JPS62103025A - 眼に使用するための粘弾性コラ−ゲン溶液 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明の分野 する化学的に修飾されたコラーゲン化合物に関する。詳
細には、本発明のコラ−デンプルは次の処直に有用であ
る：ａ）水晶のう内および水晶のう外白内障水晶体摘出
中および眼球内レンズ移植中の前眼房の奥行きの保持お
よび角膜内皮保護のための前眼房インブラントとして、
ｂ）角膜移植中において角膜内皮がその他の眼組織と接
触するのを防止するための、および手術後の移植物の位
置ずれを防止するだめの外科助材として、Ｃ）硝子体代
用材として。本発明はまた精製天然ベノシン処理コラー
ゲンをアミン反応性カップリング剤お工び一官能性アミ
ン反応性修飾剤と１１１１次的にまたは同時的に、およ
びカップリングの程度が制限されるように制御された方
法で反応させることによるコラーゲン化合物の製造に関
する。

本発明の背景 ヒアルロン酸ナトリウム、コラ−デンプルおよびコンド
ロイチン硫酸塩溶液が眼房においてＩ！［（球内レンズ
外傷から角膜内皮を保護するためにおよび前眼房の奥行
きを保持するために使用されている。さらに、ヒアルロ
ン酸塩およびコラーケ９ンｒルは硝子体代用材として使
用されている。これらの材料の中でこのような用途に理
懇的であると証明されているものはない。

５ｔｅｎｚｅｌ他［ｒ　ＣｏｌＣｏ１１ａ　Ｇｅ１ｓ　
：　Ｄｅｓｉｇｎ　ｆｏｒａ　Ｖｉｔｒｅｏｕｓ　Ｒｅ
ｐｌａｃｅｍｅｎｔ　Ｊ　、　　５ｃｉｅｎｃｅ　１６
４　：１２８２〜１２８６頁（１９６９年）、Ｄｕｎｎ
他（ｒ　Ｃｏｌｌａｇｅｎ−ＤｅＣｏｌｌａ　Ｍｅｍｂ
ｒａｎｅ　：　ＣｏｒｎｅａｌＩｍｐｌａｎｔａｔｉｏ
ｎ　Ｊ　、　　５ｃｉｅｎｃｅ　１５７　：　１３２９
〜１６３０頁（１９６７））およびＲｕｂｉｎ他［ｒ　
ＣｏｌＣｏ１１ａ　ａｓ　ａ　Ｖｅｈｉｃｌｅ　ｆｏｒ
　Ｄｒｕｇ　ＤｅｌｉｖｅｒｙＪ。

Ｊ、　Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ、
　８月−９月、３０９〜３１２頁（１９７３年）〕は薬
物供給デバイス、硝子体代用デルおよび角膜移植材とし
て機能する安定化されたコラーゲン層およびゲルの使用
を開示している。交叉結合の導入は熱、紫外線照射また
はグルタルアルデヒド反応により達成されている。

米国特許第４，４０９，３３２号にはゲルタルアルデヒ
ド、紫外線照射またはガンマ線照射によシ交叉結合され
ているアルカリ性ホスフェートで再構成されたコラーゲ
ンの複合体よりなる膜およびゲルが開示されている。こ
れらの複合体は眼科治療における硝子体代用材として有
用であると言われている。

米国特許第４．１６４，５５９号には眼医療用の担体と
して有用である化学的に修飾されたコラーゲン層が開示
されている。開示されているコラーゲン化合物はアシル
化またはエステル化されている一つだけのコラ−デンプ
ルを有するものである。

前眼房交換材としてのコラーゲンはＫａｗａｋａｍｉＫ
より開示されている（　ｒ　０ｐｅｒａｔｉｏｎ　ｆｏ
ｒＡｆｔｅｒｃａｔａｒａｃｔ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　Ｉ
ｎｊｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＣｏｌｌａｇＣｏｌｌａ　１
ｎｔｏ　ｔｈｅ　Ａｎｔｅｒｉｏｒ　ＣｈａｍｂｅｒＪ
　、　　ＥｘｃｅｒｐａＭｅｄｉａ　Ｉｎｔｅｒｎａｔ
ｉｏｎａｌ　Ｃｏｎｇｒｅｓｓ　５ｅｒｉｅｓ、　２巻
（４５０）、１４３２〜１４６４頁（１９７５年）〕。

この研究では紫外線交叉結合したコラ−デンプルを後発
白内障の摘出前に前眼房中に注入することが教示された
。

前記のコラ−デンプルは大きい粘弾性を有し、従ってコ
ンドロイチン硫酸塩よりも大きい眼組織の保護および支
持が得られる。しかしながら、既知のコラ−ビンデルは
疑似塑性ではなく、また注射器で注入した時に小片に分
解しない。さらに、コラ−デンプルは一般に濁った物質
であり、前眼房および硝子体に炎症反応を生じさせるこ
とが知られているＣ　Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　Ｖｉｔ
ｒｅｏｕｓ　Ｓｕｒｇｅｒｙ。

６０１〜６２６頁、Ｉｒｖｉｎｅ　ａｎｄ　Ｏ’Ｍａｌ
ｌｅｙ、　１９７６年〕。

さらにまた、前眼房に注入されたコラ−デンプルは眼内
圧を高めることがある［　Ｋａｗａｋａｍｉ、　Ｅ。

ｒ　０ｐｅｒａｔｉｏｎ　　ｆｏｒ　Ａｆｔｅｒｃａｔ
ａｒａｃｔ　ｗｉｔｈ　　ｔｈｅＩｎｊｅｃｔｉｏｎ　
ｏｆ　ＣｏｌＣｏ１１ａ　ｇｅｌ　　１ｎｔｏ　　ｔｈ
ｅ　ＡｎｔｅｒｉｏｒＣｈａｍｂｅｒ　Ｊ、前記文献〕
。

眼手術に使用されているコンドロイチン硫酸塩もコラー
ゲンゲルも粘弾性物質ではない。粘弾性の眼用物質はい
くつかの理由で好適である。すなわち、手術中に、粘弾
性物質は細胞および組織表面を機械的外傷から保護し、
２つの隣接しているが接着していない組織表面を分離す
ることにより、あるいは正常または病的組織接着を引き
離すことにより空間を作り出し、安全な外科処置を可能
にしまだは位置ずれや敏感な組織に触れることなくイン
プラントの挿入を可能にする空間を保持し、出血を吸収
し、およびまた組織を移動、処置あるいは元の位置に戻
すための「柔軟な用具」または「外科用具」としての役
目を果す。

手術後に、粘性手術用材料は所望の時間にわたり空間を
保持し、手術後炎症を阻止するかまたは最低にし、およ
び出血を局限化し、フィブリ／凝集勿拘束し、炎症細胞
を回復させ、および相互に移動する組織表面を潤して、
接着の生起を防止するために使用できる。

本発明の要旨 トリ力ルヴニル、ジスルホニルまたはトリスルホニルカ
ップリング基、あるいはその２または６個がカルボニル
またはスルホニル基よりなる群から選ばれる複数の分子
を含むカップリング基により結合されている２個または
６個以上の天然コラーゲン分子よりなる化学的に修飾さ
れたコラーケ９ン化合物を提供する。カップリング基に
存在するカルビニルおよび（または）スルホニル基は約
２０個より少ない炭素原子を有する飽和または不飽和ア
ルキレン、アリーレンまたは混合アルキレン−アリーレ
ンカップリング鎖を介して相互に結合している。これら
のアルキレンおよび（または）アリーレンカップリング
鎖はへテロ原子、たとえば０、ＳまたはＮを含有してい
てもよく、および利用できる芳香族位置に置換基として
カルぜキシル基、約１〜４個の炭素原子を有する直鎖状
または分枝鎖状アルキル基、約１〜４個の炭素原子を有
する直鎖状または分枝鎖状アルコキシ基、ハロゲンおよ
びその他の非反応性基を、および利用できる脂肪族位置
に置換基としてカルビキシル基および約１〜４個の炭素
原子を有するアルキルまたはアルコキシ基を有していて
もよい。

さらに詳細には、カップリング基は一般式％式％ を有する。この一般式において、 ＢはそれぞれＣＯ、ＳＯ２またはその組合せであり　　
； Ａは（イ）約６〜２０個の炭素原子を有する芳香族基； ＋ＣＨ−）　Ａｒ（−Ｉ）＋ｎＡｒ＋ＣＨ九〔式中Ａｒ
はそれぞれ独立して、６〜１０個の炭素原子を有する芳
香族環またはＣ，Ｎ、ＯおよびＳよりなる群から選ばれ
る原子を含有し、約５〜１０個の原子を有するヘテロ芳
香族環まだはその絹合せであり；Ｊは水素または＋Ｌｌ
−）ｂＢ　（ここでＬはフェニレン、約１〜４個の炭素
原子を有するアルキレンおよび約１〜４個の炭素原子を
有するオキシアルキレンよりなる群から選ばれ、ｂは０
または１であり、セしてＢは前記定蓑のとおりである）
であるが、この鎖中のＪの１つだけが＋ＬＬ＋ｂＢであ
ることができ、この場合のその他の全部のＪは水素であ
り；ｎはＯまたは１であり；ａはＯ〜４の整数であり、
そしてＤはそれぞれ独立−Ｓｏ。−ＮＨ−１−ＮＨ−Ｃ
ｏ　−ＮＨ−（ここでｍは約１〜３であり、Ｒはフェニ
ルおよび約１〜４個の炭素原子を有する直鎖状または分
枝釦状アルキルまたはアシル基よりなる群から選ばれ；
そしてＪは前記に定義され、制限されているとおりであ
る〕、 （ハ）約６〜１０個の炭素原子を有する芳香族基であり
、これらの芳香族基は利用できる位置に置換基としてＪ
（但しＪは前記に定義され、制限されているとおシであ
る）を有していてもよい；に）　Ｃ，Ｎ、ＯおよびＳよ
シなる群から選ばれる原子を含有し、約５〜１４個の環
原子を有するヘテロ芳香族基であり、これらのへテロ芳
香族基は利用できる位置に置換基としてＪ（但しＪは前
記に定義され、制限されているとおりである）を有して
いてもよい； （ホ）　１または２個のオレフィン状またはアセチレン
状基を含有し、および約２〜２０個の炭素原子を有する
脂肪族または芳香族−脂肪族鎖であり、この鎖は利用で
きる位置に置換基としてＪ（但しＪは前記に定義され、
制限されているとおりである）を有していてもよい； （へ）部分的に不飽和であることができ、約６〜１５個
の炭素原子を有する脂環族環であり、この脂環族環は利
用できる位置に置換基としてＪ（但しＪは前記に定義さ
れ、制限されているとおりである）を有していてもよい
； （ト）飽和または不飽和であることができ、Ｃ１Ｎ、Ｏ
およびＳよりなる群から選ばれる原子を含有し、約５〜
１２個の環原子を有するヘテロ環状環であり、このヘテ
ロ環状環は利用できる位置に置換基としてＪ（但しＪは
前記に定義され、制限されているとおりである）を有し
ていてもよい；（−ＣＨ力千ＥモＣＨ→８〕−Ｅ量ＣＨ
も〔式中ｔは約１〜８であシ、Ｅはそれぞれ独立Ｃ０Ｎ
ＨＸ５ｏ２Ｎ）（またはＮＨＣＯＮＨ（ここでＲは前記
定義のとおりであり、ｍは約１〜６である）であり、Ｊ
は前記に定義され、制限されているとおりであり、Ｓは
約２〜８であり、ｐは約Ｏ〜４であり、ｑは約０または
１であり、そしてｒは約０〜８であるが、ｑが１である
場合には、ｒは０より大である〕；および （す）ＪＪ　　　　　　　　　　Ｊ ＋ＣＨザーＥ−叶廷Ｅ−￥ＣＨ→７ 〔式中Ｇはそれぞれ独立して、約６〜１０個の炭素原子
を有する芳香族環または約５〜１０個の原子を有するヘ
テロ芳香族環、または約５〜１０個の原子を有するヘテ
ロ環状環であり、このヘテロ芳香族環およびヘテロ環状
環はＣＸＮ、ＯおよびＳよりなる群から選ばれる原子を
含有し、Ｊは前記に定義され、制限されているとおりで
あり、Ｗは約１〜８であシ、Ｅおよびｑは前記定義のと
おりであり、ｙは約１または２であり、そしてＶは約０
〜４であるが、ｑが１である場合には、■は０ではない
〕； よりなる群のいづれか１つより選ばれる。

Ａの芳香族またはへテロ芳香族部分は利用できる位置に
置換基として、カルがキシル基、約１〜４個の炭素原子
を有する直鎖状または分枝鎖状アルキル基、約１〜４個
の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状アルコキシ基
、ハロゲンおよびその他の非反応性基を有していてもよ
い。Ａの脂肪族、脂環族およびヘテロ環部分は利用でき
る位置に置換基として、カルざキシル基および約１〜４
個の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状アルキル基
を有していてもよい。

本発明はまた前記のように結合された２個または６個以
上の天然コラーゲン分子を含み、このカップリング結合
したコラーゲンに存在する残りの塩基性窒素（原則的に
アミン基）の少なくとも一部分がカルボキシアミｒまた
はスルホンアミ−基（これらの基は好ましくは少なくと
も１個のカルボン酸またはスルホン酸基を含有する）に
、酸ハライｒ１酸無水物、スルホニルハライドまたは活
性エステルアミン修飾剤により変換されている、化学的
に修飾されたコラーゲン化合物を提供する。

すなわち、結合したコラーゲン生成物に存在する未結合
リジンニジシロンアミン基の少なくとも一部分がアミン
修飾基に結合しており、このアミン修飾基は約２〜２０
個の炭素原子を有し、末端に１個または２個のカルボン
酸またはスルホン酸基を有する飽和または不飽和アルカ
ン、アレンまたは混合アルカン−アレンスルホンアミド
またはカルヴキシアミド基である。アミン修飾基はまた
約５個までのへテロ原子、たとえばＯｌＳおよびＮを含
有していてもよく、および利用できる芳香族および脂肪
族位置に置換基としてカルボキシル基、約１〜４個の炭
素原子を有するアルキルまたはアルコキシ基、ハロゲノ
およびその他の非反応性基を有していてもよい。さらに
詳細には、アミン修飾基は一般式 ％式％） （式中２は０〜２、好ましくは１または２であり、Ｂお
よびＡはＪが水素であるという条件付きで前記定義のと
おりであり、そしてＫはＯＨである）を有する。

本発明による化学的に修飾されたコラーゲン化合物は精
製したペプシン処理コラーゲンをカップリング結合させ
、この際に未結合塩基性窒素（原則的にアミン基）をこ
れらの部位を非塩基性にする、すなわち４より小のｐＫ
＆を有するようにする修飾剤により未結合塩基性窒素を
修飾することを行なって、製造される。

本発明により、このカップリング結合の程度がこれらを
眼手術において水晶体または硝子体置換材として成功裏
に使用できるようにする粘弾性で疑似塑性の物性を有す
るコラーゲン溶液の製造にとって極めて重要であること
が見い出された。カップリング結合が過度でありすぎる
と、生成された生成物は粘弾性ではなく、コラ−デンプ
ルになる。このようなｒルの問題点は前記したとおりで
ある。また、カップリングが充分な程度でない場合には
、溶液は所望のような粘弾性ではなく、また眼手術用助
材に要求される潤滑的物性を有しないことが見い出され
た。本発明により、また結合されたコラーゲン分子に存
在する、残りの未結合塩基性部位の大部分を、好ましく
は負に帯電した基の同時的導入により非塩基性にして、
コラーデノ生成物を原繊維形成耐性にすることが必要で
あることが見い出された。

本発明の方法により製造されるコラーゲン溶液は下記の
諸点から眼手術において特に有用であることが判る： １）これらは角膜内皮、虹彩および網膜に成る程度の保
護を付与する潤滑性を有し、粘弾性である； ２）これらは疑似塑性であり、従って注射器により容易
に注入でき、しかもそれらの元の静的粘性に戻る能力を
有する； ３）これらは自発的原槽維形成に対し耐性であり、従っ
て眼に挿入した後にも、それらの清明で透明な物性を保
有する； ４）これらはポリメチルメタアクリレートまたはポリプ
ロピレン製眼内用レンズのような疎水性重合体表面に接
着し、従ってこのようなレンズを被覆して眼の前房また
は後房への挿入を容易にするために使用できる； ５）組織に注入した時に、これらは粘度が減少され、組
織流体に稀釈され、その注入部位から除かれる。

６）これらは眼内圧を有害に増加させない；７）これら
は約２００〜４００　ｍｏｓの低い重量モル浸透圧濃度
を有する；および ８）好ましい態様では非炎症性であり、および生物学的
に適合性である。

さらにまた、天然コラーゲンは広く種々の供給源、たと
えば骨、肺、皮等から入手できる。さらに、コラーゲン
はヒアルロン酸から誘導された組織に比較して豊富に安
価に得ることができる。

本発明の詳細 な説明による化学的に修飾されたコラーゲン化合物の製
造方法は４つの主要工程よりなるが、これらの工程はこ
の順序である必要はない：１、コラーゲン供給材料の採
取； ■、コラーｒン供給材料の制御されたカップリング； 厘、残りの未結合塩基性部位の修飾；および■、修修飾
コラ−ノン採取、精製および再構成。

粗コラーゲン供給源、たとえば鍵、皮等からコラーゲン
を得る方法には制限はなく、特定の組織の選択およびそ
の適用方法にはかなりの柔軟性がある。好ましくは、コ
ラーゲンは牛皮のような縦連合組織から抽出する。コラ
ーゲンを服用に使用しようとする場合には、「スプリッ
トハイド（分裂性成）」としても知られている牛皮の真
皮層から独占的に得ると好ましい。スプリットハイドは
Ａｎｄｒｅ　Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ社（Ｎｅｗ　
Ｙｏｒｋ、　Ｎｅｗ　Ｊｅｒｓｅｙ）から市販されてい
る。

コラーゲンは標準的抽出法のいづれかＫより、たとえば
酸または塩抽出法、酵素消化法あるいはこれらの組合せ
法により可溶化できる。好ましく酵素の失活および除去
の後に、ＮａＣｊを約２．５Ｍまで加えることによりｐ
Ｈ７で沈殿させる。ペプシン処理コラ−ｒンを沈殿させ
ると、廃棄されるべき溶液中にコラーケ９７分子の消化
された非うセン形末端ベプチげおよびその他の非コラー
ゲン質汚染物質、たとえば単糖類、ムコポリ単糖類他が
残る。失活酵素は４°Ｃにおける濾過および遠心分離に
より除去する。ペプシン処理コラ−Ｉｆ　７１ｄ　次イ
で酸性水（ｐＨ２〜４）への再溶解および塩処理、たと
えばｐＨ３での０．８Ｍ塩化ナトリウム溶液の添加によ
る再沈殿を繰返すことによりさらに精製する。

精製したコラーゲンは好ましくは、たとえばＡｍ１ｃｏ
ｎ　Ｄ　Ｃ−３０濾過装置Ｉｃ　（Ａｍｌｃｏｎ社、Ｄ
ｅｎｖｅｒｓ。

Ｍａｓｓ、から市販されている）を用いて透析濾過する
好ましくは、０．１μ膜フイルターを使用して、塩、タ
ンバク質およびその他の３００，０００ダルトンより小
さい分子量を有する分子を濾去する。

透析濾過（ｄｉａｆｉｌｔ、ｒａｔｉｏｎ　）はコラー
ケ９ン生成物の透明度を増し、眼房水拡散の発生を減じ
る助けとなることが見い出された。さらに、コラーゲン
を眼用途に使用しようとする場合に、これは好ましくは
濾過殺菌技法により、無菌にしなければならない。

■、制御されたカップリング 可溶化された精製コラーゲン分子はアミ／と反応するが
、カルボキシル基とは反応しない２または３個の基を有
するカップリング剤を用いて結合させる。このようなカ
ップリング剤はシーおよびトリーカルボン酸ハライげ、
シーおよびトリースルホニルハライＰ１ジーおよびトリ
ー酸無水物、ジーおよびトリー反応性活性エステルおよ
びまたカルボン酸ハライド、スルホニルハライｒ１酸無
水物または活性エステルタイプの基の少なくとも２個を
含有するカップリング剤を包含する。好適な芳香族およ
び脂肪族シーおよびトリーカルざジ酸ハライドには、ｄ
−樟脳ジ酸クロリド、４−［ｐ−（ｏ−クロルカルボニ
ルベンゾイル）フェニル〕デテリルクロリＰ１　フラン
−６，５−ジカルボン酸クロリド、フマリルクロリｒ１
グルタリルクロリド、サクシニルクロリＰ１　セバコイ
ルクロリド、インフタロイルクロリゾ、テレフタロイル
クロリｒ１４〜ブロモイソフタロイルクロリド、ジグリ
コールジ酸クロリド、１，１−シクロヘキサンジアセチ
ルクロリド、２．２−ジメチルグルタリルクロリド、チ
オグリコール酸シクロリド、ニトリロトリアセチルクロ
リｒ１ベーター−メチルカルボアリル酸トリクロリド、
ヘキサデカンジオン酸シクロリド、マロン酸シクロリド
、アセトンゾカルがジ酸ジクロリド、オキシジアセチル
クロリド、ベンゼン−１，３，５１’Ｊカルｌクニルク
ロリド、４−クロルカル？ニルフェノキシアセチルクロ
リド、ホモフタロイルクロリド、４　、４’−ジフェニ
ルエーテルゾカルざジ酸ジクロリド、４−４’−シフェ
ニルチオエーテルジヵルＭ　／酸９クロリド、４　、４
′−ｐフェニルスルホンジカルボン酸ジクロリげ、アセ
チレンシカルビ／酸ジクロリド、シクロヘキサン−１，
４−ジカルボン酸シクロリド、トラ／スー３．６−ニン
ドメチレンー１．２，３．６−チトラヒドロフタロイル
クロリ）’、４．４’−ジチオジブチリルクロリド、ジ
フェニルメタン−４、４’−ビス（オキシアセチル）ク
ロリド、Ｎ−（４−クロルカルボニルフェニル）アント
ラニルオキシクロリド、１，３−ベンゼンビスオキシア
セチルクロリド、ビリジ／−３，５＝ゾカルボン酸ジク
ロリド、ピリジン−２，５−ジカルぜン酸ゾクロリ１、
ビリシン−２，４−ジカルボン酸ジクロリド、ピラジン
−２，３−ジカルざン酸ジクロリドおよびピリジン−２
，６−ジカルボン酸ジクロリド、エチレングリコールビ
ス−（４クロルカルボニルフエニル）エーテル、ジエチ
レングリコールビス−（４−クロルカルボニルフェニル
）エーテル、ビス−（４−クロルカルボニル−２−トリ
ル）チオエーテルおよびＮ−クロルカルボニルメチル−
Ｎ−メチルグルタミン酸りロリＰがある。

好適な芳香族および脂肪族ジーまたはトリースルホニル
ハライドはｐ−フルオルスルホニルベンゼンスルホニル
クロリ）’、１，３．５−ベンゼントリスルホニルクロ
リド、２，６−ナフタレンジスルホニルクロ！Ｊ）”、
４．４’−ビフェニルジスルホニルクロリド、１．１０
−デカン−ジスルホニルクロリドおよび４．４’−トラ
ンス−スチルベンジスルホニルクロリドを包含する。

好適なジーおよびトリー酸無水物カップリング剤はジ無
水１．２，４．５−ベンゼンテトラカルボン酸、ジ無水
３，４，９．１０−ペリレンテトラカルボン酸、ジ無水
３　、３’　、　４　、４’−ベンゾフェノンテトラカ
ルボン酸、ジ無水１．２．７．８＝ナフタレンテトラカ
ルざン酸、ジ無水ピロメリット酸、ジ無水２．ろ、４，
５−テトラヒドロフランテトラカルボン酸、トリ無水メ
リット酸、ジ無水１．２，３．４−シクロブタンテトラ
カルボン酸、ジ無水ビシクロＣ２，２，２〕オクト−７
−エン−２，３，５，６−テトラカルボン酸、ジ無水シ
クロペンタンテト２カルボン酸、ジ無水エチレンジアミ
ンテトラ酢酸、お上びジ無水ジエチレントリアミンペン
タ酢酸を包含する。

活性エステルはＧｒｅｅｎｓｔｅｉｎおよびＷｉｎｉｔ
ｚによりｒ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ａｍ
１ｎｏ　Ａｃ１ｄｓ　Ｊ、２巻、Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ
　ａｎｄ　５ｏｎｓ出版社（１９６１年）に記載されて
いる。好適なジ反応性活性エステルカップリング剤はジ
フェニルサクシネート、ビス−（ｐ−二トロフェニル）
サクシネート、ビス（シアンエチル）グルタレート、お
よびジーＳ−フェニルジチオ°サクシネートを包含する
。

アミン反応性基の組合せを含有する好適なカップリング
剤は５−クロルスルホニル−オルト−アニス酸クロＩＪ
）’、２−１０ルー５−フルオルスルホニル−ベンゾイ
ルクロリド、４−クロルスルホニルフェノキシアセチル
クロリド、メタ−フルオルスルホニルベンゾイルクロリ
ド、および無水トリメリット酸りロリげを包含する。

カップリング剤はペゾシン処理コラーゲンの水溶液に加
え、充分に混合する。好ましくは、カップリングの程度
を制限するために、反応混合物が精製コラーゲンを０．
０５〜０．６重量％好ましくは０．１５〜０．６重量％
の濃度で含有するようにする。

カップリング剤の濃度はカップリング剤の反応性を含む
かなりの因子によって変わる。しかしながら、一般に、
カップリング剤の量はコラーゲン１モル当りカップリン
グ剤約１〜６００モル、好ましくはコラーゲン１モル当
シカツブリング剤約５０〜５００モル、さらに好ましく
はコラーゲン１モル当シカツブリング剤約１００〜２０
０モルである。

反応混合物のＰＨは好ましくは、カッ７’　ＩＪング反
応全体にわたり、約８〜１１、好ましくは約８．５〜９
．５、最も好ましくは約９．０に、稀塩基、たとえば１
Ｎ水酸化ナトリウムの添加により維持する。

この方法で、はとんど全部のコラーゲン分子に存在する
リシンニブシロンアミノ基はそれらのプロトン化状態か
ら遊離され、カップリング剤まだは修飾剤と反応できる
ようになる。

カップリング反応はカップリング剤の実質的全部、すな
わち少なくとも９０チがコラーゲンと反応するか、また
は加水分解されるかまで、通常、約６０分間続ける。

カップリング反応の程度および均一度は温度、カップリ
ング剤の溶解に用いる溶剤、カップリング剤の添加速度
、カップリング剤の物性および形、反応剤の濃度および
反応混合物の一変化により変わし、従ってこれらによっ
て制御できる。

たとえばいくつかのカップリング剤は好ましくは固体と
してコラーゲン溶液に加える。カップリング剤を固体と
してコラーゲン溶液に加えることにより、カップリング
の程度を制御できることが見い出された。しかしながら
、カップリング剤は固体形で添加することは好ましいこ
とではあるが、カップリング剤はまたペゾシン処理コラ
ーゲンに添加する前に適当な溶剤に溶解することもでき
る。

適当な溶剤は好ましくは水混和性であり、Ｎ−メチルピ
ロリドン、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、アセトン、
エチレングリコールジメチルエーテルおよびアセトニト
リルを包含する。特に好ましい溶剤は比較的高い誘電率
、すなわち２５℃で測定して２５より高い、好ましくは
ろＯより高い誘電率を有するものである。このような特
に好適な溶剤はＮ−メチルピロリドンおよびＮ、Ｎ−ジ
メチルホルムアミドを包含する。高誘電率を有する溶剤
はカップリングを制御するもう一つの手段を提供する。

これは、これらの溶剤がカップリング剤の加水分解を促
進することによりカップリング度を制限する傾向がある
からである。別法として、比較的水不混和性の溶剤も使
用でき、この場合には２相反応混合物が生成される。２
相混合物の使用は溶剤の表面に対する反応部位の数を制
限することによりカップリングの程度を制限する。比較
的水不混和性の溶剤の例には酢酸エチルがある。

いづれかの溶剤中のカップリング剤溶液を使用する場合
には、溶剤の量が水性コラ−ｒン溶液１００ｄ当り溶剤
的０．５〜１０ゴ、最も好ましくはコラーｒノ溶液１０
（ＩＡ’轟り溶剤的ｉｍｌが存在するような量であると
好ましい。

カップリング反応は約Ｏ〜６５℃の温度で実施できるが
、カップリング反応を約２０°Ｃ以下の温度、好ましく
は約４℃で進行させておくことによりカップリング剤と
コラーゲンに存在するリジンエプシロンアミノ基との反
応を促進できることが見い出された。

特に好適なカップリング剤はサクシニルクロリド、グル
タリルクロリｒ１テレフタロイルクロリド、ビシクロ（
２，２，２）オクト−７−ニンー２．３，５．６−チト
ラカルざ酸−２，３，５゜６−ゾ無水物、ジ無水１．２
，４．５−ベンゼンテトラカルボン酸、ｐ−フルオルス
ルホニルベンゼンスルホニルクロリドおよび１．３．５
−ベンゼントリスルホニルクロリド、ジエチレントリア
ミンペンタ酢酸ゾ無水物を包含する。

テレフタロイルクロリド、ビシクロ［２、２、２）オク
ト−７−エン−２，３，５，６−チトラカルｆン酸−２
，３，５，６−ジ無水物、ジ無水１゜２．４．５−ベン
ゼンテトラカルボン酸、およびｐ−フルオルスルホニル
ベンゼンスルホニルクロリドのような成る社の高反応性
カップリング剤を使用する場合、あるいはＮ、Ｎ−ジメ
チルホルムアミドおよびＮ−メチルピロリドンのような
比較的高い水混和性を有するおよび（または）高い誘電
率も有する溶剤系を使用する場合に、カップリング反応
を、反応剤を約６〜５．５の酸性−で予備混合し、その
後−を８〜１１に上げてコラーゲン゛アミン基とカップ
リング剤との反応を行なうことにより開始させると好ま
しいことが見い出された。この方法で−を変えることに
より、カップリング反応を所望の粘弾性生成物が得られ
るように制御できる。

特に反応性の低いカップリング剤を使用する場合には、
反応混合物の−をカップリング反応の完了時点で少なく
とも１１．５まで上げてカンプリング剤の未反応部分の
全部を加水分解させると好ましい。

カップリング処理されたコラーゲン生成物は反応性塩基
性部位、原則的にアミン基を含有し、この部位は眼手術
用の清明で透明な溶液を生成するために、化学的に修飾
して真正中性にまたは好ましくは負電荷が付与されるよ
うにしなければならない。これらの反応性塩基性部位の
修飾はコラ−ビン生成物を眼手術に使用した時に原繊維
形成に対して耐性にすることを可能にする。この目的の
ためには、カップリング処理したコラーゲンをモノアセ
チル化剤またはスルホネート化剤としても知られている
モノ反応性アミン修飾剤と反応させる。修飾剤は好まし
くは酸、カルボン酸またはスルホン酸基を含有するか、
または反応中に酸、カルボン酸またはスルホン酸基を生
じる化合物またはこのような化合物の組合せである。好
ましくは、酸形の修飾剤は化学的に修飾されたコラーゲ
ン生成物の最適の沈殿を確実にするために、加水分解し
たカップリング剤と類似するｐｋａ値を有する。

好ましい酸無水物は環状酸無水物、たとえば無水グルタ
ル酸、無水３−エチル−３−メチルグルタル酸、無水ア
ルファー２−カルボキシエチルグルタル酸、無水６−メ
チルグルタル酸、無水２−フェニルグルタル酸、無水ジ
メチルグルタル酸、無水１，８−ナフタル酸、無水４−
クロル−１，８−ナフタル酸無水６，６−シニトロー１
，８−ナフタル酸、無水３−ニトロ−１，８−ナフタル
酸、無水マレイン酸、無水ブロモマレイン酸、無水ジク
ロルマレイン酸、無水コノ・り酸、無水Ｓ−アセチルメ
ルカゾトコハク酸、無水２．２，３．３−テトラメチル
コハク酸、無水２−ドデセン−１−イルコハク酸、無水
メチルコハク酸、無水シトラエン酸、無水イタコン酸、
無水２，６−キツキサリンジカルポン酸、無水１，２−
シクロプタンジカルがン酸、無水ジフェン酸、無水シク
ロヘキサン−１，２−ジカルボン酸、無水フタル酸、無
水ヘキサヒげロー４−メチルフタル酸、無水ホモフタル
酸、無水テトラヒドロフタル酸、無水テトラクロルフタ
ル酸、無水テトラブロモフタル酸、無水１．４．５．６
．７．７−へキサクロル−５−ノルｆレンー２，３−ゾ
カルざン酸、無水６，６−ニンｒキソ−１，２，３，６
−テトラヒドロフタル酸、無水５−クロルイサトエ酸（
５−ｃｈｌｏｒｏｉｓａｔｏｉｃ　ａｎｈｙｄｒｉｄｅ
　）、無水６，４−ピリジ／シカルピン酸、無水カルボ
ベンシルオキシ−Ｌ−グルタミン酸、無水１．２．４−
ベンゼントリカルボン酸、無水０−スルホ安息香酸、無
水チオジグリコール酸、無水２，６−ビリジンジカルボ
ン酸、無水６−チトグルタル酸（無水１．３−アセトン
ジカルボン酸）、無水ジグリコール酸、無水４−アミノ
−１，８−ナフタリン酸および無水樟脳酸を包含する。

好適なスルホニルクロリドはクロルスルホニルベンゼン
スルホンｌ！ｌ包含スる。好適な酸クロリドはスルホア
セチルクロリド、テレオタル酸およびフマール酸のモノ
酸クロリドおよびモノメチルコハク酸エステル酸クロリ
ドを包含する。好適な活性エステルはフェルレート、た
とえばモノフェニルテレフタレートおよびシアンメチル
エステル、たとえばモノ（シアンメチルサクシネート）
を包含する。さらにまた、負に帯電している生成物を生
成しないアシル化剤、たとえばペンゾイルクロリｒ１ベ
ンゼンスルホニルクロリドおよびブチリルクロリドが使
用できるが、これらは前記修飾剤と組合せて用いると好
ましい。

修飾反応はコラーケ３ンアミンのアシル化と修飾剤の加
水分解との競合反応が同時的に生起するように水性媒質
中で行なう。カップリング反応と同様に、各反応の程度
は市、カップリング結合したコラーゲンに残存する塩基
性部位のパーセンテージ、温度および修飾剤の種類およ
び形によって変わる。

修飾剤はそのままでまたは溶剤中に入れてカップリング
結合したコラーケ９ンの水溶液に添加できる。適当な溶
媒はカップリング剤の溶解に使用したものである。好ま
しくは、修飾剤は固体としてまたは約２５より小さい誘
電率を有する水混和性溶剤中に入れて添加する。溶剤中
の修飾剤溶液を使用する場°合には、結合したコラーゲ
ン水溶液１００ｒｎｌ当り溶剤約０．５〜１．０．０　
ｄ、好ましくはコラーゲン溶液１００ｍ／当り溶剤約１
．０−が存在するような量の溶剤が存在すると好ましい
。

好ましくは、反応条件下に修飾剤の競合的加水分解が生
じるために、化学量論的大過剰量の修飾剤をコラービン
に加える。修飾剤の使用量は未反応リジンニブシロンア
ミノ基の６０〜１００％と反応するに少なくとも充分の
量、好ましくは未反応リジンエツジロンアミン基の約８
０％と反応するに充分な量であるべきである。リジンア
ミン基の割合が減少するに従って修飾剤の加水分解は増
大して優勢になるので、１００％反応は実際的ではなく
、またその必要もない。アミン基の少なくとも８０％と
反応するに要する修飾剤の量は修飾剤の反応性および存
在する場合に特定の溶剤により変わる。たとえば、スル
ホニルクロリｒは加水分解よりもアミンとの反応を好む
。従って、スルホニルクロリドを用いる修飾反応ではそ
の他の修飾剤の場合に必要とされる量よりも少ない量で
使用できる。しかしながら、通常、初期の精製コラ−）
ｙ’７１モル当り修飾剤少なくとも１００モル、好まし
くはコラーゲン１モル当り修飾剤少なくとも５００モル
、最も好ましくはコラーゲン１モル当り修飾剤少なくと
も７５０モルが必要である。

反応混合物は好ましくは約８〜１１の−にさらに好まし
くは約８．５〜９．５の−に、最も好ましくは約９．０
の−に、稀塩基、たとえば１Ｎ水酸化ナトリウムの添加
により反応全体にわたって保持する。修飾反応は好まし
くは少なくとも６０分間続けていづれの未反応修飾剤も
加水分解すると好ましい。カップリング反応の場合と同
様に、修飾反応は約０〜６５℃の温度で実施できるが、
好ましくは約２０’Ｃ以下の温度、好ましくは約４℃で
行なう。これは低温においてはアミン基との反応が加水
分解より優勢になるからである。

大部分の場合に、反応混合物の−はいづれの未反応修飾
剤も加水分解するために、修飾反応の完了時点で少なく
とも１１．５に高める。

二段階合成方法（コラーダンをカップリングする第一段
階および残留する未反応塩基性部位を修飾する第二段階
）について説明したけれども、カップリング反応と修飾
反応との両方を同時的に行なう変法もある。ジ無水１，
２，４．５−ベンゼンテトラカルボン酸およびビシクロ
−（２，２，２）オクト−７−エン−２，３，５，６−
テトラカルボン酸−２，３，５，６−ゾ無水物のような
酸ジ無水物、サクシニルクロリドおよび５−クロルスル
ホニル−０−アニス酸クロリドのようなジ酸ハライド、
およびベンゼントリスルホニルクロリケおよびｐ−フル
オルスルホニルベンゼンスルホニルクロリドのような高
反応性カップリング剤を使用する場合には、コラーダン
をカップリング剤および修飾剤と同時的に反応させて、
生成するコラーゲン生成物中のカップリング度が許容さ
れないほど高くなるのを防止すると好ましい。カップリ
ング反応と修飾反応とを同時的に行なう場合には、修飾
剤の半分（すなわち初期の精製コラ−ｒン１モル当り少
なくとも５０モル）を反応混合物に加え、修飾剤の残り
半分はカップリング後にカップリング結合したコラ−ビ
ン生成物の処理に使用する。

もう一つの変法はさらに反応性のカップリング剤を用い
る場合の方法であり、精製コラ−ｒンを修飾剤のほぼｌ
／４（初期精製コラーゲン１モル当り少なくとも約２５
モル）と前反応させ、その後カップリング反応を行なう
方法である。残りの修飾剤を使用して、カップリング後
にコラーｒノ生成物を処理する。

構成 修飾されたコラーダンは等電点に向う−に調整すること
により沈殿させる。沈殿は、好ましくは遠心分離により
採取し、無菌の発熱性物質を含有しない水で洗浄して、
いづれの過剰の反応剤も除去する。精製された化学的に
修飾されたコラーデ／は６，５〜７．５、好ましくは７
．０〜７．４の−で０．１〜７．５、好ましくは０．５
〜５．０重量％の修飾されたコラーケ０ンの溶液を生成
させるに充分な生理学的緩衝液および１Ｎ　ＮａＯＨで
再構成することによりそのまま使用できる。適当な生理
学的緩衝液はＮａＣ１および場合により、約２００〜４
００ｍｏｓ　、好ましくは約３２０　ｍｏｓの重量モル
浸透圧濃度を有する緩衝液が得られるに充分なその他の
塩、たとえばＫＣＩ　、　Ｃａ（Ｊ２、ＭｇＣｌ　ＸＣ
Ｈ３ＣＯ２Ｎａ　。

ＮａＨ２ＰＯ４、Ｎａ　２ＨＰＯ４およびりｘ７酸ナト
リウムを含有する。好適な生理学的緩衝液はＮａＣ／　
Ｏ−６４重量％、ＫＣＩ　Ｏ，０７５重−ｔｉｔｓ、Ｃ
ａ（Ｊ２　ｏ、ｏ　４８重量％、Ｍｇｃｔ２０．０３０
重量％、ＣＨ３ＣＯＮａ　Ｏ−３９重量％およびＣ６Ｈ
５０７Ｎａ３　［１，１７重量％を含有し、これはＡ上
ｃｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社（Ｆｏｒｔ　Ｗｏ
ｒｔｈ　、　Ｔｅｘａｓ）からＢＳＳとして市販されて
いる。好ましくは、眼に施用するだめには、緩衝液はま
たリン酸塩、たとえばＮａ　２ＨＰＯ４およびＮａＨ２
ＰＯ４を含有すべきである。さらに好ましいリン酸塩緩
衝溶液はＮａＣ１００８４重量％、ｘｃｌｏ、０５４重
量％、Ｃａ（Ｊ２０．０１７重量％、Ｎａ２ＨＰＯ４０
，０２８重量％およびＮａＨ２ＰＯ４Ｑ、Ｏ（：ｌ　４
重量％を含有する。

最終好適工程は再構成されたコラービンを約１０ミクロ
ンフィルターに通して処理中に蓄積されることがあるい
づれかの粒子を除去する濾過工程である。濾過したコラ
ーゲンは次いで好ましくは窒素正圧下に、約４℃の温度
で貯蔵して汚染を回避する。

本発明に従い生成された好ましい化学的に修飾されたコ
ラーゲン　フラクションは１〜５重Ｎ％のコラーゲン溶
液を生成するに充分な生理学的緩衝液に溶解した場合に
、これらの溶液は（＆）４００〜７００ナノメーターで
約１００％の透過率および水または水性体液のものとほ
ぼ等しい屈折率、すなわち約１．３３〜１．４０の屈折
率を有し、透明で無色である； （ｂ）　　安定でコラーゲン繊維を含有していない；（
０）　　粘弾性である、すなわちワイセンベルグ効果（
Ｗｅｉａａｅｎｂｅｒｇ　Ｅｆｆｅｃｔ）　［Ｉｎｔｒ
ｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｔ。

Ｃｏ１１ｏｉｄ　ａｎｄ　５ｕｒｆａｃｅ　Ｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ、Ｌｏｎｄｏｎ　Ｂｕｔｔｅｒ−ｗｏｒｔｈａ
　、　１９６６年参照コを示す；（ａ　高剪断速度で低
い粘度を有する疑似塑性である： （ｅ）　　チキントロビイ性である、すなわち剪断後の
休息時に粘度を回復する； （ｆ）　　生理学的組織に注入された場合に、組織流体
中に吸収される能力を有し、非炎症性で生物適合性であ
る； （ｇ）　　約３２°Ｃ〜約４８℃の融解温度を有する；
および （ｈ）　　約２６０〜３４０　ｍ０日、好ましくは約２
８０〜３２０　ｍｏｓの重量モル浸透圧濃度を有する。

コラーゲン溶液の（ａ）〜（ｈ）の全ての物性は眼用途
におけるその治療活性に関連している。

（ａ）透明物性 眼に使用するために好適なコラーゲン溶液、すなわち生
理学的緩衝液中に化学的に修飾されたコラーゲン５重量
％までを溶解した溶液は透明で無色であり、これらを水
晶のう内および水晶のう外白内障水晶体摘出、眼球内レ
ンズ移植、角膜移植および網膜剥離の回復手術中の水晶
体または硝子体置換材として適するようにする水性体液
とほぼ等しい屈折率を有する。透明物性は彼／彼女が自
由に取り扱うことができ、およびいづれかの量の粘弾性
コラーゲン溶液の存在で完全におよび明白に目で見て手
術操作を充分に調節できる外科手段を確実にする。

（ｂ）安定性 生理学的安定性はｐＨ７，２および温度６２〜４２℃に
おける自発的原繊維形成に対する耐性であると定義され
る。原繊維形成とはコラーゲン分子が不溶性凝集体に自
己集合することであると定義される。本発明による教示
されるように、化学的に修飾されていないコラーゲンは
、実質的に全部の遊離アミン基が反応して自発的原繊維
形成を生じる。たとえば化学的に修飾されていないコラ
ーゲンは生理学的緩衝液に溶解し、６７°Ｃ［／１０温
すると、不透明す繊維状網状構造を自発的に形成する。

原繊維形成に対する耐性に不発明のコラーゲン溶液が眼
に挿入した後もそれらの清明で透明な物性を保有するこ
とを意味する。

（Ｑ）粘弾性 本発明のコラーゲン溶液は粘弾性であることを示すワイ
センベルグ効果として知られている粘弾性を示す。ワイ
センベルグ効果は適用圧力に対して直角に流動が生じる
粘弾性溶液の傾向を示すものである。回転している俸ヲ
ニュートニアン（非粘弾性〕液体中に下げると、液体は
回転をはじめ、外側方向に移動する傾向を示し、棒の周
囲に落込みが生じる。粘弾性溶液に回転している俸を入
れると、液体は俸を英際によじ登ってくる。俸の回転は
液体の円形剪断を生じさせ、その弾性物性の故に、容器
の中心に回って液体を絞る伸張したゴムバンドのように
作用し、従って欅を登ってくる。

それらの粘弾性物性の故に、本発明のコラーゲン溶液は
これらを敏感な細胞および組織表面近くで用いられる器
具およびインブラントの保護被覆材として特に有用にす
るｌｋｉ滑性を有する。前眼房で使用する場合に、不発
明の粘弾性物質は前眼房の奥行きを保持し、および水晶
の５円および水晶のう外白内障水晶体摘出中のおよび眼
内レンズ移植中の角膜内皮を保護する。粘弾性はまた、
このような溶液が網膜をその正常な位置に押し戻すこと
ができおよび網膜の背後の孔を通って流出しないために
、硝子体手術において重要である。さらにまた、粘弾性
溶液は網膜が回復するまでこれを長期持続的に支持し、
および硝子体の流動学的性質を維持する。

（、ｉ）疑似塑性 本発明による生成されるコラーゲン溶液は剪断速度を増
大すると粘度の有意の減少を示す◎生理学的緩衝溶液中
の化学的に修飾されたコラーゲンの２重ｆｉ％溶液の定
常状態粘度をコーンアンドプレート粘度計（これはＲｈ
ｅｏｍｅｔｒｉｃｓ社ＰｉＳｃａｔａｗａｙ。

Ｎｅｗ　ＪｅｒｓｅｙからＭｏｄｅｌ　６０５　Ｍｅｃ
ｈａｎｉｃａｌ　Ｓｅｐｅｃ−ｔｒＯｍｅｔθｒとして
市販されている）を用いて、約１９〜２４℃の温度およ
び約５０％の酋度で測定した。定常状態粘度は約１．５
分間にわたり測定された。このコラーゲン溶液の粘度は
０．１０秒−１の剪断速度で約０．１５ｘ１０ａ〜４．
ＯＸ　１０６センチボイズ、１．０秒−１の剪断速度で
約０．２０Ｘ１０５〜７．５　Ｘ　１０５　センチボイ
ズ、１０．０秒−１の剪断速度で約０．３Ｘ１０４〜１
．０Ｘ１０５センチボイス、オ！ヒ１００．０秒−１Ｏ
剪ｆｆｉ速度ｒ約０．４５×１０３〜２．０Ｘ１０’セ
ンチポイズである。

眼科用途には、疑似塑性物質は理想的である。

高剪断応力下で、すなわち眼組織、用具および（または
）インブラントが眼の内部で取シ扱われる手術中に、物
質の粘度は減じられ、これにより鋭従組織に対する薬物
の力が減じられる。他方、低剪斯応力下では、物質が静
止していると、粘度（工高く、この物質はインブラント
および（または）相互に関連して動く組織表面に対して
効果的な潤滑剤として作用する。

さらに、疑似塑性はこのコラーゲン溶液が手術時に小さ
い口径の針全通って小さい組織空間中に移動すること金
町龍にする。

（ｅ）チキントロビイ チキントロビイ性液体は応力がｆｌＯえられた後に延長
された期間にわたシ静止させた時に、その粘匝を再び取
シ戻すことができる疑似塑性物質であると定義できる。

一般に、本発明の化学的に修飾されたコラーゲン溶液は
注射器を通して注入された後に、それらの定常状態粘度
を取シ戻すことができる。詳細には、コラーケ９ン溶液
は剪断後の約７分以内にそれらの定常状、１ル粘度の５
ｏ〜９５％、好ましくは６５〜９５％を取シ戻す。

（ｆ）非炎症性および生物学的適合性 生理学的緩衝液中の化学的に修飾されたコラーゲンの好
ましい粘弾性溶液（約１〜３重量％）をウサギ、イヌ族
、豚族、アヒル族およびカニクイデルを含む数種の動物
における前眼房インブラントとして評価した。化学的に
修飾されたコラーゲン溶液を眼の一万に注入し、他の一
万には空気、平衡化された塩類溶液、たとえばＰｈａｒ
ｍ　ａｃ　ｉ　ａから市販されているＢ５Ｓｍまた（エ
ヘアｏ　ｙ　（Ｈｅａｌ、ｏｎＩｎ）のような対照物質
を注入した。処置および対照眼の両方を注入後の長くて
２４時間および２週間まで２４時間の間隔で、スリット
灯で検査する。眼の評価にはマクドナルドーシャダック
（ＭｃＤｏｎａｌｄ−８ｈａｄｄｕｃｋ）採点システム
［ＭａＤｏｎａｌｄ、Ｔ、Ｏｏおよび５ｈａａａｕｏｋ
、Ｊ、Ａ、’（１９７７年）、Ｅｙｅ　Ｉｒｒｉｔａｔ
ｌｏｎ。

ｒ　Ａｄｖａｎｃｅ　ｉｎ　Ｍｏｄｅｒｎ　ＴＯＸｉｃ
ｏｌｏｇｙ　、４巻。

Ｄｅｒｍａｔｏｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｐｈａ
ｒｍａｃｏｌｏｇｙ、　１６２〜１６６頁１．　Ｎｅｗ
　Ｙｏｒｋ　：　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　５ｏｎｓ
出版社」を使用する。このシステムは結膜充血、１Ｍ潤
および放電、眼房水拡散、虹彩炎症、角膜混濁および浮
腫、パンスス形底、および前眼房の５外観の評価および
採点を含んでいる。さらに、前眼房に存在する物ｌ！！
およびその被Ｊの程度の評価が行なわれる。このような
評価を工率発明の化学的に修飾されたコラーケ９ンが窒
気、Ｂ５Ｓｍおよびヘアロンに比較して総合的に均等で
あるかまたはこれらより優れていることを示した。従っ
て、この好ましいコラーケ９ン溶液は非炎症性で、生物
学的に適合性であると判定された。

（ｇ）融解温度 融解：Ｍ１度（工、粘弾性コラ−ｒン溶液が粘度を劇的
に失う、すなわち１秒−１での剪断速度で測定して粘度
がセンチボイズで１００〜１０００分の１に減少する温
度を表わす。一般に、本発明により・生成されたコラー
ゲン溶液の融解温度は差動走査熱雀計を用いて測定して
約３２°Ｃ〜４６℃であム融解温度はカップリングの程
度を制御することにより調節できる；カップリング度が
大であるほど高い融解温度を有する物質が得られる。約
３４℃〜６８°Ｃの融解温度を有するコラーゲン溶液は
白内障水晶体摘出、ＩＯＬ手術および角膜移植で用いる
前眼房インブラントとして、および角膜移植用の粘弾性
手術補助剤として最適である。低い触１祥温度を有する
物質【工これらの物質が眼から比較的急速に、すなわち
約２４時間以内に排除され、眼内圧を一過的に増加する
能力が減じられる用途に好適である。約３９℃〜４５℃
の高い融解温度を有する物質は熱的に安定な物質が要求
される用途に、たとえば硝子体置換材として、関節液置
換用材としておよび角膜移植用の粘弾性手術補助材とし
て好適である。

コラーゲン溶液の重量モル浸透圧濃度はこの溶液と接触
する細胞に対し浸透圧による傷を生じさせるほど大きく
ないか、または小さくないことが必要である。一般に、
本発明のコラーゲン溶液に等張注であり、約２００〜４
００ｍ○８、好ましくは約２６０〜３４０　ｍｏａ、特
に好ましくは約２８０〜”）　２Ｑ　ｍｏｓの重量モル
浸透圧濃度を有する。

本発明の好ましいコラーゲン溶液を工水晶体または硝子
体置換材として眼手術に用途を有する。本発明のコラー
ゲン溶液によって、種々の水晶の５内または水晶の５外
手術後に水晶体を置き換えることかでさ、かくして虹彩
、毛様体および角膜内皮の再生および機能を危険にさら
す前眼房の細胞侵入が防止できる。好ましいコラーゲン
溶液はまた白内障手術後の前眼房における生物学的プロ
テーゼとして使用でさ、これにより脱出した硝子体を元
に押し戻すことおよび硝子体と角膜との間を分離するこ
とができる。さらに、コラーゲン溶液は角膜移植後の角
膜創傷と虹彩との間の接着を防止するために、前眼房に
使用できる。

好ましいコラーゲン溶液は広範囲にわたる網膜内手術（
出血、混濁等の排除）後に適度の細胞反応および槙維束
および網膜前組織膜の発現を防止するために硝子体中に
注入できる。

さらにまた、本発明の好ましいコラーゲン溶液は細膜剥
離手術で、網膜の再付着に要する処置における粘弾性材
料として使用して、過度の繊維質組織の形成および網膜
内形癌組織の出現を防止することによυ眼内の傷の回復
を促進するために有用である。

本発明の好ましい粘弾性溶液はポリメチルメタアクリレ
ートまたはポリプロピレン眼内レンズのような疎水性重
合体表面に接着する。従って、眼内レンズをコラーゲン
溶液で容易に被覆でき、これにより眼の前房または後房
に挿入する際の傷および濁シを少なくすることができる
。本発明による化学的に修飾されたコラーケ９ン溶液は
またフンタクトレンズ溶液の湿潤剤としても使用できる
。

このようなｆＭ潤浴溶液従来既知の湿潤溶液に比較して
長時間にわたシレンズ上に残留し、レンズの装着を長期
間具合良くすることができる。

本発明のコラーゲン溶液は眼科または整形外科用途で薬
物の効果を延長させる医薬用ベヒクルとして使用される
。

成る種の非免疫原性コラーゲン溶液はその他の治療用途
で、稙維質組織の形成および後続の接着および搬痕の発
現を防止するのに有用である、たとえば、外傷性関節炎
、変形性関節炎および滑液のう炎の場合に、非免疫原性
フラーケ９ン溶液は関節内繊維質組織の発現（パンヌス
、強直、付着）を防止するために、および軟骨および滑
液組織の回復経過を支持するために、滑液空間に滑液の
代用として使用できる。ここで使用するかぎシ、「滑液
空間」の用語は妥合部、隷および（または）包の５を分
離している空間を意味するものとする。

人体形成、切骨および全てのタイプの関節内手術、たと
えば関節鏡検査において、成る種の本廃明のコラーゲン
溶液は関節軟骨表面を手術後損傷からおよび補てつ材表
面の可能な有害な作用から関節軟骨を保護するために、
および過度の繊維質組織形成を防止するために、および
軟組織および軟骨の正常な回復を促進するために使用で
きる。

さらにまた、本発明の成る種のコラーゲン溶液にいづれ
かの手術後の接着生成あるいは神経周辺の結合組織への
危険が拡大されてお夛、過度の軟骨形成が予想される場
合に、損傷または手術を受けた後の周辺末梢神経および
神経根の接着を最少にするために、鍵とその鞘との間に
移入することができる。回復中（再生）の神経周辺のコ
ラーゲン溶液の移入は神経を結合組繊細胞による転位か
ら保護することができる。

２つの内皮または結合組織膜間における膠着形成を防止
するために、成る種のコラーケ９ン溶液が中皮、心腹お
よび胸膜間に移植できる。

本発明の化学的に修飾されたコラーダンは乾燥した膜形
でも、傷口の包帯として有用である。コラーダンは皮膚
の傷口をおおうために用いると、水および微生物に対す
る障壁として働くことができる。

成る種のコラーゲン溶液は組織表面の分離にも使用でき
る。この溶液の粘弾性物性は手術処置中および手術後の
組織を防護する。コラーゲン溶液は外傷性傷における筋
肉鞘および腸鞘の潤滑機能を教養するのに有用である。

竪形外科または心臓血管系手術において成る種のコラー
ゲン溶液は潤滑性および被着性インブラントとして有用
である。さらにまた、これらの溶液は移植血管が体液と
接触するのを防止するために使用でき、およびまた合成
血管の構成成分としても使用できる。

さらにまた、本発明のコラーゲン溶液は化粧品クリーム
およびローションにおける湿潤化剤および潤滑剤として
有用である。

本発明による凍結乾燥されたカップリング結合コラーケ
９ンおよびカップリング結合およびアミン修飾されてい
るコラーゲン溶液は止血剤として有用である。

本発明による、Ｐｌ（７を有する不藩性カップリング結
合コラーゲンおよびカップリング結合およびアミン修飾
されているコラーゲン物質は軟組織増補材として使用で
きる。

本発明による化学的に結合したおよび（または）アミン
修飾されたコラーゲン化合物および粘弾性溶液のその他
の用途は当業者にとって疑いもなく自明であり、従って
前記の説明は本発明を制限するものではない。

本発明の性質をさらに明瞭に説明するために、次側には
本発明による代表的組成物およびこのような組成物の使
用方法を記載する。しかしながら、これは単に例示する
ためのものであって、本発明の範囲を制限したり、特許
請求の範囲に記載の範囲を限定するものでもないことが
理されるべきである。

例　　１ コラーゲンタイプ■の単離および精製に次の方法により
行なう。清浄な脱毛した牛皮（２００！ｉ）を冷凍粉砕
し、０．５Ｍ酢酸溶液１５ｔに４°Ｃで加える。コラー
ダンを４℃で可溶化させる。テロベデチドコラーゲン分
子の末端非ラセン形部分はコラーゲン溶液にペプシン（
５，８６ｇ）をＩＩＯえ、この混合′＠を４°Ｃで１６
時間攪拌することにより分子のラセン形部分から分離す
る。溶液のＰＨを次いでＩＯＮ水酸化ナトリウムの添Ｄ
Ｏにより７．０に増加する。２時間の混合の後（温度は
４℃に維持する）、変性したペプシンを溶液から濾去す
る。コラーゲン溶液は固形塩化ナトリウムを徐々に万０
えることによシ塩化ナトリウムで２．５Ｍにする。生成
したコラーゲン沈殿を採取し、０．５Ｍ酢酸中で再構成
する。コラーゲンを、塩化ナトリウムを０．８ＭまでＢ
ａえることにより再度沈殿させる。沈殿を採取し、０．
５Ｍ酢酸中で再構成する。塩化ナトリウムを３．８Ｍ　
：ｆで加えることによるコラーゲンの沈殿を繰返す。集
めた沈殿を０．１　Ｍ酢酸中で再構成し、約３ＯＰＨを
有する高純度０．３％（重電／重量）コラーゲンタイプ
■溶液を得る。

濾過殺菌したイ”ｎ製コラーゲンは次の方法で化学的に
修飾する。全ての反応は無菌溶液および反応剤を用いて
無菌条件下に行なう。コラーゲン沈殿（３０００ｍＪ）
’に４℃で５Ｎ水酸化ナトリウムで処理してｐＨＴｈ９
．０に上げる。この溶液に微粉砕した無水コハク酸粉末
（１，６０Ｆ　）をｎ０える。溶液を激しく攪拌し、Ｐ
Ｈは１Ｎ水酸化ナトリウムを除徐に添加することに工！
＋　９．０±０．２５に維持する。

約２分後に、無水コハク酸（０，６０Ｊ　）を加える。

攪拌を３０分間続け、−は１Ｎ水酸化ナトリウムの添加
によ、り９．０±０．２５に維持する。生成したカップ
リング結合したコラーゲン生成ｖＩＪｔ−さらに、微粉
砕無水コハク酸（１，６０ｇ　）の添加によシ処理する
。前記のように、Ｐ）（を１Ｎ水酸化ナトリウムを徐々
に加えることによ９９．０士０．２５に維持する。溶液
はさらに６０分間攪拌する。ｐＨを６ＮＨＣＪの添ＤＤ
　Ｋより４．１に減少させて化学的、に修飾されたコラ
ーケ９ン生成物を沈殿させる。生成物を遠心分離により
採取し、無菌水で４同順次洗浄する。コラーゲン沈殿を
リン酸塩緩衝溶液［Ｎａ（ＪＯ０８４重ｆｆｉ％、ＫＣ
Ｊ、　０．０５４重量％、ＣａＣｊ２０−０１７重量％
、Ｎａ２ＨＰＯ４０，０２８重ｆｉｎおよびＮａＨ２Ｐ
Ｏ４ｏ、ｏ　ｏ　４重態％を含有する〕に溶解し、２重
量％ｂ飾フラーデン溶液を生成し、そのＰＨを次いで１
Ｎ水酸化ナトリウムによシフ、２に調整する。

このコラーゲン溶液は目で見ておよび光／光学顕微ｆｉ
（４０Ｘ）の両刀で無色透明である、この化学的に修飾
されたコラーゲン溶液をニューシーラント白ウサギ、同
血統繁殖ビーグル犬、家庭用白色アヒル、ヨークシャー
豚およびカニクイデルにおける前眼房インブラントとし
て評価した。動物にケタミンの筋肉内投与で麻酔する。

鎮静によシ動かなくなった後に、眼の周囲の毛をそり、
動物を手術台に移し、ハロタンおよび二酸化窒素で麻酔
する。眼をクロロマイセチンでおおい、ペタシン金銀の
周囲に施用する。全ての手術処置に検眼顕微鏡手術法を
用いて行なう。スーパーシャープビーバー１ブレード（
５ｕｐｅｒｓｈａｒｐ　ＢｅａｖｅｒｍＢｌａｄｅ　）
　ｋ使用して輪部で前眼房中に約１ｍの封入部を作る。

眼房水を除去し、眼房をヘパリン（５００ｙｔｌ中の５
０ＯＯ単位／ｃｃのｉ　ｃｃ　）およびエピネフイリン
（５００ゴ中１：１０００の１ｃｃ）を含有するＢＳＳ
′！１：ＥたはＢ５５ｆｆｌで潤す。前眼房の空気を抜
いて、完全にすぼませる。眼房を次いで２７−デージ　
カニユーレを用いて化学的に修飾されたコラーゲン〔リ
ン酸塩緩衝溶液（ＮａＣＪｏ、８４重量％　、ＫＣＪ−
０，０５４亜ｉｔ　％　、ＣａＣＪｚｏ、０１７　Ｍｗ
ｔ％、　Ｎａ２ＨＰＯ４０，０２８重量％およびＮａＨ
２ＰＯ４０，００４重３１　％含有）中の２爪量チ溶液
コで満たす。対何の対照の眼にはＢ５５ｒｎＸ空気また
はＰｈａｒｍａｃｉｓ社からヘアロン（Ｈｅａｌｏｎ”
　）として市販されている粘弾性ヒアルロン酸ナトリウ
ムの溶液を満たす。被験物質の前眼房内注入量は眼房の
容積および固有の眼内圧によって変わる。被験物質は逆
圧がこれを注入部位から押し出すまで注入する。

処置した眼および対照の眼の両刀をマクドナルド・シャ
ダック　システムを使用して、長くて処置後の２４時間
におよび９６時間まで２４時間間隔でスリット灯顕微鏡
によ藁評価する。このシステムは結膜充血、膨潤およｑ
放電、眼房水拡散、虹彩炎症、角膜混濁および浮腫、パ
ンヌス形成および前眼房の５外観の評価および採点を包
含する。

このような評価はこの例で製造された化学的に修飾され
たコラーゲンが空気、Ｂ５Ｓｍおよびヘアロン０に比較
して総合的に優れていることを示した。

この例１に従い製造された化学的に修飾されたコラーゲ
ン〔リン酸塩緩衝溶液（Ｎａ（Ｊ　Ｏ０８４重量％、　
Ｋ（Ｊ　Ｏ，０５４重ｉ　％、　Ｃａ　（４２口、０１
７Ｌ）ｆＮ％、Ｎａ２ＨＰＯ４０，０２８ＭＸ　ｉａ　
％およびＮａＨ２ＰＯ４０，００４Ｎ量％を含有する）
中の汎」チ溶液〕をニューシーラント白ウサギにおいて
水晶の５同レンズ移植中の前眼房補助材として評価した
。コラーゲン溶液は前眼房の膨張を保持し、白内障水晶
体の摘出および眼内レンズの移植（ＩＯＬ）に適する優
れた眼房奥行きを提供することが見い出された。工ＯＬ
挿入は粘弾性物質を使用しないＩＯＬ挿入中に見られる
ような外傷的損傷が減じられるとともに容易になった。

コラーゲン物質で手術用具およびＩＯＬ表面を被覆した
。

修飾されたコラーゲン溶液の生物適合性を試験するため
に、次の試験を行なった。第一次ヒト内皮細胞培養物を
正常塩類溶液中の１％ゼラチンで被覆した多数の四部を
有する板上に保持する。融合が達成された後に、細胞を
正常塩類溶液で洗浄し、化学的に修飾されたコラーゲン
溶液［Ｎａ０１０１８４重量％、Ｋ（Ｊ　Ｏ，０５４重
量％、Ｃａｃｊ　２０．０１７重量％、Ｎａ２　ＨＰＯ
４０−’０２８重量％およびＮａＨ２ＰＯ４０，００４
重量％を含有するリン酸塩緩衝溶液中の２重量％溶液〕
をあふれるほど流す。

６５．５℃で１時間後に、コラーゲン溶液を吸ぢ［除去
し、細胞を血清を含まない媒質ですすぐ。この媒質中で
細胞をさらに２４時間インキュベートする。細胞培養物
をコラーケ９ン溶液の適用前と、フラーデン溶液の適用
後の３分と、コラーゲンの適用後の１時間と、コラーゲ
ンを除去した後の２４時間とに相対比顕微鏡によシ検査
した。処置された細胞は非処置の細胞と同様に健全であ
った（すなわち、死滅せずあるいは形態学的変化を受け
ていなかった）。これにこのコラーゲン溶液が毒性作用
を有していないことを示している。

このコラーゲンの溶液（ＮａＣｆ　Ｏ０８４重量％、Ｋ
ＣＪｏ、０５４重量％、ＣａＣｊ２０−０１７重量％、
Ｎａ２ＨＰＯ４０，０２８重ｔ％およびＮ　ａＨ２ＰＯ
４０，００４重量％を含有するリン酸塩緩衝溶液中の２
重量％溶液）は次の試験を使用して、粘弾性であること
を示した、すなわちワイゼンベルグ効果を示した。

モーター駆動している０、５インチ直径羽付きポリテト
ラフルオルエチレン−被Ｎ攪拌俸を約３０ｄのコラーゲ
ン溶液を含有する５０ｍＡ！ビーカー中に挿入し、約４
０回転／分で回転させる。コラーゲン溶液は適用力に対
して直角に流れ、攪拌体の上に少なくとも０．５ｍ移動
した。

このコラーケ９ンの溶液（Ｎａ　ＣＪ、　０．８４重量
％、ＫＣＪ！０．０５４重量％　、Ｃａ（Ｊ２０−０１
７重量％、Ｎａ２ＨＰＯ４ｏ、ｏ　２８重量％およびＮ
ａＨ２ＰＯ４０，００４ｉ［２１％を含有するリン酸塩
緩衝溶液中の２重量％溶液）の粘度を次のとおシにして
流動学的に測定した。粘度測定は室温（２２〜２４°Ｃ
）で、機械的分光計［ＲｈＣｏｎｅｔｒｉｃａ社、Ｐｉ
ｓｃａｔａｗａｙ、　ＮｅｗＪｅｒＳｅｙからＭｏｄｅ
ｌ　６０５　Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ　Ｓｐｅｃｔｒｏｍ
ｅｔｅｒとして市販されている〕にニジ、コーンアンド
プンー）　（Ｃｏｎｅ　ａｎｄ　ｐｌａｔｉ）技法を用
いて行なう。

円錐（コーン）の角度は０．１ラジアンに維持し、試料
を平衡になるまで剪断した後に、１．５分にわたりその
力を測定し、粘度を決定する。粘度は数棟の剪断速度で
この方法で決定し、第１表に示す。

１００．０　　　　　４．２１５ １０．０　　　　１０．２８０ １．０　　　　６５．２００ ０．１　　　３７０．５００ コラーゲン溶液の粘度シエ剪断速度が増加するに従って
減少する。これはこの溶液が疑似塑性であることを示し
ている。

このコラーゲンの溶液（Ｎａ（Ｊ　０．８４重量％、Ｋ
Ｃｌ　０．０５４　ｋ　Ｉｒｋ　％　、Ｃａｃｆ２０．
０１７重ＫＫ％、Ｎａ２ＨＰＯ４０−０２８７１１３１
％およびＮａＨ２Ｐ　０４０．００４重量％を含有する
リンＯ塩緩衝溶液中の２瓜量係溶液）のチキントロビイ
性を次のとおりにして証明した。０．１秒−１の剪断速
度における粘度測定値を前記のコーンアンドプレート技
法を用いて決定する。５００秒−１で６０秒間薄切り剪
断の後に、剪断力を取シ除き、試料を７分間纒める。試
料を再度、０．１秒−１の剪断速度で剪断し、粘度を再
び記録する。結果を第２表に示す。

０．１秒−１での初期　ｏ、ｉ秒−１での７分曲粘度　
　　　　　　回復後の粘度　　　　　回　復　％（セン
チボイズ）　（センチボイズ） このコラーゲンの溶液（Ｂ５Ｓｍ中の約２重量％溶液）
をまた次の試験〔この試験を以後「注射器試験（ｓｙｒ
ｉｎｇθｔｅａｔ）Ｊと称する〕を用いて、前眼房置換
材としての効力について試験した。２５０ミリリツトル
　ガラス製注射器円筒部にＨａｍ冬１ｔｏｎ社から入手
できるＭｏｄｅｌ　１７２５　Ｎ注射器からのプランジ
ャーを付ける。このプランジャーの頭頂部におもりを通
し、６４Ｉの一定の力を生じさせる。プランシャーのテ
フロン製チップを３０ミクロンの小砂を包んだ紙でプラ
ンジャーが自由に動くまでおだやかに摩擦する。円筒部
に２インチ２２デージの取シ除くことのできる針をつけ
る。

コラーゲン溶液を泡が含まれないように円筒部中に針の
ない１ｄプラスチツク製ツベルクリン注射器を用いて導
入する。溶液０．０５−を押し出すための時間、すなわ
ち円筒部を０．５インチ下って移動するプシンジャー当
ルの時間を第３表に示す。

４　　　　　２．１３　　　　　　　２６眼の前眼房を
適当に保持するためには約２０秒より長い押出し時間が
必要であることが測定された。さらに、溶液が眼の外ま
で通過するためには、約１２０秒よシ矧い押出し時間が
必要である。好ましくは、押出し時間は約２０〜４０秒
である。

この２％コラーゲン溶液の融解温度は差動走査熱鷺計で
測定して約３５〜３６℃であった。

例　　２ 精製したタイプ■コラーゲンを例１に記載に従い製造し
たが、但し精製コラーゲン沈殿は０．０５Ｍ酢醗１？０
０ｄ中で再構成して０．１５％（重量／重量）コラーゲ
ン溶液を得た。この溶液を４°Ｃに保持し、１ＯＮ水酸
化ナトリウムで処理して−を５に上げる。この激しく攪
拌されている溶液にＮ　、　Ｎ’−ジメチルホルムアミ
ド１７ｄ中のテレフタロイル　クロリド（０，１０３６
，９）を全部一度に加える。混合物を攪拌しながら、５
Ｎ水酸化ナトリウムＶＣニジｐＨ９，０±０．２５に迅
速に調整する。

過割合は６　Ｎ　ＨＣＪ−の逆添加により補正する。攪
拌″’に６分間絖け、この間−は９．０に保持する。Ｐ
Ｈ′ｆ！：２分間、１１．５に上げ、次いで５　Ｎ　Ｎ
ａＯＨおよび６　Ｎ　Ｈ（Ｊをそれぞれ添加して９．０
に再び戻し、未反応テレフタロイル　クロリドを加水分
解させ、これによりカップリング結合した生成物が生成
される。

４℃に保持されているカップリング結合されたコラーゲ
ン生成物に、アセトン１７−中の無水グルタル酸（０，
１４５５１）を攪拌しながら滴下し“て加える。ＰＨＧ
工１工水Ｎ水酸化ナトリウム、０±０．２５に維持する
。溶液をさらに１４分間攪拌する。ＰＨを２分間、１Ｎ
水酸化ナトリウムの添°加により１１．８にし、次いで
１５分間、＜５　Ｎ　ＨＣｊで９．０に戻す。溶液の−
を次いで６Ｎ　ＨＣＪ−の添加によシ４．１に低下させ
て、化学的に修飾されたコラーゲン生成物を沈殿させる
。生成物を遠心分離によシ採取し、例１と同様に洗浄す
る。修飾されたコラーゲン沈殿をＢ５５ｆｆｉに溶解し
、２重量％修飾コラ−ｒン溶液を生成し、そのｐＨｅＩ
Ｎ水酸化ナトリウムにより７．１５に調整する。

この溶液は目で見ておよび（またを工）光／光学顕微鏡
（４０Ｘ）の両方で測定して無色透明であった。

例１に記載の方法に従い、剪断速度の関数として粘度を
測定し、次の結果を得た。

剪断速度（１７秒）　　粘度（ｃｐ　）１００．０　　
　　　　　　　２，７５０１０．０　　　　　　　　　
９，８４７１．０　　　　　　　　６１，４９０ ０．１　　　　　　　４２５．０００ 粘度は剪断速度が増加するに従い減少し、これはこの２
重量％コラーゲン溶液が疑似塑性であることを示してい
る。

化学的に修飾されたコラーゲン（ＢＳＳ”中の２重量％
溶液）をニューシーラント白ウサギにおいて前眼房イン
ブラントとして評価した。コラーゲン溶液は少なくとも
３０分間、前眼房の膨張を維持し、白内障水晶体の摘出
および眼内レンズ（ＩＯＬ）の移植に適する優れた眼房
奥行き″Ｉ！：提供した。コラーゲン溶液は手術用具お
よび眼内レンズを被覆した。

コラーゲン溶液（ＮａＣＪ　０．８４　重量％、ＫＣＪ
Ｏ，０５４重１１％、ＣａＣｊ−２０−０１７重１％、
Ｎａ２ＨＰＯ４０，０２８重量％およびＮａＨ２ＰＯ４
０−００４重量％を含有するリン酸塩緩衝溶液中の２重
量％溶液）をニューシーラント白ウサギにおいて例１に
記載の方法に従いマクドナルドーシャダツク　システム
を用いて、前眼房インブラントとして評価した。

この評価はこの例の化学的に修飾されたコラーデこのコ
ラーゲン溶液の生物適合性を次のとおりにして試験した
。５％より少ない割合で細胞が死滅している汚染物を除
失したヒト角膜をＢ５Ｓｍ。

ＢＳＳ”中２５容量チコラーゲン溶液（ＢＳＳ”中２重
量％）、またはＢＳＳ”中５０容量チコラーゲン溶液（
ＢＳＳ”中２重量％）を含有する媒質中で３４℃におい
て４日間インキュベートする。インキュベーション後に
、角膜をトリパン青またはアトヤ　アリザリン赤で染色
し、細胞形態および濃度を測定した。コラーゲン溶液で
処理された角膜はＢＳＳ”で処理された角膜と有意に異
ならない。

このコラーゲン溶液（ＢＳＳ！Ｉｌ中の約２重Ｒ％〕は
例１に記載の方法に従い試験して、ワイゼンベルグ効果
を示した。

２％コラ−ｒン溶液のチキントロビイ性を例１に記載の
とおシに測定した。結果を第５表に示す。

４２５．０００　　　３０Ｂ、ｉｏｏ　　　　　７２こ
の２％コラーゲン溶液の融解温匣は差動走査熱量計によ
シ測定して、約３９〜４０℃であった。

例　　６ アミン修飾剤として無水グルタミン酸の代りに無水１，
２．４−ベンゼントリカルボン酸（０，４２５ｇ）を使
用する以外は例２０方法に従い化学的に修飾されたコラ
ーゲンを製造した。沈殿および洗浄後に、コラーゲンを
ＢＳＳｍＫ溶解して、２重量％コラーゲン溶液を虫取し
た。この溶液の−を１Ｎ水酸化ナトリウムにより７．２
に調整する。

このコラーゲン溶液は目で見ておよび光／光学＠微鏡（
４０Ｘ）の両方によシ測定して無色透明であった。

このコラーゲン溶液をニューシーラント白ウサギにおい
て前眼房インブラントとして評価した。

コラーゲン溶液は少なくとも３０分間前眼房の膨張を保
持し、白内障水晶体の摘出および眼内レンズ（ＩＯＬ　
）の移植に適する優れた眼房奥行きを提供した。

コラーゲン溶液（ＢＳＳ′！ｌ中２重量％）を例１に記
載の方法に従い成人したネコにおいて前眼房インブラン
トとして評価した。眼は手術後の２４時間および４８時
間にスペキュラ顕微鏡により検査して内皮細胞の形態お
よび濃度を評価した。角膜量チおよびＮａＨ２ＰＯ４０
−００４重量％を含有するリン酸塩緩衝溶液中２重量％
溶液）をニューシーラント白ウサギにおいて、例１に記
載の方法に従いマクドナルドーシャダツク　システムヲ
用いて、前眼房インブラントとして評価した。この評価
はこの例の化学的に修飾されたコラーゲンが空気、Ｂｕ
ｓ”およびヘアロン１と総合的に均等であるか、または
これらよシ優れていることを示した。

このコラーゲンの溶液（Ｂ５５ｌ！ｌ中の約２重量％）
を工例１に記載の方法に従い試験してワイゼンベルグ効
果を示した。コラーゲン溶液は例１の方法に従い試験し
て、剪断速度が増加すると粘度の減少を示し、疑似塑性
である。コラーゲン溶液に０．１秒−１での剪断の７分
以内にその初期粘度の約７５％を回復し、チキントロビ
イ性である。

２％コラーゲン溶液の融解温度は差動走査熱量計により
測定して、約３５〜３６℃である。

例　　４ カップラーとしてテレフタロイル　クロリドの代りにＮ
−メチル　ピロリドン１７ゴ中のジ無水シクロペンタン
テトラカルボン酸（０，１７８６Ｆ）を使用し、および
アミン修飾剤として無水グルタル酸の代９に無水１，２
．４−ベンゼントリカルボン＃　（０，５６６７１１）
を使用する以外は例２の方法に従い化学的に修飾された
コラーゲンを製造した。

このコラーゲン溶液は目で見ておよび光／元学顕＠鏡（
４０Ｘ）の両方によシ測定して無色透明であった。

コラーゲン溶液（Ｎａ（Ｊ　Ｏ−８４重ｆｆｉ％、Ｋ（
ＪＯ，０５４重１１％、Ｃａ（Ｊ　２０．０１７　重ｊ
ｔｔ　％、Ｎａ２ＨＰＯ４０，０２８重量％およびＮａ
Ｈ２ＰＯ４０，００４重量％を含有するリン酸塩緩衝溶
液中の２重量％溶液）を例１に記載の方法に従いマクド
ナルドーシャダツク　システムを使用してニューシーラ
ント白ウサギで前眼房インブラントとして評価した。

この評価はこの例に従い製造された化学的に修飾された
コラーゲンが空気、ＢＳＳ！Ｉｌおよびヘアロン１と総
合的に均等であることを示す。

このコラーゲンの溶液（ＢＳＳＩ！ｌ中の約２重量％溶
液）は例１に記載の方法に従い試験してワイゼンベルグ
効果を示す。コラーゲン溶液は例１の方法に従い試験し
て、剪断速度が増加するに従い粘腿の減少を示し、疑似
塑性である。コラーゲン溶液は０．１秒−１での剪断の
７分以内にその初期粘度の約６５〜９５Ｆｔ−回復し、
チキントロビイ性である。

２％コラ−ｒン溶液は差動走査熱量計によシ測足して約
６４〜６７℃の融解温度を示す。

例　　５ カップラーとしてテレフタロイル　クロリドの代ｔ）に
Ｎ−メチルピロリドン１フｄ中のセバコイル　クロリド
（０，２０３３，９）？使用し、およびアミン修飾剤と
して無水グルタル酸の代りにＮ−メチルピロリドン１７
−中の無水コハク酸（０，１０６３Ｉｌ）を使用する以
外は例２の方法に従い化学的に修飾されたコラーゲンを
製造した。

このコラーゲンの溶液（ＮａＣｊ　Ｏ６８４重ｉｔ％、
Ｋ（Ｊ　Ｏ，０５４重ｔ　％　、ＣａＣｌ２０−０１７
　ＭＬ量チ、Ｎａ２ＨＰＯ４０，０２８重ｉｔ％お工び
ＮａＨ２ＰＯ４０−００４重量％を含有するリン酸塩緩
衝溶液中の２重重チ溶液）をニューシーラント白ウサギ
において例１に記載の方法に従いマクドナルドーシャダ
ツク　システムを用いて前眼房インブラントとして評価
する。この評価はこの例に従い製造された化学的に１じ
飾されたコラーゲンが空気、Ｂ５５ｒｎおよびヘアロン
１と総合的に均等であるかまたはこれらよシ浚れている
ことを示す。

このコラーゲンの溶液（Ｂ５５ｒｎ中の２重量％溶゛液
）は例１に記載の方法に従い試験して、ワイゼンペルグ
効果を示す。コラーゲン溶液は例１の方法に従い試験し
て、剪断速度が増加するに従い粘度の減少を示し、疑似
塑性である。コラーゲン溶液は０．１秒−１での剪断の
７分以内にその初期粘度の約７５％を回復し、チキント
ロビイ性である。

２％フラーデン溶液の融解温度は差動走査熱量計により
測定して約６４〜６７℃である。

例　　６ カップラーとしてテレフタロイル　クロリドの代りにア
セトン１７−中の４−（ｐ−１（ｏ−クロルカルボニル
ベンゾイル）フェニル〕ゾチリル　クロリド（０，２６
５２，９）を使用し、および無水グルタル酸の代ジにア
セトン１７ｍ１中の無水コハク酸（０，３９！ｌ　３　
、！ｉｌ　）　ｔ−便用する以外は例２０方法に従い化
学的に修飾されたコラーゲンを製造した。

このコラーゲンの溶液（ＮａＣｆ　Ｏ−８４菖３１％、
ＫＣｊＯｌｏ　５４重’ｌｋ％、ＣａＣｌ２０−０１７
重量％、Ｎａ２ＨＰＯ４０，０２８ｍ　１１％およびＮ
ａＨ２ＰＯ４０−００４重量％を含有するリン酸塩緩衝
浴液中の２富欲チ溶液）は例１ｉＣ記載の方法に従いマ
クドナルドーシャダツクシステムを使用して、ニューシ
ーラント白ウサギにおいて前眼房インブラントとして評
価する。この評価はこの例に従い製造された化学的に変
性されたコラーゲンが空気、Ｂ５Ｓｍお工びヘアｌμと
総合的に均等であることを示す。

このコラーゲンの溶液（ＢＳＳＩ！ｌ中の２重量％）は
例１に記載の方法に従い試験してワイゼンペルグ効果を
示す。コラーゲン溶液は例１の方法に従い試験して、剪
断速度が増加すると粘度の減少を示し、疑似塑性である
。コラーゲン溶液は０．１秒−１での剪断の７分以内に
その初期粘度の約６５〜９５％を回復し、チキントロビ
イ性である。

２チコラーゲン溶液の融解温度は差動走査熱量計により
測定して約３４〜３７℃である。

例　　７ カップラーとしてテレフタロイル　クロリドの代シにア
セトン１フ リド（　０．１　４　４　２　ｇ）を使用し、およびア
ミン修飾剤として無水グルタル酸の代りにアセトン１７
ｄ中の無水ジグリコールｅｌＩ（　［１．１　９　７　
３　ｇ　）　’ｃ使用する以外は例２の方法に従い化学
的に修飾されたコラーゲンを製造した。

このコラーゲンの溶液（　Ｎａｐ！　０．８　４重量％
、ＫＣＵ　Ｏ．０　５　４　３１１１％、ＣａＣｌ２　
０−０　１　７重ｆｆｉ％、Ｎａ　２　ＨＰＯ４　０．
０　２　８　ｍ　Ｉｋ％およびＮａＨ２ＰＯ４　０　、
０　０　４冨量％全含有するリン酸塩緩衝溶液中の２重
量％溶液）を例１に記載の方法に従い、マクドナルドー
シャダツク　システムを用いて、ニューシーラント白ウ
サギにおいて前眼房インブラントとして評価する。この
評価はこの例に従い製造された化学的に修飾されたコラ
ーゲンが空気、ＢＳＳ！ＩＩおよびヘアロン１と均等で
あるかまたはこれらより優れていることを示す。

このコラーゲンの溶液（　Ｂ５ｌ３ｍ中の約２，ｌｉ！
％）は例１に記載の方法に従い試験してワイゼンペルグ
効果を示す。このコラーゲン溶液は例１の方法に従い試
験して剪断速度が増ＤＯすると粘度の減少を示し、疑似
塑性である。コラーゲン溶液４１０．１秒−１での剪断
の７分以内にその初期粘度の約６５〜９５％金回復し、
チキントロビイ性である。

２％コラーゲン溶液の融解温度は差動走査熱量計で測定
して約６４〜３７℃である。

例　　８ 例２におけるようにして製造した精製タイプ■コラーゲ
ン（　０．０　５　Ｍ酢酸中の０．１５重重量型量％溶
液１７００ｄ）を４℃で１ＯＮ水酸化ナトリウムによシ
処理してｐ）ｌｋ５．０に上げる。Ｎ，Ｎ−ジメチルホ
ルムアミド１７ｓｃＡ’中のビシクロ〔２。

２、２〕オクト−７−エン−２．３，５．６ーテトラカ
ルボン酸−２．３，５．６−ジ無水物（　０．０　８　
１　０　＃　）および無水１．２．４−ベンゼントリカ
ルボン酸（　０．０　６　６　０　ｇ）の溶液を精製タ
イプ１コラーゲンに攪拌しながら全部を一度に卯える。

ｐＨｔ１ＯＮ水酸化ナトリウムを用いて９、４に直ちに
上げる。溶液を１０分間攪拌し、この間、ＰＨは１Ｎ水
醗化ナトリウムを除徐に加えることによす９．４に維持
する。１０分後に、ＰＨｔ１ＯＮ水酸化す）　ＩＪウム
の添加によ！！７　１　２．１に上け、このｐＨｆｆ１
１２．１で２分間維持する。ＰＨを次いテロ　Ｎ　ＨＣ
ＪＩＤｍＩ＋０　１ｃ　Ｌす９．０ニ下げ、このＰＨ金
１０分間維持する。この間に溶液のｆ＆度は４℃から６
２℃に高める。

このカップリング結合したコラーゲン生成物にアセトン
１７ｄ中の無水１．２．４−ベンゼントリカルボン！（
０．２４７２．９）を、ＰＨを９．０士０、２　５　Ｋ
維持するための１Ｎ水酸化ナトリウムとともに滴下して
ＤＯえる。添加が完了した後に、溶液を１０分間攪拌す
る。ＰＨをｉ　Ｑ　Ｎ　ＮａＯＨおよび６　Ｎ　Ｈ（Ｊ
をそれぞれ使用して、６分間１２．５に上げ、次いで９
０に減じる。ｐＨ９．０で１０分間攪拌した後に、ｐＨ
’に３．２に減じて、化学的に修飾されたコラーゲン生
成物を沈殿させる。溶液を１５分間おだやかに攪拌して
完全な沈殿を確実にする。

生成物を遠心分離により採取し、集めた沈殿を無菌水で
、含水沈殿１部当り水１０部の櫂釈匿で順次４回洗浄す
る。

Ｂ５５ｒｎ中のコラーゲンの２重量％溶液は目で見てお
よび光／光学顕微鏡の両刀で測定して無色透明であった
。

このコラーゲンの溶液（　Ｂ５５ｒｎ中２重量係）を例
１に記載の方法に従いマクドナルドーシャダツク　シス
テムを用いてニューシーラント白ウサギにおいて前眼房
インブラントとして評価した。この評価はこの例により
製造された化学的に修飾されたコラーゲンが空気、Ｂ５
Ｓｍおよびヘアロン０と総合的に均等であるかまたはこ
れらより優れていることを示した。

コラーゲン溶液（　Ｂ５Ｓｍ中の約２重量％）は例１に
記載の方法に従い試験して、ワイゼンペルグ効果を示す
。コラーゲン溶液は例１の方法に従い試験して、剪断速
度が増加すると粘度の減少を示し、疑似塑性である。コ
ラーゲン溶液は０．１秒−１での剪断の７分以内にその
初期粘度の約６５〜９５％を回復し、チキントロビイ性
である。

２％コラ−ｒン溶液の融解温度は差動走査熱量計で測定
して約３４〜６７℃である。

例　　９ カップラーとしてビシクロ［２、２、２］オクト−７−
エン−２，３，５，６−チトラカルざン酸−２．３，５
．６−ジ無水物の代シにＮ−メチル・ピロリドン１７ｄ
中の１．３．５−ベンゼントリスルホニル　クロリド（
０，０７２７，９）　ｔ−使用し、およびアミン修飾剤
として無水１．２．４−ベンゼン　トリカルボン酸の代
υにアセトン１７ｄ中の０−スルホ安息香酸環状無水物
（０，０７１８ｇ）を便用する以外【工例８の方法に従
い化学的に修飾されたコラーゲンを製造した。

このコラーゲンのＢＳＳ”中の２重量％溶液は目で見て
および光／光学顕微！（４０Ｘ）の両方により測定して
無色透明であった。

このコラーゲンの溶液（ＮａＣＪ　Ｏ−８４重量％、Ｋ
Ｃｊ　Ｏ，０５４重量％、ＣａＣｊ２０．０１７重量％
、Ｎａ２ＨＰＯ４０，０２８重量％およびＮａＨ２ＰＯ
４０，ＯＯ４重量％を含有するリン酸塩緩衝溶液中の２
重量％溶液）は例１に記載の方法に従いマクドナルドー
シャダツク　システムを用いてニューシーラント白ウサ
ギにおいて前眼房インブラントとして評価する。この評
価はこの例に従い製造された化学的に修飾されたコラー
ゲンがを気、Ｂ５Ｓｍおよびヘアロン０と総合的に均等
であることを示す。

このコラーゲンの溶液（Ｂ８Ｓｍ中の約２重量％）は例
１に記載の方法に従い試験して、ワイゼンペルグ効果を
示す。コラーゲン溶液は例１の方法に従い試験して剪断
速度が増加すると粘度の減少を示し、疑似塑性である。

コラーゲン溶液は０．１秒−１での剪断の７分以内にそ
の初期粘度の約７５〜９５％を回復し、チキントロビイ
性である。

２チコラーゲン溶液は差動走査熱量計により測定して約
３５〜４２℃の融解温度を有する。

例１０ カップリング剤としてビシクロ［２、２、２］オクト−
７−エン−２，３，５，６−テトラカルボン酸−２，３
，５，６−ジ無水物の代りにジ無水３．３’、４．４’
−ベンゾフェノンテトラカルざン酸（０，１０Ｎ　）　
’に使用する以外は例８の方法に従い化学的に修飾され
たコラーゲンを製造した。

このコラーゲンのＢｕｓｙｉ中の２重量％溶液をヱ目で
見てお工び光／光学顕微鏡の両方で測定して無色透明で
あった。

このコラーゲンの溶液（ＮａＣｊＯ−８４重量％、Ｋ（
Ｊ　Ｏ，０５４重量％、Ｃａ（４２０，０１７重量％、
Ｎａ２ＨＰＯ４ｏ、ｏ　２８　Ｎ　１１％およびＮａＨ
２ＰＯ４０，００４重量％を含有するリン酸塩緩衝溶液
中の２重量％溶液）金側１に記載の方法に従いマクドナ
ルドーシャダツク　システムを用いてニューシーラント
白ウサギにおいて前眼房インブラントとして評価する。

この評価はこの例に従って製造された化学的に修飾され
たコラーゲンが空気、Ｂ５５Ｉｎおよびヘアロン０と総
合的に均等である力）マたはこれらよシ優れていること
を示す。

このコラーゲンの溶液（ＢＳＳ”中の約２重量％）は例
１に記載の方法に従い試験してワイゼンペルグ効果を示
す。コラーゲン溶液は例１の方法に従い試験して剪断速
度が増加すると粘度の減少を示し、疑似塑性である。コ
ラーゲン溶液は０．１　秒−１での剪断の７分以内にそ
の初期粘度の約６５〜９５！１回復し、チキントロビイ
性である。

２％コラーゲン溶液の融解温度は差動走査熱量計によシ
測定して約３４〜３７℃である。

例１１ 例１におけるように製造精製タイプＩコラーゲン全０．
１５京量／重怠チ溶液が得られるに充分な０．１Ｍ酢酸
に溶解する。このコラーゲン溶液（３００ｒＩＬ！りｔ
−４６ｃに冷却し、ｐＨｔ−１０Ｎ　ＮａＯＨで９．０
に調整する。激しく攪拌されているコラーゲン溶液にエ
チレン　グリコールジメチル　エーテル３１１ｔｌ！に
溶解した１、３−ベンゼンジスルホニル　クロリド（０
，０７、ｌｉ’　）　ｔ−加える。ＰＨを、１ＮＮａＯ
Ｈを徐々に加えることにより１５分間９．０士０．２５
に維持する。

１５分後に、エチレン　グリコール　ジメチルエーテル
６−に溶解した無水１，２．４−ベンゼントリカルボン
酸（０，０５，９）を含有する溶液をこのコラーゲン溶
液に一度に全部加える。ＰＨｔ−４５分間９０±０．２
５に維持する。ｐＨｔ−１ＯＮＮａＯＨの添ＴＪＤによ
シ３分間１２．０に上げる。ＰＨを次イｒ　６　Ｎ　Ｈ
Ｃｊｔ−用いて３．３に減じ、化学的に修飾されたコラ
ーゲン生成物を沈殿させる。沈殿を濾取し、脱イオン水
を用いて洗浄する。沈殿をＮａ（Ｊｏ、８４重量％、Ｋ
ＣＩ　０．０５４重態チ、ＣａＣｆ２０．０１７ｊｌｆ
ｆｉ％、Ｎａ２ＨＰＯ４０−０２８Ｍ量チお工びＮａＨ
２ＰＯ４０−００４７１１１世’ｊ　ｔ−含有するリン
酸塩緩衝溶液中で再構成して２重ｉ１／重量％溶液を得
る。

このコラーゲン溶液は目で見ておよび光／光学顕微鏡の
両方により測定して無色透明である。

このコラーゲン溶液を例１に記載の方法に従いマクドナ
ルドーシャダツク　システムヲ用いてニューシーラント
白ウサギにおいて前眼房インブラントとして評価する。

この評価はこの例に従い製造された化学的に修飾された
コラーゲンが空気、ＢＳ８′″および　ヘアロン０と総
合的に均等であることを示す。

このコラーゲンの溶液（ＢＳＳＩｎ中の約２重量％）は
例１に記載の方法に従い試験してワイゼンベルグ効果を
示す。このコラーゲン溶液に１例１の方法に従い試験し
て、剪断速度が増加すると粘度の減少を示し、疑似塑性
である。コラーゲン溶液は０．１秒−１での剪断の７分
以内にその初期粘度の約６５〜９５％を回復し、チキン
トロビイ性であ８２％コラーゲン溶液の融解温度は差動
走査熱量計によル測定して約６４〜６７℃である。

例１２ 例２に従い製造した精製タイプ■コラーゲン（７５０ｄ
）ｔ−４℃で１ＱＮＮａＯＨで処理してＰＨｔ５．０に
上げる。アセトン７．５ｍｌ中のｐ−フルオルスルホニ
ルベンゼンスルホニル　クロリド（０，０２５１Ｎ）お
よび無水グルタル酸（０，０１２４Ｉ）を激しく攪拌さ
れているコラーゲン溶液に一度に全部加える。ＰＩ”Ｉ
を１ＱＮＮａＯＨおよび６ＮＨＣ１をそれぞれ使用して
、直ちに１１．７によけ、次いで９．２に減じる。溶液
を１５分間攪拌してカッシリング結合したコラーゲン生
成物を生成させる。

このカップリング結合したコラーゲンの溶液を４℃でア
セトン７．５ｄ中の無水グルタル酸（０，０６４２＃）
の滴下添加により処理し、ｐＨは１ＮＮａＯＨの添加に
より９．０±０．２５に維持する。

添加完了後に、溶液ｔ−ｉＯ分間かきまぜる。−を６Ｎ
　ＨＣＪ、をユ使用して４．０に減じ、溶液を次いでさ
らに１０分間かきまぜる。修飾されたコラーゲン沈殿を
遠心分離により採取し、無菌水で含水沈殿１部当ジ水１
０倍の稀釈度で４回洗浄する。

生成コラーゲンのＢＳＳ”中２重量係溶液は目で見てお
工び光／光学顕微鏡の両方で測定みて無色透明である。

コラーゲン溶液（ＢＳＳ”中２重量％）を例ｉ１ｃ記載
の方法に従いマクｒナルトーシャダック　システムを使
用してニューシーラント白ウサギにおいて前眼房インブ
ラントとして評価した。この評価はこの例に従い製造さ
れた化学的に修飾されたコラーゲンが空気、Ｂ５Ｓｍお
よびヘアロン０と総合的に均等であるかまたはこれらよ
り優れていることを示した。

生成コラーゲンの溶液（ＢＳＳ”巾約２＊量％）は例１
に記載の方法に従い試験してワイゼンベルグ効果ヲ示す
。コラーゲン溶液を１例１の方法に従い試験して、剪断
速度が増ＤＯすると粘度の減少を示し、疑似塑性である
。コラーゲン溶液（工０．１秒−１での剪断の７分以内
にその初期粘度の約６５〜９５％を回復し、チキントロ
ビイ性である。

２％コラーゲン溶液の融解温度に差動走査熱量計で測定
して約３４〜３７℃である。

例１６ 例１で製造されたような精製タイプＩコラーｒンを０．
１Ｍ酢酸溶液３００ｗＬｅ中で再構成して、０．２０東
量／恵量チ溶液を生成する。このコラーゲン溶液（３０
０ｍＪ）を４℃に冷却し、ＰＨを１ＯＮＮａＯＨで８．
０に調整する。攪拌されているコラーゲン溶液にアセト
ン３−中に溶解した５−クロルスルホニル−〇−アニス
酸クロリド（０，０３０１９）を徐々に加える。この間
、ＰＨはｉ　Ｎ　ＮａＯＨの添加により８．０に維持す
る。８．０の反応ＰＨを使用して、利用できる遊離アミ
ンの濃度を減少させ、それによりカップリングの程度を
制御する。６分の反応の後に、ＰＩ（を５　Ｎ　ＮａＯ
Ｈの添加に工り１６に上げていづれかの残存するカプラ
ーを加水分解し、反１）６ヲ止める。…は１３に２分間
保持し、次いで６　Ｎ　Ｈ（Ｊで９．０に減じる。

アセトン３ｄ中に溶解した無水グルタル酸（０，０３４
９）ｔ−含有する溶液をコラーゲン溶液に全部一度に加
える。ＰＨはｌ　Ｎ　ＮａＯＨを徐々に加えて９．０±
０．２５に３０分間保持する。ＰＨを次いで＜５　Ｎ　
ＨＣｆを用いて４．０に減じて化学的に修飾されたコラ
ーゲン生成物を沈殿させる。例１に記載の方法に従い沈
殿全採取し、洗浄する。フラーデン沈殿企平衡化した塩
類溶液（ＢＳＳ”　）に溶解して２．０重量／重量％溶
液を生成する。ＰＨを次いで１ＮＮａＯＨを用いて７．
１に調整する。

このコラーゲンの溶液（ＮａＣｊ　Ｏ−８４重１１％、
ＫＣＬＯ，０５４重量％、ＣａＣ２２０，０１７重１１
％。

Ｎａ２ＨＰＯ４０，［）　２８重量％およびＮａＨ２Ｐ
Ｏ４０，００４重量％を含有するリン酸塩緩衝溶液中の
２重量％溶液）ｔ−例１に記載の方法に従いマクドナル
ドーシャダツク　システムを用いてニューシーラント白
ウサギにおいて前眼房インブラントとして評価する。こ
の評価はこの例に従い製造された化学的に修飾されたコ
ラーゲンが突気、ＢＳＳ！！１およびヘアロン０と総合
的に均等であることを示す。

生成コラーゲンの溶液（ＢＳＳｆｆＩ中約２重ｔ巾約は
重量に記載の方法に従い試験してワイゼンベルグ効果を
示す。このコラーゲン溶液は例１の方法に従い試験して
剪断速度が増加すると粘度の減少を示し、疑似塑性であ
る。コラーゲン溶液は０・１秒−１での剪断の７分以内
にその初期粘度の約６５〜９５％を回復し、チキントロ
ビイ性である。

２チコラーゲン溶液の融解温度は差動走査熱量計により
測定して約３４〜３７℃である。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. （１）少なくとも二個の天然コラーゲン分子を含み、こ
   れらの各コラーゲン分子に存在する少なくとも１個のリ
   ジンエプシロンアミノ基がカップリング基により結合し
   ている化学的に修飾されているコラーゲン化合物であつ
   て、カップリング基がカルボニルおよびスルホニル基よ
   りなる群から選ばれる少なくとも２つの部分を含むこと
   を特徴とする化学的に修飾されているコラーゲン化合物
   。
2. （２）カップリング基に存在するカルボニルおよび（ま
   たは）スルホニル基が２０個より少ない炭素原子を有す
   る飽和または不飽和アルキレン、アリーレンまたは混合
   アルキレン−アリーレンカップリング鎖を介して相互に
   結合しており、これらのアルキレンおよび（または）ア
   リーレンカップリング鎖は酸素、イオウおよび窒素より
   なる群から選ばれるヘテロ原子を含有していてもよく、
   および利用できる芳香族位置に置換基としてカルボキシ
   ル基、１〜４個の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖
   状アルキル基、１〜４個の炭素原子を有する直鎖状また
   は分枝鎖状アルコキシ基、ハロゲンおよびその他の非反
   応性基を有していてもよく、および利用できる脂肪族位
   置に置換基としてカルボキシル基および１〜４個の炭素
   原子を有するアルキルまたはアルコキシ基を有していて
   もよい、特許請求の範囲第１項の化学的に修飾されたコ
   ラーゲン化合物。
3. （３）カップリング基が一般式 −Ｂ−Ａ−Ｂ− 〔式中ＢはそれぞれＣＯ、ＳＯ＿２またはその組合せを
   表わし；そして Ａは（イ）６〜２０個の炭素原子を有する芳香族基；（
   ロ）▲数式、化学式、表等があります▼（式中Ａｒはそ
   れぞれ ６〜１０個の炭素原子を有する芳香族環、Ｃ、Ｎ、Ｏお
   よびＳよりなる群から選ばれる原子を含有し、５〜１０
   個の原子を有するヘテロ芳香族環またはその組合せを表
   わし、Ｊは水素または−（Ｌ）−＿ｂＢ〔式中Ｌはフェ
   ニレン、１〜４個の炭素原子を有するアルキレンおよび
   １〜４個の炭素原子を有するオキシアルキレンよりなる
   群から選ばれ、ｂは０または１でありそしてＢは前記定
   義のとおりである〕であるが、但し鎖▲数式、化学式、
   表等があります▼中のＪ の１つだけが−（Ｌ）−＿ｂＢであることができ、その
   他全部のＪは水素であり；ｎは０または１であり、ａは
   ０または１〜４の整数であり、そしてＤはそれぞれＯ、
   ＣＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ＿２、▲数式、化学式、表等があ
   ります▼、ＮＨ、ＮＲＪ、▲数式、化学式、表等があり
   ます▼、▲数式、化学式、表等があります▼、▲数式、
   化学式、表等があります▼、 −ＳＯ＿２−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−（但しｍは
   １〜３の整数であり、Ｒはフェニル、１〜４個の炭素原
   子を有する直鎖状または分枝鎖状アルキルあるいはアシ
   ル基よりなる群から選ばれ、そしてＪは前記に定義され
   、制限されているとおりである）よりなる群から選ばれ
   る〕；（ハ）６〜１０個の炭素原子を有する芳香族基で
   あり、これらの芳香族基は利用できる位置に置換基とし
   てＪ（但しＪは前記に定義され、制限されているとおり
   である）を有していてもよい；（ニ）Ｃ、Ｎ、Ｏおよび
   Ｓよりなる群から選ばれる原子を含有し、５〜１０個の
   原子を有するヘテロ芳香族基であり、これらのヘテロ芳
   香族基は利用できる位置に置換基としてＪ（但しＪは前
   記に定義され、制限されているとおりである）を有して
   いてもよく；（ホ）１個または２個のオレフィン状また
   はアセチレン状基を有し、および２〜２０個の炭素原子
   を有する脂肪族または芳香族・脂肪族鎖であり、これら
   の鎖は利用できる位置に置換基としてＪ（但しＪは前記
   に定義され、制限されているとおりである）を有してい
   てもよく、（ヘ）部分的に不飽和であつてもよい３〜１
   ５個の炭素原子を有する脂環族環であり、この脂環族環
   は利用できる位置に置換基としてＪ（但しＪは前記に定
   義され、制限されているとおりである）を有していても
   よく；（ト）飽和または不飽和であることができ、およ
   びＣ、Ｎ、ＯおよびＳよりなる群から選ばれる原子を含
   有し、５〜１２個の環原子を有するヘテロ環状環であり
   、このヘテロ環状環は利用できる位置に置換基としてＪ
   （但しＪは前記に定義され、制限されているとおりであ
   る）を有していてもよく； （ト）▲数式、化学式、表等があります▼（式中ｔは１
   〜８ の整数であり、ＥはそれぞれＯ、ＮＲＪ、Ｓ、ＳＯ、Ｓ
   Ｏ＿２、ＣＯ、▲数式、化学式、表等があります▼、Ｃ
   ＯＮＨ、ＳＯ＿２ＮＨおよびＮＨＣＯＮＨ〔但しＲは前
   記定義のとおりであり、そしてｍは１〜３の整数である
   〕よりなる群から選ばれ、Ｊは前記に定義され制限され
   ているとおりであり、ｓは２〜８の整数であり、ｐは０
   または１〜４の整数であり、ｑは０または１であり、そ
   してｒは０または１〜８の整数であるが、ｑが１である
   場合には、ｒは０より大である）；および（チ）▲数式
   、化学式、表等があります▼（式中Ｇはそれぞれ６〜 １０個の炭素原子を有する芳香族環、５〜１０個の原子
   を有するヘテロ芳香族環および５〜１０個の原子を有す
   るヘテロ環状環であり、これらのヘテロ芳香族およびヘ
   テロ環状環はＣ、Ｎ、ＯおよびＳよりなる群から選ばれ
   る原子を含有し、Ｊは前記に定義され、制限されている
   とおりであり、ｗは１〜８の整数であり、Ｅおよびｑは
   前記定義のとおりであり、ｙは１または２であり、そし
   てｖは０または１〜４の整数であるが、ｑが１である場
   合には、ｖは０ではない）；よりなる群から選ばれる〕
   を有する特許請求の範囲第１項の化学的に修飾されたコ
   ラーゲン化合物。
4. （４）カップリング基に結合していないリジンエプシロ
   ンアミノ基の少なくとも一部分がアミン修飾基が結合し
   ており、このアミン修飾基は飽和または不飽和アルカン
   スルホンアミドおよびカルボキシアミド基、アレンスル
   ホンアミドおよびカルボキシアミド基および混合飽和ま
   たは不飽和アルカン−アレンスルホンアミドおよびカル
   ボキシアミド基よりなる群から選ばれ、これらのアミン
   修飾基は２〜２０個の炭素原子を有しおよび末端に１個
   または２個のカルボン酸またはスルホン酸部分を有し、
   これらのアミン修飾基はまた酸素、イオウおよび窒素よ
   りなる群から選ばれる５個までのヘテロ原子を含有して
   いてもよく、および利用できる芳香族および脂肪族位置
   に置換基としてカルボキシル基、１〜４個の炭素原子を
   有するアルキルおよびアルコキシ基およびハロゲンを有
   していてもよい、特許請求の範囲第１項の化学的に修飾
   されたコラーゲン化合物。
5. （５）カップリング基に結合していないリジンエプシロ
   ンアミノ基の少なくとも６０％がアミン修飾基に結合し
   ており、これらのアミン修飾基は飽和または不飽和アル
   カンスルホンアミドおよびカルボキシアミド基、アレン
   スルホンアミドおよびカルボキシアミド基、および混合
   飽和または不飽和アルカン・アレンスルホンアミドおよ
   びカルボキシアミド基よりなる群から選ばれ、これらの
   アミン修飾基は２〜２０個の炭素原子を有しおよび末端
   に１個または２個のカルボン酸またはスルホン酸部分を
   有し、これらのアミン修飾基はまた、酸素、イオウおよ
   び窒素よりなる群から選ばれる５個までのヘテロ原子を
   含有していてもよく、および利用できる芳香族および脂
   肪族位置に置換基としてカルボキシル基、１〜４個の炭
   素原子を有するアルキルおよびアルコキシ基およびハロ
   ゲンを有していてもよい、特許請求の範囲第１項の化学
   的に修飾されたコラーゲン化合物。
6. （６）アミン修飾基が一般式 −Ｂ−Ａ（Ｂ−Ｋ）＿ｚ （式中ｚは０、１または２であり、ＢおよびＡは前記定
   義のとおりであるが、Ｊは水素でありそしてにはＯＨで
   ある）を有する特許請求の範囲第１項の化学的に修飾さ
   れたコラーゲン化合物。
7. （７）生理学的緩衝溶液に溶解した特許請求の範囲第４
   項に記載のコラーゲン化合物０．５〜５．０重量％を含
   有する粘弾性コラーゲン溶液であつて、生理学的緩衝溶
   液中のこの化学的に修飾されたコラーゲン化合物の２重
   量％溶液が０．１０秒＾−＾１の剪断速度で０．１５×
   １０＾６〜４．０×１０＾６センチポイズの定常状態粘
   度；１．０秒＾−＾１の剪断速度で０．２０×１０＾５
   〜７．５×１０＾５センチポイズの定常状態粘度、１０
   ．０秒＾−＾１の剪断速度で０．３×１０＾４〜１．０
   ×１０＾５センチポイズの定常状態粘度および１００秒
   ＾−＾１の剪断速度で０．４５×１０＾３〜２．０×１
   ０＾４センチポイズの定常状態粘度を有する程度にまで
   、この化学的に修飾されたコラーゲン化合物中にカップ
   リング基が存在することをさらに特徴とする粘弾性コラ
   ーゲン溶液。
8. （８）生理学的緩衝溶液中に溶解した特許請求の範囲第
   ４項に記載のコラーゲン化合物の約０．５〜５．０重量
   ％を含有する粘弾性コラーゲン溶液であつて、生理学的
   緩衝溶液中のこの化学的に修飾されたコラーゲン化合物
   の２重量％溶液が３２℃〜４８℃の融解温度を有する程
   度にまで、このコラーゲン化合物中にカップリング基が
   存在することをさらに特徴とする粘弾性コラーゲン溶液
   。
9. （９）特許請求の範囲第１項の化学的に修飾されたコラ
   ーゲン化合物の製造方法であつて、 ａ）天然コラーゲンの少なくとも０．０５重量％水溶液
   に、天然コラーゲン１モル当りカップリング剤１〜６０
   ０モルに等しい量でカップリング剤を加え、ここでカッ
   プリング剤はジ−およびトリ−カルボン酸ハライド、ジ
   −およびトリ−スルホニルハライド、ジ−およびトリ−
   酸無水物、ジ−およびトリ−反応活性エステルおよび少
   なくとも２個のカルボン酸ハライド、スルホニルハライ
   ド酸無水物および活性エステルよりなる群から選ばれる
   部分を有する化合物よりなる群から選択され；ｂ）この
   天然コラーゲンとカップリング剤とを、８以上のｐＨお
   よび０〜５５℃の温度で、実質的に全部のカップリング
   剤が反応するかあるいは加水分解するに充分な期間、反
   応させる； 工程を特徴とする製造方法。
10. （１０）方法がさらに、 ｃ）反応混合物に、酸無水物、酸ハライド、スルホニル
    ハライドおよび活性エステルよりなる群から選ばれるモ
    ノ−反応性アミン修飾剤を天然コラーゲン１モル当りア
    ミン修飾剤の少なくとも１００モルに等しい量で加える
    工程、およびｄ）８より大のｐＨおよび０〜３５℃の温
    度で、実質的に全部のアミン修飾剤が反応するか、また
    は加水分解するのに充分の期間、アミン修飾反応を行な
    う工程、 を含む特許請求の範囲第９項の方法。