JPS62123129A - 動物を治療するための組成物及び方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 煉−穴分野 本発明は獣医学の分野におけるインターロイキ／−２（
ＩＬ−２）の新しい用途に関するものである。より詳し
くは、本発明は動物におけるストレス−関連疾患全コン
トロールするに際し、或いはワクチンに対する動物の免
疫応答を高めるに際し、或いは動物における体重増加を
高めるに際し、ＩＬ−２’ｉ使用することに関するもの
である。

背景 ストレス−関連疾患 家畜食物動物、特にウシは過密状態、乳離れ、時には激
しい天候及び一般的には非自然的環境からのストレス金
倉む船積み及び飼養場条件により悪影響を受ける。通常
「船積熱」として知られている一つの症候群は又「ウシ
呼吸器疾患症候群」即ちＢＲＤＳとも呼ばれることがあ
る。それは一つの特別の病気というよりも病気徴候の複
合体であり、免疫抑制及び一種以上のウィルス或いは細
菌病原体による感染に罹りやすい性質により特徴付けら
れる。

その他の動物も又ストレスに対する悪い反応全示す。例
えば、ブタは通常ウシと同様には船積みされないが、乳
離れ或いは単に悪い天候に対して消極的な呼吸器の反応
全示し得る。ここでも又その徴候は実験モデルの役には
立食ない。家畜におけるストレス関連障害の一般的治療
法は見出され又いない。病気の動物は典型的Ｖこは抗生
物質で治療され℃いる。最近幾つかの企業が船積熱を治
療するためのインターフェロン調剤を提供し℃いる。

ワクチンアジ、バンド Ｍ場の家畜、スポーツ動物及び家内々ノドの病気金子防
するためにワクチンを使用することは通常行われている
ことであり、これをこれらの動物が曝されるエリ広範な
病気に敷・別する定めに相当な努力がなされてきており
、又現在なされている。例えば、動物における狂犬病ワ
クチンの使用は現在ではありふれたものであり、現在で
はその他の病気に対して動物を免疫化する念めの適当な
ワクチンを得る努力がなされている。

能動免疫の過程において、しばしば遭遇する一つの問題
はワクチンにおいて使用される抗原が引続く攻撃に対し
て保護を与えるのに十分なレベルに抗体力価を産生ずる
のに、或いはこれらのレベルを増すためのポテンシャル
を長期間維持するのに十分に免疫原的でないことである
。もう一つの問題はワクチンが細菌性及びウィルス性感
染に対して主たる免疫防御である細胞性免疫の誘発に十
分でないことである。その様な「弱い」動物ワクチンの
中で悪名が高いのは不活性化フェモフィルおける呼吸器
病に関連するものである）から構成されるものである。

より強い体液性及び／又は細胞性応答を得るためには、
普通ワクチンを患者のワクチンに対する免疫応答を高め
る物質であるア・ゾ、バンド（免疫強化剤）を含有する
配合物中に含ませて投与する。

ワクチンに最も普通に用いられるアジ−パントは曲調剤
及び明春である。この様なアジ−パントが機能する機ｍ
は理解され工おらず、又ある特別のアノ−バント調剤が
ある与えられた例において十分に有効であるかどうかは
予測できない。

動物の体重増加 食物用に育てられている動物における体重増加全促進す
るために広汎な努力がなされている。

対照動物の栄養のＩＭヲ増大するなどの安全且つ有効で
ある方法は又高価なものでもある。従っ℃、動物におい
てその通常の食物金より効率的に利用するように代謝的
変化を引起こすホルモンその他の物質を供給することに
よりこの直接的アプローチを短絡する試みがなされ℃い
る。一つの例はシチメンチョウ及びクシの体重を増大す
るジエチルスチルベステロール（ＤｇＳ　）の使用でめ
る。

ＤＥＳは体重増大を起こすのに極め工成功したものであ
ることが明らかであるが、肉或いはその他の動物から得
られ几商品に残存する残留物が消費者において問題全引
起こすに十分なものであるという深刻な欠点を有する。

従ってその様な添加剤の使用をコントロールするために
広汎な規制が制定されている。

もう一つの例は、無症状の感染及び病気を減少させ、そ
れによって動物の一般的健康及びその体重増加の傾向を
改良するために飼料中に抗生物質を使用することである
。その様な抗生物質の使用に伴う問題はそれらが動物中
に耐性のある生物体を発生させ、それが次いで食物連鎖
により消費者に移行することである。その様な耐性のあ
る生物体による感染症の抗生物質によるコントロールは
不可能である。

ヒトＩＬ−２（ｈＩＬ−２）の生物学的活性ｂＩＬ−２
の生物学的活性に関して、相当な背景情報が利用可能で
ある。ｈＩＬ−２はコンカナバリン−Ａ　（Ｃａｎ　Ａ
　）刺戟牌臓細胞の上澄液から或いは現在では組換え技
術を用いて得ることができ、インビトロにおいて幾つか
の測定可能な活性を有する。先ずそれはｈＩＬ−２が細
胞変性の或いはヘル・２−Ｔ−細胞系に添加された場合
にチミジン取込みＫより測定されるＴ−細胞成長因子で
ある。

それは成人胸腺細胞に関して細胞分裂促進性であり、細
胞変性ａｌ胞応答を刺戟する（例、リンホカイン−活性
化−キラー（ＬＡＫ）細胞）。又、それは無胸腺ネズミ
牌臓細胞培養液中におい℃ヘル／！−Ｔ−細胞金置換す
ることが示されｆＣ（Ｗａ　ｔｓｏｎＪ、２等、　Ｉｖ
ｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｒａｙ　（１９８０）　５１
　：２５７−２７８）。具体的には、ＩＬ−２及び抗原
の存在下において、抗体応答に寄与する能力を有する特
異的Ｔヘル・９−細胞が生成された。おそらく、これは
ｈＩＬ−２がこれらのヌードマウス桿臓培養物における
ヘル／４’　−Ｔ−細胞の抗原−依存性成熟に係わるた
めに起こるものと思われる。

Ｉ　Ｌ−２は又インビトロでＢ細胞に直接影響金及ぼす
ことが示されている。、？’＃Ｉ！！され活性化され＆
Ｂ細胞集団において、ＩＬ−２により増殖、並びにＩｇ
Ｍ及びＩｇＧ分必の両方が高められた（　Ｍｌｎｇａｒ
ｌ、　Ｍ、　Ｃ，等、　Ｎａｔｕｒｅ　（１９８４）　
３１２：６４１　；　Ｍｌｔｔｌｅｒ、　Ｒ，等、、　
Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　（１９８５）１３４：２３９
３−２３９９：Ｍｕｒａｇｕｃｈｌ、Ａ、等、Ｊ。

Ｅｘｐ、Ｍｅｄ、（１９８５）１６１　：１８１−１９
７３゜これらのインビトロの活性が免疫防御を増す念め
に如何にして特異的インビビ機構に移されるかは明らか
でない。しかしながら、その様なインビトロの研究に関
して各種ＩＬ−２類の種間の交差反応性が研究されてい
る。例えばレーデルマン等（Ｒｓｄｅ　１ｒｎａｎ　、
　Ｄ。等、　Ｊ、　ｒｒｎｍｕｎｏｌ、　Ｍｅｔｈ、（
１９８３）５６：３５９−３７０）はｈＩＬ　−２がウ
サギ及びマウスに由来する活性化Ｔ　ＩＪン・ゼ球をそ
れらが内生的形叩のＩＬ−２により支持されるのとほぼ
同程度に支持すること金示している。ルスケッチ等［Ｒ
ｕ５ｃｅｔｔｌ、　Ｆ、　Ｗ、等、Ｂｌｏｏｄ（１９８
１）５７：３７９−３９３１は初めて、ヒトで一細胞の
みならずその他の霊長類、ウマ、モルモット、ネコ、ラ
ット及びマウスからの末梢血液リンパ球或いは肺臓細胞
に対しても成長因子として挙動するｈＩＬ、−２の能力
を証明した。カーター等［Ｃａｒｔｅｒ、　Ｊ−等。

Ｆｓｄ、Ｐｒｏｃ、（１９８５）４４：１２９０　］は
、１ｔｌＬ−２のインビトロでのクシ細胞変性リンパ球
の発達及び維持を高めるｈＩＬ　−２の能力を開示して
いる。

Ｍｏｄ（１９８５）４：９６−１０９）はヒト及び動物
リンパ球上の生来のｈＩＬ−２及び組換え形のｈＩＬ−
２の活性を比較したインビトロのリン・−球増殖研究を
報告している。生来のＩＬ−２及び組換え体ＩＬ−２は
動物細胞につい又同一範囲の活性金示した。

幾らかのインビボのデータも又入手可能である。

インビボにおい”ＣＩＬ−２の活性は異種性赤血球に対
する応答においてヌードマウスにおいて免疫適格性全回
復することが示されている。Ｓ口ｔ　ｔａｒ、Ｈｌ等　
、　　Ｅｕｒ、　　Ｊ、　　Ｉｍｍｕｎｏｌ、（１９８
０）１０ニア１９−７２２　〕。種間交差反応性に対す
る情報も又ある。

リード等［Ｒｅｅｄ、　Ｓ、　Ｇ、等＋　Ｊ、　Ｉｍ、
ｒｒ＋ｕｎｏｌ。

（１９８４）１３３：３３３３’１３は寄生性原生動物
に感染し九マウスにおける牌臓細胞応答全再生（ｒｅｃ
ｏｎｓｔｉｔｕｔｅ　）するｈＩＬ−２の能力全開示し
、そし又ファラー等（Ｆａｒｒａｒ、　Ｊ、　Ｊ、等、
Ｉｍｍｕｎｏｌ。

Ｒｅｖ、（１９８２）６３：１５８）はｈＩＬ−２のイ
ンビピ注射がヌードマウスにおいて牌臓Ｔ−細胞全刺戟
すること金示し念。

要約すると、ｈＩＬ−２ｄ何等かの形でインビ〆で挙動
Ｌｉ特異的抗原に対する応答全含め℃好結果の免疫応答
を媒介し、又インビトロの研究はｈＩＬ−２の種間交差
反応性は極めて多様であることを示した（従来のインビ
ｄぐの種間研究はｈＩＬ−２に対してネズミのみ全対象
とするものでおった）。

しかしながら、インビボでのＩＬ−２活性の性質が完全
には理解されておらず、又免疫応答における工Ｌ−２の
関与の機構が理解され℃いないので、この時点において
特別の病気、その他の治療或いは予防方法或いは代謝に
及ぼすその影響を予測することは可能でない。従って、
ｈＩＬ−２が首尾良く家畜におけるストレス関連症候群
の発生全軽減するか、ワクチンの効率金高めるか或いは
動物における体重増加を高めるかについては、従来例の
示唆もない。

発明の開示 本発明の一面はストレスにより誘発される症候群に対し
て動物全保護するための、或いはワクチンに対する動物
の免疫応答金高めるための或いは動物における体重増加
を高めるための組成物であって２、ＩＬ−２ｔ−含んで
なる組成物である。

もう一つの面は、ストレスにより誘発される症候群に対
して勧物金護る念めの、或いはワクチンに対する動物の
免疫応答を高めるための或いは動物における体重増加を
高めるための方法であっ℃、動物に有効量のＩＬ−２を
投与することを特徴とする方法である。

ワクチンアジ、バンドとして使用される場合に、ｈＩＬ
−２は動物と同様にヒトに対しても有効である。従って
、本発明のもう一つの而はワクチンに対するヒトの免疫
応答全高めるための組成物であってｈＩＬ−２ｅ含んで
なる組成物である。方法で表わせば、本発明のこの側面
はワクチンに対するヒトの免疫応答を高める方法であっ
１、ヒ）にワクチン投与療法の一部としてり、ＩＬ−２
ｉ投与することを特徴とする方法である。

以１・余白。

発明の実施態様 Ａ、定義 この明細書において用いられる１−ｈＩＬ−２Ｊとはこ
蛋白質を特徴付ける活性のスペクトルを示すポリペプチ
ドを指す。具体的には、この蛋白質はギリヌ等（Ｇｉｌ
ｌｉｓ、　Ｓ、等、Ｊ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、（１９７８
）１２０：２０２７〜１５１９）及びワトソン（Ｗａｔ
ｓｔＯｎｌＪ、ＩＬ」≧ＬＸリュ（１９７９）１５０：
１５１０−１５１９）の標準的アッセイにおいて示され
ているようにｈＩＬ−２依存性細胞溶解性及びヘルパー
Ｔ細胞系の増殖を刺戟することができるものでなければ
ならない。生来のｈＩＬ−２のアミノ酸配列を第１図に
示す。

この−次アミノ酸配列は天然源から生来の蛋白質として
得られるか或いは組換え的に誘導される。

示された配列のアミノ酸の除去、追加、置換或いは変更
を含む活性の深刻な損傷を生じない一次配列のその他の
適度の修正も勿論この定義に包含される。例えば、位置
１２５におけるシスティンと中性のアミノ酸との置換は
より優れた安定性及び十分な反応性のミューティンをも
たらすことが確立されている（米国特許４，５１８，５
８４号明細書及び上記ドイル等参照〕。　４ 更に、ｈＩＬ−２は任意のその他の蛋白質と同様に中性
或いは塩形前にて存在してよく、そしてグリコジル化、
ホスホリル化、或いはアセチル化のごとき付随的非蛋白
質部分を含有してもよい。これらの変形も又、それによ
シ生物学的活性が破壊症候群」とは、動物が１以上の細
菌或いは病原体による感染に罹り、体重を失う或いは一
般的悪い健康状態を示す性向を有する免疫抑制の状態を
指す。

「船積熱」或いは「ウシ呼吸器病症候群」（ＢＲＤＳ）
は、ウシの飼養場への輸送及びそこでの維持に伴う抑う
つ、免疫抑制、体重喪失、呼吸器問題、ウィルス或いは
細菌感染及び一般的悪健康及び死を含む消極的総合的症
状と定義される。この病気は感染の経路或いは特別の代
謝パラメータの組を説明するモデルによるよりも反病的
に定義される。この病気に対する有効性の樟準は船積ス
トレス及び飼養場維持に伴う特別の条件に直面する健康
な動物の維持である。この病気の幾つかの・セラメータ
が認識されている。それは通常ストレスの２週間以内の
突然の発病により特徴付けられ、症候としては呼吸困難
、咳、目やに及び鼻汁、食欲不振及び迅速な体重減少、
熱、増大した肺音、及び一般的抑うつなどが挙げられる
。罹患した動物からは各種の細菌及びウィルス培養物が
単離されており、例えばバステウレラｓｐｐ　（Ｐａｇ
ｔ＠ｕｒｅｌｌａ」す〕、７エモフイルスｓｐｐ（Ｈａ
ｅｍｏｐｈｉｌｕｓ　５ｐｐ）、感染性ウシ鼻気官炎、
パラインフルエンザウィルス、及びウシ呼吸器シンシチ
ウムのウィルスなどが挙けられる。この病気は曝された
動物の４０〜５０％を典型的に罹患させそしてその結果
生ずる死は典型的には曝された数の２〜５チである。

ここにおいて用いられる「アジェバンド」という用語は
その通常の意味、即ち特定の抗原に対する免疫応答を高
める能力、を有する。その様な能力は免疫−媒介保護の
有意な増強により示される。

体液の免疫の上昇は、抗原に対して童生される抗体の力
価の相当な増大（通常〉１０チ〕により典型的に示され
る。

一般的方法 本発明の配合物は最も便利には筋肉内注射或いは徐放性
組成物として投与されるが、しかし、その他の投与方法
も可能である。消化の際に加水分解を防止する特別の配
合物が経口配合物のためには必要とされるであろうし、
及び静脈内注射は一般的に投与に際して必要とされる熟
練のレベル及び注意により一般的に非経済的である。従
って、筋肉内注射、特に徐放性放出配合物に適した配合
が好ましい。

標準的な配合は液体注射液、或いは注射のために適当な
液体中に分散液又は溶液として調合することのできる固
体のいづれかである。適当な賦形剤は例えば水、塩水、
デキストローヌ、グリセロール、及びエタノールである
。非毒性補助物質、例えば、湿潤剤、緩衝剤或いは乳化
剤も又添加されてもよい。一つの特別の有用な配合は有
効量の洗剤、例えばドデシル硫酸ナト’Ｊウム（ＳＤＳ
）を含有し、可溶化及び静菌作用を行う。

長期間の安定性及び遅い放出を行うために各種技術が公
知である。例えばｈＩＬ−２の安定性及び半減期はそれ
をポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの親水性重合
体に力、グリンダさせることによシ高められる。この［
ＰＥＧ化ＪｈＩＬ−２と呼ばれるＰＥＧ−ｈＩＬ−２複
合体はｈＩＬ−２の単一徐放性投与物を投与するのに特
に有用である。

徐放性及び連続放出性配合物は当業者に理解される如く
、かなり各種のものがある。徐放性非経口投与用の組成
物の一例は単一注射で組換え体ｈＩＬ−２又はｈＩＬ−
２の可溶形態例えばＰＥＧ化ｈＩＬ−２を約１０〜１０
単位／に９／日（純粋ｈＩＬ−２は約３−６Ｘ１０　　
μ／〜の比活性を有する）の制御された割合で放出する
注射可能なマイクロカプセル配合物である。このマイク
ロカプセル配合物は、通常の皮下注射用針で筋肉内或い
は皮下に注射することのできる２０〜１００μｍ直径の
球状粒子よりなるさらさらした粉末であり、これらのマ
イクロカプセルは生体分解性、生体適合性ボリエヌテル
であるポリ（ＤＬ−ラクチドーコーグリコリド）　（Ｄ
Ｌ−ＰＬＯ）　Ｋ膨剤中にカブセル化された０、５〜５
％のｈＩＬ−２より構成される。その他の徐放性配合物
も又使用可能である。

ワクチンアジュバントとして使用される場合には、ｈＩ
Ｌ−２は通常ワクチンとは別に投与されるが、場合によ
って、特に徐放性或いは連続放出形態においては、ワク
チンと組合わされて投与されてもよい。ｈＩＬ−２がワ
クチンと組合わされる場合には、投与される組成物は、
ある与えられた病原体又は抗原に対して特異的応答を引
出すのに有効である免疫原、薬学的に許容可能なワクチ
ン担体及び免疫強化量のｈＩＬ−２を含有する。好まし
い方法はワクチン投与後５〜３０日間、好ましくは５〜
１４日間約１０３〜約１０６単位／に９／日のレベルで
ｈＩＬ−２を連続的に投与することである。

「連続的」という用語は、徐放性投与形■により達成さ
れるような真の連続的投与及び真の連続投与により達成
されるそれに類似した薬動力学的・臂ターンを与えるｈ
ＩＬ−２の複数回の間欠的投与（又はＰＥＧ化ｈＩＬ−
２のような延長された半減期形態のｈＩＬ−２）などを
示すものである。毎日の筋肉的注射を用いてこハまでに
得られたデータは、好ましい投与量が１０〜１０単位／
ユ／日であることを示している。ワクチンは通常製造者
の使用説明書に従って投与でれる。その他のアノユバン
トはワクチン又はｈＩＬ−２のいづれかと共に投与され
る。

ｈＩＬ−２は典型的には「弱い」（即ち、レベル、範囲
及び／又は持続時間において減少した保護を与える〕と
考えられる動物又はヒトワクチンにより与えられる保護
を高めるために用いられる。その様なワクチンの具体例
はボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔａｌｌｍ）細菌ワクチン、
エラセリシア・コ’）　（Ｅｓｃｈｅｒｉｅｈｉａｃｏ
ｌｔ）細菌ワクチン、ヘモフィルス（ＨａｅｍｏｐｈＨ
ｕｓ）細菌ワクチン、レプトスビロシヌ（Ｌｅｐｔｏａ
ｐｉｒｏｓｌｓ）ワクチン、モ２キセラーｙ４ｒビス（
Ｍｏｒａｘｅｌｌａ　ｂｏｖｉｓ）細菌ワクチン、ノ４
ステウレラ（Ｐａｓｔｅｕｒａｌｌａ）細菌ワクチン及
びビブリオφ７エタス（Ｖｉｂｒｊｏ　ｆｅｔｕｓ）細
菌ワクチンなどの細菌ワクチン類及びウシ呼吸器病ワク
チン（感染性ウシ鼻気管炎、・セラインフルエンザ、呼
吸器シンシチウムウイルス）、ウシウィルス下痢ワクチ
ン、ウマインフルエンザワクチン、ネコ白血病ワクチン
、ネコ呼吸器病ワクチン（鼻気管炎−カリキー肺炎ウィ
ルス）、イヌ・４゛ルボウイルスワクチン、伝播性胃腸
炎ワクチン及び仮性狂犬病ワクチンなどの弱毒化された
生きた或いは死滅ウィルス生成物などが挙けられる。

船積熱に対して動物を保護するためのｈＩＬ−２の投与
方法は船積み及び飼養場の条件に応じて異る。投与は連
続的であり、船積みの前又は少なくとも飼養場に到着時
点においてセｊ始され、例えば１４〜３０日以上の期間
に亘って継続されるのが好ましい。ここでも又「連続的
」という用語は徐放性投与形態により達成されるようｉ
真の連続投与、並びに真の連続投与によって達成される
それに類似する薬動力学パターンを与える複数の断続的
ｈＩＬ−２の投与（又はＰＥＧ化ｈＩＬ−２などの高め
られた半減期形態のｈＩＬ−２）を意味するものである
。約１０〜約１０　単位／に９７日、好ましくは約１０
４〜１０５単位／に９／日の毎日の投与量が一般的に用
いられる。ウシにおいては、約１０単位／に９７日を越
える投与量は望ましくない副作用を起こし始めた。

その他の家畜のストレスにより誘発された障害症候群又
は呼吸器障害症候群に対しては投与方法及び量は動物の
種類及び大きさく例えばブタ、ヤギ、ヒツジなど）及び
症状の重さに応じて異る。

しかしながら、その様な症候群に対する有効な投与量は
船積熱に対して用いられたそれと同一範囲であろう（単
位重量基準で）。

ｈＩＬ−２はそれ自体として、又はストレス関連疾患に
対して保護するために用いられるワクチンの補給剤とし
て投与される。

体重増加を高めるために用いられる場合には、ＩＬ−２
は典型的には長期間（例えば動物の飼育スケジュールを
通して）投与される。この用途に対するＩＬ−２の投与
量は通常１０３〜１０５単位／に１１／日である。

Ｃ０実施例 以下の実施例は本発明を更に支持或いは例示することを
意図するものであり、本発明を限定す、るものではない
。

Ｃ，１，ｉｎ　Ｖｉｔｒｏ活性　　。

ウシ及びブタ末梢血液単核細胞（Ｐ　ＢＭＣ）について
のイヒビトロ活性は組換え体ｈＩＬ−２に対して示され
ている（Ｆｏｎｇ、　５ｕｓａｎ等、Ｖｅ　ｔ　、　Ｉ
ｍｍｕｎｏｌμ蓮」二児駐Ｖ±■しく１９８６）１１：
９１−１００３゜この研究において用いられたｈＩＬ−
２はｄｅｓ−ａｌａｎｙｌ！−ｒｌＬ−２と命名され、
最初のアラ二ａ＠ｒ１２５ ンを欠きそして位置１２５においてシスティンの代シに
セリンを有するものである。それは活性化されていない
ウシ及びブタＰＢＭＣに対して細胞分裂誘発性であｐ１
両方の種からのＣｏｎＡ−活性化ＰＢＭＣの長期間成長
を維持する能力があることが示された。第２Ａ図及び第
２Ｂ図はＣｏｎＡ−活性化ウシ（２人）及びブタ（２Ｂ
）ＰＢＭＣのｄｅｎ−ａｌａｎｙｌ−ｒＩＬ−２８ｅｒ
１２５に対する投与量一応答を示す曲線である。又、ｄ
ａｓ−ａｌａｎｙｌ−ｒＩＬ−２で１〜５ｅｒ１２５ 日間グリインキエペートされたクシ及びブタＰＢＭＣは
庸瘍細胞標的に対して高められた細胞毒性を示した。

更に、スト、）　（ｓｔｏｔｔ、、ｒ、Ｌ、）等はウシ
及びブタ末梢血液リンパ球がリンパ球幼若化アッセイに
おいてヒト組換え体ＩＬ−２応答性であることを示した
。幼若化は４日リン・臂球培養物において５Ｈ−チミジ
ン（１８時間パルス）の取り込みによシ求められ、結果
を毎分の崩壊数（ＤＰＭ）／培養物の幾何学的平均（Ｇ
Ｘンの蹟、。とじて表わし、第３図に示すような非線形
回帰解析によりプロットした。マイトジェンの稀釈率及
び単位数で表わしたｈＩＬ−２の濃度をＸ軸上に示す。

これらの結果は、ウシ及びブタ細胞上のｈＩＬ−２の効
果が幼若化を刺戟することが知られている植物レクチン
類ＰＨＡ及びＣｏｎ　Ａにより示されるものに匹敵する
ものであることを示している。

Ｃ０２，細胞性免疫の相剰 呼吸器疾患は主として細胞（Ｔ−細胞〕免疫系によりコ
ントロールされるので、ｈＩＬ−２の家畜における細胞
免疫応答を高める能力はこれらの症状に対するその有効
性を示すものである。組換え体ｈ　Ｉ　Ｌ−２のインビ
デ注射は仔ウシの血液中に上昇したレベルのリンパ球の
幼若化をもたらした。

具体的には、８匹の１３５〜２２５に９の体重（３〜５
月令）のウシをランダムに各２匹の４群に分け、それら
は１ケ月間次のように毎週注射を受けた。即ち、群工、
２及び３はそれぞれ筋肉内に１０．１０　及び１０単位
／ｋｌ？を受取り、群４は賦形剤のみを受取った。これ
らの動物についてリンパ球刺戟を評価した。結果は、休
止リンＡ？球活性は１０及び１０　　単位／ゆのみを受
取る仔ウシにおいてその期間に亘り、各接種に先立って
行われた幼若化アッセイにより求めた場合、組換え体ｈ
ＩＬ−２治療によシ高められたことを示した。

１０５単位／ゆを受取る仔ウシについては、リン・９球
活性は最後のＩＬ−２投与後２週間以内に正常に戻った
のに対し、１０単位／ゆ注射された仔ウシはその時点に
おいても高められた抗体を保った。

Ｃ１３，船積熱の治療 ２００頭の未経産雌ウシをテネシー州の幾つかの異った
供給源から購入し、コロラド州の研究飼養場に輸送した
。この動物の平均体重は約１８０ゆであった。これらの
動物をランダムに（体重及び品種〕四つの群に分離し、
１〜■と命名した。

組換え体ｈＩＬ−２（ｄｅｌＩ−ａｌａｎｙｌ−ｒＩＬ
−２）５ｒ１２５ を０．０５％ＳＤＳ中に配合し、動物が飼養場に入った
後筋肉内に投与した。全ての動物は毎日、週に５回、２
週間に亘って治療を受けた。四つの群に対する投与量処
決は下記の通シであった。

群　　　　　　ＩＬ−２投与（ｕＡｙ／日）１　　　　
　　　２Ｘ１０　（高投与量つＩＩ　　　　　　　　２
Ｘ１０　（中投与量〕■・　　　　　　　２Ｘ１０　（
低投与量〕■　　　　　　対照例（稀釈剤） これらの動物は標準的ＢＲＤＳ−関連ワクチン投与を受
けなかつた。それらは偶然に飼養場における初めの何日
か激しい雪及び寒い気候に曝されたので、従って早期に
サイレージ飼料が与えられた。

動物の健康は実験治療を知らされていない人により毎日
観察された。動物の体重は規則的間隔で測定された。表
１は２１日目の治療の結果を示す。

表　１ 死亡率 対照例　　　　　　２１１５０ 低投与量　　　　　２０１５０　　ｐ＝０．８３９中投
与量　　　　　２６１５０　　ｐ＝０．３１６病気の発
生 病気或いは死亡数／総数 対照例　　　　　　４３１５０ 低投与量　　　　　４２１５０　ｐ＝０．７７９中投与
量　　　　　４３１５０　ｐ＝１．０００以下余白 病気の重症度 対照例　　　　　　１．７６ 低投与量　　　　１．７９　　　　　　ｐ＝Ｑ、９５０
中投与量　　　　１．９３　　　　　　ｐ割、３９５研
究中の罹病率及び死亡率は予想以上に高いものであった
。上記の如くあるグループは８５％の罹病率及び５０％
の死亡率を示した。病気は研究に入って２日目の時点に
おいて既に見られた。この研究において見られたＢＲＤ
Ｓの著しい重症度は幾つかの要因によるであろう。即ち
、激しい雪及び寒い気候、動物が軽量（平均４００ポン
トンで且つ皮の薄いもの（テネシー産）であったこと、
各群が幾つかの供給源からの寄せ集めであったこと（即
ち、それらは新鮮ではなく、多くのものはコロラドに船
積される前に幾つかの取引小屋を経験したものであった
こと〕、動物が早期にサイレージ飼料を与えられ、十分
に食べられなかったことなどが挙げられる。

動物の健康を観察する人の臨床判断においては高投与量
ＩＬ−２の群が終始「より良く見えた」ということであ
る。これは表１のデータにおいて高投与量ＩＬ−２群が
終始減少した死亡率、病気の減少した発生率及び病気の
低下した重症度への傾向を示すことによシ支持されてい
る。

全ての場合において、高投与量群は対照群よりも行動が
良好であった。これらの差異の統計学的有意性（ｐ−値
）はぎりぎりであるが（１）＜０．０５の厳密な定義を
用いればつ、全ての結果は首尾一貫している。

表１に示されなかった追加の目安も又高投与量ＩＬ−２
群における有効性への傾向を支持した。

例えば、死亡した高投与量群の動物は対照動物よりも研
究中のかなυ後で死亡したものであった。

２１日目の時点においては、生存動物の平均体重に差異
がなかった。しかしながら、高投与量群においてはより
多くの動物が生存したので群当りの総重量においては相
当な相違があった。

Ｃ０４，ブタワクチンにおけるアジュバントとしての有
効性 組換え体ｈＩＬ−２は、各２匹づつ６群に分けられた１
２匹の肥育用ブタを用いて、不活性化Ｈｐｐ細菌ワクチ
ンの効率を高めることが示された。群１はｈＩＬ−２ア
ジュバント対照例であり、群２は細菌ワクチン対照例で
あり、群３は０日目及び２１１日目単一注射として、１
０　単位のｈｒＬ−２Ａｇを受け、群４は各々各ワクチ
ン投与に引続き、５回の毎日の１０５単位／ゆの注射を
受け、群５は０日目及び２１１日目１０単位／ｋｇの１
回の注射を受け、そして群６は各ワクチン投与に引続き
各々１０５単位／ゆの５回の毎日の注射を受けた。

群２〜６のブタは０日及び２１１日目おいて、首の筋肉
内に油アジュバントに乳化されたホルマリン−不活性化
ＨｐＰを投与された。全ての群のツタは４１１日目鼻腔
内にセロタイ７’１Ｈｐｐのチャレンジを受け、７１１
日目殺され剖検された。肺病巣に特に注目して冒された
肺面積を視覚によシ求めた。ブタは７１日の間定期的に
体重が測定された。体重の増加は一般的健康状態の指標
である。

結果は下記の通シであった。

１　　２５７％　　　　　０．６９　　　０．３０２６
．１００チ　０．６９中 ３　　２５．５８％　　　　　０．６２　　　０．２７
４　　１２．１２％　　　　　０．５５　　　０．８６
５　　１３．１９チ　　　　　０．６２　　　０．３９
６　　０．０　％　　　　　０．５８　　　０．８８＊
ブタはチャレンジの後５日目に死亡 これらの結果に示される如く、毎日ワクチン投与後にｈ
ＩＬ−２を受けた群（群４及び６〕はその他の治療を行
われた群に比べてチャレンジ後に実質的により高い体重
増加を示した。これらの結果は又群４及び６における肺
の病態の相当な減少を示し、ワクチン投与療法における
毎日のｈＩＬ−２の投与により提供される攻撃に対する
増大した保護を示している。全ての動物は攻撃後に）Ｉ
ｐｐに対する高い抗体力価を示した。

ｈＩＬ−２（ｄｓｓ−ａｌａｎｙｌ−ｒＩＬ−２，、，
１２５）のＨｐＰワクチン投与へのアジュバントとして
作用する能力を確認するために第二の研究を行った。こ
の第二の研究の処決は上記第一の研究のそれと同様であ
った。即ち、動物にｈＩＬ−２治療と共に又はなしにワ
クチン投与し、引続き有毒なＩ（ｐｐでチャレンジした
。有効性の主な目安は感染に引続く臨床的徴候、感染に
引続く体重増加及び剖検における肺の冒された程度であ
った。この第二の研究の結果を下表に示す。

対照例（２）　　　　　３４　　　　０．３７　　　０
．３１）ｆｐｐ単独（３）　　　　　１９　　　　　０
．３４　　　　０．６２第二の研究からのデータは第一
の研究における１０５ｕ　／ＩＪ／日ｈＩＬ−２におい
て観察された有効性を確認するものでアシ、これらの知
見を１０　　ｕ／に９／日の投与量にも及ばずものであ
る。１０　　ｕ／ｋｌｌ／日のＩＬ−２投与量における
保護はより高い投与量において観察されたものに匹敵す
るものであった。

Ｃ１５，イヌにおけるアジュバントとしての有効性イヌ
に最初のｈＩＬ−２治療及び７日後の５日間の（毎日の
）ｈＩＬ−２治療のスタートの時点においてカサガイ（
ｋｅｙｈｏｌｅ　ｌｌｍｐａｔ）ヘモシアニン（ＫＬＩ
（）を注射した。エンデイムーリンクドイムノアプンー
ペントア、セイ（ＥＬＩＳＡ）　　をイヌから・取出し
た血清について行い、ＫＬＨに対する抗体応答を測定し
た。ＩＬ−２治療イヌにおいてはＫＬＨに対するＩｇＧ
抗体の相当な投与量依存性増大がみられた。この増大は
用いられ九ＫＬＨ免疫原に対して特異的であった。

Ｃ３６９体重増加における有効性 通常の環境で育てられた若いブタの体重増加に及はす各
種投与量及びスケジー−ルにおける組換え体ｈＩＬ−２
投与の効果を以下の試験により示す。

４８匹の１５〜２０ｋｇの正常な健康状態にある離乳し
たブタを各々６匹の８個の群に分けた。

ｈｒＬ−２又は対照組成物をブタの筋肉内に下記の如く
投与した。

８　　塩水対照例　　毎週１回　４週間以下余白 時間０及び６〜８週間を通して毎週の個々の重量を測定
した。飼料消費及び病気の臨床的印象も又記録された。

ｈＩＬ−２を受取る動物は対照群の動物に比べて相当に
より大きな体重増加を有し、一般的により健康である。

【図面の簡単な説明】

第１図はｈＩＬ−２のアミノ酸配列を示す。 第２Ａ図及び２Ｂ図は、実施例のＣ，１，節において説
明された９７７４球増殖試験の結果を示す投与量一応答
油体である。 第３図はウシ及びブタＴ−リン・９球の幼若化に及ぼす
ｈｒＬ−２の効果を示す。 以下余白 図面の浄ｉＦ（内容に変更なし） ＩＬ−２（エニー／ト／ＭＬ） ＦＩＧ、　２Ａ ＩＬ−２、２５（ユニット／ＭＬ） ＦＩＧ、　２Ｂ １０−３　　　ｌ□−４ｔｏ−’　　　　　ｔｏｏ　マ
イトジｚ７濃Ｖ／培養吻 ＦＩＧ、　３

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、動物をストレスにより誘発される症候群に対して保
   護するための、或いはワクチンに対する動物の免疫応答
   を高めるための或いは動物における体重増加を高めるた
   めの組成物であって、ＩＬ−２を含んでなることを特徴
   とする組成物。 ２、ＩＬ−２がｈＩＬ−２である特許請求の範囲第１項
   記載の組成物。 ３、ｈＩＬ−２がｈＩＬ−２の水溶性形態である特許許
   請求の範囲第２項記載の組成物。 ４、ｈＩＬ−２がＰＥＧ化ｈＩＬ−２である特許請求の
   範囲第３項記載の組成物。 ５、ｈＩＬ−２がｄｅｓ−ａｌａｎｙｌ−ｒＩＬ−２＿
   ｓ＿ｅ＿ｒ＿１＿２＿５である特許請求の範囲第２項、
   第３項又は第４項記載の組成物。 ６、ＩＬ−２が連続放出性配合物の形態である特許請求
   の範囲第１項、第２項、第３項、第４項又は第５項記載
   の組成物。 ７、ＩＬ−２が単一徐放性配合物の形態である特許請求
   の範囲第１項、第２項、第３項、第４項又は第５項記載
   の組成物。 ８、動物をストレスにより誘発される症候群に対して保
   護するための、或いはワクチンに対する動物の免疫応答
   を高めるための或いは動物における体重増加を高めるた
   めの方法であって、有効量のＩＬ−２を動物に投与する
   ことを特徴とする方法。 ９、ＩＬ−２がｈＩＬ−２である特許請求の範囲第８項
   記載の方法。 １０、ｈＩＬ−２がｈＩＬ−２の水溶性形態である特許
   請求の範囲第９項記載の方法。 １１、ｈＩＬ−２がＰＥＧ化ｈＩＬ−２である特許請求
   の範囲第１０項記載の方法。 １２、ｈＩＬ−２がｄｅｓ−ａｌａｎｙｌ−ｒＩＬ−２
   ＿ｓ＿ｅ＿ｒ＿１＿２＿５である特許請求の範囲第９項
   、第１０項又は第１１項記載の方法。 １３、ＩＬ−２が連続放出性配合物の形態である特許請
   求の範囲第８項、第９項、第１０項、第１１項又は第１
   ２項記載の方法。 １４、ＩＬ−２が単一徐放性配合物の形態である特許請
   求の範囲第８項、第９項、第１０項、第１１項又は第１
   ２項記載の方法。 １５、ＩＬ−２が１０＾３〜１０＾６単位／ｋｇ／日の
   割合で連続的に投与される特許請求の範囲第１３項記載
   の方法。 １６、ｈＩＬ−２を含んでなる、ワクチンに対するヒト
   の免疫応答を高めるための組成物。 １７、ｈＩＬ−２がｈＩＬ−２の水溶性形態である特許
   請求の範囲第１６項記載の組成物。 １８、ｈＩＬ−２がＰＥＧ化ｈＩＬ−２である特許請求
   の範囲第１７項記載の組成物。 １９、ｈＩＬ−２がｄｅｓ−ａｌａｎｙｌ−ｒＩＬ−２
   ＿ｓ＿ｅ＿ｒ＿１＿２＿５である特許請求の範囲第１６
   項、第１７項、又は第１８項記載の組成物。 ２０、ＩＬ−２が連続放出性配合物の形態である特許請
   求の範囲第１６項、第１７項、第１８項又は第１９項記
   載の組成物。 ２１、ＩＬ−２が単一徐放性配合物の形態である特許請
   求の範囲第１６項、第１７項、第１８項又は第１９項記
   載の組成物。 ２２、ワクチンに対するヒトの免疫応答を高める方法で
   あって、ｈＩＬ−２をヒトにワクチン予防接種療法の一
   部として投与することを特徴とする方法。 ２３、ｈＩＬ−２がｈＩＬ−２の水溶性形態である特許
   請求の範囲第２２項記載の方法。 ２４、ｈＩＬ−２がＰＥＧ化ｈＩＬ−２である特許請求
   の範囲第２３項記載の方法。 ２５、ｈＩＬ−２がｄｅｓ−ａｌａｎｙｌ−ｒＩＬ−２
   ＿ｓ＿ｅ＿ｒ＿１＿２＿５である特許請求の範囲第２２
   項、第２３項又は第２４項記載の方法。 ２６、ＩＬ−２が連続放出性配合物の形態である特許請
   求の範囲第２２項、第２３項、第２４項又は第２５項記
   載の方法。 ２７、ＩＬ−２が単一徐放性配合物の形態である特許請
   求の範囲第２２項、第２３項、第２４項又は第２５項記
   載の方法。