JPS6215529B2

JPS6215529B2 -

Info

Publication number: JPS6215529B2
Application number: JP16007678A
Authority: JP
Inventors: Hamao Umezawa; Takaaki Aoyanagi; Taiji Sekizawa; Masahiro Ueda; Kenji Kawamura; Yasukatsu Yuda
Original assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Current assignee: Meiji Seika Kaisha Ltd
Priority date: 1978-12-27
Filing date: 1978-12-27
Publication date: 1987-04-08
Also published as: JPS5587720A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、特定の微生物を培養して得られるエ
ステラスチンから化学的に誘導されるテトラヒド
ロエステラスチンを有効成分とする新規な抗炎症
剤に関するものである。エステラスチンは、放線菌培養液中より梅沢等
が単離、採取した物質であり（特開昭53−98901
号）、エステラーゼの阻害活性を有し、マウスに
対する毒性試験では250mg／Kg（i.p.）の投与で
全く毒性が認められない。エステラスチンの化学
構造は次式の通りであると認められた。更にエステラスチンを接触還元反応で処理し
て、エステラスチンと同様に抗エステラーゼ活性
を有し、かつエステラスチンよりもその阻止酵素
群が拡大された新規かつ有用なる新規抗エステラ
ーゼ活性物質テトラヒドロエステラスチンが得ら
れる。（特願昭53−61725号すなわち特公昭61−
45620号公報参照）。このテトラヒドロエステラス
チンの化学構造は次式の通りであると認められた。エステラスチンは例えば微生物化学研究所構内
の土壌試料から分離されたストレプトミセス・ラ
ベンドレーMD4−C1株（微工研菌寄第3723号）
を培養して得られる培養物中より単離された抗エ
ステラーゼ活性を有する物質である。エステラスチン及びテトラヒドロエステラスチ
ンは液性抗体産生細胞を減少せしめ、又細胞性免
疫に対しても抑制作用があり、免疫反応によつて
誘起される多くの難病即ち関節炎、リチウム、多
発性硬化性症等の治療薬として有用であるが、本
発明者らはエステラスチン及びテトラヒドロエス
テラスチンのもつ薬理作用についてさらに検討を
加え、これら化合物が強い抗炎症作用を有するこ
とを実験的に確認した。本発明はテトラヒドロエステラスチン並びにこ
れの酸付加塩の少なくとも１つを有効成分として
含有する抗炎症剤を要旨とするものである。本発明の抗炎症剤で有効成分として使用される
テトラヒドロエステラスチンには、その薬理上許
容し得る塩、等も含まれる。その塩の代表として
はそのアミノ基における酸付加塩、例えば塩酸
塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、トリクロロ酢
酸塩等が挙げられる。以下これらを本有効成分物質と総称する。本発明の抗炎症剤は適当なる投与方法で使用さ
れ、注射剤の場合は、本有効成分物質にPH調整
剤、緩衝剤、安定化剤、賦形剤などを添加しても
よく、さらに常法によつて凍結乾燥を行ない、凍
結乾燥注射剤を作ることができ、また本有効成分
物質にPH調整剤、緩衝剤、安定化剤、等張剤、局
麻剤等を添加し、常法により溶液又は懸濁液の形
の皮下、筋肉内、静脈内用注射剤とする。固型製剤を調製する場合は、本有効成分物質に
通常の賦形剤、安定化剤、必要によつて結合剤、
崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味剤、矯臭剤などを
加え常法により錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤
及び外用塗布軟こう剤等にすることができる。本有効成分物質の投与量は投与方法、症状によ
つて変動するが、通常は成人に対する１回投与量
としてテトラヒドロエステラスチン0.5mg／Kg〜
200mg／Kgが適当であり１日３回或は症状によつ
て１日３回以上投与する。テトラヒドロエステラスチンの製造について、
エステラスチンをメタノールに溶かし、公知の水
素添加触媒、例えば酸化白金、パラジウム等の触
媒を加え、水素気流中あるいは、パールの還元装
置により、２時間から一夜還元を行なう。触媒を
過して除去し、液を濃縮すると、テトラヒド
ロエステラスチンが得られる。又、必要に応じて更にシリカゲルカラムクロマ
トグラフイーで精製することができる。溶出溶剤
は酢酸エチル、クロロホルムなどの混合溶剤を用
い、特に１：１の混合比のものが最適である。テトラヒドロエステラスチンは白色粉末として
得られ、次の物理化学的性状を有している。即ち融点102.5〜104℃、質量分析法で測定して
得られる分子量510、元素分析値：C65.84％、
H9.71％、N4.93％、O18.12％でありC₂₈H₅₀N₂O₆
の分子式を有する。赤外部吸収スペクトル（臭化
カリウム錠）で3320、2920、1830、1720、1650、
1610、1545、1185、1120、885、720に特異吸収帯
を有し、かつ核磁気共鳴吸収スペクトル（重クロ
ロホルム溶液、δppm）で3.2（２位CH）、4.34
（３位CH）、〜2.1（４位CH₂）、5.02（５位CH）、
1.26（６〜15位CH₂、2′〜5′位CH₂）、0.88（16位
CH₃、6′位CH₃）、〜1.76（1′位CH₂）、4.72（2″位
CH）、2.76及び2.98（3″位CH₂）、6.78（2″位
NH）、2.03（2″位CDCH₃）、5.44及び5.80（3″位
CONH₂）に吸収を示す。次にテトラヒドロエステラスチンの抗炎症作用
を示す試験例について説明する。なお、試験例における浮腫強度及び抑制強度の
測定は、起炎１、３、５および６時間後に足蹠の
容積を藤平らの装置により測定し、下記の式によ
り浮腫強度を算出後、0.5％のアラビアゴム溶液
投与群の浮腫強度に対する抑制率を算出して行わ
れた（以下の試験例でも同様である）。浮腫強度（％）＝Ｂ−Ａ／Ａ×100 Ａ：起炎剤注入前の足蹠容積Ｂ：起炎剤注入後の足蹠容積抑制率（％）＝Ｉｃ−Ｉｔ／Ｉｃ×100 Ic：溶媒投与群の浮腫強度 It：薬物投与群の浮腫強度試験例１体重130±５ｇのWistar系雄性ラツトを１群６
匹として使用。0.5％アラビアゴム溶液に懸濁さ
れた試料テトラヒドロエステラスチン（以下の試
験例でも同様な懸濁液として用いた）は0.5mlの
メチルアルコールを加えて溶解後、表面活性剤
Tween80を１滴入れ、さらに0.5％アラビアゴム
溶液を加えて懸濁液とした。テトラヒドロエステラスチンを50及び100mg／
Kg宛、経口投与し、その１時間後に１％カラゲニ
ン生理食塩液をラツトの右側足蹠皮下に0.05ml注
入し起炎した。起炎２、３、５及び６時間後に足蹠の容積を測
定し、浮腫強度を算出後、0.5％アラビアゴム溶
液投与群の浮腫強度に対する抑制率を算出して、
テトラヒドロエステラスチンのカラゲニン足浮腫
に対する作用を算定した（表１）。その結果、テ
トラヒドロエステラスチン50及び100mg／Kgの経
口投与で著明な浮腫抑制を示すことが判つた。

【表】試験例２体重170±10ｇのWistar系雄性ラツトを１群５
匹として用いた。テトラヒドロエステラスチンを
10、50 び100mg／Kg宛、経口投与し、その１時
間後に８％ウサギ抗ラツト血清をラツトの右側足
蹠皮下に0.05ml注入し起炎した。起炎１、３、５及び６時間後に足蹠の容積を測
定し浮腫強度を算出後、0.5％アラビアゴム溶液
投与群の浮腫強度に対する抑制率を算出して、テ
トラヒドロエステラスチンの抗血清によるアレル
ギー性足浮腫に対する作用を調べた（表２）。表から判る通り、テトラヒドロエステラスチン
10、50及び100mg／Kgの経口投与で緩和ではある
がアレルギー性浮腫を抑制する。

【表】以下にエステラスチンとテトラヒドロエステラ
スチンの製造例を示す。参考例１グリセリン1.5％、綿実粉（フアルマメデイ
ア）1.5％、食塩0.3％、Ｌ−アスパラギン0.2％、
消泡剤（アデカノール）0.005％からなる培地300
を570のステンレス製タンクに仕込み、120
℃、20分滅菌後、ストレプトミセスMD4−C1株
（微工研菌寄第3723号）の種培養液（通気撹拌培
養２日）30を植菌し、撹拌は毎分200回転、通
気量は毎分300で、27℃、48時間培養を行つ
た。この培養液を過して菌体を含む固型物34.2
Kgを得た。この固型物をエタノール100で２回
抽出し、抽出液を減圧下に６迄濃縮した。これ
を酢酸ブチル６で２回抽出し、抽出液を減圧下
に濃縮して128.2ｇのエステラスチン粗粉末を得
た（ID₅₀＝0.08mcg／ml）。得られた粗粉末は次の方法によつて、精製し
た。すなわち、粗粉末128.2ｇをクロロホルム500
mlに溶解し、シリカゲル（ワコーゲルＣ−100）
1.5Kgを充填した塔に通してエステラスチンを吸
着させた。次いで塔をクロロホルム10、クロロ
ホルム−メタノール（100：１）10で洗浄後、
クロロホルム−メタノール（80：１）で溶出し
た。活性分画2500mlを減圧下に濃縮乾固すると
4.83ｇの褐色粗粉末が得られた（ID₅₀＝
0.002mcg／ml）。次いでこの粗粉末をメタノール
20mlに溶解し、メタノールで膨潤させたセフアデ
ツクスLH−20、２の塔に通し、４のメタノ
ールで展開溶出した。活性分画を減圧下に濃縮乾
固することにより656mgの淡黄色の粉末が得られ
た（ID₅₀＝0.0004mcg／ml）。この粉末を酢酸エ
チル５mlに溶解し、シリカゲル（ワコーゲルＣ−
300）250ｇの塔に通してエステラスチンを吸着さ
せた。更に塔を酢酸エチルで展開し、活性分画
1000mlを減圧下に濃縮乾固して白色粉末のエステ
ラスチン351mgを得た（ID₅₀＝0.0002mcg／ml）。参考例２エステラスチン95mlをメタノール10mlにとか
し、酸化白金20mgを加え水素20LBSの圧力下で２
時間還元を行なつた。酸化白金を過して除去
し、液を濃縮する事により薄層クロマトグラフ
イーで単一のスポツトを示すテトラヒドロエステ
ラスチンの白色粉末96mgを得た。参考例３エステラスチン10mgを99％メタノール0.5mlに
とかし酸化白金２mgを加え水素20LBSの圧力下で
２時間還元を行なつた。酸化白金を過して除
き、液を濃縮し、白色粉末9.7mgを得た。これ
を次にシリカゲルカラムにかけ酢酸エチル−クロ
ロホルム（１：１）の混合溶剤で溶出し、薄層ク
ロマト的に単一なテトラヒドロエステラスチンの
白色粉末5.9mgを得た。

Claims

【特許請求の範囲】１次式で示されるテトラヒドロエステラスチン及びこれ
の酸付加塩の少なくとも１つを有効成分として含
有することを特徴とする抗炎症剤。