JPS62175497A - 胆汁酸誘導体およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔発明の背景〕 技術分野 本発明は、新規な胆汁酸誘導体およびその製造法に関す
る。この胆汁酸誘導体は、癌治療薬として有用なもので
ある。

先行技術 胆汁酸はステロイド化合物の一種であって、脅椎動物の
胆汁の主要成分である。これらの胆汁酸の多くは、一般
に炭素数２’ｌの３β−コラン酸のヒドロキシ誘導体で
あることが知られている。

ヒトの胆汁中にはコール酸、デオキシコール酸、ケノデ
オキシコール酸およびリトコール酸などが含まれている
が、動物の種によって胆汁酸の種類および組成に若干の
相異が見られる（例えば、クマの胆汁中にはウルソデオ
キシコール酸、ラット胆汁中にはβ−ムリコール酸など
種特異的な胆汁酸が存在している）。

これらの胆汁酸は、生体内で脂肪酸やビタミン類の吸収
、脂質代謝調節に欠くことのできない必須成分であり、
中でもデヒドロコール酸、ウルソデオキシコール酸は従
来より胆汁分泌促進、胆石溶解、脂質消化吸収促進、整
腸などの目的で繁用されている。

一方、胆汁酸の分布に関しては、肝においてコレステロ
ールより合成され、グリシンまたはタウリンで抱合され
た後、胆汁中に分泌されて胆嚢内に貯蔵、濃縮された後
、十二指腸に放出されるが胆汁酸は小腸内で水に不溶な
物質の乳化（可溶化）などの機能を果たした後、回腸よ
り吸収され、門脈中に入り、肝細胞に摂取され、再び胆
汁中に分泌されることが知られている（腸−門脈一肝一
胆道の循環、すなわち腸肝循環）。

ところで、最近、上記胆汁酸の有する独自の機能を利用
した誘導体の研究が行われるようになり、例えば、伊藤
らは天然に存在する胆汁酸の３位カルボキシル基にイミ
ノジ酢酸が結合した化合物を合成し、これらに顕著な炭
酸カルシウム溶解作用があったことを確認して、胆石溶
解剤として有用であることを報告している（特開昭／、
０−　／ｌ、１９９４号および同ＡＯ−０，７１４号公
報参照）。

しかしながら、天然に存在する胆汁酸の３位水酸基にＮ
−ハロアルキルカルバモイル基が結合した誘導体に関し
ては、それ自体が存在しないことはもちろん、既存の胆
汁酸またはその誘導体に制癌作用があったという報告も
何一つないのが現状である。

〔発明の概要〕

要旨 本発明は、胆汁酸の３位水酸基にＮ−ハロアルキルカル
バモイル基が結合した胆汁酸誘導体およびその塩に関す
るものである。

すなわち、本発明による胆汁酸誘導体は下式（１）％式
％ を特徴とするものである。

イ）下式（２） で表わされる胆汁酸誘導体に、活性カーボネート化試薬
を反応させること。

口）得られる活性カーボネート化１体に下式（３）ハ）
上記工程イ）〜口）で得られる胆汁酸誘導体を加水分解
に付すこと。

二）上記加水分淋物を縮合剤存在下で下式（４）％式％
（４１ 式中Ｒ５はカルボキシル基またはスルホニル基であり、
ｎはｌ−２の整数を示す。

で示される化合物と反応させること。

効果 本発明による胆汁酸誘導体およびその塩は、天然に存在
する胆汁酸（例えば、コール酸、デオキシコール酸、ウ
ルソデオキシコール酸、カッデオキシコール酸、ドリコ
ール酸等）から誘導されることより腸肝循環が予測され
ること、また、それ自体が制癌作用を有すること、等よ
り癌疾患対策、特に肝−胆道系の癌疾患に太いに貢献す
るものと思われる。

〔発明の詳細な説明〕

化合物 本発明による胆汁酸誘導体は、前記式（１）で表わされ
るものである。その式の詳細な定義についても前記した
通りである。Ｒ５？低級アルコキシル基は、炭素数／−
４’程度がふつうである。また、Ｒ４がＸＣＨ２ＣＨ２
−である場合にコ個存在することになるＸは、異なるも
のであってもよい。

また、その塩とは、ナトリウム、カリウム、マグネシウ
ム、等のアルカリ金属またはアルカリ土類金属との塩あ
るいはアンモニウム塩、アミン塩など薬学上許容できる
任意の塩基類との塩をいう。

このような化合物の一具体例を理化学的性状とともに示
せば下表に示す通りである。

有用性 本発明による胆汁酸誘導体は、既存の制癌剤と同程度の
制癌作用を有し、かつ低毒性である。

従って、この化合物は、制癌剤として使用することがで
きる（詳細後記）。

本発明による胆汁酸誘導体（１）は、合目的的な任意の
方法によって製造することができる。

そのような方法の好ましい具体例は、前記した工程イ）
〜二）を順次に、そして必要に応じて工程口）、ハ）ま
たは二）まで、実施することからなるものである。

この具体例では、式（２）の化合物から出発していが、
そこでの基Ｒ３は水酸基および−ＮＨ÷ＣＨｚ”ｎ”ｓ
基を含まないという点で式（１）での基Ｒ６と同じであ
る。すなわち、この具体例では、基Ｒ５の水酸基および
−ＮＨ÷ＯＨ２＋、ＲＳ基の導入は後から行なう（工程
ハ）および二））ことになっている。しかし、式（１）
の化合物が得られる限り、他の反応ないし工程が利用し
５ることはいうまでもない。

さて、この好ましい具体例での工程の詳細は、下記の通
りである。

工程イ） 例えば、コール酸、デオキシコール酸、ウルソデオキシ
コール酸、ケノデオキシコール酸およびリトコール酸か
ら選ばれる天然の胆汁酸のアルカリ塩にヨウ化メチル、
臭化メチル、塩化メチル、ヨウ化エチル、臭化エチル、
ヨウ化イソプロピルあるいは臭化ブチル等の炭素数／−
１の低級アルキルハライドまたはベンシルク四うイド、
ベンジルプロミド等のベンジルハライドを常法により反
応させ、得られる胆汁酸のアルキルエステル（前記式（
２）中、ＲＳ　　が低級アルコキシル基またはベンジル
オキシル基で示される化合物）を反応原料とし、これに
カルボニルシバライド、Ｎ、Ｎ’−ジスクシンイミジル
カーボネート、クロロカルボニルベンゾトリアゾール等
の活性カーボネート試薬（カルボニル基の両端にハロゲ
ン原子、スクシンイミジルオキシル基またはベンゾトリ
アゾール基等の活性基を有する二価性の試薬をいう）を
例えば、酢酸エチル、クロロホルム、塩化メチレン、ベ
ンゼンあるいはアセトン停の反応性水素を有しない溶媒
またはこれらの混合液中で反応させることにより、活性
カーボネート化体〔前記反応原料（胆汁酸のアルキルエ
ステル）の３位水酸基に上記活性カーボネート化試薬が
縮合したもの〕を得ることができる。

なお、上記活性カーボネート化反応において、しばしば
副産物として、ハロゲン化水素、Ｎ−ヒドロキシコハク
酸イミド等の酸性物質が生じて反応を防害することがあ
るが、この様な場合はあらかじめ炭酸ナトリウム、炭酸
カリウム、炭酸水素ナトリウム等の無機塩類あるいはピ
リジン、トリエチルアミン等の三級アミン類を反応系に
添加し、生成する上記副産物を順次中和することも可能
である。

工程　口） 上記活性カーボネート化体は、前記式（３）（その式の
詳細な定義については前記と同様）で示される化合物（
本化合物はいずれも既知物質であり、任意の方法で合成
するかあるいは重賞の試薬を用いてもよい）またはその
塩（塩酸、硫酸、酢酸等任意の酸性物質との塩）を炭酸
ナトリウム、炭酸カリウムまたは炭酸水素ナトリウム等
の無機塩類あるいはピリジン、トリエチルアミン等の第
三アミン類の存在下、前記同様、反応性水素を有しない
溶媒中で反応を行うことにより、前記式（１）でＲ３が
低級アルコキシル基またはベンジルオキシル基で示され
る化合物を得ることができる。

工程ハ） さらに上記化合物は、塩酸、酢酸、硫酸、ｐ−トルエン
スルホン酸、トリフルオロ酢Ｌ）ＩＪフルオロメタンス
ルホン酸、酒石酸、コノ１り酸、クエン酸等、任意の無
機または有機の酸触媒あるいは水酸化ナトリウム、炭酸
ナトリウム、炭酸カリウム、炭酸水素ナトリウム等の無
機塩類またはテトラエチルアンモニウムヒドロキシド等
の四級アンモニウムヒドロキシド類から選ばれる塩基触
媒存在下、ジオキサン、テトラヒドロフラン、Ｃ１〜Ｃ
４の低級アルコール等、水と混和可能な有機溶媒または
これらの混合物に適当量の水を加えた溶媒中で加水分解
反応を行うことにより、前記式（１）で８３が水素原子
で示される化合物を得ることができる。

なお、前記式（１）でＲ５がベンジルオキシル基である
化合物の場合は、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、あ
るいはＣ１〜Ｃ４の低級アルコール等の有機溶媒中で水
素雰囲気下、パラジウムまたは白金等の水素添加触媒と
ともに反応させることにより、七〇Ｒ３基を水素原子に
変えることも可能である。

工程二） 以上の工程で得られた化合物は、ひき続き前記式（４）
（その式の詳細な定義忙ついては前記と同様）で示され
る化合物と縮合剤存在下に前記同様反応性水素を有しな
い溶媒中で反応させることにより、前記式（１）でＲ３
が−ＮＨ÷ＣＨ２＋Ｒ５基（その式の詳細な定義につい
ては前記と同様）で表わされる化合物を得ることかでき
る。

なお、ここでいう縮合剤とは、カルボキシル基とアミノ
基を縮合させることが可能な任意の縮合剤をいい、例え
ば、Ｎ、Ｎ’−ジシクロへキシルカルボジイミド、塩酸
／−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カル
ボジイミド、／−エトキシカルポニルーコーエトキシー
ｔ、２−ジヒドロキノリン、　Ｎ、Ｎ／　−ジスクシイ
ミジルカーボネートなどを挙げることができる。

後記実験例から明らかなように、本発明による胆汁酸誘
導体は制癌性を有すると共に低毒性であるので、この化
合物は制癌剤として有用である。

すなわち、本発明の応用としての癌治療剤は、前記一般
式（１）で示される胆汁酸誘導体またはその塩を有効成
分とするものである。

この癌治療剤は、上記胆汁酸誘導体のいずれか単独また
は相互の混合物からなるものまたはこれと液体または固
体の製剤上の補助成分例えば賦形剤、結合剤、希釈剤、
と混合してなるものであり、粉末、顆粒、錠剤、カプセ
ル剤、注射剤など任意の剤形で経口的または非経口的に
投与することができる。

また、必要に応じて他の制癌剤（例えば！　−ＦＵ　。

マイトマイシン、クレスチン等）と調合させてもよい。

投与量は、年齢、体重、症状により適宜増減するが、経
口的には通常、成人、７日、胆汁酸誘導体として７０〜
〜ｉｏｇが望ましい。好ましい具体例は、胆汁酸誘導体
と製剤上の補助成分とからなるものである。また、本発
明の他の好ましい具体例は、上記１日あたり投与量を７
回ないし数回に分けて服用させるための単位投与形態の
ものである。

実験例 化合物の合成 合成した目的物質は、結晶化させて融点を測定したもの
以外は、溶媒を留去してから乾燥させて無色の粉末とし
て得ている。また、目的物質の記号および物理化学的性
状は、前記衣−７に示した通りである。

実施例／ ルボニル〕コール酸メチルエステル（ＣＡ−Ｍｅ−ＮＭ
）コール酸メチルエステルｔｒ、ｒｉを塩化メチレンＸ
ｍｌに溶解し、これにトリエチルアミンλ、３Ｉを加え
て攪拌しながら、ホスゲンコ、ｌＩｇを含む２７−のベ
ンゼン溶液を滴下し、その後一時間攪拌な続けた。他方
で、塩酸ビス（コークロロエチルアミン）１１．７１１
を３ゴの水に溶かして氷冷した溶液に、水酸化カリウム
／、ｌ！：ｉを、ｔｌ！！７！の水に溶かして氷冷した
溶液を加えて油状の沈澱物として生成したビス（コーク
ロロエチル）アミンヲ、／！ｒｍｌのクロロエチルムで
３回抽出してから無水硫酸マグネシウムで乾燥し、コ、
ｒｇのトリエチルアミンを加えた溶液を調製し、これを
上記のコール酸メチルエステルとホスゲンとの反応液に
加えて、室温で一晩攪拌した。その後、反応液を水、０
．！；Ｎ塩酸および水の順に洗い、無水硫酸マグネシウ
ムで乾燥後、溶媒を留去した。得られた反応混合物をシ
リカゲルクロマトグラフィーで分離精製して、標題化合
物札ざ９（収率りｑ６）を得た。

実施例コ コール酸エチルエステルｇ、ｔ、ｇを出発物質として、
実施例１と同様の反応処理して、標題化合物ｓ、、ｙｇ
（収率件チ）を得た。

実施例３ コール酸ベンジルエステルｑ０ｇ　ｉ　ヲ出発物’ＪＲ
トして実施例／と同様の反応処理して、標題化合物！、
７ＩＩ（収率ＩＩＪ係）を得た。

実施例ダ デオキシコールメチルエステル９．６９を出発物質とし
て実施例１と同様の反応処理して、標題化合物ダ、２Ｉ
Ｃ収率３クチ）を得た。

実施例！ ウルツチオキシコール酸ベンジルエステル９．６＃、Ｎ
、Ｎ’−ジスクシイミジルカーポネートク、６ｇ、トリ
エチルアミンｌＩｇをＩ−のアセトニトリルに加え、室
温でＳ時間攪拌したのち、ｔｏｙの塩酸ビス（２−クロ
ロエチル）アミンと３ｇのトリエチルアミンを含有する
Ｊｔ）ｍｌのアセトニトリルの溶液を加え、室温で一晩
攪拌したのち、よＯｄの酢酸エチルを加え、水、２％炭
酸水素ナトリウム水溶液および水の順に洗浄し、無水硫
酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を留去して得た反応混合
物をシリカゲルクロマトグラフィーで分離精製して、標
題化合物３．３９（収率ｌＩｉ％）を得た。

実施例６ 、？−０−［ビス（コークロロエチル）アミツカケノデ
オキシコール酸ベンジルエステル？ｊ、９を出発物質と
して実施例よと同様に反応処理して、標題゛化合物６．
４Ｉｇ（収率！θ％）を得た。

実施例７ Ｂｚ−ＮＭ） リトコール酸ベンジルエステル？、ｌＩｇを出発物質と
して実施例１と同様に反応処理して、標題化合物ダ、テ
Ｉｉ（収率３？チ）を得た。

実施例ｔ コール酸ベンジルエステル１０９を出発物質とし、塩酸
ビス（コークロロエチル）アミンのかわりに塩酸λ−ク
ロロエチルアミン６Ｉを用いた他は実施例！と同様に反
応処理して、標題化合物Ａｇ（収率仰ｑ６）を得た。

実施例デ デオキシコール酸ベンジルエステル？、７ｐを出発物質
とし、塩酸ビス（コークロロエチルアミンのかわりに塩
酸λ−クロロエチルアミン３Ｉを用いた他は実施例１と
同様に反応処理して、標題化合物ｚ０．ｙｇ（収率タタ
チ）を得た。

実施例１Ｏ −Ｈｚ−ＣＩＡ） ウルソデオキシコール酸ベンジルエステル？、７Ｉを出
発物質として実施例ｇと同様に反応処理して、標題化合
物弘１収率３４（％）を得た。

実施例／／ デオキシコール酸ベンジルエステルデ、りＩを出発物質
とし、塩酸ビス（λ−クロロエチル）アミンのかわりに
臭化水素酸コープロモエチルアミン／Ｑｆｉを用いた他
は実施例よと同様に反応処理して、標題化合物ＩＩ、！
；ｌ（収率３６％）な得た。

実施例／コ −Ｂｚ−ＢＥＡ） ウルソデオキシコール酸ベンジルエステル９．７ｙな出
発物質として実施例／／と同様に反応処理して、標題化
合物、ｙｏｇｇ（収率３０％）を得た。

実施例１３ ＢＢＩＡ） コール酸ベンジルエステルｑ　、ｇ　Ｉ　ｋ　出発物’
ＪＫ　トし、塩酸ビス（λ−クロロエチル）アミンのか
わりにビス（−一プロモエチル）アンモニウムドシレー
）　／、ｔ　ｇを用いた他は実施例よと同様に反応処理
して、標題化合物コ、６ｙ（収率１７ｔｓ）を得た。

実施例／ダ ｊ−０−（ビス（２−クロロエチルアミノカルボニル〕
コール酸メチルエステル！、９７７を１０％（Ａ／ｖ）
水酸化ナトリウム水溶液７０−とエタノールＳＯｄの混
液に溶かし、室温に３時間放置したのち、１００ｍ１の
酢酸エチルを加え、Ｏ０Ｓ規定塩酸、水（３回）の順に
洗い、無水硫酸マグネシウムで乾燥したのち、溶媒を留
去して、標題化合物ｒ、ｒｇ（収率９６チ）を得た。ク
ロロホルムを加えて結晶化させたものの融点は、／Ａ！
　−／４４℃であった。

実施例／よ 、７−０−（ビス（２−クロロエテル）アミノカルボニ
ルコチオキシコール酸メチルエステル！、７Ｉを出発物
質として実施例／ｌＩと同様に反応処理して、標題化合
物ｓ、ｓｇ（収率９？チ）を得た。アセトニトリルを加
えて結晶化させたものの融点は、ハｑ〜／ＩＩ：Ｉ℃で
あった。

実施例／６ ．７−０−［ビス（コークロロエチル）アミノカルボニ
ル〕ウルソデオキシコール酸ベンジルエステル、４．ｊ
ｇを出発物質とし、実施例／ｌＩと同様に反応させた。

反応終了後、反応液中のエタノールの大半を減圧で留去
したのち、７０−の水を加え、この水溶液をベンゼンで
２回洗った。水溶液を濃塩酸で酸性（ｐＨλ）としたの
ち、ｔｅａｌの酢酸エチルで抽出し、酢酸エチル層を水
で２回洗ったのち、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶
媒を留去して、標題化合物！；、２９（収率？３チ）を
得た。

実施例１７ ．７−０−［ビス（−−クロロエチル）アミノカルホニ
ル］ケノテオキシコール酸ベンジルエステル、６．３１
を５ｏｙｔｔのテトラヒドロフランに溶かし、ｏ、ｓｉ
の！チパラジウム炭素を加えて原料が消失するまで水添
を行った。反応終了後、触媒なｒ取し、Ｐ液を留去して
、標題化合物ｔ０ｇｒ（収率？ｇ％）を得た。

実施例１ざ ｊ−０−［ビス（２−クロロエチル）アミ７カルボニル
］リトコール酸ベンジルエステルｌ、、３７／を出発物
質として実施例／’）と同様に反応処理して、標゛題化
合物よ、１Ｉｌ（収率ｉｏｏ％）を得た。クロロホルム
を加えて結晶化したものの融点は、／３ｒ〜／６コ℃で
あった。

実施例１９ ．７−０−　（２−クロロエチルアミノカルボニル）コ
ール酸ベンジルエステル５ＪＩｉを出発物質として実施
例／６と同様に反応処理して、標題化合物！９（収率ｌ
ｏｏ％）ｋ得た。クロロホルムを加えて結晶化させたも
のの融点は、ｌＡ２〜／／−５℃であった。

実施例Ｊ 、７−０−（コークロロエチルアミノカルボニル）デオ
キシコール酸ベンジルエステル＆、？、９ヲ出発物質と
して実施例１７と同様に反応処理して、標題化合物亭、
９ｔｉ（収率？ｆｆチ）を得た。

実施例コ１ ｊ−０−（２−クロロエチルアミノカルボニル）ウルソ
デオキシコール酸ベンジルエステル！、９９を出発物質
として実施例１りと同様に反応処理して、標題化合物ダ
、９ＩＣ収率９１チ）を得た。

実施例ｎ ３−Ｏ−（２−ブロモエチルアミノカルボニル）デオキ
シコール酸ベンジルエステル５３ｇを出発物質として実
施例／りと同様に反応処理して、標題化合物ｒ、３ｐｃ
収率９ｔ％）を得た。

実施例刀 ３−０−〔−一プロモエチルアミノカルホニル〕３−０
−　（，２−７’ロモエチルアミノカルボニル）ウルソ
デオキシコール酸ベンジルエステル５．ｙｇを出発物質
として実施例／７と同様に反応処理して、標題化合物！
５．３１１（収率９ｇ％）を得た。

実施例−グ 、？−０−［ビス（２−ｙ”ロモエチル）アミノカルボ
ニル〕コール酸ベンジルエステルｑ６ｏｗヲ出発物質と
し、実施例１７の暑。スケールで同様に反応処理して、
標題化合物１．１０■（収率９９チ）を得た。

実施例Ｊ 、７−０−［ビス（コークロロエチル）アミノカルボニ
ル〕コール酸／、２９．／−エトキシカルボニルーコー
エトキシー／、コージヒドロキノリン７００ｍ９、トリ
エチルアミンｏ、３６ｍ１およびタウリン２ｇＯ〜をｔ
−のジメチルホルムアミドに加えて、９０℃で／、ｊ一
時間反応させた。室温に冷却後、反応液を１００ｍ１の
ジインプロピルエーテルに加えて生じた油状の沈澱物を
ＳＯｄの酢酸エチルに加え、／規定塩酸で洗ったのち、
無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を留去して得られ
た反応混合物を、シリカゲルカラムクロマトグラフィー
で分離精製して、標題化合物？’ｌＯ■（収率６６％）
を得た。

実施例コロ 、７−０−（ビス（コークロロエチル）アミノカルボニ
ル〕コール酸５０ｇｇ、グリシン／　ｉおよびジシクロ
へキシルカルボジイミド２．！ｒｌｌを７！θゴの酢酸
エチルに加え、−昼夜加熱還流したのち室温に冷却して
、不溶物を沢取した。ｒ液を０．２Ｎ塩酸で洗ったのち
、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を留去して得ら
れた反応混合物を、シリカゲルクロマトグラフィーで分
離精製して、標題化合物ｅ、２ｇ　（収率６６チ）を得
た。クロロホルムを加えて結晶化させたものの融点は、
／コ３〜／２７°Ｃであった。

実施例、２７ 、？−０−（，２−クロロエチルアミノカルボニル〕コ
ール酸！、／　ｌｉを出発物質として実施例コロと同様
に反応処理して、標題化合物３．！；ｌ（収率６．２％
）を得た。

生理活性 本発明胆汁酸誘導体ＣＡＮＭ（前記表−／参照）１且 の癌細胞に対するＤＮＡ合成組害作用な見るべく組織学
的試験及びマウスによる急性毒性試験を行った。その結
果を実験方法と伴に示せば下記の通りである。

癌細胞に対するＤＮＡ合成阻害効果 ドンリュウ系ラッう腹腔内で継代移植中の吉日腹水肝癌
ＡＨ／３０　ｆ：１０チ牛脂仔血清１０−’　Ｍインス
リン、ペニシリン１００単位／ｒｒＬｌおよびストレプ
トマイシン１００μｉ／ＩＩＬＩを含む／タデ培地（放
置「組織培養」朝倉書店刊（／９７４）参照）で約１０
個／−の細胞密度に調製し、組織培養用フラスコ（培養
面積２’ｌｃｒ／ｌ）に３づずつ分注し、二酸化炭素イ
ンキュベーター（ｊチＣＯ２−デＳチ空気、３７℃）中
で評時間予備培養した。予備培養後、浮遊してくる細胞
を遠心分離（１０００回転、３分）にて集め、コ４　Ｘ
　１０５個／１ｎｌの細胞密度に調製した。これを組織
培養用プレート（培養面積／、９ａｌ／ウェル）に／ｒ
ＩＬｌずつ分注した後、最終濃度のｉｏｏ倍の濃度に調
製された本発明ＣＡ−ＮＭ　（前記表−７参照）、前立
腺癌治療薬ナイトロミン■（吉富製薬）およびコール酸
（対照）を用いてそれぞれＯ４ＳμＭ。

りμＭおよび５０μＭに調製し、２時間前培養を行った
。

前培養後、トリチウで標識したチミジン溶液を培地中の
放射活性がｏ、２ｒ　ｐ　Ｃ１／ｍＪとなるように加え
、さらに二時間培養を行った。

培養終了後、浮遊している細胞を遠心分離によって集め
、氷冷したＰＢＳ（−）溶液（田水製薬）で−回洗浄し
、次いで氷冷したｔＱ％および５％トリクロル酢酸でそ
れぞれ３分間処理した。

その後、アルコールで一回洗浄した後、／Ｎ水酸化ナト
リウムθ、　、ｌｔ　ｍ！ｊ　ｆ　ｇＪえて、３２℃で
７時間加温した。室温まで冷却した後、／Ｎ塩酸θ、コ
よｄ加えて中和し、液体シンチレーション用バイアル瓶
に移し、液体シンチレーション用カクテル（ＡＣ８−Ｉ
Ｉ、　Ａｍｅｒｓｈａｍ）　！ｒｎｌを加えて、液体シ
ンチレーシコンカウンター忙てトリチウムの放射活性を
測定した。

その結果は、下表に示す通りである。

表−コ なお、表中の放射性活性（％）は、対照群（コール酸）
の放射活性を１００としたときの放射活性を百分率で示
したものである。

これらの結果から、本発明の胆汁酸誘導体ＣＡ−ＮＭは
、既存の制癌剤ナイトロミン■（吉富製薬）と比べて同
程度の癌細胞に対するＤＮＡ合成阻害作用が認められ、
かつその効果は用量依存的であることがわかった。

毒性 一方毒性に関しては、本発明ＣＡ−ＮＭ１０／／ｋｇを
ｄｄＹ系マウス（１群７匹）に経口的に単回投与し、そ
の急性毒性を観察した結果、投与後３Ｑ日間に死亡例が
認められないことより、本発明胆汁酸誘導体は一般に低
毒性であるといえる。

出願人代理人　　　　　佐蒔−」 手続ネ１１正書 昭和６１年９月ぐ日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、下式で示される胆汁酸誘導体およびその塩。 ▲数式、化学式、表等があります▼（１） 〔式中、Ｒ＿１およびＲ＿２はそれぞれ水素原子または
   水酸基であり、Ｒ＿３は水酸基、低級アルコキシル基、
   ベンジルオキシル基または −ＮＨ−（ＣＨ＿２）−＿ｎＲ＿５基（式中Ｒ＿５はカ
   ルボキシル基またはスルホニル基であり、ｎは１〜２の
   整数を示す。）であり、Ｘはハロゲン原子であり、Ｒ＿
   ４は水素原子またはＸＣＨ＿２ＣＨ＿２−基であり、■
   はα結合であり、■はαまたはβ結合である。〕 ２　下記の工程イ）およびロ）、工程イ）およびロ）お
   よびハ）、または工程イ）およびロ）およびハ）および
   ニ）からなることを特徴とする、一般式（１）の胆汁酸
   誘導体の製造法。 イ）、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼（２） 〔式中、Ｒ＿１およびＲ＿２はそれぞれ水素原子または
   水酸基であり、Ｒ′＿３は低級アルコキシル基、または
   ベンジルオキシル基であり、■はα結合であり、■はα
   またはβ結合である。〕 で表わされる胆汁酸誘導体に、活性カーボネート化試薬
   を反応させること。 ロ）、得られる活性カーボネート化体に一般式▲数式、
   化学式、表等があります▼（３） 〔式中、Ｘはハロゲン原子であり、Ｒ＿４は水素原子ま
   たはＸＣＨ＿２ＣＨ＿２−基である。〕で表わされる化
   合物を反応させること。 ハ）、上記工程イ）〜ロ）で得られる胆汁酸誘導体を加
   水分解に付すこと。 ニ）、上記加水分解物を縮合剤存在下で 一般式 Ｈ＿２Ｎ−（ＣＨ＿２）−＿ｎＲ＿５（４）［式中、Ｒ
   ＿５はカルボキシル基またはスルホニル基であり、ｎは
   １〜２の整数を示す。］ で示される化合物と反応させること。