JPS61135596A - Ｌ−リジンの製法 - Google Patents
Ｌ−リジンの製法Info
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- JPS61135596A JPS61135596A JP25560084A JP25560084A JPS61135596A JP S61135596 A JPS61135596 A JP S61135596A JP 25560084 A JP25560084 A JP 25560084A JP 25560084 A JP25560084 A JP 25560084A JP S61135596 A JPS61135596 A JP S61135596A
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- Japan
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- lysine
- genus
- medium
- caprolactam
- producing
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- Pending
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明はＬ−リジンの製造法に呵するものである。
［従来の技術］
従来、発酵法によるリジンの製造法として、ブレビバク
テリウム（３ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕ＋＋＋ ） ｉ
ｔに属し、５−（２−アミノエチル）−Ｌ−システィン
（ＡＥＣ）耐性またはへロ置換−ε−カプロラクタムに
対し耐性を有プる菌を使用する方法が公知である（特公
昭４８−２８０７８４公報、特公昭５３−４５３９１号
公報）。
テリウム（３ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕ＋＋＋ ） ｉ
ｔに属し、５−（２−アミノエチル）−Ｌ−システィン
（ＡＥＣ）耐性またはへロ置換−ε−カプロラクタムに
対し耐性を有プる菌を使用する方法が公知である（特公
昭４８−２８０７８４公報、特公昭５３−４５３９１号
公報）。
この方法も工業的には相当優れた方法ではあるが、なお
し−リジン生成蓄積能を向上させると言う点において、
改良すべき余地があった。
し−リジン生成蓄積能を向上させると言う点において、
改良すべき余地があった。
［発明が解決しようとする問題点］
そこで、本発明者らは上記問題の改良を目的に鋭意検討
したところ、新たに見い出した特定の変異菌を使用すれ
ば、Ｌ−リジンの生成蓄積が極めて向上すると言う事実
を見い出し本発明を完成した。
したところ、新たに見い出した特定の変異菌を使用すれ
ば、Ｌ−リジンの生成蓄積が極めて向上すると言う事実
を見い出し本発明を完成した。
ｃ問題点を解決するための手段］
本発明の上記目的はブレビバクテリウム（３ｒｅｖｉｂ
ａｃｔｅｒｉｕａ ） Ｉｉ！！またはコリネバクテリ
ウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ） 属に： Ｈ
Ａし、α−（ヒドロキシエチルオキシエチル）アミノ−
ε−カプロラクタムに対し耐性を有し、かつし−リジン
生成蓄１１ｆｉを有する変異菌を培養し、その培地中に
蓄積したＬ−リジンを採取するによって達成できる。
ａｃｔｅｒｉｕａ ） Ｉｉ！！またはコリネバクテリ
ウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ） 属に： Ｈ
Ａし、α−（ヒドロキシエチルオキシエチル）アミノ−
ε−カプロラクタムに対し耐性を有し、かつし−リジン
生成蓄１１ｆｉを有する変異菌を培養し、その培地中に
蓄積したＬ−リジンを採取するによって達成できる。
以下、本発明の構成を詳述する。
本発明に使用される。微生物はブレビバクテリウム（３
ｒｅＶｉｂａ（ｊｔｅｒｉｕｌ ）属とコリネバクテリ
ウム（Ｇ ｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の何れか
に属する微生物である。また、これらの属に属する微生
物であっても、α−（ヒドロキシエチルオキシエチル）
アミノ−ε−カプロラクタムに対し耐性を有するものに
限られる。これらの微生物は、ブレビバクテリウム・ラ
クトフェルメンタム（Ｂ ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｒ
ａ １ａｃｔｏｒｅｒ＋＋ｅｎｔｕ＊）（ＡＴＣＣ−
１３８６９、以下ＴＭ−１１１８と称する）やコリネバ
クテリウム・グルタミクム（ＣＯｒＶｎｅｂａＣｔｅｒ
ｉｔｌｍ ｇＩＬｌｔａｌｉｃｕｉ ＡＴＣＣ−１
３２８６以下ＴＭ−１１１７と称する）にα−（ヒドロ
キシエチルオキシエチル）アミノ−ε−カプロラクタム
（ＨＡＣと称する）耐性を付与することによって得られ
た変異株であり、既に微工研菌寄第７７００号および第
７６９５号としてそれぞれ登録されている。
ｒｅＶｉｂａ（ｊｔｅｒｉｕｌ ）属とコリネバクテリ
ウム（Ｇ ｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属の何れか
に属する微生物である。また、これらの属に属する微生
物であっても、α−（ヒドロキシエチルオキシエチル）
アミノ−ε−カプロラクタムに対し耐性を有するものに
限られる。これらの微生物は、ブレビバクテリウム・ラ
クトフェルメンタム（Ｂ ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｒ
ａ １ａｃｔｏｒｅｒ＋＋ｅｎｔｕ＊）（ＡＴＣＣ−
１３８６９、以下ＴＭ−１１１８と称する）やコリネバ
クテリウム・グルタミクム（ＣＯｒＶｎｅｂａＣｔｅｒ
ｉｔｌｍ ｇＩＬｌｔａｌｉｃｕｉ ＡＴＣＣ−１
３２８６以下ＴＭ−１１１７と称する）にα−（ヒドロ
キシエチルオキシエチル）アミノ−ε−カプロラクタム
（ＨＡＣと称する）耐性を付与することによって得られ
た変異株であり、既に微工研菌寄第７７００号および第
７６９５号としてそれぞれ登録されている。
本発明に使用される微生物は、いわゆるグルタミン酸生
産菌として知られている代表的な微生物、すなわちブレ
ビバクテリウム（３ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕＩｌｌ）
属またはコリネバクテリウム（Ｇ ｏｒｙｎｅｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ）属に属する微生物を親株として通常の変異
誘導法ならびにスクリーニング法によって採取される。
産菌として知られている代表的な微生物、すなわちブレ
ビバクテリウム（３ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕＩｌｌ）
属またはコリネバクテリウム（Ｇ ｏｒｙｎｅｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ）属に属する微生物を親株として通常の変異
誘導法ならびにスクリーニング法によって採取される。
具体的には紫外線照射やＮ−メチル−Ｎ′−二トローＮ
−二トロメソグアニジン処理（ＮＴＧ処理）等の方法に
よって採取される。
−二トロメソグアニジン処理（ＮＴＧ処理）等の方法に
よって採取される。
前記変異株の誘導方法の実験例を述べれば次のとおりで
ある。
ある。
実験例１
コリネバクテリウム・グルタミクム（ＡＴＣＣ−１３２
８６以下ＴＭ−１１１７と称する）を常法により、ＮＴ
Ｇ処理侵、以下に示す最小培地にα−くヒドロキシエチ
ルオキシエチル）アミノ−ε−カプロラクタム（ＨＡＣ
）０．２％添加した寒天培地上に塗抹し、４〜１０日間
、３０℃で培養した。培地組成は第１表のとおりであっ
た。
８６以下ＴＭ−１１１７と称する）を常法により、ＮＴ
Ｇ処理侵、以下に示す最小培地にα−くヒドロキシエチ
ルオキシエチル）アミノ−ε−カプロラクタム（ＨＡＣ
）０．２％添加した寒天培地上に塗抹し、４〜１０日間
、３０℃で培養した。培地組成は第１表のとおりであっ
た。
第１表
グルコース ｉｏ ｏｒ。
硫安 １・５ ０ｒ・尿素
１．５（ｌｒ。
１．５（ｌｒ。
ＫＨ２ＰＯ４１，Ｏｏｒ。
Ｋ２ＨＰＯ４３１，ｏｏｒ。
１ＶＨ１’ｓＯ４・７Ｈ２００，１Ｏｒ。
Ｃａ Ｃｌ ２ ・２Ｈ２００，００１ｏｒ。
Ｎａ Ｏｆ ０．００５！７ｒ
。
。
Ｆｅ’ＳＯ＋ ・７Ｈ２００，００５ｏｒ。
Ｍｎ ３０４−４Ｈ２００，００５ｏｒ。
ｄ−ピオチン ３０ μ９チアミン塩
酸塩 １００μ０ポリペプトン ８
０．００３ｏｒ。
酸塩 １００μ０ポリペプトン ８
０．００３ｏｒ。
寒天 ２０ Ｏｒ。
以上・の組成をイオン交換水で１リツトルとし、Ｎａ
ＯＨでｐＨを６．８に調整したものを培地とした。上記
の培養で出現したコロニーの中からＬ−リジン生産能の
高いものを選別し、その一つとしてコリネバクテリウム
・グルタミクム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｇｌｕｔａｓｉｃｕｍ）ｊｌ （ＨＡ Ｇ耐性変異
菌 ＴＭ−１１１９（微工研菌寄第７７００号）を得た
。
ＯＨでｐＨを６．８に調整したものを培地とした。上記
の培養で出現したコロニーの中からＬ−リジン生産能の
高いものを選別し、その一つとしてコリネバクテリウム
・グルタミクム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ
ｇｌｕｔａｓｉｃｕｍ）ｊｌ （ＨＡ Ｇ耐性変異
菌 ＴＭ−１１１９（微工研菌寄第７７００号）を得た
。
同様な方法でブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタ
ム（３ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｓ ！ａｃｔｏｆｅｒ
ｍｅｎｔｕｌ）ＡＴＣＣ−１３８６９（以下ＴＭ−１１
１８と称する）を親株として同様なＮ丁Ｇ処理によって
ホモセリン要求性のＬ−リジン産生変異株を得た。
ム（３ｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｓ ！ａｃｔｏｆｅｒ
ｍｅｎｔｕｌ）ＡＴＣＣ−１３８６９（以下ＴＭ−１１
１８と称する）を親株として同様なＮ丁Ｇ処理によって
ホモセリン要求性のＬ−リジン産生変異株を得た。
このホモセリン要求性Ｌ−リジン産生変異株をざらにＮ
ＴＧ処理し）−Ｉ Ａ Ｃ耐性変異株の中からし−リジ
ン生産能を有するものを選別し、その一つとしてブレビ
バクテリウム・ラクトフェルメンタム（１３ｒｅｖｉｂ
ａｃｔｒｉｕｉ ｌａｃｔｒｅｒｍｅｎｔｕｉ＋ ）
ＨＡＣ耐性変異菌ＴＭ−１１０９（微工研菌寄第７６
９５号）を得た。
ＴＧ処理し）−Ｉ Ａ Ｃ耐性変異株の中からし−リジ
ン生産能を有するものを選別し、その一つとしてブレビ
バクテリウム・ラクトフェルメンタム（１３ｒｅｖｉｂ
ａｃｔｒｉｕｉ ｌａｃｔｒｅｒｍｅｎｔｕｉ＋ ）
ＨＡＣ耐性変異菌ＴＭ−１１０９（微工研菌寄第７６
９５号）を得た。
実験例２
第２表に示した液体培地に第３表に示した量のＨＡＣを
添加した培地を作成した。この培地を常法により殺菌後
金々１０ｍ１入った試験管で３０℃で４８時間通気培養
した。菌の成育度は培養液を２倍希釈後５５０１％μの
吸光度で測定した。
添加した培地を作成した。この培地を常法により殺菌後
金々１０ｍ１入った試験管で３０℃で４８時間通気培養
した。菌の成育度は培養液を２倍希釈後５５０１％μの
吸光度で測定した。
第２表
グルコース １５ ａｒ。
硫安 ２．０９ｒ。
尿素 ２．０＋；ｌｒ。
Ｋｌ−＋２ ＰＯ４２，０Ｏｒ。
Ｋ２ＨＰＯ４１，Ｏａ「。
Ｍｇ８０４ ・７ＨｚＯ０，１ｇｒ。
Ｃａ Ｃ１−２１−１２００，００１ｐｒ。
Ｎａ ＣＩ ０．００５ｏｒ。
Ｆ１３８０４ ・７ｔ−４２００，００５ａｒ。
Ｍｎ ８０４ ・４Ｈ２００，００５ｏｒ。
ｄ−ピオチン ５０ μ９チアミン塩酸
塩 １００ μ９以上の組成をイオン交換水
で１リツトルにし、Ｎａ ＯＨでＩ）Ｈを６．８に調整
したものを培地とした。
塩 １００ μ９以上の組成をイオン交換水
で１リツトルにし、Ｎａ ＯＨでＩ）Ｈを６．８に調整
したものを培地とした。
第３表は、これらの１８養によって得た各菌株の成育度
を示したものである。
を示したものである。
第３表
上記実験例のようにして得られた微生物を用いてＬ−リ
ジンを生産するには、炭素源、窒素源、無機塩類および
微生物が要求する栄養物質を含有する通常の栄養培地を
使用する。前記炭素源としては、グルコース、シュクロ
ースおよびこれらを含有する糖蜜、廃糖蜜、澱粉の加水
分解液などの糖類、ジュースや果物の粕、木材、紙など
のセルロースを加水分解した加水分解糖液のような各種
糖類の他、酢酸のような有機酸、エタノールのようなア
ルコール、炭化水素等も使用できる。前記窒素源として
は、アンモニアガス、各種の有機および無機アンモニウ
ム塩、尿素その他が使用できる。醗酵の条件は通気培養
がよく、醗ｓＩ！度は２４〜４０℃、時間は２〜７日間
である。ＤＨの調整は無機あるいは有機の酸性もたはア
ルカリ性物質、さらには尿素、炭酸カルシウム、アンモ
ニアガスなどを使用して行なわれる。その範囲は５〜９
である。醗酵液からＬ−リジンの採取は通常イオン交換
樹脂法、その他の公知の方法によって行なわれる。培地
の種類によっては直接晶析する方法も採用できる。
ジンを生産するには、炭素源、窒素源、無機塩類および
微生物が要求する栄養物質を含有する通常の栄養培地を
使用する。前記炭素源としては、グルコース、シュクロ
ースおよびこれらを含有する糖蜜、廃糖蜜、澱粉の加水
分解液などの糖類、ジュースや果物の粕、木材、紙など
のセルロースを加水分解した加水分解糖液のような各種
糖類の他、酢酸のような有機酸、エタノールのようなア
ルコール、炭化水素等も使用できる。前記窒素源として
は、アンモニアガス、各種の有機および無機アンモニウ
ム塩、尿素その他が使用できる。醗酵の条件は通気培養
がよく、醗ｓＩ！度は２４〜４０℃、時間は２〜７日間
である。ＤＨの調整は無機あるいは有機の酸性もたはア
ルカリ性物質、さらには尿素、炭酸カルシウム、アンモ
ニアガスなどを使用して行なわれる。その範囲は５〜９
である。醗酵液からＬ−リジンの採取は通常イオン交換
樹脂法、その他の公知の方法によって行なわれる。培地
の種類によっては直接晶析する方法も採用できる。
［実施例］
以下、実施例によって本発明の詳細な説明する。
実施例１
スラント上から１白金耳の種菌をかき取り、次に示した
種培養培地１５０１に接種し、２４時間通気培養を行な
つを種培養液とした。培地は第４表のとおりであった。
種培養培地１５０１に接種し、２４時間通気培養を行な
つを種培養液とした。培地は第４表のとおりであった。
第４表
肉エキス ５ｇ「。
ペプトン １５（ｌｒ。
Ｎｊｃｌ ５ Ｇｒ。
Ｋ上！」五ｑユーエＬ−−ユＬ−
上記組成をイオン交換水で１リツトルにし、た。
一方、１リツトル容量の小型ガラス製ジャーファメンタ
ーに第５表に記載の主醗酵培地を注入し、上記種培養液
と合ｌ！１リットルとなるように調整後常法により殺菌
した。これらに上記種培養液を加え、１リツトルの液体
培地とした後、３０℃で通気攪拌培養を開始した。
ーに第５表に記載の主醗酵培地を注入し、上記種培養液
と合ｌ！１リットルとなるように調整後常法により殺菌
した。これらに上記種培養液を加え、１リツトルの液体
培地とした後、３０℃で通気攪拌培養を開始した。
第５表
グルコース １１０１１１ｒ。
硫安 ５０ ｏｒ。
ＫＨ２ＰＯ４１、２Ｏｒ。
ＭＧ ８０４ ・７Ｈ２００，！Ｍｒ。
Ｆｅ ８０４ ・７Ｈ２００，００５ｏｒ。
Ｍｎ Ｃｌ ２ ・４Ｈ２００，００！Ｍｒ。
Ｃａ Ｃ１２・２Ｈ２００，００５ｏｒ。
Ｎａ ｃｌ ｏ、００５ａｒ。
ｄ−ビオチン １００ μ９チアミン塩酸
塩 ２０ＯＬｔｇポリペプトンＳ
１５ （ｌｒ。
塩 ２０ＯＬｔｇポリペプトンＳ
１５ （ｌｒ。
消泡剤 ０．１９Ｃ１ｒ。
培養の完了時間は菌の種類によって異なるが７０〜９０
時間であった。培養の結果を第６表に示す。
時間であった。培養の結果を第６表に示す。
第６表
ＴＭ−１１１７３２，７
ＴＭ−１１１９４３，２
ＴＭ−１１１８０
ＴＭ−１１０９４３，１
＊Ｌ−リジンモノ塩酸塩で換算した濃度（ａ／ｌ）で表
示 実施例２ 上記と同様に種培養を作成し第７表の主ｌ静培地を換え
た以外は実施例１と同様に通気攪拌による醗酵を行なっ
た。
示 実施例２ 上記と同様に種培養を作成し第７表の主ｌ静培地を換え
た以外は実施例１と同様に通気攪拌による醗酵を行なっ
た。
第７表
廃糖蜜（硫酸処ＤＩり ２２０ｇｒ、／＋（
糖換算Ｊｌ） （１１００ｒ、 ／Ｉ
）硫安 ５０ｇｒ、／１ポリ
ペプトンＳ １５ｃ＋ｒ、／１なお、
前記の硫酸処理は廃糖蜜を少量の硫酸を加え、加熱（１
２０℃、１０分間）処理したものである。醗酵が完了す
るまでの時間は菌によって異なるが、９０〜１１０時間
必要であった。醗酵によって蓄積したＬ−リジンの量を
第８表に示した。
糖換算Ｊｌ） （１１００ｒ、 ／Ｉ
）硫安 ５０ｇｒ、／１ポリ
ペプトンＳ １５ｃ＋ｒ、／１なお、
前記の硫酸処理は廃糖蜜を少量の硫酸を加え、加熱（１
２０℃、１０分間）処理したものである。醗酵が完了す
るまでの時間は菌によって異なるが、９０〜１１０時間
必要であった。醗酵によって蓄積したＬ−リジンの量を
第８表に示した。
第８表
ＴＭ−１１１７３８，３
ＴＭ−１１１９４２，５
−エ鼠ニュユ０９−一一一一二４１．８−＊Ｌ−リジン
モノ塩酸塩で換痺した濃度（９／Ｉ）で表示 ［発明の効果１ 本発明によると、Ｌ−リジン蓄積能が高く、しかも廃糖
蜜を使用した場合、より高いリジン蓄積量が得られる。
モノ塩酸塩で換痺した濃度（９／Ｉ）で表示 ［発明の効果１ 本発明によると、Ｌ−リジン蓄積能が高く、しかも廃糖
蜜を使用した場合、より高いリジン蓄積量が得られる。
Claims (1)
- ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）
属またはコリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ）属に属し、α−（ヒドロキシエチルオキシエ
チル）アミノ−ε−カプロラクタムに対し耐性を有し、
かつＬ−リジン生成蓄積能を有する変異菌を培養し、そ
の培地中に蓄積したＬ−リジンを採取することを特徴と
するＬ−リジンの製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25560084A JPS61135596A (ja) | 1984-12-05 | 1984-12-05 | Ｌ−リジンの製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25560084A JPS61135596A (ja) | 1984-12-05 | 1984-12-05 | Ｌ−リジンの製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61135596A true JPS61135596A (ja) | 1986-06-23 |
Family
ID=17280975
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25560084A Pending JPS61135596A (ja) | 1984-12-05 | 1984-12-05 | Ｌ−リジンの製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61135596A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003053371A (ja) * | 2001-08-20 | 2003-02-25 | Ataka Construction & Engineering Co Ltd | 曝気撹拌装置 |
| JP2007136389A (ja) * | 2005-11-21 | 2007-06-07 | Ngk Insulators Ltd | 散気装置 |
-
1984
- 1984-12-05 JP JP25560084A patent/JPS61135596A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2003053371A (ja) * | 2001-08-20 | 2003-02-25 | Ataka Construction & Engineering Co Ltd | 曝気撹拌装置 |
| JP2007136389A (ja) * | 2005-11-21 | 2007-06-07 | Ngk Insulators Ltd | 散気装置 |
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