JPH01185445A

JPH01185445A - 全血分析要素

Info

Publication number: JPH01185445A
Application number: JP63010452A
Authority: JP
Inventors: Shigeru Nagatomo; 茂長友; Mitsutoshi Tanaka; 光利田中
Original assignee: Fuji Photo Film Co Ltd
Current assignee: Fujifilm Holdings Corp
Priority date: 1988-01-20
Filing date: 1988-01-20
Publication date: 1989-07-25
Anticipated expiration: 2010-03-29
Also published as: JPH0726959B2; US5023052A

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】［産業上の利用分野］本発明は、生物体液中、たとえば血液中の特定物質の定
量に用いる乾式化学分析要素に関する。

［従来技術とその欠点］体液中に存在する各種代謝成分、　例えばグルコース、
とリルビン、尿素窒素、尿酸、コレステロール、乳酸説
水素酵素、クレアチンキナーゼ、ＧＯＴ−ＧＰＴ等の定
量分析は、臨床医学上重要で、疾患の診断、治療経過の
追跡、予後の判定などに不可欠である。血液等を試料と
する臨床化学検査では、微量の液体試料で、精度の高い
検査を行うことができることが望ましい、従来、溶液試
薬を用いる湿式法が広く用いられているが、迅速性に欠
ける。

乾式化学分析、すなわち実質的に乾燥状態の分析要素、
例えば、試験片や多層分析要素中に、分析試薬系を導入
した臨床分析法が知られている。

乾式化学分析は湿式法による化学分析（即ち、溶液中に
試薬を用いる方法）より、例えば使用上の簡易性、経済
上の節約及び分析の迅速さなどの点で優れている。乾式
多層分析要素は、微量の液体試料で、精度の高い検査を
迅速に行うことができる分析手段として、開発された。

乾式多層分析要素は例えば、特公昭５３−２１６７７号
、特開昭５５−１６４３５６号、特開昭６０−２２２７
６９号等で知られている。

乾式多層分析要素の一例を挙げれば、透明支持体、試薬
層、反射層−展開層から構成されている。透明支持体は
、例えば下塗り処理を施した薄いプラスチックフィルム
である。透明支持体の上に塗布された試薬層には、液体
試料中に含まれる被検成分と反応し、その成分量に応じ
た光学濃度に発色する試薬が含まれる０反射層は、試薬
層に入射した光が展開層に達するのを防ぎ、試薬層の光
学測定の際展開層に点着した液体試料の影響を受けない
ようにする役割を持つ、展開層は、点着された液体試料
を均一に、液の量にほぼ比例する面積に広げる。このよ
うな乾式分析要素を用いて定量分析するには、液体試料
、例えば全血を展開層の表面に一定量滴下する。展開層
で展開された血液は、反射層を通って試薬層に達し、こ
こで試薬と反応し、発色する。点着後、化学分析スライ
ドを適当な時間、一定温度に保って発色反応を充分に進
行させた後、透明支持体側から照明光を試薬層に照射し
、特定波長域で反射光量を測定して反射濃度を求め、予
め求めておいた検量線に基づいて定量分析を行う。

従来、湿式法、乾式化学分析いずれにおいても、赤血球
を除去した血清または血漿を試料として分析が行なわれ
ることが多かった。しかし血液の他の成分から赤血球を
分離する操作には多くの労力と装置のコストを伴うので
、未希釈の全血で分析できることが望ましい。

全血を試料として乾式化学分析を行うには、血球（赤血
球及び白血球〉及び全血の他の高分子量成分を、分析要
素中で何らかの手段で分離しなければならない、特公昭
５３−２１６７７号には、血球および全血の高分子量成
分を、分析要素中で分離するために、ろ過層を設けるこ
とを開示している。

しかし、特開昭６０−１１１９６０号に記載されている
ように、免式分析要素に設けたろ過層により血清または
血漿から血球成分を除去する場合には非常に時間がかか
り、また血漿または血清中の分析物質の一部がろ過層中
で失われて、分析が不正確になるおそれがあった。

赤血球による妨害を回避するために、全血中の赤血球を
分析要素中で血漿から分離除去し、しかも血漿中の被検
成分の試薬層への拡散が速やかに行なわれる、全血試料
中の特定成分の分析に有用な乾式分析要素が、特願昭６
０−２７９８６０号で提案された。この分析要素は、第
１の非繊維質多孔性層、第２の非繊維質多孔性層、繊維
質多孔性層がこの順に一体に積層されており、前記３層
の多孔性層がそれぞれ隣接する面の間で、液体の均一透
過が実質的に妨げられないような微少貫通部を形成する
ように部分的に配置された接着剤により実質的に密着し
て接着されて一体化されている、多層分析要素であり、
発色を生ずる試薬組成物は前記３層の多孔性層のいずれ
かに含まれ、第２の非繊維多孔性層の平均有効孔径を０
．８μ鴫から３０μ鴫としたものである。

しかし、この多層分析要素を用いて全血の分析を行うと
き、試薬組成物から生ずる色素の分光吸収、特に検出に
利用される波長が血液中のヘモグロビンの分光吸収に接
近しているとき、試料皿の点着ｌや展開層での分布によ
って、分析結果が影響され易い、また血液のへマドクリ
ット値（血液中に占める血球の容積百分率）の大小によ
り、血漿中の成分含量が同じ血液でも、分析結果に差が
出ることが経験された。

［解決しようとする技術的課題］本発明は、分析要素中で全血中の赤血球を血漿から分離
除去して赤血球による妨害を回避し、しかも血漿中の被
検成分の試薬層への拡散が速やかに行なわれ、全血試料
中の特定成分を血液のへマドクリット値に拘わらず高い
精度で分析することができる乾式分析要素の提供を、技
術的課題とする。

〔技術的課題の解決手段〕

上記技術的課題は、水不透過性、光透過性支持体の上に
、第１の非繊維質多孔性層、第２の非繊維質多孔性層、
繊ｍ質多孔性層がこの順に一体に積層されており、前記
３層の多孔性層が互いに、液体の均一透過が実質的に妨
げられない程度に微少貫通部を形成するよう部分的に配
置された接着剤により、接着されており、被検成分の存
在下に検出し得る光学的変化を生ずる試薬組成物が前記
非繊維質多孔性層の少なくとも１つに含まれ、前記光学
的変化は前記第１の非繊維質多孔性層において検出し得
る多層分析要素であって、第１の非繊維質多孔性層がポ
リスルホンから成ることを特徴とする一体型多層分析要
素により、解決された。

前記分析要素において、前記試薬組成物が第１の非繊維
質多孔性層に含まれるとき、上記技術的課題は、より好
ましく達成された。

上記技術的課題はまた、水不透過性、光透過性支持体の
上に、水浸透性層、第１の非繊維質多孔性層、第２の非
繊維質多孔性層、繊維質多孔性層がこの順に一体に積層
されており、前記３層の多孔性層が互いに、液体の均一
透過が実質的に妨げられない程度に、微少貫通部を形成
するよう部分的に配置された接着剤により接着されてお
り、被検成分の存在下に検出し得る光学的変化分生ずる
試薬組成物が前記水浸透性層および非繊維質多孔性層の
少なくとも１つに含まれ、前記光学的変化は少なくとも
前記水浸透性層において検出し得る多層分析要素であっ
て、前記第１の非繊維質多孔性層がポリスルホンから成
ることを特徴とする一体型多層分析要素により、解決さ
れた。支持体と第１の非繊維質多孔性層の間にある上記
水浸透性層は、多孔性層であってもよいが、無孔性層で
あることが好ましい。

上記分析要素（後者の）において、前記試薬組成物が水
浸透性層および第１の非繊維質多孔性層の少なくとも一
つに含まれるとき、上記技術的課題は、より好ましく達
成された。

［発明の異体的構成の詳細］本発明の一体型多層分析要素は水不浸透性支持体と第２
の非繊維質多孔性層の間に設けられた第１の非繊維質多
孔性層がポリスルホンから成ることを特徴とする。

ポリスルホンはポリサルホン、ポリサルホン樹脂とも呼
ばれて、よく知られている〈例えば化学工業日報社刊ｒ
９２８５の化学商品」、第６６５ページ）０本発明に用
いるポリスルホンは、芳香族系ポリスルホン、オレフィ
ン系ポリスルホン、いずれでもよいが、前者が好ましい
、芳香族系ポリスルホンには、４，４°−ジヒドロキシ
ジフェニルスルホンの縮重合体、すなわち４−（４’−
オキシフェニレンスルホニル）フェニル基の連結体く下
記構ｊΔ式１　”）　、４．４°−ジオキシジフェニル
スルホンとジフェニルメタンの連結体の重合体く下記構
造式ＩＩ）　、４，４°−ジオキシジフェニルスルホン
とビフェニルの連結体の重合体（下記構造式■）等が知
られている。

（ｎは３０ないし５００）ＩＩ：（ｎは５０ないし５００） ■：（ｎは５０ないし５００）例えば、ユニオンカーバイド社（米国）または日産化学
（株）の「ユーデルボ１月ナルホン」、アイシーアイ　
ジャパン（株）の「ポリエーテルサルホン」、カーポラ
ンダム社（米ｒ５）の“＾５ｔｒｅ１゜（アストレル）
等が知られており、これらを用いことができる。

ポリスルホンから成る微多孔性膜は、例えば特開昭６２
−２７００６号に記載された方法で形成することができ
る。

第２の非繊維多孔性層としては、特公昭５３−２１６７
７号、米国特許１，４２１，３４１号等に記載されたセ
ルロースエステル類、例えば、セルロースアセデート、
セルロースアセテート／ブチレート、硝酸セルロースか
らなるプラッシュ・ポリマーの層が好ましい、６−ナイ
ロン、６，６−ナイロン等のポリアミド、ポリエチレン
、ポリプロピレン等の微多孔性膜でもよい。特開昭６２
−２７００６号に記載されたポリスルホンから成る微孔
性膜でもよい、その他、特公昭５３−２１６７７号、特
開昭５５−９０８５９号等に記載された、ポリマー小粒
子、ガラス粒子、けい藻土等が親水性または非吸水性ポ
リマーで結合された連続空隙をもつ多孔性層も利用でき
る。しかし上記のうち溶血を起こす材料は、試料血液中
の赤血球をｒａ壊し、ヘモグロビンの試薬層への透過を
許すので、好ましくない。

第１と第２の非繊維多孔性層の厚さは同じでも、異なっ
てもよく、５０ないし５００μｍ、好ましくは８０ない
し２００μｍである。

第１と第２の非繊維多孔性層の孔径は同じでも、異なっ
てもよい。しかし第１の非繊維多孔性層の有効孔径は、
大きくても第２の非繊維多孔性層の有効孔径の３倍を越
えないことが好ましい。また第２の非繊維多孔性層の有
効孔径は０．８μｍ口から３０μｒｎであることが好ま
しい。

本明細書で非繊維多孔性層の有効孔径は、ＡＳＴＭ　　
Ｆ３１６−７０に準拠した限界泡王法（バブルポイント
法）により測定した孔径で示す。非繊維多孔性層が相分
離法により作られたいわゆるプラッシュ・ポリマーから
成るメンブランフィルタ−である場合、厚さ方向の液体
通過経路は、膜の製造の際の自由表面側（即ち光沢面）
で最も狭くなっているのが普通で、液体通過経路の断面
を円に近似したときの孔径は、自由表面の近くで最も小
さくなっている。単位の通過経路における厚さ方向に関
する最小孔径は、さらにフィルターの面方向について分
布を持っており、その最大値が粒子に対するろ（濾）過
性能を決定する。通常、それは限界泡圧法で測定される
。

前に述べたように、相分離法により作られたいわゆるプ
ラッシュ・ポリマーから成るメンブランフィルタ−では
、厚さ方向の液体通過経路は膜の製造の際の自由表面側
（即ち光沢面）で最も狭くなっており、本発明の分析要
素においてこの種の膜を用いる場合には、第１の非繊維
多孔性層の支持体に近い側にメンブランフィルタ−の光
沢面を向けることが好ましい。第２の非繊維多孔性層も
、支持体に近い側にメンブランフィルタ−の光沢面を向
けることが好ましい。

第２の非繊維質多孔性層を第１の非繊維質多孔性層の上
に固定するには、接着剤を用いることができるが、液体
の均一透過が実質的に妨げられないようにする必要があ
る。そのためには、接着剤を部分的に配置し、接着剤が
存在しない部分に微少貫通部が形成されるようにする。

その方法として特開昭８２−１３８７５６号（特願昭６
０−２７９！ｌ’５９号）に記載された方法が有用であ
る。繊維質多孔性層を第２の非繊維質多孔性層の上に固
定するにも同様の方法を用いることができる。

第１の非繊維多孔性層の空隙体積（単位面積当たり。以
下同じ）は、第２の非繊維多孔性層の空隙体積より小さ
くすることが好ましく、それには両者の空隙率を同じに
して、前者の厚さを後者より小さくしてもよいし、両者
の厚さを同じとして、前者の空隙率を小さくしてもよい
、厚さと空隙率の組み合わせで、両者の空隙体積の関係
を規制してもよい、第２の非繊維質多孔性層に用いるも
のと同じ膜を、適当な溶剤で処理することによって、空
隙率を必要なだけ小さくすることもできる。

本発明の分析要素は種々の構成を有することができる０
例えば、米国特許３，９９２，１５８号、特開昭５５−
１６４３５６号、特開昭６２−１３８７５６号、同一１
３８７５７号、同一１３８７５８号（特願昭６０−２７
９８５９号、同一２７９８６０号、同一２７９８６１号
）の記載を参考にできる。実用的には例えば、（１）支持体の上に、第１非繊維多孔性層、第２非繊維
多孔性層、繊維質多孔性層をこの順に、（２）支持体の
上に、接着層（または吸水層）、第１非繊維多孔性層、
第２非繊維多孔性層、繊維質多孔性層を、この順に、（３）支持体の上に、検出層、第１非繊維多孔性層、第
２非繊維多孔性層、繊維質多孔性層を、この順に、（３）支持体の上に、試薬層（試薬組成物の一部を含む
）、第１非繊維多孔性層、第２非繊維多孔性層、繊維質
多孔性層を、この順に、それぞれ有するものが、有用である（支持体は下塗り層
を含んでいてもよい）、検出層は一般に、被検成分の存
在下で生成した色素等が拡散し、光透過性支持体を通し
て光学的に検出され得る層で、親水性ポリマーにより構
成することができる。検出層は、本発明の分析要素にお
ける水浸透性層が試薬の少なくとも一部を含まない場合
に相当する。

媒染刑、例えばアニオン性色素に対してカチオン性ポリ
マーを、含んでもよい。吸水層は一般に、被検成分の存
在下で生成する色素が実質的に拡散しないような層を言
い、膨潤しやすい親水性ポリマーにより構成することが
できる。

第１非繊維多孔性層と第２非繊維多孔性層の間には、さ
らに他の非繊維または繊維質で４孔性層、あるいは無孔
性層をを設けることができる。

試薬層と第１非繊維多孔性層との間に、妨害物除去層、
気体透過層、光反射層等を設けてもよい。

また検出層と第１非繊維多孔性層との間に、妨害物除去
層、光反射層等を設けてもよい。

光透過性水不透過性支持体の材料として好ましいものは
ポリエチレンテレフタレートである。セルローストリア
セテート等のセルロースエステル類でもよい、親水性層
を強固に接着させるため通常、下塗り層を設けるか、親
水化処理を施す。

試薬組成物は、被検成分の存在下に、光学的に検出し得
る物質、例えば染料を、生成し得る組成物であって、被
検成分と直接に反応して、あるいは被検成分と他の試薬
との反応により生成する中間体との反応の結果、光学的
に検出し得る物質、例えば染料を、生成し得る組成物（
指示薬）を含む、ロイコ色素の酸化によって染料を生成
する組成物（例として、米国特許・４，０８９，７４７
号、特開昭５９−１９３３５２号等に記載されたような
アリールイミダゾールロイコ色素）、ジアゾニウム塩、
酸化されたときに他の化合物とカップリングにより染料
を生成する化合物を含む組成物（例えば４−アミノアン
チピリン類と、フェノール類またはナフトール類）、還
元型補酵素と電子伝達剤の存在下で染料を生成すること
のできる化合物から成るもの等を、用いることができる
。また、酵素活性を測定する分析要素の場合には、例え
ばｐ−ニトロフェノールのような有色物質を遊離しうる
自己ｍ色性基質を、試薬層や展開層に含むことができる
。

被検成分の存在下に発色を生ずる試薬組成物を前記の非
繊維質多孔性層の少なくとも１つに含有させるには、試
薬組成物の適当な溶液または分散液を予め含浸または塗
布した多孔性展開層を、他の水浸透性層、例えば試薬層
の上に特開昭５５−１６４３５６号のような方法で接着
させる方法も有用である。

多孔性層を、他の水浸透性層（例えば下塗り層、接着層
、吸水層）の上に前記特開昭５５−１６４３５６号のよ
うな方法で接着させた後、試薬組成物の溶液または分散
液を多孔性層に塗布してもよい。

多孔性層への含浸または塗布には公１の方法を利用でき
る。塗布には例えばデイツプ塗布、ドクター塗布、ホッ
パー塗布、カーテン塗布等を適宜選択して用いる。

試薬組成物は、総てを第１の非繊維質多孔性層に含んで
もよく、別の多孔性または無孔性層（例えば試薬層）に
分けて含有させてもよい０例えば被検成分と試薬との反
応により中間体を生成する組成物を第２の非繊維多孔性
層に、生成した中間体と反応して染料等を与える組成物
（指示薬）を第１の非繊維多孔性層に含んでもよい。

試薬組成物は、その一部を親水性ポリマーを結き剤とす
る無孔性Ｎｉ（例えば試薬層）に含ませてもよい、親水
性ポリマーとして例えば、ゼラチンおよびこれらの誘導
体く例えばフタル化ゼラチン）、セルロース誘導体（例
えばヒドロキシエチルセルロース）、アガロース、アク
リルアミド重合体、メタアクリルアミド重合体、アクリ
ルアミドまたはメタアクリルアミドと各種ビニル性モノ
マーとの共重合体等が利用できる。

親水性ポリマーを結合剤とし試薬組成物を含む均一層を
塗布した後、試薬組成物を含まない非繊維多孔性層を特
開昭５５−１６４３５６号のような方法で接着させるこ
とによって、試薬組成物を第１の非繊維多孔性層に実質
的に含有させることができる。

試薬組成物には必要に応じ、活性化剤、緩衝剤、硬膜剤
、界面活性剤等を含有させることができる。

本発明の分析要素の試薬層に含有させることができる緩
衝剤の例としては、炭酸塩、ホウＭ塩、燐酸塩やＢｉｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ誌　第５巻第２号、４６７ページよ
り４７７ページ（１９６６年）に記載されているグツド
（Ｇｏｏｄ　）のＷＩ衝剤などを挙げることができる。

これらの緩衝剤はｒ蛋白質・酵素の基礎実験法」（堀尾
武−ほか著、南江堂、１９８１年）、前記Ｂｉｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ誌第５巻等の文献を参考にして選択するこ
とができる。

試薬組成物は酵素を含むものでもよく、特願昭６０−２
７９８５９号明細書第１８ページから竿２０ページに記
載されたものを用いることができる。

繊維質多孔性層は、液体試料の展開層として利用される
ので、液体計量作用を有する層であることが好ましい、
液体計量作用とは、その表面に点着供給された液体試料
を、その中に含有している成分を実質的に偏在させるこ
となく、面の方向に単位面積当りほぼ一定量の割合で広
げる作用である。繊維質多孔性層を構成する材料として
は、濾紙、不織布、織物生地（例えば平織生地）、編物
生地（例えば、トリコット編）、ガラス繊維濾紙等を用
いることができる。これらのうち織物、編物等が好まし
い、ｔａ物等は特開昭５７−６６３５９号に記載された
ようなグロー放電処理をしてもよい。展開層には、展開
面積、展開速度等を調節するため、特開昭６０−２２２
７７０号、特願昭６１−１２２８７５号、６１−１２２
８７６号、６１−１４３７５４号に記載したような親水
性高分子あるいは界面活性剤を含有してもよい。

繊維質多孔性層を非繊維質多孔性層の上に固定するには
、接着剤を用いることができるが、液体の均一透過が実
質的に妨げられないようにする必要がある。そのために
は、接着剤を部分的に配置し、接着剤が存在しない部分
に微少貫通部が形成されるようにする。その方法として
特願昭６０−２７９８５９号に記載された方法が有用で
ある。

非繊維多孔性層を接着し積層するための接着層を、支持
体、下塗り層、吸水層、検出層等の層の上に設けてもよ
い、接着層は水で膨潤したときに多孔性層を接着するこ
とができるような親水性ポリマー例えば、ゼラチン、ゼ
ラチン誘導体、ポリアクリルアミド、澱粉等からなるこ
とが好ましい。

第２の非繊維多孔性層は、検出層、試薬層等に生じた検
出可能な変化（色変化、発色等）を光透過性の支持体側
から反射測光する際に、全血中の赤血球のヘモグロビン
の赤色を遮蔽するとともに、光反射層または背景層とし
て機能する。第２の非繊維多孔性層に親水性ポリマーを
バインダーとして分散された酸化チタン、硫酸バリウム
等の光反射性粒子を含有させてもよい、バインダーとし
てはゼラチン、ゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド等
が好ましい、さらに、第１の非繊維多孔性層、繊維質多
孔性層のいずれかまたは両方にも、光反射性粒子を含ま
せてもよい。

本発明は、全血中のグルコース、尿殻、尿酸、クレアチ
ニン等の低分子成分の定量は勿論、総蛋白、アルブミン
、各種酵素等の高分子成分、ビリルビン等の蛋白質と結
合した成分、コレステロール、グリセリド等の疎水性成
分の電歇に特に有用である。

多孔性層に抗原、抗体の少なくとも一方を含有させて、
免疫学的方法による抗原または抗体の定量に用いること
もできる。

［実施例１］ゼラチン下塗りしである厚さ１８０μ屑のポリエチレン
テレフタレート無色透明平滑フィルム上に、乾燥後の膜
厚が７μｍになるようにゼラチン水溶液を塗布、乾燥し
て、吸水層を形成した。

吸水層表面を約２５℃の水でほぼ一様に濡らしたｆ＆、
特開昭６２−２７００６号の実施例２に記載された方法
で作られた平均孔径０．４μＩＩ（厚さ方向の最小孔径
の平均値）、厚さ１８０μ論のポリスルホンメンブレン
フィルター（ポリスルホンは前記構造式ＩＩ、　ｎ＝５
０〜８０）を重ね合わせ、乾燥させて、吸水層にメンブ
レンフィルターを接着させた。

次にこのメンブレンフィルターの上から、下記組成物１
および組成物２を表示の割合で順次塗布し、乾燥して、
多孔質試薬層とした。

組成物１：ゼラチン　　　　　　　　　　　　０．６４ｇ／輸２界
面活性剤　　　　　　　　　　　２．５　ｇ　７ｍ２（
ポリオキシエチレンノニルフェニルエーテル）トリスヒドロキシメチルアミノメタン　　　　　　　　　０．４６ｇ／−２リン
酸１カリウム　　　　　　　　　０．４６６７ｍ”α−
ケトゲルタールｌ！！２　　　　　　０．５　ｇ／＠”
し−アスパラギン酸ナトリウム　　２．５　ｇｅｔｓ”
オキザロ酢酸デカルボキシラーゼ１２６００１０／噛２塩化マグネシウム（無水＞　　　　　　０．３　＠／＋
＊”Ｆ　Ａ　Ｄ　　　　　　　　　　　　　　２８す／
噛２ヂアミンビロりん酸　　　　　　１１８　Ｂ／ｍ２
ピルビン酸オキシダーゼ　　３５，０００１０／ｍ２ペ
ルオキシダーゼ　　　　　　６，４００１Ｕ／ｍ２溶媒
：　　水（希ＮａＯＨ溶液でＰＨを７．５に調整して塗布した）（次ページへ続く）組成物２：ロイコ色素（下記ｉ造）　　　　　　１．８　ｇｅｍ２
界面活性剤　　　　　　　　　　　０．６　ｇ　７ｍ２
（ポリオキシエチレン（ｎ＝４０）ノニルフェニルニーデル）溶媒：　エタノールロイコ色素：２−（３，５−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−４−ｈｙｄｒｏｘ
ｙｐｈｅｎｙｌ）−４−ｐｈｅｎｅｔｈｙｌ−５−（４
−ｄｉｍｅｔｂｙｌａｍｉｎｏｐｌｔｅｎｙｌ）ｉｍｉ
ｄａｚｏｌｅ次に平均孔径３．０μｍ（厚さ方向の最小孔径の平均値
）、厚さ１４０μｍ、空隙率約８０％のセルロースアセ
テートメンブレンフィルタ（富士写真フィルム（株）製
ミクロフィルターＦＭ３００）の表面に、１００メツシ
ユの網（面積率約２０％）を通してスクリーン印刷法で
澱粉糊を固形成分３ｇｈａ’の割合で付着させたものを
ラミネートし、乾燥して第２非繊維多孔質層とした。

次に１０Ｏ８相当のＰＥＴ紡績糸からなる厚さ約２５０
μ鎗のトリコット編物生地を、第２非繊雑多孔質層上に
上記と同じ網点接着法により接着し、一体止させ、ＡＳ
Ｔ活性測定用多層分析要素を完成した。

［実施例２］ゼラチン下塗りしである厚さ１８０μｌのポリエチレン
テレフタレート無色透明平滑フィルム上に、下記組成物
を水溶液として塗布、乾燥して、第１試薬層を形成した
。

組成物３．　　　　　［］内は各成分の被覆量ゼラチン
　　　　　　　　　　　［８，２ｇ／ｍ２］界面活性剤
　　　　　　　　　　［０，４１ｇ　／ｎ２］（ポリオ
キシエチレン（４０）ノニルフェニルエーテル）Ｆ　Ａ　Ｄ　　　　　　　　　　　　　［２２ｍｇ／ｍ
２］チアミンピロリんｌ！１２　　　　　　　［９３哨
８／噛２］ピルビン酸オキシダーゼ　　［１２，３００
［０／ｍ２コペルオキシダーゼ　　　　　［６，５２０
１０／＋ａ２］ビス［（ビニルスルホニルメチルカルボニル）アミノコメタン　［１８０ｍぢ／　ｍ　２
ニ以上溶媒：　　水ロイコ色素（下記構造）　　　　　［２８０…ｇ／−”
］溶媒：エタノールロイコ色素＋　　２−（３，５−ｄｉｍｅｔｈｏｘｙ−
４−ｈｙｄｒｏｘｙｐｈｅｎｙｌ）−４−ｐｈｅｎｅｔ
ｈｙｌ−５−（４−ｄｉｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｐｈｅ
ｎｙｌ）ｉｍｉｄａｚｏｌｅ（冷ＮａＯＨ溶液でｐＨを
７．５に調整して塗布した）試薬層を約２５℃の水でほぼ一様に濡らした後、平均孔
径０．４μｍ（厚さ方向の最小孔径の平均値）、厚さ１
８０μｍの前記構造式１１のポリスルホンから成るメン
ブレンフィルターを重ね合わせ、乾燥させて、第１試薬
層にメンブレンフィルターを接着させた。

次にこのメンブレンフィルターの上から、下記組成物４
を表示の被覆量になるよう塗布、乾燥して、多孔質試薬
層とした。

組成物４ニドリスヒドロキシメチルアミノメタン　　　　　　　　　０．３０ｇ／論２リン
酸１カリウム　　　　　　　　０．３６　ｇ／輸２α−
ケトゲルタール酸　　　　　　０．３２６７ｍ２Ｌ−ア
スパラギン酸ナトリウム　　１．９２　ｇ／−２オキザ
ロ酢酸デカルボキシラーゼ１２６００　１Ｕ／躊２塩化マグネシウム（無水＞　　　　　１８．７　ｇ７ｍ
２ヒドロキシプロピルメチルセルロース　　　　　　　３．２　ｇ／論２（＠
　Ｎ　ａ　ＯＨ溶液でｐＨを７５に調整）次に平均孔径
３．０μＭ（厚さ方向の最小孔径の平均値）、厚さ１４
０μｍ、空隙率約８０％のセルロースアセテートメンブ
レンフィルタ（富七写真フィルム（株）製ミクロフィル
ターＦＭ３００）の表面に、１００メンシユの！１１（
面積率約２０％）を通してスクリーン印刷法で澱粉糊を
固形成分３ｇ　／　ｍ　２の割合で付着させたものをラ
ミネートし、乾燥して第２非繊維多孔質層とした。

次に１０Ｏ３相当のＰＥＴ紡績紡績へなる厚さ約２５０
μｍのトリコットＭＡ物生地を、第２非繊維多孔Ｗ層上
に上記と同じ網点接着法（こより接着し、一体止させ、
ＡＳＴ活性測定用多層分析要素を完成した。

［比較例１］実施例１で、ポリスルホンメンブレンフィルターの代わ
りに平均孔径３．０μｍ（厚さ方向の最小孔径の平均値
）、厚さ１４０μ伯、空隙率約８０％のセルロースアセ
テートメンブレンフィルター（富士写真フィルム（株）
製ミクロフィルターＦＭ３００）を用いた他は、実施例
１と同様に（１：製した。

［測定例２〕マドクリット値４３％の新鮮全血（ヘパリン採血）に、
遠心分離して得た血漿、血球、ブタ由来のＡ　Ｓ　Ｔ　
（ＳＩＧＮΔ社製）を加え、ヘマトクリット値が２５％
、４０％、５５％、ＡＳＴ活性が２２０および８５６　
ｕｎｉｔ／ｉ’の合計６種類の血液を調製した。

実施例１および実施例２の分析要素を１．５Ｘ１．５ｃ
＋ｎ角に切断し、点着孔と測定孔を備えたプラスチック
マウントに挿入し、これに上記６種類の血液をそれぞれ
点着した０点着ｆ＆３７℃にて反応させ、６４０ｎｍの
吸収を支持体側より２．５分後と４分後に反射測光し、
０Ｄｔ（透過光学濃度）に１負算した値（Ｃ１ｉｎｉｃ
ａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ。

Ｖｏｌ、２４．１３３５（１９７８）の原理による）を
用いてＡＳＴ活性値を算出した。結果を第１表に示す。

第１表第１表の結果から明らかなように、比較例は血液のへマ
ドクリット値によるＡＳＴ活性測定値の変化が大きいの
に対し、本実施例の分析要素は血液のへマドクリット値
によるＡＳＴ活性測定値の変化が小さい、すなわち本発
明の分析要素は、全血の酵素活性測定において、すぐれ
ている。

［実施例３コゼラチン下塗りしである厚さ１８０μｌのポリエチレン
テレフタレート無色透明平滑フィルム上に、平均重合度
１０００、けん化度約８８％のポリビニルアルコール水
溶液を、乾燥後の膜厚が２５μ縞になるように塗布、乾
燥して、吸水層を形成した。

吸水層表面を約２５℃の水でほぼ一様に濡らした後、平
均孔径０．４μｍ（厚さ方向の最小孔径の平均値）、厚
さ１８０μｍの前記構造式■１のポリスルホンから成る
メンブレンフィルターをラミネート（重ね合わせ）し、
乾燥させて、吸水層にメンブレンフィルターを一体化さ
せた。

次ぎにこのメンブレンフィルターの上から、下記Ｉｌｌ
ｌｌ成金表示の被″Ｎ量になるよう水溶液として塗布し
、乾燥して、多孔質試薬層とした。

（次ページへ続く）組成物ら＝Ｄｙｐｈｉｌｉｎｅ　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　８．ＯＥ／ＩＩ２（Ｍｅｒｃｋ　　Ｉｎｄｅｘ
、　　１０ｔｈ　Ｅｄ、。

ｐ、５０３．ｉｃｅ論３４６５．）スルホサリチル酸　　　　　　１６．７鴇２２．４−ジ
クロロベンゼンジアゾニウムスルホサリチル酸塩　　　
　０．１６　（１／ｍ２次に富士写真フィルム（株）製
ミクロフィルターＦＭ３００　＜Ｅｆｔ小孔径３．０μ
鶴、厚さ１４０μ備、空隙率約８０％のセルロースアセ
テートメンブレンフィルタ）の表面に、１００メツシユ
のｌｌ’４（面積率約２０％）を通してスクリーン印刷
法で澱粉糊を固形成分３　ｇ／ｗａ２の割合で付着させ
たものをラミネートし、乾燥して第２非繊維多孔質層と
した。

さらに１ＯＯ３相当のＰＥＴ紡績糸からなる厚さ約２５
０μ鋤のトリコット編物生地を、第２非繊ｔｉ多孔質層
上に上記と同じ網点接着法により接着し、一体止させ、
ビリルビン定量用乾式分析要素を完成した。

［比較ｆ’Ａ３コ　　　（都合上、比較例２は省略）実
施例３でポリスルホンメンブレンフィルターの代わりに
、平均孔径３．０μｍ（厚さ方向の最小孔径の平均値）
、厚さ１４０μ転空隙率約８０％のセルロースアセテー
トメンブレンフィルター（富士写真フィルム（株）ｇＪ
ミクロフィルターＦＭ３００）を用いた他は、実施例３
と同様に作製した。

［［定例３］新鮮ヒト全血（ヘパリン採血管使用）から分離した血球
をＤ　ａｄｅ社製管理用血清Ｍｏｎ１−ＴｒｏｔＩＸ　
、または社製管理用血清「オメガビリルビン」に加えて
、ビリルビンをそれぞれ０．５．４．５．１０．６゜１
８．６　ｍｇ／ｌ含むヘマトクリット４ｏｚの人工血を
調製した。

実施例３および比較例３の分析要素に、上記の人工血を
各１０ＪｉＲ点着し、分析要素を密閉容器中で３７°Ｃ
に保って、６分後の反射濃度を波長５４０１−で測定し
た。結果を第３表に示す。

第３表第３表から明らかなように、実施例３の乾式分析要素は
総コレステロールをすぐれた正確度で測定できた。

実施例３および比較例３の分析要素を用いて、４．５ａ
＋ｇ／ｄ１オよび１０．６ｍｇ／ｄｆｒ、同じ測定を各
１゜回反復し、同時再現性を評価した。その結果は第４
表に示すごとくであった。

（次ページへ続く）第４表［９考例コポリスルホンメンブレンフィルターと従来用いられたセ
ルロースアセテートメンブレンフィルターの光遮蔽効果
を比べるため、次の様な測定を行った。

■実施ｒＩＡ１で用いたポリスルホンメンブレンフィル
ター（Ａとする〉と、平均孔径０．８μｍ（厚さ方向の
最小孔径の平均値）、厚さ１８０μｍのセルロースアセ
テートメンブレンフィルター（３士写真フィルム（株）
製ミクロフィルターＦＭ８０、Ｂとする）にそれぞれ水
を含ませる。

■この状態で支持体側より、背景に黒板を置いた場合と
白板を置いた場合の反射光学濃度〈○Ｄ）の差を、波長
４５０ないし８００μＩ″′：′測定する。

第２表に示した様に、フィルターＢではその背景が白の
場合と黒の場合で０．５７〜０．６３の光学濃度の差を
生じたが、フィルターＡでは０．１６〜０．２２となり
その差が約１／３に減少した。

［発明の効果］本発明の分析要素は、第１非繊維多几質層の光遮蔽効果
が高いため、血液等が構成する展開層側の背景が低くな
り、分析精度、特に同時再現性が改良される。

それだけでなく、驚くべきことには試料皿のへマドクリ
ット値の影響が著しく軽減される。すなわち本発明の分
析要素は、全血を試料として、血液のへマドクリット値
が２５％から５５％の広い範囲にわたり、ヘマトクリッ
ト値にほとんど左右されない分析値を得ることができる
。従って検体のへマドクリット値に対する考慮が不要と
なり、臨床検査の精度が向上し、所要時間が短縮される
利点がある。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施ｇ４１の多層分析要素の断面図である０図
面中の記号の意味は次のとおり。１０　　支持体２０　　試薬層（第１非繊維多孔質層）３０　　血球ろ
過層（第２非繊維多孔質層）５０　　展開層（繊維質多
孔層）６０　　吸水層出願人　　富士写真フィルム株式会社第１図手粘Ｒ幹ｎ正嗜下（自発）１、事件の表示昭和６３年特許願第１０４５２号２、発明の名称全面分析要素３、補正をする者事件との関係　　　特許出願人住　所　　神奈川県南足柄市中沼２１０番地富士写真フ
ィルム株式会社　東京本社電話（２０６）２５３７４、補正の対象　　　明細書の「発明の詳細な説明」の
欄５、補正の内容明細書の発明の詳細な説明の欄の記載を下記の通り補正
する。１）明細書第３ページ１２行目のｒＧＯＴ、ＧＰＴ、を
ｒＡＳＴ、ＡＬＴＪと補正する。２）同第１７ページ１０行目の「層をを設ける」を「層
を設ける」と補正する。３）第２４ページ８行目の「平均孔径」を「有効孔径」
と補正する。４）第２４ページ８行目の「（厚さ」から同９行目の「
方向の最小孔径の平均値）」までを削除する。５）第２６ページ１１行目の「平均孔径」を「有効孔径
」と補正する。６）第２６ページ１１行目の「（厚さ」から同１２行目
の「平均値）」までを削除する。７）第２８ページ９行目の「平均孔径」を「有効孔径」
と補正する。８）第２８ページ９行目の「（厚さ方向」から同１０行
目の「値）」までを削除する。９）第２９ページ９行目の「平均孔径」を「有効孔径」
と補正する。１０）第２９ページ９行目の「（厚さ方向」から同１０
行目１１）第３０ページ４行目の「平均孔径」を「有効
孔径」と補正する。１２）第３０ページ４行目の「（厚さ方向」から同５行
目の「平均値）」までを削除する。１３）第３２ページ１０行目の「平均孔径」を「有効孔
径」と補正する。１４）第３２ページ１０行目の「（厚さ方向」から同１
１行目の「平均値）」までを削除する。１５）第３３ページ９行目の「最小孔径」を「有効孔径
ｊと補正する。１６）第３４ページ３行目の「平均孔径」を「有効孔径
」と補正する。１７）第３４ページ３行目の「（厚さ方向」から同４行
目の「平均値）」までを削除する。１８）第３６ページ本文（第４表を除く）７行目の「平
均孔径」を「有効孔径」と補正する。１９）第３６ページ本文７行目の「（厚さ方向」から同
８行目の「平均値）」までを削除する。

Claims

【特許請求の範囲】

（１）水不透過性、光透過性支持体の上に、第１の非繊
維質多孔性層、第２の非繊維質多孔性層、繊維質多孔性
層がこの順に一体に積層されており、前記３層の多孔性
層が互いに、液体の均一透過が実質的に妨げられない程
度に微少貫通部を形成するよう、部分的に配置された接
着剤により接着されており、被検成分の存在下に検出し
得る光学的変化を生ずる試薬組成物が前記非繊維質多孔
性層の少なくとも１つに含まれ、前記光学的変化は前記
第１の非繊維質多孔性層において検出し得る多層分析要
素であって、前記第１の非繊維質多孔性層がポリスルホ
ンから成ることを特徴とする一体型多層分析要素。
（２）前記試薬組成物が前記第１の非繊維質多孔性層に
含まれる特許請求の範囲（１）の分析要素。
（３）前記３層の多孔性層が、それぞれ隣接する面の間
で実質的に密着して、部分的に配置された接着剤により
接着されている特許請求の範囲（１）の分析要素。
（４）第２の非繊維多孔性層の有効孔径が０．８μｍか
ら３０μｍである特許請求の範囲（１）の分析要素。
（５）水不透過性、光透過性支持体の上に、水浸透性層
、第１の非繊維質多孔性層、第２の非繊維質多孔性層、
繊維質多孔性層がこの順に一体に積層されており、前記
３層の多孔性層が互いに、液体の均一透過が実質的に妨
げられない程度に、微少貫通部を形成するよう部分的に
配置された接着剤により接着されており、被検成分の存
在下に検出し得る光学的変化を生ずる試薬組成物が前記
水浸透性層および非繊維質多孔性層の少なくとも１つに
含まれ、前記光学的変化は少なくとも前記水浸透性層に
おいて検出し得る多層分析要素であつて、前記第１の非
繊維質多孔性層がポリスルホンから成ることを特徴とす
る一体型多層分析要素。
（６）前記３層の多孔性層が、それぞれ隣接する面の間
で実質的に密着して、部分的に配置された接着剤により
接着されている特許請求の範囲（５）の分析要素。