JPS62167798A - インタ−ロイキン２結晶及びその製造法 - Google Patents
インタ−ロイキン２結晶及びその製造法Info
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- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
この発明は、インターロイキン２（以下「ＩＬ−２Ｊと
記す）結晶及びその製造法に関する。ＩＬ−２は、抗腫
瘍剤等の医薬として重要であり、ＩＬ−２結晶は、この
ようなＩＬ−２を精製する際に有用である。
記す）結晶及びその製造法に関する。ＩＬ−２は、抗腫
瘍剤等の医薬として重要であり、ＩＬ−２結晶は、この
ようなＩＬ−２を精製する際に有用である。
（従来の技術）
ＩＬ−２は従来、いくつかの異なるクロマトグラフィー
を組合せる等、多数の工程を経て精製されていた。しか
るにＩＬ−２は、結晶化しにくいため、晶析による精製
という他めて簡易な精製手段をとることかできなかった
。
を組合せる等、多数の工程を経て精製されていた。しか
るにＩＬ−２は、結晶化しにくいため、晶析による精製
という他めて簡易な精製手段をとることかできなかった
。
（発明が解決しようとする問題点）
従ってこの発明の目的は、！Ｌ−２の結晶化手段を提供
することにある。
することにある。
（問題点を解決するための手段）
本発明者らは叙上の問題点くついて徨々研究した結果、
特定な条件下では、塩析法という極めて簡便な方法でＩ
Ｌ−２結晶を製造しうろことを見い出した。
特定な条件下では、塩析法という極めて簡便な方法でＩ
Ｌ−２結晶を製造しうろことを見い出した。
即ちこの発明は、ｐＨ４，５から７．５の範囲の水性溶
媒にＩＬ−２が溶解されている溶液に、無機塩を加えて
ＩＬ−２結晶を析出せしめることよりなるＩＬ−２結晶
の製造法である。
媒にＩＬ−２が溶解されている溶液に、無機塩を加えて
ＩＬ−２結晶を析出せしめることよりなるＩＬ−２結晶
の製造法である。
水性溶媒は−４，５から７．５の範囲のものが使用でき
るが、ｐＨ４，７からｐＨ５，７及びｐＨ６，３から７
．３の範囲が最も好ましい。−の調節には、燐酸緩衝液
等が用いられる。水性溶媒には低級アルコール等の極性
溶媒を加えれば、より好ましい結果が得られることがあ
る。
るが、ｐＨ４，７からｐＨ５，７及びｐＨ６，３から７
．３の範囲が最も好ましい。−の調節には、燐酸緩衝液
等が用いられる。水性溶媒には低級アルコール等の極性
溶媒を加えれば、より好ましい結果が得られることがあ
る。
溶解されるＩＬ−２の純度は、より高いものが好ましい
が、夾雑物が蛋白性物質でない時には、低純度のもので
あってもよい。ＩＬ−２の溶液中ＩＬ−２の濃度は、通
常３ψ１以上がより良い結果が得られる。
が、夾雑物が蛋白性物質でない時には、低純度のもので
あってもよい。ＩＬ−２の溶液中ＩＬ−２の濃度は、通
常３ψ１以上がより良い結果が得られる。
無機塩としては、塩析に広く用いられているところの硫
酸アンモニウムが最も好ましいが他の塩でも同等の結果
が得られると予想される。塩濃度は、無機塩の種類によ
って異なシ、硫酸アンモニウムの場合には、少くとも１
、０ ｎｏ １７１以上は必要である。
酸アンモニウムが最も好ましいが他の塩でも同等の結果
が得られると予想される。塩濃度は、無機塩の種類によ
って異なシ、硫酸アンモニウムの場合には、少くとも１
、０ ｎｏ １７１以上は必要である。
このようにして調製されたＩＬ−２溶液を静置又は必要
によりゆるく攪拌し、室温あるいは必要によりよシ低温
下におくことにより、ＩＬ−２結晶が析出する。
によりゆるく攪拌し、室温あるいは必要によりよシ低温
下におくことにより、ＩＬ−２結晶が析出する。
得られたＴＬ−２結晶は、９９チ以上の高い純度のもの
であυ、従って、この発明はＩＬ−２の精製に適用する
ことができる。
であυ、従って、この発明はＩＬ−２の精製に適用する
ことができる。
（実施例）
組換えＤＮＡ法によりヒトＩＬ−２遺伝子が挿入されて
育種された大腸菌が生産したＩＬ−２の５０％プロア９
ノール水溶液を予め７０ ｍＭＭ酢酸緩衝液ｐＨ５，０
）で平衡化したセファデックスＧ−２５（ファルマシア
社）のカラムに通じ、同じ緩衝液でカラムを洗浄して脱
ブロツクノールしたＩＬ−２水溶液画分を得た。この画
分を更に予め７０ ｍＭＭ酢酸緩衝液ｐＨ５，０）で平
衡化した高速イオン交換クロマト用充てん剤ＭｏｎｏＳ
（ファルマシア社製）のカラムに通じ同緩衝液を０．
５ Ｍ ＮａＣｔを含む同緩衝液とのグラジェント溶出
法にてＩＬ−２を溶出した。得られたＩＬ−２溶液は０
．０７ Ｍ酢酸緩衝液と０．２５ＭのＮａＣ１を含みＩ
Ｌ−２濃度は３．８−であった。
育種された大腸菌が生産したＩＬ−２の５０％プロア９
ノール水溶液を予め７０ ｍＭＭ酢酸緩衝液ｐＨ５，０
）で平衡化したセファデックスＧ−２５（ファルマシア
社）のカラムに通じ、同じ緩衝液でカラムを洗浄して脱
ブロツクノールしたＩＬ−２水溶液画分を得た。この画
分を更に予め７０ ｍＭＭ酢酸緩衝液ｐＨ５，０）で平
衡化した高速イオン交換クロマト用充てん剤ＭｏｎｏＳ
（ファルマシア社製）のカラムに通じ同緩衝液を０．
５ Ｍ ＮａＣｔを含む同緩衝液とのグラジェント溶出
法にてＩＬ−２を溶出した。得られたＩＬ−２溶液は０
．０７ Ｍ酢酸緩衝液と０．２５ＭのＮａＣ１を含みＩ
Ｌ−２濃度は３．８−であった。
以上のようにして得たＩＬ−２溶液５μｔと塩析溶液（
組成は以下で説明）５μｔとを、シリコン化（ジメチル
ジクロロシラン３チクロロホルム溶液に５分間浸漬し、
１２時間風乾後、１２０℃乾熱器で１００℃にて６時間
加熱）したカバーグラス（直径２１＋ｗ＋、厚さム４）
上にマイフロピ（ットにて混合して１つの液滴をつくっ
た。
組成は以下で説明）５μｔとを、シリコン化（ジメチル
ジクロロシラン３チクロロホルム溶液に５分間浸漬し、
１２時間風乾後、１２０℃乾熱器で１００℃にて６時間
加熱）したカバーグラス（直径２１＋ｗ＋、厚さム４）
上にマイフロピ（ットにて混合して１つの液滴をつくっ
た。
２４穴細胞培養用プレート〔商品名 リンプロ。
米国フロラ、ラデラトリー社製〕の凹部（ウェル、内径
１７瓢）に前述の塩析溶液を１ゴ入れ、前記のタン／４
’り液滴をのせたカバーグラスを用いて、タンパク液滴
が下になるようにして蓋をした。この際凹部の上縁には
シリコングリースをぬり、カバーグラスと凹部とが密閉
状態を保つようにした。
１７瓢）に前述の塩析溶液を１ゴ入れ、前記のタン／４
’り液滴をのせたカバーグラスを用いて、タンパク液滴
が下になるようにして蓋をした。この際凹部の上縁には
シリコングリースをぬり、カバーグラスと凹部とが密閉
状態を保つようにした。
この容器を２７℃一定温度条件においた。
イ）塩析溶液として ０．２Ｍす／酸緩衝液ｐＨ６，５
硫酸アンモニウム１．８Ｍを用いた場合、７日後に６角
紡錘状結晶（第１図）の析出をみた。
硫酸アンモニウム１．８Ｍを用いた場合、７日後に６角
紡錘状結晶（第１図）の析出をみた。
口）塩析溶液として ０．２ＭＩＪン酸緩衝液ｐＨ７，
０硫酸アンモニウム２．０Ｍを用いた場合、７日後にイ
）と同様の結晶の析出をみた。
０硫酸アンモニウム２．０Ｍを用いた場合、７日後にイ
）と同様の結晶の析出をみた。
ハ）塩析溶液として ０．２Ｍ＋Ｊン酸緩衝液ｐＨ６，
７硫酸アンモニウム２．１Ｍを用いた場合、７日後に
イ）と同様の結晶の析出をみた。
７硫酸アンモニウム２．１Ｍを用いた場合、７日後に
イ）と同様の結晶の析出をみた。
二）塩析溶液として ０．２ Ｍ酢酸緩衝液ｐＨ５，６
。
。
硫酸アンモニウム２．２Ｍを用いた場合、７日後に板状
集合晶（第２図）の析出をみた。
集合晶（第２図）の析出をみた。
ホ）塩析浴液として ０．２ Ｍ酢酸緩衝液ｐＨ４，７
硫酸アンモニウム１．６Ｍを用いた場合、７日後に二）
と同様の結晶析出を本た。
硫酸アンモニウム１．６Ｍを用いた場合、７日後に二）
と同様の結晶析出を本た。
へ）塩析溶液として ０．２ Ｍ酢酸緩衝液１＋Ｈｓ、
ｅ硫酸アンモニウム１．８Ｍを用いた場合、７日後に二
）と同様の結晶析出をみた。
ｅ硫酸アンモニウム１．８Ｍを用いた場合、７日後に二
）と同様の結晶析出をみた。
第１図及び第２図は、本発明のインターロイキン２結晶
の模写図である。
の模写図である。
Claims (2)
- （１）結晶化されているインターロイキン２。
- （２）ｐＨ４．５から７．５の範囲の水性溶媒にインタ
ーロイキン２が溶解されている溶液に、無機塩を加えて
インターロイキン２結晶を析出せしめることよりなる、
インターロイキン２結晶の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP943686A JPS62167798A (ja) | 1986-01-20 | 1986-01-20 | インタ−ロイキン２結晶及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP943686A JPS62167798A (ja) | 1986-01-20 | 1986-01-20 | インタ−ロイキン２結晶及びその製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62167798A true JPS62167798A (ja) | 1987-07-24 |
Family
ID=11720265
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP943686A Pending JPS62167798A (ja) | 1986-01-20 | 1986-01-20 | インタ−ロイキン２結晶及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS62167798A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05507707A (ja) * | 1990-06-15 | 1993-11-04 | シェリング・コーポレーション | 結晶性インターロイキン―４ |
-
1986
- 1986-01-20 JP JP943686A patent/JPS62167798A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH05507707A (ja) * | 1990-06-15 | 1993-11-04 | シェリング・コーポレーション | 結晶性インターロイキン―４ |
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