
−ニトロメソグアニジン処理等の方法によって採取され
る。
−ニトロメソグアニジン処理等の方法によって採取され
る。
前記変異株の誘導方法の実験例を述べれば次のとおりで
ある。
ある。
実験例１
コリネバクテリウム・グルタミクム（ＡＴＣＣ−１３２
８６以下ＴＭ−１１１７と称する）を常法により、紫外
線照射処理後、以下に示１最小培地にＬ−α−アミノ−
ε−カプロラクタム（ＬＡＣ）０．２％添加した寒天培
地上に塗抹し、４〜１０日間、３０℃で培養した。培地
組成は第１表のとＪ３っであった。
８６以下ＴＭ−１１１７と称する）を常法により、紫外
線照射処理後、以下に示１最小培地にＬ−α−アミノ−
ε−カプロラクタム（ＬＡＣ）０．２％添加した寒天培
地上に塗抹し、４〜１０日間、３０℃で培養した。培地
組成は第１表のとＪ３っであった。
第１表
グルコース １０ ０ｒ。
硫安 １．５！ｌｌｒ。
尿素 １゜５ ｇｒ。
ＫＨ２ＰＯ４１，Ｏｇｒ。
Ｋ２ＨＰＯ４３，０（ｌｒ。
ｔＶＩｌ）ＳＯ４・ ７１１２０
０．１ ｇｒ。
０．１ ｇｒ。
Ｃａ Ｃｌ ２ ・２Ｈ２００，ＯＯ１＋ｒ。
Ｎａ ＣＩ ０．００５Ｏｒ。
Ｆｅ ３０４−７Ｈ２００，００５ｏｒ。
Ｍ ｎ Ｓ ０４ ・ ４ Ｆ１２ ０
０． ００５ ｇｒ。
０． ００５ ｇｒ。
ｄ−ビオチン ３０ μ９チアミン塩
酸Ｊｕ １００μ９ポリペプトン
３ ０．００３Ｏｒ。
酸Ｊｕ １００μ９ポリペプトン
３ ０．００３Ｏｒ。
寒天 ２０ （Ｊｒ。
以上の組成をイオン交換水で１リツトルとし、ＮａＯＨ
で０１−１を６．８に調整したものを培地とした。上記
の培養で出現したコロニーの中からＬ−リジン生産能の
高いものを選別し、その一つとしてコリネバクテリウム
・グルタミクム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）属（Ｌ Ａ Ｃ１性変異菌 Ｔ
Ｍ−１１０７（微工研菌￥ｊ７ｊ４７６９３号）を得た
。
で０１−１を６．８に調整したものを培地とした。上記
の培養で出現したコロニーの中からＬ−リジン生産能の
高いものを選別し、その一つとしてコリネバクテリウム
・グルタミクム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｇｌｕｔａｍｉｃｕｍ）属（Ｌ Ａ Ｃ１性変異菌 Ｔ
Ｍ−１１０７（微工研菌￥ｊ７ｊ４７６９３号）を得た
。
同様な方法でブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタ
ム（Ｂ ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｉａｃｊｏｆｅ
ｒｍｅｎｔｕｍ）ＡＴＴＣＧ−１３８６９（以下ＴＭ−
１１１８と称する）を親株としてＭＡＣ耐性変異株の中
からＬ−リジン生産能を右Ｊるものを選別し、その一つ
としてブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム（Ｂ
ｒｅｖｉｂａｃｔｒｉｕｎ＋ ｌａｃｔｆｅｒｍｅｎ
ｔｕｍ ） ＬΔＣ耐性変異菌ＴＭ−１１０８（微工研
菌奇第７６９４号）を得た。
ム（Ｂ ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ Ｉａｃｊｏｆｅ
ｒｍｅｎｔｕｍ）ＡＴＴＣＧ−１３８６９（以下ＴＭ−
１１１８と称する）を親株としてＭＡＣ耐性変異株の中
からＬ−リジン生産能を右Ｊるものを選別し、その一つ
としてブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム（Ｂ
ｒｅｖｉｂａｃｔｒｉｕｎ＋ ｌａｃｔｆｅｒｍｅｎ
ｔｕｍ ） ＬΔＣ耐性変異菌ＴＭ−１１０８（微工研
菌奇第７６９４号）を得た。
実験例２
第２表に示した液体培地に第３表に示した量のＬＡＧを
添加した培地を作成した。この培地を常法により殺菌後
各々１０ｍ１入った試験管で３０℃で４８時間通気培養
した。菌の成育麿は培養液を２倍希釈後５５０Ｉ１１μ
の吸光度で測定した。
添加した培地を作成した。この培地を常法により殺菌後
各々１０ｍ１入った試験管で３０℃で４８時間通気培養
した。菌の成育麿は培養液を２倍希釈後５５０Ｉ１１μ
の吸光度で測定した。
第２表
グルコース １５ ｏｒ。
髄空 ２．Ｏｇｒ。
尿素 ２．Ｏｇｒ。
Ｋ１−１２ＰＯ４２，Ｏｇｒ。
Ｋ２ＨＰＯ４１，Ｏｏｒ。
ｔｖｌｇ ＳＯ４・７ｆ−１２００，１（Ｊｒ。
Ｃａ Ｃ１’ ２Ｈ２００，００１！ｌｌｒ。
Ｎａ ＣＩ ０．００５ｇｒ。
Ｆｅ ＳＯ４・７Ｈ２００，００５ｏｒ。
Ｍｎ ＳＯ４・ ４ Ｆ＋２ ０
０． Ｃ０５ｇｒ。
０． Ｃ０５ｇｒ。
ｄ−ビオチン ５０ μ９チアミン塩酸
塩 １００ μｑポリペプトン Ｓ
Ｏ，ＯＯ３ｇｒ。
塩 １００ μｑポリペプトン Ｓ
Ｏ，ＯＯ３ｇｒ。
以上の組成をイオン交換水で１ リットルにし、ＮａＯ
ト１でｐ Ｈを６．８に調整したものを培地とした。
ト１でｐ Ｈを６．８に調整したものを培地とした。
第３表は、これらの培養によって得た各菌株の成育度を
示したものである。
示したものである。
第３表
濃度＄１１１７ １１０７ １１１８ １１０８０
０．４１３ ０．４５１ ０．３９２ ０．３８
８１．０ ０．０８１ ０．２１５ ０．０９７
０．１８１上記実験例のよううにしてｊｑられた微生
物を用いてＬ−リジンを生産するには、炭素源、窒素源
、無機塩類および微生物が要求する栄養物質を含有する
通常の栄養培地を使用する。＠記炭素源としては、グル
コース、シュクロースおよびこれらを含有する糖蜜、廃
糖蜜、澱粉の加水分解液などの糖類、ジュースや果物の
粕、木材、紙などのセルロースを加水分解した加水分解
糖液のような各種糖類の他、酢酸のような有機酸、エタ
ノールのようなアルコール、炭化水素等も使用できる。
０．４１３ ０．４５１ ０．３９２ ０．３８
８１．０ ０．０８１ ０．２１５ ０．０９７
０．１８１上記実験例のよううにしてｊｑられた微生
物を用いてＬ−リジンを生産するには、炭素源、窒素源
、無機塩類および微生物が要求する栄養物質を含有する
通常の栄養培地を使用する。＠記炭素源としては、グル
コース、シュクロースおよびこれらを含有する糖蜜、廃
糖蜜、澱粉の加水分解液などの糖類、ジュースや果物の
粕、木材、紙などのセルロースを加水分解した加水分解
糖液のような各種糖類の他、酢酸のような有機酸、エタ
ノールのようなアルコール、炭化水素等も使用できる。
前記窒素源としては、アンモニアガス、各種の有機およ
び無機アンモニウム塩、尿素その他が使用できる。 醗
酵の条件は通気培養がよく、ｍ酵温度は２−４〜４０℃
、時間は２〜７日間である。ｌ）Ｈの調整は無機あるい
は有機の酸性もたばアルカリ性物質、さらには尿素、炭
酸カルシウム、アンモニアカスなどを使用して行なわれ
る。その範囲は５〜っである。醗酵液からＬ−リジンの
採取は通常イオン交換樹脂法、その他の公知の方法によ
って行なわれる。培地の種類によっては直接晶析する方
法も採用できる。
び無機アンモニウム塩、尿素その他が使用できる。 醗
酵の条件は通気培養がよく、ｍ酵温度は２−４〜４０℃
、時間は２〜７日間である。ｌ）Ｈの調整は無機あるい
は有機の酸性もたばアルカリ性物質、さらには尿素、炭
酸カルシウム、アンモニアカスなどを使用して行なわれ
る。その範囲は５〜っである。醗酵液からＬ−リジンの
採取は通常イオン交換樹脂法、その他の公知の方法によ
って行なわれる。培地の種類によっては直接晶析する方
法も採用できる。
以下、実施例によって本発明の詳細な説明する６［実施
例１ 実施例１ スラント上から１白金耳の種菌をかき取り、次に示した
種培養培地１５０ミリリツトルに接種し、２４時間通通
気８養を行なって種培養液とした。培地は第４表のとお
りであった。（本ページ以下空白） 第４表 肉エキス ５ ｇｒ。
例１ 実施例１ スラント上から１白金耳の種菌をかき取り、次に示した
種培養培地１５０ミリリツトルに接種し、２４時間通通
気８養を行なって種培養液とした。培地は第４表のとお
りであった。（本ページ以下空白） 第４表 肉エキス ５ ｇｒ。
ペプトン １５ｇｒ。
ＮａＣＩ ５ （Ｊｒ。
ＫＨ２ＰＯ４５（ｌｒ。
上記組成をイオン交換水で１リツトルにした。
一方、１リットル容Ｍの小型ガラス製ジャーフ７メンタ
ーに第５表により記載の主醗酵培地を注入し、上記種培
養液と合せ１リツトルとなるように調整後常法により殺
菌した。これらに上記種培養液を加え、１リツトルの液
体培地とした後、３０℃で通気攪拌培養を開始した。
ーに第５表により記載の主醗酵培地を注入し、上記種培
養液と合せ１リツトルとなるように調整後常法により殺
菌した。これらに上記種培養液を加え、１リツトルの液
体培地とした後、３０℃で通気攪拌培養を開始した。
（以下木ページ空白）
第５表
グルコース １１０（ｌｒ。
硫安 ５０ ０ｒ。
ＫＨ２ＰＯ４１，２ｏｒ。
Ｍｇ３０４ ・７ｔ−Ｉｚ Ｏ０，５ｇｒ。
Ｆ（３３０４・７Ｈ２００，Ｏ０５ｇｒ。
Ｍｎ Ｃｌ ２ ・４Ｈ２００，００５！Ｊｒ。
Ｃａ Ｃ１２・２Ｈ２００，００５Ｏｒ。
Ｎａ ＣＩ ０．００５ｇｒ。
ｄ−ビオチン １００ μｇチアミン塩酸
塩 ２００ μ０ポリペプトン３
１５ （ｌｒ。
塩 ２００ μ０ポリペプトン３
１５ （ｌｒ。
消泡剤 ０．１９ｇｒ。
培養の完了時間は菌の種類によって異なるが７０〜９０
時間であった。培養の結果を第６表に示す。
時間であった。培養の結果を第６表に示す。
第６表
使用菌株 Ｌ−リジン
蓄積濃度＊
ＴＭ−１１１７３２，７
１１０７４６，１
１１０８３９，２
＊リジン七］」ｎ酸塩で換算した濃度（ＩＪ／ｌ）実施
例２ 上記と同様に種培養を作成し第７表の主醗酵培地を換え
た以外は実施例１と同様に通気攪拌による醗酵を行なっ
た。
例２ 上記と同様に種培養を作成し第７表の主醗酵培地を換え
た以外は実施例１と同様に通気攪拌による醗酵を行なっ
た。
第７表
廃糖蜜（硫酸処理） ２２０ｇｒ、／１（糖
換ｎ量） （１１０ｇｒ、／Ｉ）硫安
５０（Ｊｒ、／１ポリペプト
ンＳ １５ｇｒ、／１なお、前記の硫
酸処理は廃糖蜜を少■の硫酸を加え、加熱（１２０℃、
１０分間）処理したものである。醗酵が完了するまでの
時間は菌によって異なるが、９０〜１１０時間必要であ
った。８１ｒＩ９によって’？ｆｊ ｆｎ Ｌ／たＬ−
リジンの量を第８表に示しＩこ 。
換ｎ量） （１１０ｇｒ、／Ｉ）硫安
５０（Ｊｒ、／１ポリペプト
ンＳ １５ｇｒ、／１なお、前記の硫
酸処理は廃糖蜜を少■の硫酸を加え、加熱（１２０℃、
１０分間）処理したものである。醗酵が完了するまでの
時間は菌によって異なるが、９０〜１１０時間必要であ
った。８１ｒＩ９によって’？ｆｊ ｆｎ Ｌ／たＬ−
リジンの量を第８表に示しＩこ 。
第８表
使用菌株 し−リジンの蓄積濃度（＊）ＴＭ−１
１１７３８，３ １１０７４８，２ １１０８４２，１ ；１：Ｌ−リジンモノ塩酸塩塩酸塩度 （ｇｒ、 ／ｌ ）で表わす ［光明の効果］ 本発明によると、Ｌ−リジン蓄積能が高く、しかも廃糖
蜜を使用した場合、より高いリジン蓄積のが得られる。
１１７３８，３ １１０７４８，２ １１０８４２，１ ；１：Ｌ−リジンモノ塩酸塩塩酸塩度 （ｇｒ、 ／ｌ ）で表わす ［光明の効果］ 本発明によると、Ｌ−リジン蓄積能が高く、しかも廃糖
蜜を使用した場合、より高いリジン蓄積のが得られる。
Claims (1)
- ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）
属またはコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ）属に属し、Ｌ−α−アミノ−ε−カプロラク
タムに対し耐性を有し、かつＬ−リジン生成蓄積能を有
する変異菌を培養し、その培地中に蓄積したＬ−リジン
を採取することを特徴とするＬ−リジンの製造法。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21245684A JPS6192586A (ja) | 1984-10-12 | 1984-10-12 | Ｌ−リジンの製造法 |
| EP85111629A EP0175309A3 (en) | 1984-09-14 | 1985-09-13 | A method for producing l-lysine |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP21245684A JPS6192586A (ja) | 1984-10-12 | 1984-10-12 | Ｌ−リジンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6192586A true JPS6192586A (ja) | 1986-05-10 |
Family
ID=16622923
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP21245684A Pending JPS6192586A (ja) | 1984-09-14 | 1984-10-12 | Ｌ−リジンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6192586A (ja) |
-
1984
- 1984-10-12 JP JP21245684A patent/JPS6192586A/ja active Pending
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