JPS62203063A - 蛋白分析用一体型多層分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野コ 本発明は水性液体試料中の蛋白を定量分析するための平
板状またはシート状の一体型多層分析要素に関し、詳し
くは水性液体試料、殊に生物体液。

例えば全血、の中の総蛋白の定量分析に適した臨床検査
に有用な平板状またはシート状の一体型多層分析要素に
関するものである。

［従来技術］ 乾式の分析要素の一形態として、透明支持体の上に呈色
反応試薬がゼラチンに代表される親水性ポリマーバイン
ダーに分散含有されている試薬層と最上層に多孔性展開
層（以下、展開層ということがある）が密着して接着さ
れた構成の一体型多層分析要素（以下、多層分析要素と
いうことがある）が特公昭５３−２１６７７　、米国特
許３９！３２１５Ｂ、特開昭５５−９０８５９　、特開
昭５５−１６４３５６　、特開昭５７−６６３５９　、
特開昭５２−３４８８　、米国特許Ｒｅ３０２６７、特
開昭５８−７７６６１　、特開昭６０−２２２７６９　
、特開昭５７−１４８２５０　、特開昭５７−１２５８
４７等において多数提案され、実用に供されている。こ
れらの多層分析要素では全血試料に適応させるために展
開層に二酸化チタン微粒子等の光遮蔽性微粒子を含有さ
せるか。

展開層と試薬層の間に光遮蔽層を設けている。多層分析
要素はその展開層に約１０ｕｌの全血または血漿等の水
性液体試料を点着するだけの乾式操作で被検成分の正確
な定量分析、または半定量分析が実施できるので、臨床
検査分野での使用が増大しつつある分析手段である。

経時保存性を改良したビウレット試薬組成物を含む試薬
層を有する蛋白分析用多層分析要素が特開昭５４−１０
１３９８　、特開昭５８−８５１６３．特開昭５９−５
１３５６に提案されている。特開昭５４−１０１３９８
に記載の多層分析要素は９例えばポリエチレンテレフタ
レートフィルム支持体の上に、硫酸銅、酒石酸、水酸化
リチウムを含むビウレット試薬組成物を含むアガロース
からなる試薬層、並びに微結晶セルロース粒子及びポリ
ビニルピロリドンからなる粒状構造物展開層を積層一体
化したものである。その多層分析要素の特徴はアルカリ
中に実質的にナトリウムイオンを含まないことにより、
試薬層を所定の高ｐｌ＋に維持して、要素の保存安定性
を催促したものであった。また、特開昭５Ｌ５１３５６
に記載の多層分析要素は上記の多層分析要素の発色性、
保存性及び定量精度を向上させたもので、ビウレット試
薬組成物中のアルカリとして、アルカリ金属の水酸化物
、アルカリ塩、アルカリ土類金属塩のうちの２種以上の
アルカリ性混合物を含有さすたものである。

［従来技術の問題点コ 上述の蛋白分析用一体型多層分析要素では試薬層または
光遮蔽層等の展１ｍ１層以外の層に耐アルカリ性親水性
ポリマーバインダーを用いているので水浸透性ではある
が、一般的に高分子アナライトである蛋白に対しては難
浸透性でアナライトの拡散移動による浸透が遅いという
問題点があった。

その他に、ナトリウムイオンを含まない試薬組成物はバ
インダーポリマーである親水性ポリマーとの親和性が悪
く、試薬層塗布液が撥水性をおびたり、試薬層の上に塗
布される光遮蔽層や接着層のような親水性バインダーポ
リマー含有塗布液の塗布時にこれらの層の塗液が撥しか
れて均一な塗布層を形成しがたい傾向があることが判明
した。

またそれらの多層分析要素では、高ｐｌ＋の試薬層に耐
アルカリ性親水性バインダーポリマーが用いられている
が、それでもなおバインダーポリマーの保存時の経時劣
化とそれに伴う分析精度の劣化が生じやすいという問題
点があった。

［発明の目的］ 本発明の目的は発色反応に充分な量の蛋白（アナライト
）が試薬層まで速やかに拡散浸透できる蛋白分析用一体
型多層分析要素を提供することである。

本発明の他の目的は全血試料中の赤血球を分離する機能
を有し、比色法のための反射光学）１度測定時に赤血球
による妨害を回避して全血試料中の蛋白の定量分析を可
能にする蛋白分析用一体型多層分析要素を提供すること
である。

本発明の他の目的は蛋白の発色反応に充分な量の呈色試
薬試薬組成物が含有されており、検量線の勾配が大きく
、測定精度の高い蛋白分析用一体型多層分析要素を提供
することである。

本発明の他の目的は呈色試薬試薬組成物の経時劣化が少
なく、カブリが少なく、測定感度が高く。

測定精度の高い蛋白分析用一体型多層分析要素を提供す
ることである。

回工至亘 ［発明の構成コ 本発明は、光透過性水不透過性支持体の上に。

順に、水溶性第二銅塩、銅キレート化剤及びアルカリ剤
を含む蛋白分析用呈色試薬組成物を分散含有する耐アリ
カリ性親水性ポリマーバインダーからなる試薬層、下側
非繊維質多孔性シート、上側非繊維質多孔性シート、及
び繊維質多孔性シートが一体に積層されてなり、前記３
層の多孔性シートはそれぞれその隣接する２面の間にお
いて液体の均一通過が実質的に妨げられないように微貫
通空隙を構成するように部分的に配・置された接着剤に
より実質的に密着して接着され一体化されている蛋白分
析用一体型多層分析要素である。

［発明の構成の詳細な説明］ 繊維質多孔性シートは最外層（支持体から最も遠い最上
層）に位置して主に展開作用を有する層として機能する
。すなわち、その上側表面（支持体から遠い側の表面）
に点着供給された水性液体試料をその中に含有している
成分を実質的に偏在させることなしに単位面積当りほぼ
一定量の液体試料が分布するように、受容した水性液体
試料を横方向（シートの面の方向）に拡散させ、同時に
隣接する下側の層に水性液体試料を単位面積当りほぼ一
定容量の割合で受容した水性液体試料を供給する作用（
展開作用またはメータリング作用）を有する層である。

さらに繊維質多孔性シートは水性液体試料中の分析を妨
害する非溶解性物質（例。

全血試料中の赤血球等）を濾過除去する作用もする層で
ある。

繊維質多孔性シーｊ・とじて、織物生地９編物生地、有
機ポリマー繊維バルブ含有抄造紙および濾紙、ガラス繊
維バルブ含有抄造紙および送紙、繊維質不織布等を用い
ることができる。

ｍｓ生地トシテハ、特開昭５５−１６４３５６．特開昭
６０−２２２７７０等に記載の展開層用の平織物が好ま
しく。

平織物のうちでは細布生地、金ｌ】生地、ブロード生地
、ボブリン生地等が好ましい。織物生地を構成する糸と
しては紡績糸（加捻糸）が好ましい。織物生地の糸の太
さは綿紡績糸番手で表して約２０Ｓから約１５Ｏ５，好
ましくは約４０Ｓから約１２０　Ｓ相当の範囲、または
絹糸デニールで表して約３５Ｄから約３００Ｄ、好まし
くは約４５Ｄから約１３０Ｄの範囲。

織物生地の厚さは約１００−から約５ｏｏｌａ、好まし
くは約１２０　Ｌｆｆｎから約３５０１ｆｆｎの範囲、
織物生地の空隙率は約４０％から約９０％、好ましくは
約５０％から約８５％の範囲である。

編物生地としては、特開昭６０−２２２７６９　、特開
昭６０−２２２７７０等に記載の展開層用の経（たて）
メリヤス編生地が好ましく、経メリヤス編生地のうちで
はトリコット編生地、ラッシェル編生地、ミラニーズ編
生地、ダブルトリコット編生地が好ましい。編物生地を
構成する糸としては紡績糸（加捻糸）が好ましい。編物
生地の糸の太さは綿紡績糸番手で表して約４０５から約
１５０Ｓ、好ましくは約６０ｓがら約１２ＯＳ相当の範
囲、または絹糸デニールで表して約３５Ｄから約１３０
Ｄ、好ましくは約４５Ｄから約９０Ｄ（７）範囲、ｔａ
物生地の編成工程時のゲージ数としては約２０から約５
０の範囲２編物生地の厚さは約１ｏｏ１．Ｉｒｒ！から
約６００Ｌｆｆ１１．好ましくは約１５０ｔＪＴｒＩか
ら約４０ＯＬｌ＋Ｔｌの範囲。

編物生地の空隙率は約４０％から約９０％、好ましくは
約５０％から約８５％の範囲である。

有機ポリマー繊維バルブ含有抄造紙としては。

特開昭５７−１４８２５０等に記載のポリエチレン繊維
だけのバルブからの抄造紙、およびポリエチレン繊維（
３０〜７０％）とセルロース繊維等の天然ｍ維の混合バ
ルブからの抄造紙が好ましい。紙の厚さは約８０ｕｍか
ら約４００１ＪＩＴ＋、好ましくは約１１００ｕから約
２５０旧の範囲２紙の空隙率は約２０％から約８０％、
好ましくは約５０％から約７０％の範囲である。

繊維質多孔性シートのうち織物生地および編物生地（以
下９両者をあわせて布ということがある）は水洗等の脱
脂処理により少なくとも糸製造時または布製造時に供給
または付着した油脂類を実質的に除去した布を用いる。

抄造紙およびカレンダー処理した抄造濾紙は油脂類を実
質的に付着していないものを用いる。繊維質多孔性シー
トは特開昭５７−６６３５９等に記載の物理的活性化処
理（好ましくはグロー放電処理、またはコロナ放電処理
）をその片面または両面に施すか、あるいは特開昭５５
−１６４３５６　、特開昭５７−６６３５９　、特開昭
５７−１４８２５０等に記載の界面活性剤、好ましくは
ノニオン性界面活性剤水溶液の含浸処理、塗布またはス
プレィ処理、親水性ポリマー水溶液の含浸処理、塗布ま
たはスプレィ処理、特開昭６０−２２２７７０に記載の
親水性セルロース誘導体とＨＬＢ値１０以上のノニオン
性界面活性剤の水溶液の含浸処理、塗布またはスプレィ
処理、これらの２種以上の処理等により多孔性接着によ
る下側の層との接着の強化、メータリング作用、ヘマト
クリット値対応のメータリング作用等をコントロールす
ることができる。

本発明の一体型多層分析要素において微貫通空隙構造接
着剤層により多孔性接着されて隣接する２層の非繊維質
多孔性シートのうち上側非繊維質多孔性シートは主に水
性）α体試料中の分析を妨害する非溶解性物質（例、全
血試料中の赤血球、白血球等の微粒子成分）を濾過する
作用、および光遮蔽作用を有する層として機能する。下
側非繊維質多孔性シートは光遮蔽作用を有する層、また
は試薬組成物の一部成分または全成分を含有保持する多
孔性試薬層として機能する。

非繊維質多孔性シートとじて特公昭５３−２１６７７　
。

米国特許３９９２１５８．米国特許１４２１３４１等に
記載のセルロースエステル、例えばセルロースアセテー
ト、セルロースブチレート、セルロースアセテートブチ
レート（混合エステル）、セルロースニトレート；セル
ロースエーテル、例えばエチルセルロース；炭酸エステ
ルポリマー、例えばビスフェノールＡのポリカルボネー
ト；ポリアミド、例えばポリカブラミド（６−ナイロン
）、ポリへキサメチレンアジボアミド（６，６−ナイロ
ン）等からなるメンブランフィルタ（プラッシュポリマ
一層）、第９回プラスチックフィルム研究会講座講演要
旨集（高分子学会、　１９８４年２月２２発行）＋　Ｍ
ｅｍｂｒａｎａ、　Ｉ　ｎｃ、カタログ（１９８２年７
月発行）等に記載のポリエチレン微多孔性膜、ポリプロ
ピレン微多孔性膜等のポリオレフィン微多孔性膜、特公
昭５３−２１６７７、米国特許３９９２１５８等に記載
のポリマーミクロビーズ、ガラスミクロビーズ、珪藻土
等の微粒子が親水性ポリマーバインダーに保持されてな
る連続微空隙含有多孔性層、特開昭５５−９０８５９に
記載のポリマーミクロビーズが水で膨潤しないポリマー
接着剤で点接触状に接着されてなる連続微空隙含有多孔
性Ｐｉ（三次元格子状粒状構造物Ｊｌ！り等の非繊維質
等方的多孔性層等を用いることができる。

微貫通孔構造接着剤により多孔性接着された２層の非繊
維質多孔性シートのかわりに特願昭６０−２３２７２６
に記載の多層塗布法または多層流延法により形成された
２層の高分子微多孔性層がその界面で密着一体化してな
る連続空隙構造の複合メンブランフィルタ（複合プラッ
シュポリマ一層）を用いることができる。

下側非繊維質多孔性シートの空隙サイズは約２０ｎｍか
ら約３０ＬＪｒ１１．好ましくは約５０ｎｍから約Ｉ　
Ｑ　（）ｍの範囲、空隙率は約２０％から約９０％、好
ましくは約４０％から約８５％の範囲、厚さは約２０ｕ
ｍから約５００ｕｍ、好ましくは約８０ｕｍから約３５
０ｕｍの範囲である。上側非繊維質多孔性シートの空隙
サイズ（平均最小孔径）は約０．８層ｍから約３０ｕｍ
＋好ましくは約１　、　Ｏｕｍ　ｈ）ら約１０ｕｍの範
囲、空隙率は約２０％から約９０％、好ましくは約４０
％から約８５％の範囲、厚さは約２０ｕｍから約５００
１．ＩｒＩ＋、好ましくは約８０ｕｍから約３５０ｕｍ
の範囲、上下２層の非繊維質多孔性シートの合計厚さは
約４０ｕｍから約５００ｔＪｍ、好ましくは約８０ｐｍ
から約３５０ｕｍの範囲が充分な測定感度を得るために
有利である。

非繊維質多孔性シート中には全血中のヘモグロビンの赤
色等の反射光学濃度測定の光学的妨害排除のために特公
昭５３−２１６７７　、米国特許３９９２１５Ｂ。

特開昭５５−９０８５９　、特願昭６０−２３２７２６
等に記載の方法に従って白色の難溶性二酸化チタン微粒
子、硫酸バリウム微粒子、黒色の難溶性カーボンブラッ
ク、白色のアルミニウム微粒子または微少フレーク等の
微粒子をいずれか１層または２Ｎに含有させて光反射層
または光遮蔽層としての機能を高めることができる。あ
るいはこれらの微粒子の分散液を非繊維質多孔性シート
に、好ましくは繊維質多孔性シートの接着される側と反
対側（下側）から浸透させ空隙の内部表面に付着含有さ
せる方法で同様の目的を達成することができる。微粒子
分散液にはゼラチン、ポリビニルアルコール、ポリアク
リルアミドのようなバインダを高分子アナライトの通過
を実質的に妨害しない範囲の含有量で含んでよい。これ
らの微粒子のうちでは二酸化チタン微粒子、硫酸バリウ
ム微粒子が好ましい。三次元格子状粒状構造物層を用い
る場合にはいずれかの微粒子が接着剤で点接触状に接着
されてなる三次元格子状粒状構造物層を用いることがで
きる。

２層の非繊維質多孔性シート層には公知の界面活性剤、
好ましくはノニオン性界面活性剤を含浸保持させること
ができる。界面活性剤の含浸保持により水性液体試料の
拡散、浸透９通過が均一になる。

本発明の多層分析要素においては蛋白分析用呈色試薬組
成物は支持体以外のいずれか１層又は２以上の複数層に
含有されている。呈色試薬組成物が含有される層の例と
して、実質的に親水性ポリマーパーインダ一層１ｒＦ！
！だけ、親水性ポリマーバインダ一層と下側非繊維質多
孔性シート層の２層。

親水性ポリマーバインダ一層と２層の非繊維質多孔性シ
ート層の３層がある。呈色試薬組成物はこれらのいずれ
かＩＦｊ、２層又は３Ｎにその全成分が含有されるよう
に配合できるほか、多層分析要素製造時又は使用（分析
操作の実施）前の保存時の呈色試薬組成物の特定の成分
の変質又は劣化による感度低下等の性能劣化を防ぐ目的
で特定の複数成分各々を別異の２Ｆ！以上の複数層にわ
けて含有させることができる。実質的に同じ呈色試薬組
成物の全成分が２層以上の複数層に含有される態様にお
いても、各層の試薬組成物の単位面積当りの含有量が実
質的に同一である態様と含有量が異なる態様とがある。

本発明の蛋白分析用多層分析要素に含有させる蛋白分析
用呈色試薬組成物として、水溶性第二銅塩、銅キレート
化剤及びアルカリ剤よりなるビウレット試薬組成物があ
る。アルカリ剤としては。

水酸化リチウム又は水酸化リチウムとほかのアルカリ性
化合物との混合物が好ましい。ビウレット試薬組成物の
具体例として、特開昭５４−１０１３９８に記載の水溶
性第二銅塩（例、硫酸第二銅）、銅キレート化剤（例、
実質的にナトリウムイオンを含まない酒石酸）、及び実
質的にナトリウムイオンを含まないアルカリ剤（例、水
酸化リチウム、水酸化カルシウム）よりなる実質的にナ
トリウムイオンを含まないビウレット試薬組成物、特開
昭５９−５１３５６に記載の水溶性第二銅塩（例、硫酸
第二銅）、銅キレート化剤（例、酒石酸、酒石酸カリウ
ムナトリウム）、アルカリ剤としてアリカリ金属水酸化
物（例、水酸化リチウム、水酸化ナトリウム）、アルカ
リ金属塩（例。

塩化ナトリウム、燐酸ナトリウム、酢酸すトリウム）、
アルカリ土類金属塩から選択される少なくとも２種以上
のアルカリ性混合物よりなるビウレット試薬組成物、特
願昭６０−１３２０５７に記載の水溶性銅塩（例、硫酸
鋼、塩化鋼、酢酸銅）、銅キレート化剤として酒石酸と
酒石酸ナトリウムの混合物、アルカリ剤として水酸化リ
チウムよりなるビウレット試薬組成物等がある。

ビウレット試薬組成物の各成分の量又は量比は次のとお
りである。水溶性第二銅塩の量はアナライトである蛋白
１ｇに対して約０．５ｇ〜約１０ｇの範囲。

銅キレート化剤の量比はモル比で水溶性第二銅塩の約０
．２倍〜約２倍の範囲、アルカリ剤は分析操作時にビウ
レット試薬組成物の周囲ｐＨを約１２．０以上に維持で
きる量で、水酸化リチウムの全アルカリ剤中にしめる量
比は約４５−ｔ％以上（水酸化リチウムだけでもよい）
、好ましくは約５０ｗｔ％〜約９５ｗｔ％の範囲である
。

試薬層は上述の蛋白分析用試薬組成物が耐アルカリ性の
非蛋白性親水性ポリマーバインダーに分散含有されてい
る層である。非蛋白性親水性ポリマーの具体例として特
開昭５４−１０１３９８．特開昭５９−１７１８６４、
特開昭６０−１１５８５９等に開示のアガロース。

プルラン、カルボキシメチルプルラン等のプルラン誘導
体、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、ポリ
−Ｎ−ビニル−２−ピロリドン、アクリルアミド−Ｎ−
ビニル−２−ピロリドンコポリマー等がある。これらの
非蛋白性親水性ポリマーは単独で。

あるいは２種以上を組合せて用いることができる。

試薬層には一般的にはアガロース、ポリアクリルアミド
、ポリビニルアルコール、アクリルアミド−Ｎ−ビニル
−２−ピロリドンコポリマー等の耐アルカリ性の非蛋白
性親水性ポリマーを用いるのが好ましい。

試薬層におけるビウレット試薬組成物の含有量は、バイ
ンダーポリマーに対して重量比で約１０％〜約５０％、
好ましくは約１５％〜約３０％の範囲である。試薬層の
乾燥時の厚さは約３１Ｊｍから約５０ｕｍ、好ましくは
約５１Ｊ′１１から約３０Ｌｆｆｎの範囲、被覆量では
約３３／ｍ２から約５０ｇ／１Ｔ１２．好ましくは約５
ｇ／ｍ２から約３０ｇ／ｍ２の範囲である。試薬層には
公知の界面活性剤。

特にノニオン性界面活性剤を含有させることができる。

試薬層は実質的に透明であることが好ましいが、必要に
応じて試薬層中に二酸化チタン微沖子、硫酸バリウム微
粒子、カーボンブラック等を少量分散含有させて光学的
性能を調節することができる。ビウレット試薬組成物を
含有する試薬層は前述の諸特許明細書の記述に従フて設
けることができる。

多孔性シートを多層分析要素に組こむ前に多孔性シート
にビウレット試薬組成物を含有保持させる方法の例とし
て、多孔性シートをビウレット試薬組成物水溶液又は有
機溶媒含有溶液に浸漬し。

多孔性シートを溶液から取りだし、乾燥（好ましくは減
圧乾燥、減圧凍結乾燥）させる方法がある。

多層分析要素に組みこまれた多孔性層にビウレット試薬
組成物を含有保持させる方法の例として。

特開昭５９−１７１８６４．特開昭６０−２２２７６９
　、特開昭６０−２２２７７０等に記載のように、接着
層又は吸水層等の上に多孔性層を設けた後、多孔性層の
上から改良ビウレット試薬組成物含有水溶液又は有機溶
媒含有溶液を塗布し乾燥（好ましくは減圧乾燥）させる
方法がある。

暇■至亘 試薬層と支持体の間には吸水層を設けることができる。

吸水層は水を吸収して膨潤する非蛋白性親水性ポリマー
を主成分とする層で、吸水層の界面に到達または浸透し
た水性液体試料の水を吸収できる層であり、全血試料を
用いる場合には水性液体成分、血漿の下側非１　相貫多
孔性シート（ビウレット試薬組成物を含有する場合には
多孔性試薬層として機能する）への浸透を促進する作用
を有している。吸水層に用いられる親水性ポリマーは水
吸収時の膨潤率が３０℃で約１５０％から約２０００％
、好ましくは約２５０％から約１５００％の範囲の非蛋
白性親水性ポリマーである。非蛋白性親水性ポリマーの
具体例として前述の試薬層に用いられるのと同様な非蛋
白性親水性ポリマーがある。これらの非蛋白性親水性ポ
リマーは単独で、あるいは２種以上を組合せて用いるこ
とができる。吸水層には一般的にはアガロース、ポリア
クリルアミド。

ポリビニルアルコール、アクリルアミド−Ｎ−ビニル−
２−ピロリドンコポリマー等の耐アルカリ性の非蛋白性
親水性ポリマーを用いるのが好ましい。

吸水層の乾燥時の厚さは約２ｕｍから約ｔｏｏｕｍ＋好
ましくは約５ｕｍから約３０ｕｍの範囲、被覆量では約
２ｇ／ｍ２から約１００ｇ／ｍ”、好ましくは約５ｇ７
ｍ２から約３０ｇ／ｍ２の範囲である。吸水層には公知
のｐ＋＋緩衝剤。

塩基性ポリマー等を含有させて使用時（分析操作実施時
）のｐｌ＋を調節することができる。さらに吸水層には
公知の媒染剤、ポリマー媒染剤等を含有させることがで
きる。吸水層は実質的に透明であることが好ましいが、
必要に応じて吸水層中に二酸化チタン微粒子、硫酸バリ
ウム微粒子、カーボンブラック等を少量分散含有させて
光学的性能を調節することができる。

光透過性水不透過性支持体としては従来公知の多層分析
要素に用いられている光透過性（透明な）水不透過性支
持体を用いることができる。その具体例としてはポリエ
チレンテレフタレート、ビス°フェノールＡのポリカル
ボネート、ポリスチレン。

セルロースエステル（例、セルロースジアセテート、セ
ルローストリアセテート、セルロースアセテートピロビ
オネート等）等のポリマーからなる厚さ約５０Ｌｆｆｒ
ｌから約１ｍｍ　、好ましくは約８０−から約３００−
の範囲の透明な、すなわち波長約２００ｎｍから約９０
０ｎｍの範囲内の少なくとも一部の波長範囲の電磁！Ｗ
　！！１線を透過させる平滑な表面を有するフィルム状
（シート状）または平板状の支持体を用いることができ
る。支持体中には必要に応じて二酸化チタン微粒子、硫
酸バリウム微粒子、カーボンブラック等を分散含有させ
て光学的性能を調節することができる。支持体の表面に
は必要に応じて公知の下塗層または接着層を設けて支持
体の上に設Ｃｊられる試薬層又は吸水層と支持体との接
着を強固にすることができる。

本発明の多層分析要素においては繊維質多孔性シートと
２層の非繊維質多孔性シートとの間で上側から下側に水
性液体の均一通過が円滑に行われるようにこれらの多孔
性シートは相互に微貫通空隙構造（または微貫通孔構造
）の接着剤層により実質的に密着して接着して一体化（
多孔性接着又は微多孔性接着）される。本明細書におい
て、水性液体の均一通過とは、連続微空隙を有する繊維
質多孔性シートの上側表面に点着供給された水性液体が
その連続微空隙のメータリング作用により拡散されその
層の下側表面に達した分布状態を実質的に保ったまま隣
接する上側非繊維質多孔性シートの上側表面に水性液体
が通過すること、または上側非繊維質多孔性シートの下
側表面に達した水性液体がその分布状態を実質的に保っ
たまま隣接する下側非ｉ相貫多孔性シートの上側表面に
水性液体が通過することを意味する。

微貫通空隙構造の接着剤層としては９例えば印刷におけ
る網点と同じように円、方形、星形、不定形等のドツト
状の接着剤が整然と配列されたもの、平行状細線（波型
または直線）形、交叉細線（波型または直線）形に配列
されたもの（この場合。

微貫通孔構造接着剤層になる）、スクリーンレスドツト
（砂目状パターン）のように微視的にはドツトの形、大
きさ、配列はランダムであるが巨視的には均一性が感じ
られるように配列されたもの等の部分的配列のいずれか
になるように配置された接着剤Ｎを用いるられる。単位
面積当りの接着剤のドツトや線が占める総面積の比率、
すなわち接着剤面積率は、印刷における網点面積率（日
本印刷学会−「印刷工学便覧Ｊ１９８３年発行、　２６
２−２６３頁）と同様の定義により、約８０％以下、好
ましくは約５０％以下、最も好ましくは約５％から約２
０％の範囲である。接着剤のドツト径または線の太さは
、約５０…から約１ｍｍの範囲で接着力が損なわれない
範囲で小さいことが望ましい。接着剤ドツトまたは線の
相互間隔は、約３０Ｌｆｆｎから約３ｍｍの範囲で接着
される２枚の多孔性シートの対向する２表面の開に毛細
間隙ができない範囲で実験により決めることが出来る。

接着剤としては液状接着剤、非ニユートン粘性の液体接
着剤、ホットメルト型（熱融解型）接着剤等を用いるこ
とができる。液状接着剤としては粘度約１０００ｃｐｓ
以上で延糸性の少ない接着剤が、多孔性シートの表面に
局在し、多孔性シートの内部方向への侵入の少ない点で
好ましい。その具体例としてポリビニルアルコール水溶
液、デキストリン水溶液、カルボキシメチルセルロース
水溶液がある。非ニユートン粘性の液体接着剤としては
固体微粒子等を適宜混合して非ニユートン粘性を付与さ
れた）α体接着剤が好ましい。その具体例として澱粉糊
、メチルセルロース添加澱粉糊、酢酸ビニル−ブチルア
クリレートコポリマー水性エマルジョンがある。ホット
メルト型接着剤としては温度約５５°Ｃ以下で固体状の
接着剤が好ましい。その具体例としてエチレン−酢酸ビ
ニルコポリマー。

エチレン−イソブチルアクリレートコポリマーがある。

ホットメルト型接着剤は糸状、細毛糸状。

顆粒状、微粒子状、粉状等のものを適宜選択して用いる
ことができる。

接着剤の部分的存在パターン、すなわち網点状パターン
、平行状細線（波型または直線）形パターン、交叉細線
（波型または直線）形パターン、砂目状パターン等を形
成する好ましい方法として印刷方式による方法がある。

印刷方式として、凹版またはグラビア版により直接多孔
性シートの表面に接着剤パターンを形成する方法、オフ
セット印刷方式で一度ゴムローラー、ｆａ型紙等の上に
接着剤パターンを移し取り、ざらにこの接着剤パターン
を多孔性シートの表面に移す方法、ポリエチレンテレフ
タレート紗スクリーンまたはメタルスクリーンを通して
スクリーン印刷方式により直接またはオフセット方式で
多孔性シートの表面に接着剤パターンを形成する方法等
がある。ホットメルト型接着剤を用いる場合にはこれら
の方法は接着剤の融解温度より高い温度で実施すること
ができる。

接着剤の部分的存在パターンを形成する池の方法として
、仮支持体の表面に固体微粒子等を適宜混合して非ニユ
ートン粘性を付与された液体接着剤の薄層を塗布形成し
、その上にメンブランフィルタまたは抄造紙を一様に重
ねた後すぐにこれを剥離することによりメンブランフィ
ルタまたは抄造紙の表面に印刷におけるスクリーンレス
ドツト状の接着剤パターンを形成する方法がある。

接着剤の部分的存在パターンを形成する池の方法として
、仮支持体の表面に接着剤の薄層を塗布し、その上に織
物生地または編物生地のような規則的な微細凸凹表面の
多孔性シートを一様に重ねた後すぐにこれを剥離するこ
とにより織物生地または編物生地の布目の山部（糸の山
部）だけに点状に接着剤を付着させ、この多孔性シート
を他の平滑な表面の多孔性シート（メンブランフィルタ
等）に貼りあわせて密着一体化（多孔性接着）する方法
がある。

接着剤の部分的存在パターンを形成する池の方法として
、繊維質多孔性シート全体を接着剤溶液中に浸漬し、シ
ートを溶液から取り出し、シートを圧搾して接着剤溶液
を紋り出し、繊維の表面だけに接着剤が付着している状
態にし、繊維質多孔性シートを他の平滑な表面の多孔性
シート（メンブランフィルタ等）に貼りあわせて密着一
体化（多孔性接着）する方法がある。

このようにして表面に接着剤の部分的存在パターンが形
成された多孔性シートを他の（表面に接着剤パターンの
形成されていない）多孔性シートに重ねあわせ（ホット
メルト型接着剤を用いる場合には接着剤の融解温度より
高い温度で）実質的に一様な軽い圧力を加えて対向する
多孔性シートを密着させることにより多孔性シートは相
互に微貫通空隙構造（または微貫通孔構造）の接着剤層
により実質的に密着して接着され一体化する（本明細書
では、これを多孔性接着又は微多孔性接着ということが
ある）。多孔性接着は多孔性シート相互間、多孔性シー
トと非多孔性シートの間、非多孔性シート相互間いずれ
の接着にも適用できる。

本発明の一体型多層分析要素においては、必要に応じて
さらにｌＮ以上の繊維質多孔性シート又は非繊維質多孔
性シートを多孔性接着して設けることができるほか、さ
らに必要に応して前述の諸特許明細書等に記載の諸種の
機能層９例えば、光遮蔽層又は光反射Ｎ（バックグラウ
ンド層）、第２吸水層等を適宜選択して設けることがで
きる。

本発明の蛋白分析用一体型多層分析要素は全血試料に特
に有用であるが、他の水性液体試料９例えば血漿、血清
、尿、髄液９食品、飲料等にも適用できる。

本発明の総蛋白分析用多層分析要素の−具体例である実
施例１の分析要素では、上から順にトリコット編物生地
からなる繊維質多孔性シー）（１）。

セルロースアセテートメンブランフィルタからなる上側
非繊維質多孔性シー）（２）、セルロースアセテートメ
ンブランフィルタからなる下側非繊維質多孔性シート（
３）、ビウレット試薬組成物がアクリルアミド−Ｎ−ビ
ニルピロリドンコポリマー（耐アルカリ性バインダー）
に分散含有されている試薬層（４）がポリエチレンテレ
フタレート透明フィルムからなる光透過性水不透過性支
持体（５）の上に接着された構成の一体型多層分析要素
で、多孔性シー）（１）−（２）間、多孔性シート（２
）　−（３）間が網点状に配置された澱粉糊で多孔性接
着され−ｔ；Ｈヒされている。繊維質多孔性シー）（１
）は主としてメータリング作用を有し、非繊維質多孔性
シートク２）と（３）は主として血球類濾過作用と光遮
蔽作用を有し２試薬Ｎ（４）は全血試料中の水を吸収し
て水性液体成分の非繊維質多孔性シート（２）と（３）
への移行を促進する作用を有する吸水層と呈色層をも兼
ねている。

本発明の総蛋白分析用釜・層分析要素の別の一具体例で
ある実施例２の分析要素では下側非繊維質多孔性シート
（３）がポリプロピレン微多孔性シートである他は実施
例１と同様な総蛋白全定量用多層分析要素であって９強
アリカリ性のビウレット試薬組成物含有試薬層に隣接す
る多孔性シートが強アルカリに対して安定なポリプロピ
レンからなるので、多層分析要素の保存安定性が改善さ
れる。

即ちシェルフライフが長くなる効果がある。

本発明の多層分析要素は一辺約１５ｍｍから約３０ｍｍ
の正方形またはほぼ同サイズの円形等の小片に裁断し、
特公昭５“７−２８３３１　、実開昭５６−１４２４５
４　、特開昭５７−６３４５２．実開昭５８−３２３５
０．特表昭５８−５０１１４４等に記載のスライド枠に
収めて蛋白分析用スライドとして用いることが　ｉｌ造
、包装、輸送、保存、測定操作等諸種の観点で好ましい
。使用目的によっては。

長いテープ状でカセットまたはマガジンに収めて用いる
こと、または小片を開口のあるカードに貼付または収め
て用いることなどもできる。

本発明の多層分析要素は前述の諸特許明細書等に記載の
操作により液体試料中の被検成分の分析を実施できる。

すなわち約５μｍから約５０．１　、好ましくはｓｐ＋
から３０ｕ１の範囲の全血、血漿、血清等の水性液体成
分滴を展開層に点着し、１分から１０分の範囲で、約２
０℃から約４０°Ｃの範囲の実質的に一定の温度で、好
ましくは３７°Ｃ近傍の実質的に一定の温度でインクベ
ーションし、光透過性支持体側から波長約４００ｎｍか
ら約７００ｎｍの範囲の可視光を用いて呈色試薬組成物
含有層又は吸水層の光学濃度を反射測光し、予め作成し
た検量線を用いて比色測定法の原理により液体試料中の
蛋白含有量を求めることができる。点着する水性液体試
料の量。

インクベーション時間と温度は一定にすることにより被
検成分である蛋白の定量分析を高精度で実施できる。こ
の測定操作は特開昭５６−７７７４６　、特開昭５８−
２１５６６、特開昭５８−１６１８６７等に記載の化学
分析装置により極めて容易な操作で高精度の測定をする
ことができる。

図工Σ亘 実施例１ グロー放電処理された厚さ１８０−の無色透明ポリエチ
レンテレフタレー）（ＰＥＴ）支持体の上に乾燥後の層
厚が４０−になるように下記組成の総蛋白分析用試薬組
成物溶液を塗布し乾燥させた。

へ　　　　　！・ｍの、１ 水　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　（３０ｇポリオキシジエチレンラウリル硫酸 ナトリウム５０％水溶液　　　　　　　　４０ｇ硫酸銅
５水塩　　　　　　　　　　　　１５０８酒石酸　　　
　　　　　　　　　　　　　１００ｇ酒石酸ナトリウム
　　　　　　　　　　　１５呂水酸化リチウムｌ水塩　
　　　　　　　２００ｇアクリルアミド−Ｎ−ビニルと
ロリドンコボリマー（組成比１　：　１　）２０％水溶
液（４０℃における粘度的４００ｃｐｓ）　　　　２０
００ｇ乾燥後の試薬層の表面を約２５℃の水でほぼ一様
にぬらした後、下側非繊維質多孔性シートとして最小゛
孔径３．Ｏｕｍ、厚さ約１４０ｔｎｎ、空隙率的８０％
のセルロースアセテートメンプラノフィルタをラミネ−
トし、乾燥させて試薬層とメンブランフィルタを密着一
体化させた。

次に５０メツシユの網点（網点面積率約２０％）を通し
てスクリーン印刷法で澱粉糊を下側メンブランフィルタ
の表面に固形成分約３　ｇｅｍ２の割合で付着させ、直
ちに上側非繊維質多孔性シートとして最小孔径３．０Ｌ
Ｉｒｒｌ、厚さ約１４０ｕｍ、空隙率約８０％のセルロ
ースアセテートメンブランフィルタをラミネートし、澱
粉糊を乾燥させて２枚のメンブランフィルタを多孔性接
着して密着一体化させた。ついで同様にして上側メンブ
ランフィルタの上に１０ＯＳ相当のＰＥＴ紡績糸からな
る厚さ約２００ｐｍのトリコット編物生地を多孔性接着
して密着一体化させた。このようにして３層の多孔性シ
ートが多孔性接着された総蛋白型定量用一体型多層分析
要素を調製した。

別に、ヘマトクリット値４３％、血漿総蛋白含有量７．
２ｇ／旧と検定された全血試料、および前記全血を遠心
して血漿と血餅を分離し、血漿の一部を等容積の生理食
塩水又は１５％ヒトアルブミン含有生理食塩水でおきか
え、再び分離した血餅と混合してヘマトクリット値４３
％、血漿総蛋白含有量（検定値）　１．８　；　３．３
　；　５．７　；　８．５　；　１０．Ｏｇ／ｄ＋のコ
ントロール全血試料を用意した。

次にこれらの全血試料とコントロール全血試料それぞれ
の２０　ｕｌを上記の多層分析要素のトリコット編物生
地層の上に点着し、３７℃で６分インクヘーションし、
中心波長５４０ｎｍの可視光でＰＥＴ支持体側から要素
中の呈色を反射測光して第１表に記載の結果を得た。

第　　１　　表 総蛋白含有量 ｇ／ｄｌ　　１．８　３．３　５．７　．７．２　　Ｂ
、５　１０．０反射光学濃度値 ０．９１０１．０２９１．２３４１．３０８１．３５８
１．４１２第１表の結果から本発明の総蛋白型定量用一
体型多層分析要素においては検量線の勾配が比較的大き
く、総蛋白量の定量精度が高いことが明らかである。こ
れは全血試料中のアナライトであるアルブミン等の蛋白
が試薬層へ速やかに充分な量浸透するため呈色反応が充
分に進行するためと推定される。

実施例２ 下側非繊維質多孔性シートとしてオクチルフェノキシポ
リエトキシエタノール（オキシエチレン単位平均１０含
有）２％水溶液に浸漬し乾燥させた最小孔径的３．０層
ｍ、厚さ約１４０　ｕｍ　＋空隙率約８０％のポリプロ
ピレン微多孔性膜（メンブランフィルタ）を用いたほか
は実施例１と同様にして３層の多孔性シートが多孔性接
着された総蛋白定量用一体型多層分析要素を調製した。

得られた要素について実施例１と同様の全血試料とコン
トロール全血試料を用いて実施例１と同様にして評価し
て、実施例１とほぼ同等の結果を得た。

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. （１）光透過性水不透過性支持体の上に、順に、水溶性
   第二銅塩、銅キレート化剤及びアルカリ剤を含む蛋白分
   析用呈色試薬組成物を分散含有する耐アリカリ性親水性
   ポリマーバインダーからなる試薬層、下側非繊維質多孔
   性シート、上側非繊維質多孔性シート、及び繊維質多孔
   性シートが一体に積層されてなり、前記３層の多孔性シ
   ートはそれぞれその隣接する２面の間において液体の均
   一通過が実質的に妨げられないように微貫通空隙を構成
   するように部分的に配置された接着剤により実質的に密
   着して接着され一体化されていることを特徴とする蛋白
   分析用一体型多層分析要素。
2. （２）前記部分的に配置された接着剤が網点状、交叉線
   状、並列線状または砂目状に配置された接着剤である特
   許請求の範囲１に記載の分析要素。
3. （３）前記試薬層と前記支持体との間に親水性ポリマー
   を含有する吸水層が設けられている特許請求の範囲１に
   記載の分析要素。
4. （４）前記下側非繊維質多孔性シートにも前記呈色試薬
   組成物が含有されている特許請求の範囲１に記載の分析
   要素。
5. （５）前記呈色試薬組成物がビウレット試薬組成物であ
   る特許請求の範囲１に記載の分析要素。
6. （６）前記アルカリ剤が分析操作時に前記ビウレット試
   薬組成物の周囲ｐｈを約１２．０以上に維持できるアル
   カリ剤である特許請求の範囲５に記載の分析要素。
7. （７）前記水溶性第二銅塩が硫酸第二銅、前記アルカリ
   剤が水酸化リチウム、前記銅キレート化剤が酒石酸及び
   酒石酸ナトリウムである特許請求の範囲６に記載の分析
   要素。
8. （８）前記水溶性第二銅塩が硫酸第二銅、前記アルカリ
   剤が実質的にナトリウムイオンを含まない水酸化リチウ
   ム、前記銅キレート化剤が実質的にナトリウムイオンを
   含まない酒石酸である特許請求の範囲６に記載の分析要
   素。