JPS62120399A - 抗原決定ペプチド及びそれらの製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、次の一般式（Ｉ）； Ｈ−Ｖａ　Ｉ　−Ｘ−Ｙ　　　　（Ｉ）〔式中、Ｘは、
次の構造： Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−へ５ｐ−５ｅｒ−八ｒｇ−Ａ
ｓｎ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ。

Ｐｈｅ−１１ｅ−）１ｉｓ−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−
Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ。

Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ａｌａ−Ｔ
ｙｒ−１１ｅ。

Ｌｅｕ−Ｈ１ｓ−Ｔｈｒ−Ｇ　１　ｙ−Ｇ　Ｉｕ−Ａｒ
ｇ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｈｊｓ−Ｌｅｕ−Ｇ　１　ｙ。

５ｅｒ−Ｇｌｙ−Ｔｙｒ−へｌａ−へｒｇ−Ｇｌｙ−Ｔ
ｒｐ−Ｐｈｅ又は５ｅｒ−１１ｅ−Ｇｌｕ−Ｔｒｐ−八
ｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−５ｅｒを有す
るオクタペプチド残基〜ウンデカペプチド残基を表わし
、そしてＹは水酸基又はアミン基を表わす〕の抗原決定
ペプチド及びそれらの製造方法に関する。

上に定義されたペプチド化合物は、新規物質であり、そ
してヒトＴ−細胞リンパ栄養型■ウィルス（ＨＴＬＶ−
ＩＩＩ　、旧Ｖ）の抗原決定特性を有することがわかっ
た。それらは、いわゆる後天性免疫不全症候群（ＡＩＤ
Ｓ）を誘発する前記ウィルスに対する抗体の検出のため
に適切な診断薬として使用することが期待される。それ
らはまた、単一決定抗体を得るための及びＡＩＤＳの前
記ウィルスによる感染に対する免疫化のための将来の安
全薬としての可能性を有することが推測される。

以下余白 〔従来の技術〕 今まで、免疫不全症候群は、患者の血液におけるそれぞ
れの１（ＩＶ−拮抗性抗体の存在によって確認されてい
る。このアッセイは、いわゆるＥＬＩＳＡ試験の使用に
よりもたらされ、そしてそれは、患者の血清抗体と抗原
、すなわち使用される。ＥＬＩＳＡ試験プレートによっ
て非活性化されたヒト免疫不全ウィルスとの相互反応に
基づいている。そのウィルスはかなり複雑な多段技法に
よってのみ利用される。すなわち、まず起源体が感染さ
れた宿主細胞によって！Ｆｌｉｍ培養中において増殖さ
れ、次にウィルス粒子がその培養培地から単離され、そ
して生物学的物質がＥＬＩＳＡ試験プレートコーチング
の製造のために使用され得る前に、いくつかの連続的な
操作によって精製される。それに関与する方法は、ひじ
ょうに労費的且つ不経済であり、そして上のすべては操
業者に対して高い危険性を与える。なぜならば、この研
究のすべては、ひじょうに伝染性病原体基質により行な
われるからである。ＥＬＩＳ＾試験プレートでされ、（
それらは非活性調製物により提供されるが）潜在的に伝
染性の物質として処理されるべきである。上に概略され
た原理は、いくつかの主な医薬的方法によって供給され
るような実験室用ＡＩＤＳ診断セットを製造するのに採
用されている。その試験は完全には特異的ではない。す
なわち、組織培養からの避けられない残留汚染菌による
誤まった正の反応から推定される。これらの無視できな
い誤まった正の反応の発生率の観点において、すべての
正の調査結果は、免疫螢光検査アッセイ又はいわゆるウ
ェスターン法のいづれかによる他の原理に基づいて追加
の確認試験を実施することによって確かめられるべきで
ある。これらの欠点を、本発明の新規の抗原決定ペプチ
ドを用いる新規のアッセイセットの最近の開発によって
除去又は実質的に減じることができる。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明の対象化合物は、溶液中において又はポリマー性
固形担体上で、それぞれのアミノ酸残基のフラグメント
合成又は連続的な縮合のいづれかによって使用される。

本明細書に詳しく記載されている好ましい方法は、ペプ
チド合成のＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄ固相技法に基づき、そ
して実質的には次の連続的段階による。すなわちそれら
の段階は、まず、変性されたポリスチレン型担体樹脂の
反応基に適切に保護された配列のカルボキシ末端のアミ
ノ酸残基を結合し、続いて、それぞれ保護されたアミノ
酸及び通常の縮合剤を用いて、一連の連続的反応サイク
ルによって必要なペプチド鎖を合成し、得られたペプチ
ジル樹脂をアシドリシス分解し、そしてその操作の間、
形成されたペプチド鎖が担体樹脂から切断され、そして
同時に脱保護され、そして最後に、その得られたペプチ
ド生成物を精製することを含んで成る。

〔具体的な説明〕

従って、１重量％の量のジビニルベンゼンにより架橋さ
れ、そしてクロロメチル成分又はベンズヒドリルアミン
成分の導入により変性されたポリスチレンが担体として
使用された。酸のＮαアミノ基かも一ブチルオキシカル
ボニル（Ｂｏｃ）　７Ｊによって保護され（他の酸性除
去性保護基をまた使用することができるが、しかし付加
の利点を与えない）、そしてそれぞれの合成の段階にお
けるアシドリシス性脱保護が、ジクロロメタン中トリフ
ルオロ酢酸溶液を用いて便利にもたらされた。二及びそ
れ以上の官能価アミノ酸の側官能基（一般に水酸基又は
アミノ基）は、ベンジル又は関連（たとえばベンジルオ
キシカルボニル、Ｚ）基により保護された。保護された
アミノ酸の連続的な縮合は、適切な酸の反応性誘導体の
使用、好ましくは、対称無水物又はＮ−ヒドロキシ−ベ
ンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）エステルによりもたらさ
れた。

合成の完結の後、形成れさたペプチド鎖は、酸により分
解され、そして同時に、二及びそれ以上の官能価アミノ
酸残基から保護基が除去された。この分解は、トリフル
オロ酢酸及びチオアニゾールの存在中、液体弗化水素又
はトリフルオロメタンスルホン酸の作用下で便利に行な
われた。得られた粗生成物は、ペプチド化学で日常、使
用される担体又は好ましくは疎水性脂肪族炭化水素コー
チングにより提供されるシリカゲルもしくは分子篩担体
を充填するカラムクロマトグラフィーにより精製された
。得られたペプチド生成物の組成物は、アミノ酸分析に
よって確かめられ、そしてそれらの純度は、クロマトグ
ラフィー及び電気泳動による分離法によって確証された
。

式（１）のペプチドのアミノ酸配列は、Ｈ（Ｖ（ヒト免
疫不全ウィルス）タンパク質のアミノ酸配列のフラグメ
ントとして得られ、そしてそれぞれの抗原決定基を含む
ように選択された。得られるペプチドは、診断目的のた
めに、より具体的には、ＨＩＶ−感染個体の細胞により
産生され、そして病原性）１１Ｖクンバク質を阻害する
抗体の検出より、体液及び生物学的基質、たとえば血液
血清中のＨＩＶの診断のために主として有用であること
が見出された。その診断試験は、そのウィルスによって
感染された生物中に形成されるＩＩＩＶ抗体とこの発明
の対象の抗原決定ペプチドとの相互反応に基づく。この
試験方法は、次の方法で実質的に調整された変性試験を
用いて、標準酵素結合の免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ
）試験の原理に基づいて実施され得る。試験プレート中
に供給されているマイクロウェル（被覆さていない、抗
原フリーのプラスチック支持体）を、まず抗原決定ペプ
チドにより被覆する。それらは、ｐＨ７，０のリン酸緩
衝液又はｐＨ９，５の炭酸緩衝液中において、このペプ
チド又は好ましくは、試験プレートの支持材（ポリスチ
レン）に対して正しい接着性を確保し、そしてそのアッ
セイにおいて妨害しない適切な高分子ビヒクル、たとえ
ばヤギ又はウシ血清アルブミンとそれとの接合体の溶液
により満たされる。２０℃で４時間及び４℃で４４時間
のインキュベーションの後、残存する吸収されていない
遊離ペプチドを含む上清溶液を、デカントし、そしてさ
らに被覆操作のために再使用する。そのプレートウェル
を、リン酸緩衝液によりすすぎ、そしてプラスチック表
面上の占められていない受容部位のブロッキングのため
に、同じ緩衝液中、ウシ血清アルブミンの３％溶液によ
り満たす。３７゛Ｃで１時間のインキュベーションの後
、そのウェルを、リン酸緩衝液によりすすぎ、そして前
もって１：１００に希釈された、試験されるべき患者の
血清を導入する。そのテストプレートを３７℃で２時間
インキュベートし、そのウェルをリン酸緩衝液及び水に
より連続的にすすぎ、そしてホースーラディシュペルオ
キシダーゼとヒト免疫グロブリンに対する動物抗体との
接合体を添加する。３７℃で２時間のインキュベーショ
ンの後、そのウェルを十分に洗浄し、溶解物を除き、そ
して接合されたペルオキシダーゼを、標準免疫着色反応
、たとえば３゜３’−５，５’−テトラメチル−ベンジ
ジン又は０−フェニレンジアミン及び過酸化水素により
目に見えるようにする。色の進展は３０分を要するかも
知れない。その色の純度を、使用される試薬のために規
定された波長で分光光度計により測定する。従って、上
の方法における吸光度は、それぞれ４５０又は４９２ｎ
ｍＴ：読まれる。本発明の対象ペプチドを有する色の反
応は、本来の生物学的物質（非活性で生きている旧Ｖ）
から調製された抗原により得られた値を１００％として
取る正の対照値と比較する場合、４１．６％の平均相対
吸光度を示した。

抗原を有しない負の対照血清を比較するために使用する
場合、その色の反応は、測定のバックグラウンドレベル
で変動した。

本発明の抗原決定ペプチドはまた、病原性ＨＩＶタンパ
ク質に対する単決定抗体を得るために及びＨＩＶに対す
る活性免疫化のために使用されることが予期される。い
くつかの種の実験動物に対する予備のインビボ実験の後
、対象のペプチド又はそれらの混合物（遊離又は好まし
くは結合状態もしくは適切な担体構造物中に二官能価重
縮合剤によって導入されている）を用いて、免疫化を便
利に行なうことができる。従って、発明者は、遊離状態
の又は好ましくはグルタルアルデヒドにより重縮合され
たもしくはたとえばＮ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボ
ジイミドを用いてウシ血清アルブミン、チレオグロプリ
ン又はカサガイのキーボールヘモシアニンに結合された
これらのペプチドにより、動物、特にウサギを免疫化す
ることに成功した。完全フロインドアジュバント（非活
性コツホバチルスを含む）又はムラミルジペプチドを免
疫アジュバントとして使用した。

報告された実験結果によって示されるように、対象ペプ
チドは、ＨＩＶについてスクリーニングすることにおけ
る診断及び多分、ＡＩＤＳのウィルス起源体に対する哺
乳類の活性免疫化のための安全なワクチン薬としてもま
た使用され得る。

さらに製造方法を例示的に記載するが、しかしそれらは
非限定的である。

五−上 Ｈ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−＾５ｐ−Ｓｅｒ
−八ｒｇ−八５ｎへＰｒｏ−Ｌｅｕ−ＯＨペプチド合成
用容器を、１％ジビニルベンゼンにより架橋された、ク
ロロメチル化されたポリスチレン樹脂２．５ｇを充填し
、そしてＢｏｃ−Ｌｅｕ（樹脂のｇ当り０．６　ｍモル
のＬｅｕ含有量）によりエステル化した。その合成は９
つの反応サイクルを含み、それぞれは次の段階から成る
＝　（１）保護基の分離（脱保護）　、ＴｌΔ−ＤＣＭ
Ｉ：１．ＩＸ５及び１×３０分、（２）洗浄、ＤＣＭ、
３ｙ１分、（３）洗浄、２−プロパツール、２ｙ１分、
（４）洗浄、ＤＣＭ、２ｙ１分、（５）中和、ＴＥＡ−
ＤＣＭ　１　：　９　。

１ｙ１分及び１ｙ３分、（６）洗浄、ＤＣＭ、６ｙ１分
、（７）縮合、特にことわらないかぎり予備の対称無水
物（３００％過剰モル）を用いて、アミノ基についての
陰性反応まで、及び（８）洗浄、ＤＣＭ、３ｙ１分。前
記の９つの反応サイクルにおいて、次の保護アミノ酸を
、連続的に結合した：Ｂｏｃ−Ｐｒｏ　、　Ｂｏｃ−Ａ
ｓｎ（縮合を、予備のＨＯＢｔエステルを用いて行なっ
た、３００％過剰モル）　、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）
　（反応容器中において縮合剤としてＤＣＣと共にこの
アミノ酸誘導体を混合することによって）、Ｂｏｃ−３
ｅｔ（Ｂｚｌ）、　　Ｂｏｃ−八５ｐ（ＯＢｚｌ）、　
　Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）　　、（上と同様にＡｒｇ
誘導体を混合する）　、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｚ）（２度）
及びＢｏｃ−Ｖａｔ　、この合成が完結した後、ペプチ
ジル樹脂４．１ｇを得た。この材料のサンプル　（０，
５ｇ）　　を、　ＴＦＭＳＡ（０，７５ｍＺ）　　　、
ＴＦＡ（２，５）　　、チオアニゾール（１−）の混合
物中に＋Ａ！、濁した。

周囲温度で１時間、撹拌した後、その生成物を、無水エ
ーテル（１００ｍ７）により沈殿せしめ、分離し、同し
溶媒により洗浄し、１Ｍ酢酸中に抽出し、そして移動相
として１Ｍ酢酸（７ｍＺ／時の流速）を用いて、ポリア
クリルアミドゲルカラム（１×１００　ａｍ）上で精製
した。均質の生成物を含む両分を集め、そして凍結乾燥
した。得られるペプチド材料（収Ｍ　１１３ｎ＋ｇ）は
、標記化合物のための理論値と一致するアミノ酸分析を
有し、そしてその純度を、分析ＨＰＬＣ（ＭｅＯＨ４０
％〜０．１％ＴＦＡ水溶液６０％中におけるＲ　ｔ　＝
　７．９分）、薄層クロマトグラフィー及びｐＨ２，５
での濾紙電気泳動によって確めた。Ｒｒ＝０．４５（ｎ
−ブタノール：酢酸：水＝４：１：１）。

適切なアミノ酸誘導体を用いての類似する方法が、次の
ペプチド化合物を産した： Ｈ−Ｖａｌ−Ｐｈｅ−４１ｅ−旧５−Ａｓｎ−Ｐｈｅ−
Ｔｙｒ−八ｒｇ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−ＯＨ（収ｆ５７ｒｎ
ｇ）　　、　Ｒｔ　＝　６．８　（ＭｅＯＨ４５％〜０
，１％ＴＦＡ水溶液５５％）　、Ｒｆ　＝　０．１５　
（ＢｕＯＨ：八ｃｏＨ：水＝４　：　１　：　１）及び
ｌｌ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｔｙ
ｒ−Ａｌａ−Ｔｙｒ−１１ｅ−ＯＨ（収ｆｆ１７９ｍｇ
）　、Ｒｔ　＝６．１（ＭｅＯ８３５％〜０．１％ＴＦ
Ａ水溶液６５％）、Ｒｆ＝０．２２（上と同じ）。

附ヨー亀 Ｈ−Ｖａ　ｌ　−Ｌｅｕ−Ｈ１ｓ−Ｔｈｒ−Ｇ　１ｙ−
Ｇ　１　ｕ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−しｅｕ
−Ｇｌｙ−ＩＪＨ２ ペプチド合成容器を、１％ジビニルベンゼンにより架橋
されたベンズヒドリルアミン含有ポリスチレン樹脂（樹
脂のｇ当り０．７　ｍモルのアミノ基含有ｆｆ１）１．
５ｇにより充填した。その合成法は、例Ｉと同じ段階か
らそれぞれ成る（但し、最初のサイクルは段階（４）か
ら出発した）１２の反応サイクルを含み、そして縮合を
、３００％モル過剰の対応するＨＯＢｔエステルを用い
て行なった。次の保護されたアミノ酸残基を、連続的に
それぞれのサイクルで結合した：　Ｂｏｃ−Ｇｌｙ　、
　Ｂｏｃ−Ｌｅｕ　、　Ｂｏｃ−）１ｉｓ（Ｂｏｃ）、
　Ｂｏｃ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）＋　Ｂｏｃ−＾ｓｐ　（Ｏ
Ｂｚｌ）、　Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）　（例１におけ
るこのアミノ酸誘導体として同様に縮合される）　、Ｂ
ｏｃ−Ｇｌｕ　（ＯＢｚｌ）、　Ｂｏｃ−Ｇｌｙ、Ｂｏ
ｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、　Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）＋
　Ｂｏｃ−Ｌｅｕ及びＢｏｃ−Ｖａｌ　、合成の完結の
後、ペプチジル樹脂３．１ｇを得た。この材料のサンプ
ル（０，５ｇ）を、液体ＨＦ中、１０％のｐ−チオクレ
ゾール溶液１〇−を用いて、０°Ｃで１時間、分解した
。この形成されたペプチド鎖を、樹脂からそのようにし
て分離し、そして同時に脱保護した。得られた粗生成物
を、固定相として疎水性脂肪族鎖により被覆されたシリ
カゲル及び２５％メタノール中、０．１％ＴＦＡ水溶液
を用いて、２Ｘ５０ｃｎａのカラムの予備ＨＰＬＣによ
って精製し、そして均一の百分を集め、そして凍結乾燥
せしめた。純粋な生成物（収量７２ｍｇ）は、理論値と
同じアミノ酸分析を有し、そしてその純度を、分析用Ｈ
ＰＬＣ（Ｍｅ叶４０％〜０、１％ＴＦＡ水溶液６０％中
におけるＲｔ＝８．２）、薄層クロマトグラフィー及び
ｐＨ＝２．５での濾紙電気泳動によって確かめた。

Ｒｆ＝０．４０（ｎ−ブタノール：酢酸：水＝４：１；
１）。

適切なアミノ酸誘導体を用いての類似する方法が、次の
ペプチド化合物を与えた： Ｈ−Ｖａ　Ｉ　−３ｅｒ−Ｇ　ｌｙ−Ｔｙｒ　−Ａ　Ｉ
ａ−Ａｒｇ−Ｇ　Ｉｙ−Ｔｒｐ−Ｐｈｅ−Ｎｔｌ　ｙ。

（収４ｊｔ７２ｍｇ）　、Ｒｔ　＝　７．１　（ＭｅＯ
ＦＩ４０％〜０．１％ＴＦＡ水溶液６０％）　、Ｒｆ　
＝０．５　　（Ｂｕｉｌｔ：へｃＯＨ：水＝　４　：　
１　：　１　）　、Ｈ−Ｖａｌ−５ｅｒ４１ｅ−Ｇｌｕ
−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−八ｒｇ−Ｔｙｒ−
Ｓｅｒ−ＮＨｚ　　（収量４６ｍｇ）　　、Ｒｔ　＝　
５．７　（ＭｅＯＨ３５％〜０．１％ＴＦＡ水溶液６５
％）、Ｒｆ＝０．４７（上と同じシステム）。

使用された略語の説明： ＡＩＤＳ　：後天性免疫不全症候群、 八ＲＣ：ＡＩＤＳ関連複合体、 １（ＩＶ　　：ヒト免疫不全ウィルス、ＨＴＬＶ　：ヒ
）Ｔ−細胞リンパ栄養型ウィルス（Ｈｒｖと同じ）、 ＨＬＩＳＡ　　：酵素結合の免疫吸着検定、ＨＰＬＣ：
高性能液体クロマトグラフィー、Ｒｔ：保持時間（分）
、 化学薬品及び基： ＤＣＣ：Ｎ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド、 ＤＣＭ　　ニジクロロメタン、 ＋１０Ｂｔ　：　Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール、
ＴＥＡ　　：　ｌ−リエチルアミン、 ＴＦ八　ニトリフルオロ酢酸、 ＴＦＭＳ八　ニトリフルオロメタンスルホンＢｏｃ　　
：　ｔ−ブチルオキシカルボニル、Ｂｚｌ　　：ベンジ
ル、　　Ｆｏｒ　　：ホルミル、Ｔｏｓ：ｐ−トルエン
スルホニル（トシル）、Ｚ：ペンジルオキシカルボニル
、 ＢｒＺ：ｏ−ブロモベンジル−オキシカルボニル、アミ
ノ酸残基： Ａｌａ　　：アニニル、　　へｒｇ：アルギニル、Ａｓ
ｐ　　：アスパルチル、Ａｓｎ：アスパラギニル、Ｇｌ
ｕ　　：グルタミル、　Ｇｌｎ　　：グルタミニル、ｃ
ｔｙ　　ニゲリシル、　　Ｈｉｓ　　：ヒスチジル、ｌ
ｉｅ　　：イソロイシル、Ｌｅｕ　　：ロイシル、Ｔｙ
ｒ　　：リシル、Ｐｈｅ　　：フェニルアラニル、Ｐｒ
ｏ　　：プロリル、　　Ｓｅｒ　　：セリール、Ｔｈｒ
　　：　）レオニル、　Ｔｒｐ　　：　Ｌ”　’７”ト
フィル、Ｔｙｒ　　：チロシル、　　シａｌ：バ５ル。

以下余白

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次の一般式（ I ）： Ｈ−Ｖａｌ−Ｘ−Ｙ（ I ） 〔式中、Ｘは、次の構造： 【アミノ酸配列があります】 を有するオクタペプチド残基〜ウンデカペプチド残基を
   表わし、そしてＹは水酸基又はアミノ基を表わす〕の抗
   原決定ペプチド。 ２、次の式： Ｈ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ
   −Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−ＯＨを有する特許
   請求の範囲第１項記載の抗原決定ペプチド。 ３、次の式： Ｈ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ
   −Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−
   ＮＨ＿２ を有する特許請求の範囲第１項記載の抗原決定ペプチド
   。 ４、次の一般式（ I ）： Ｈ−Ｖａｌ−Ｘ−Ｙ（ I ） 〔式中、Ｘは、次の構造： 【アミノ酸配列があります】 を有するオクタペプチド残基〜ウンデカペプチド残基を
   表わし、そしてＹは水酸基又はアミノ基を表わす〕の抗
   原決定ペプチドの製造方法であって、ポリスチレン型担
   体樹脂のクロロメチル又はベンズヒドリルアミン成分に
   前記配列のカルボキシ末端のアミノ酸残基を結合し、続
   いて、それぞれ保護されたアミノ酸及び通常の縮合剤を
   用いて、必要なペプチド鎖を連続的に合成し、得られた
   ペプチジル樹脂をアシドリンス分解し、形成されたペプ
   チドを生成し、そして脱保護し、そして最後にその生成
   物を精製することを含んで成る方法。 ５、次の式： Ｈ−Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｔｙｒ−Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ
   −Ａｒｇ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−ＯＨの抗原決定ペ
   プチドの製造を、前記担体樹脂のクロロメチル成分にＢ
   ｏｃ−保護のカルボキシ末端のＬｅｕ残基を結合し、続
   いて、Ｂｏｃ−Ｐｒｏ、Ｂｏｃ−Ａｓｎ、Ｂｏｃ−Ａｒ
   ｇ（Ｔｏｓ）、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ａ
   ｓｐ（ＯＢｚｌ）、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、Ｂｏｃ
   −Ｔｙｒ（Ｚ）（２回）及びＢｏｃ−Ｖａｌを連続的に
   縮合することによって必要なペプチド鎖を合成し、トリ
   フルオロメタンスルホン酸によりそのペプチジル樹脂を
   分解し、そして生成されたペプチド生成物を高性能液体
   クロマトグラフィーによって精製することにより行なう
   特許請求の範囲第３項記載の方法。 ６、次の式： Ｈ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｇｌｕ
   −Ａｒｇ−Ａｓｐ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−
   ＮＨ＿２ の抗原決定ペプチドの製造を、前記担体樹脂のベンズヒ
   ドリルアミン成分にＢｏｃ−保護のカルボキシ保護のＧ
   ｌｙ残基を結合し、続いて、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ、Ｂｏｃ−
   Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）、Ｂｏｃ−Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）、Ｂｏｃ
   −Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）、Ｂ
   ｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｇｌｙ、Ｂｏｃ−
   Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）、Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｂｏｃ）、Ｂｏｃ
   −Ｌｅｕ及びＢｏｃ−Ｖａｌを連続的に縮合することに
   よって必要なペプチド鎖を合成し、トリフルオロメタン
   スルホン酸によりそのペプチジル樹脂を分解し、そして
   生成されたペプチド生成物を高性能液体クロマトグラフ
   ィーによって精製することにより行なう特許請求の範囲
   第３項記載の方法。