JPS62215870A - ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結合特異性を有するモノクロ−ナル抗体類およびそれらを使用する方法 - Google Patents
ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結合特異性を有するモノクロ−ナル抗体類およびそれらを使用する方法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、ヒト前立腺腫瘍関連抗原（ｈｕｍａｎ ｐ
ｒｏｓｔａｔｅ ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ
ａｎｔｉｇｅｎｓ）に対する結合特異性（ｂｉｎｄ
ｉｎｇ ５ｐｅｃｉｆｉｃｔｙ）をもつが、前立腺特
異性抗原（ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａ
ｎｔｉｇｅｎ）（ＰＳＡ）または前立腺酸性ホスファタ
ーゼ（ＰＡＰ）に対する結合特異性をもたないモノクロ
ーナル抗体、およびそれを使用する診断法および処置法
に関する。
ｒｏｓｔａｔｅ ｔｕｍｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ
ａｎｔｉｇｅｎｓ）に対する結合特異性（ｂｉｎｄ
ｉｎｇ ５ｐｅｃｉｆｉｃｔｙ）をもつが、前立腺特
異性抗原（ｐｒｏｓｔａｔｅ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａ
ｎｔｉｇｅｎ）（ＰＳＡ）または前立腺酸性ホスファタ
ーゼ（ＰＡＰ）に対する結合特異性をもたないモノクロ
ーナル抗体、およびそれを使用する診断法および処置法
に関する。
腫瘍関連抗体に対する結合特異性を有する物質を発見す
ることを試みて、多年にわたって、種々のモノクローナ
ル抗体が開発されてきている。これらのモノクローナル
抗体は腫瘍の診断および処置において有用であろうこと
が望まれてきた。
ることを試みて、多年にわたって、種々のモノクローナ
ル抗体が開発されてきている。これらのモノクローナル
抗体は腫瘍の診断および処置において有用であろうこと
が望まれてきた。
モノクローナル抗体はハイブリドーマとして知られる細
胞系により産生される。ハイブリドーマは、その腫瘍組
織に関連する抗原に対する結合親和性を有するモノクロ
ーナル抗体を産生ずるような腫瘍組織を使用してつくる
ことができる。はとんどのモノクローナル抗体は、次の
ような欠点を有する： （１）それらはそれらが発現さ
れた腫瘍に非常に密接に関連するもの以外の多くの腫瘍
のタイプに結合することができないか、あるいは（２）
結合特異性に極端に欠ける、すなわち、それらは、細胞
が悪性であるかあるい悪性でないかのいかんにかわらず
、はとんどすべてのタイプの細胞に結合する。結局、こ
れらのモノクローナル抗体は、（１）極端な結合特異性
をもつため、診断または処置すべき各腫瘍のために独特
のモノクローナル抗体を開発することが必要であるか、
あるいは（２）結合特異性に極端に欠乏するために、モ
ノクローナル抗体は悪性の細胞と悪性でない細胞とを区
別することができないので、一般に臨床的に有用ではな
い。
胞系により産生される。ハイブリドーマは、その腫瘍組
織に関連する抗原に対する結合親和性を有するモノクロ
ーナル抗体を産生ずるような腫瘍組織を使用してつくる
ことができる。はとんどのモノクローナル抗体は、次の
ような欠点を有する： （１）それらはそれらが発現さ
れた腫瘍に非常に密接に関連するもの以外の多くの腫瘍
のタイプに結合することができないか、あるいは（２）
結合特異性に極端に欠ける、すなわち、それらは、細胞
が悪性であるかあるい悪性でないかのいかんにかわらず
、はとんどすべてのタイプの細胞に結合する。結局、こ
れらのモノクローナル抗体は、（１）極端な結合特異性
をもつため、診断または処置すべき各腫瘍のために独特
のモノクローナル抗体を開発することが必要であるか、
あるいは（２）結合特異性に極端に欠乏するために、モ
ノクローナル抗体は悪性の細胞と悪性でない細胞とを区
別することができないので、一般に臨床的に有用ではな
い。
診断法および治療法におけるモノクローナル抗体の有用
性に関して発生した関心事にかかわらず、器官特異性で
ある、すなわち、特定の器官にのみ関連する抗原に結合
できるが、それらの器官特異性が与えらると、特定の器
官中に発生する多くの異なるタイプの腫瘍に関連する抗
原に結合できるモノクローナル抗体を開発できると、な
お、信じられる。
性に関して発生した関心事にかかわらず、器官特異性で
ある、すなわち、特定の器官にのみ関連する抗原に結合
できるが、それらの器官特異性が与えらると、特定の器
官中に発生する多くの異なるタイプの腫瘍に関連する抗
原に結合できるモノクローナル抗体を開発できると、な
お、信じられる。
前立腺癌は米国における男性の間の最も優勢な悪性腫瘍
である。この病気は頻繁に存在するが、女性の集団にお
いて検出されないと仮定される。
である。この病気は頻繁に存在するが、女性の集団にお
いて検出されないと仮定される。
その上、前立腺癌は長い潜伏期間をしばしば示すことが
認められる。さらに、前立腺癌はその高い転移可能性を
もつことが知られている。これらの理由で、前立腺腫瘍
の存在について生体内または生体外で診断するために、
および殊に腫瘍がいったん転移したとき、このような腫
瘍を処置するために有用な１種または２種以上の物質を
開発することが望まれてきた。
認められる。さらに、前立腺癌はその高い転移可能性を
もつことが知られている。これらの理由で、前立腺腫瘍
の存在について生体内または生体外で診断するために、
および殊に腫瘍がいったん転移したとき、このような腫
瘍を処置するために有用な１種または２種以上の物質を
開発することが望まれてきた。
前立腺抗原マーカー（ｍａｒｋｅｒ）に対する種々のモ
ノクローナル抗体は従来記載されてきた。これらの従来
記載されたモノクローナル抗体は、前立腺特異性抗原（
Ｐ Ｓ Ａ）に［ワンプ（Ｗａｎｇ）、Ｍ、Ｃ，ら、泌
尿器学（Ｕ ｒ 。
ノクローナル抗体は従来記載されてきた。これらの従来
記載されたモノクローナル抗体は、前立腺特異性抗原（
Ｐ Ｓ Ａ）に［ワンプ（Ｗａｎｇ）、Ｍ、Ｃ，ら、泌
尿器学（Ｕ ｒ 。
１、）、１７：１５９−１６９ （１９７９）］（特別
にここに引用によって加える）、あるいは前立腺酸性ホ
スファターゼ（ＰＡＰ）に［チュー（ｃｈｕ））、Ｔ、
Ｍ、ら、泌尿器学（Ｕ ｒ 。
にここに引用によって加える）、あるいは前立腺酸性ホ
スファターゼ（ＰＡＰ）に［チュー（ｃｈｕ））、Ｔ、
Ｍ、ら、泌尿器学（Ｕ ｒ 。
±ユ）、よ５ ： ３１９−３２２ （１９７８）］（
４す５１１にここにｔ’ｉｌＦ日によっで力■身る）、
あるい１士両者に結合する。これらの従来記載されたモ
ノクローナル抗体は、ある前立腺腫瘍に結合することが
できないので、欠点を有する。
４す５１１にここにｔ’ｉｌＦ日によっで力■身る）、
あるい１士両者に結合する。これらの従来記載されたモ
ノクローナル抗体は、ある前立腺腫瘍に結合することが
できないので、欠点を有する。
したがって、本発明の１つの目的は、ヒト前立腺腫瘍関
連抗原に対する結合特異性をもつが、ＰＳＡまたはＰＡ
Ｐに結合しないモノクローナル抗体を提供することであ
る。
連抗原に対する結合特異性をもつが、ＰＳＡまたはＰＡ
Ｐに結合しないモノクローナル抗体を提供することであ
る。
本発明の他の目的は、すべての前立腺腫瘍に関連する抗
原に結合しかつ前立腺以外の器官に由来する細胞にほと
んどあるいはまったく結合しないモノクローナル抗体を
提供することである。
原に結合しかつ前立腺以外の器官に由来する細胞にほと
んどあるいはまったく結合しないモノクローナル抗体を
提供することである。
本発明の追加の目的は、これらのモノクローナル抗体を
使用する前立腺腫瘍およびその転移を診断する方法を提
供することである。
使用する前立腺腫瘍およびその転移を診断する方法を提
供することである。
本発明のほかの目的は、これらのモノクローナル抗体を
使用する前立腺腫瘍およびその転移を処置する方法を提
供することである。
使用する前立腺腫瘍およびその転移を処置する方法を提
供することである。
本発明の他の目的および利点は、以後の本発明の詳細な
説明から明らかとなるであろう。
説明から明らかとなるであろう。
１つの実施態様において、前述の目的は、ヒト前立腺腫
瘍関連抗原に対する結合特異性をもつが、前立腺特異性
抗原または前立腺酸性ホスファターゼに対する結合特異
性をもたないモノクローナル抗体によって達成された。
瘍関連抗原に対する結合特異性をもつが、前立腺特異性
抗原または前立腺酸性ホスファターゼに対する結合特異
性をもたないモノクローナル抗体によって達成された。
下に詳述する手順により開発された、これらのモノクロ
ーナル抗体の２つの例をＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ
−７３と表示する。ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７
３は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ
Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、１２３０１Ｐａｒｋｌａｗｎ
Ｄｒｉｖｅ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎ
ｄ、Ｕ、Ｓ、Ａ、２０８５２）にそれぞれ受託番号４０
２９２および４０２９３で受託された。
ーナル抗体の２つの例をＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ
−７３と表示する。ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７
３は、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ
Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、１２３０１Ｐａｒｋｌａｗｎ
Ｄｒｉｖｅ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎ
ｄ、Ｕ、Ｓ、Ａ、２０８５２）にそれぞれ受託番号４０
２９２および４０２９３で受託された。
モノクローナル抗体ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７
３の各々は、同一抗原と交差反応せず、悪性前立腺組織
上に存在する独特のエピトープに向けられる。さらに、
各々は、変化するが、臨床的に許容されうる程度に、前
立腺組織のために器官特異性であるかあるいは器官に関
連する。こうして、これらの新規なモノクローナル抗体
は前立腺腫那およびその転移の存在の診断およびそれを
処置するために有用である。
３の各々は、同一抗原と交差反応せず、悪性前立腺組織
上に存在する独特のエピトープに向けられる。さらに、
各々は、変化するが、臨床的に許容されうる程度に、前
立腺組織のために器官特異性であるかあるいは器官に関
連する。こうして、これらの新規なモノクローナル抗体
は前立腺腫那およびその転移の存在の診断およびそれを
処置するために有用である。
他の実施態様において、本発明の前述の目的は、工程：
（ａ） 患者から体液の試料を入手し、（ｂ） 前
記体液をヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結合特異性を
もつが、前立腺特異性抗原または前立腺酸性ホスファタ
ーゼに対する結合特異性をもたないモノクローナル抗体
に暴露し、 （ｃ） 体液中に存在する物質に結合するモノクロー
ナル抗体の量を決定し、そして （ｄ） 体液の物質に結合したモノクローナル抗体の
量を前もって決定した基本水準と比較して、前立腺腫瘍
またはその転移の存在を確認する、 を含んでなることを特徴とする前立腺腫瘍またはその転
移を診断する方法、によって達成された。
記体液をヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結合特異性を
もつが、前立腺特異性抗原または前立腺酸性ホスファタ
ーゼに対する結合特異性をもたないモノクローナル抗体
に暴露し、 （ｃ） 体液中に存在する物質に結合するモノクロー
ナル抗体の量を決定し、そして （ｄ） 体液の物質に結合したモノクローナル抗体の
量を前もって決定した基本水準と比較して、前立腺腫瘍
またはその転移の存在を確認する、 を含んでなることを特徴とする前立腺腫瘍またはその転
移を診断する方法、によって達成された。
なお他の実施態様において、本発明の前述の目的は、工
程： （ａ） 患者に、ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結
合特異性をもつが、前立腺特異性抗原または前立腺酸性
ホスファターゼに対する結合特異性をもたないモノクロ
ーナル抗体を投与し、ここで前記モノクローナル抗体は
マーカーに接合（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）されており、そ
して （ｂ） 前記患者を検出装置に暴露して、前立腺腫瘍
部位またはその転移部位に対応するマーカーの区域を同
定する、 を含んでなることを特徴とする前立腺腫瘍またはその転
移の存在を診断する方法、によって達成された。
程： （ａ） 患者に、ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結
合特異性をもつが、前立腺特異性抗原または前立腺酸性
ホスファターゼに対する結合特異性をもたないモノクロ
ーナル抗体を投与し、ここで前記モノクローナル抗体は
マーカーに接合（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）されており、そ
して （ｂ） 前記患者を検出装置に暴露して、前立腺腫瘍
部位またはその転移部位に対応するマーカーの区域を同
定する、 を含んでなることを特徴とする前立腺腫瘍またはその転
移の存在を診断する方法、によって達成された。
なおさらに他の実施態様において、本発明の前述の目的
は、前立腺腫瘍またはその転移に悩む患者に製薬学的に
有効な量のモノクローナル抗体−治療剤を投与すること
からなり、ここで前記モノクローナル抗体はヒト前立腺
腫瘍関連抗原に対する結合特異性をもつが、前立腺特異
性抗原または前立腺酸性ホスファターゼに対する結合特
異性をもたないことを特徴とする前立腺腫瘍またはその
転移に悩む患者を処置する方法、によって達成された。
は、前立腺腫瘍またはその転移に悩む患者に製薬学的に
有効な量のモノクローナル抗体−治療剤を投与すること
からなり、ここで前記モノクローナル抗体はヒト前立腺
腫瘍関連抗原に対する結合特異性をもつが、前立腺特異
性抗原または前立腺酸性ホスファターゼに対する結合特
異性をもたないことを特徴とする前立腺腫瘍またはその
転移に悩む患者を処置する方法、によって達成された。
本発明によれば、ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結合
特異性をもつが、ＰＳＡまたはＰＡＰに対する結合特異
性をもたないモノクローナル抗体は、次のようにして生
成しかつ単離することができる。
特異性をもつが、ＰＳＡまたはＰＡＰに対する結合特異
性をもたないモノクローナル抗体は、次のようにして生
成しかつ単離することができる。
マウスを前立腺腫瘍調製物で免疫化する。免疫化された
マウスからの牌細胞を単離し、そしてマウス骨髄腫細胞
と融合し、そしてハイブリドーマの生長のみを許す条件
下に培養する。次いで、ヒト前立腺腫瘍関連抗原を所望
のモノクローナル抗体の生成についてスクリーニングす
る。
マウスからの牌細胞を単離し、そしてマウス骨髄腫細胞
と融合し、そしてハイブリドーマの生長のみを許す条件
下に培養する。次いで、ヒト前立腺腫瘍関連抗原を所望
のモノクローナル抗体の生成についてスクリーニングす
る。
マウスの免疫化、免疫化された細胞の単離、単離された
細胞とマウス骨髄腫細胞との融合、およびハイブリドー
マの生長を許す条件下の培養は、すべて、この分野にお
いてよく知られているか、あるいは当業者により容易に
決定される方法によって実施される。
細胞とマウス骨髄腫細胞との融合、およびハイブリドー
マの生長を許す条件下の培養は、すべて、この分野にお
いてよく知られているか、あるいは当業者により容易に
決定される方法によって実施される。
マウス比細胞の免疫化のため、前立腺腫瘍関連抗原を有
する任意の腫瘍からの調製物を用いることができる。好
ましい腫瘍調製物は、両性の前立腺増生（ｈｙｐｅｒｐ
ｌａｓｉａｓ）および前立腺癌、とくに前立腺腺癌から
のものを包含する。
する任意の腫瘍からの調製物を用いることができる。好
ましい腫瘍調製物は、両性の前立腺増生（ｈｙｐｅｒｐ
ｌａｓｉａｓ）および前立腺癌、とくに前立腺腺癌から
のものを包含する。
さらに、免疫化はちょうど１つの腫瘍あるいは１または
２以上の腫瘍のタイプからなる１種または２種以上の腫
瘍の混合物からの調製物を用いて実施できる。これに関
して、ことに好ましい調製物は３種類の両性前立腺増生
および１種類の前立ｒｉ腺癌の混合物から成る。
２以上の腫瘍のタイプからなる１種または２種以上の腫
瘍の混合物からの調製物を用いて実施できる。これに関
して、ことに好ましい調製物は３種類の両性前立腺増生
および１種類の前立ｒｉ腺癌の混合物から成る。
マウス骨髄腫細胞系はこの分野において入手容易なある
数のもののいずれであることもできる。
数のもののいずれであることもできる。
１つの殊に好ましいよく知られた入手容易なマウス骨髄
腫細胞系はＰ３−ＭＳ−１−Ａｇ４−１［Ｎ Ｉ ＧＭ
Ｓ ヒユーマン・ジェネティック・ミュータント・セ
ル・レポジタリー（ＨｕｍａｎＧｅｎｅｔｉｃ Ｍｕ
ｔａｎｔ Ｃｅ１ｌ Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）、受
託番号ＧＭ３５７３）（ＮＳ−１）］である。
腫細胞系はＰ３−ＭＳ−１−Ａｇ４−１［Ｎ Ｉ ＧＭ
Ｓ ヒユーマン・ジェネティック・ミュータント・セ
ル・レポジタリー（ＨｕｍａｎＧｅｎｅｔｉｃ Ｍｕ
ｔａｎｔ Ｃｅ１ｌ Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ）、受
託番号ＧＭ３５７３）（ＮＳ−１）］である。
所望のモノクローナル抗体の生成についてのスクリーニ
ングは、前立腺抗原に対する制限された結合活性、すな
わち、前立腺腫瘍関連抗原に結合するが、ＰＳＡまたは
ＰＡＰに結合しない制限された結合活性を決定すること
により、および正常の膀胱、乳房、結腸、腎臓、肺、膵
臓および肝臓を包含する、正常の抗原に対する交差反応
性の欠乏により達成される。臨床的に許容されうるため
には、モノクローナル抗体はＰＳＡおよびＰＡＰに対す
る反応性に欠け、かつ前立腺以外の正常の抗原に対する
交差反応性に望ましくは完全に欠けなくてはならない。
ングは、前立腺抗原に対する制限された結合活性、すな
わち、前立腺腫瘍関連抗原に結合するが、ＰＳＡまたは
ＰＡＰに結合しない制限された結合活性を決定すること
により、および正常の膀胱、乳房、結腸、腎臓、肺、膵
臓および肝臓を包含する、正常の抗原に対する交差反応
性の欠乏により達成される。臨床的に許容されうるため
には、モノクローナル抗体はＰＳＡおよびＰＡＰに対す
る反応性に欠け、かつ前立腺以外の正常の抗原に対する
交差反応性に望ましくは完全に欠けなくてはならない。
しかしながら、抗原が臨床的応用におけるモノクローナ
ル抗体の使用に関係しない組織からのものである場合、
モノクローナル抗体は前立腺以外の正常の抗原に対して
多少の反応性を有することができる。前立腺抗原に対す
る制限された結合活性および前立腺以外の正常の抗原に
対する交差反応性についてのアッセイは、当業者により
容易に決定される。
ル抗体の使用に関係しない組織からのものである場合、
モノクローナル抗体は前立腺以外の正常の抗原に対して
多少の反応性を有することができる。前立腺抗原に対す
る制限された結合活性および前立腺以外の正常の抗原に
対する交差反応性についてのアッセイは、当業者により
容易に決定される。
モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体を生成する
ハイブリドーマ細胞をマウスの腹腔中に注射し、そして
適当な時間後、非常に高い力価の相同抗体を生ずるマウ
スからの腹水を収穫し、そしてそれからモノクローナル
抗体を単離することによって、大量に生産される。ある
いは、モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体を生
産する細胞を生体外で培養し、そして分泌されたモノク
ローナル抗体を細胞培養基から単離することによって生
産することができる。
ハイブリドーマ細胞をマウスの腹腔中に注射し、そして
適当な時間後、非常に高い力価の相同抗体を生ずるマウ
スからの腹水を収穫し、そしてそれからモノクローナル
抗体を単離することによって、大量に生産される。ある
いは、モノクローナル抗体は、モノクローナル抗体を生
産する細胞を生体外で培養し、そして分泌されたモノク
ローナル抗体を細胞培養基から単離することによって生
産することができる。
ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３と表示するモノク
ローナル抗体を発現するハイブリドーマを、上の方法に
従って生産した。これらの２つのモノクローナル抗体の
結合特異性およびこれらの抗体と既知の前立腺モノクロ
ーナル抗体との比較は、下の実施例１において論じられ
ている。
ローナル抗体を発現するハイブリドーマを、上の方法に
従って生産した。これらの２つのモノクローナル抗体の
結合特異性およびこれらの抗体と既知の前立腺モノクロ
ーナル抗体との比較は、下の実施例１において論じられ
ている。
本発明の他の実施態様は、前立腺腫瘍または転移を診断
する生体外方法を包含する。
する生体外方法を包含する。
前述のように、体液を患者から入手し、そして本発明の
モノクローナル抗体に暴露する。次いで、体液中に存在
する物質に結合するモノクローナル抗体の量を決定し、
そして体液の物質に結合したモノクローナル抗体の量を
前もって決定した基本の水準と比較することによって診
断を実施する。基本の水準を越える結合したモノクロー
ナル抗体の量は、前立腺腫瘍またはその転移が存在する
可能性を示す。
モノクローナル抗体に暴露する。次いで、体液中に存在
する物質に結合するモノクローナル抗体の量を決定し、
そして体液の物質に結合したモノクローナル抗体の量を
前もって決定した基本の水準と比較することによって診
断を実施する。基本の水準を越える結合したモノクロー
ナル抗体の量は、前立腺腫瘍またはその転移が存在する
可能性を示す。
生体外方法において使用できる体液は、ヒト前立腺腫瘍
関連抗原を含有することが疑われる任意の体液である。
関連抗原を含有することが疑われる任意の体液である。
その例は、血液、血清、精液漿（ｓｅｍｉｎａｌ ｐ
ｌａｓｍａ）、精液、尿および前立腺液（ｐｒｏｓｔａ
ｔｉｃ ｆ ｌ ｕ ｉｄ）を包含する。体液
は当業者によく知られているかあるいは当業者により容
易に決定される方法により得ることができる。
ｌａｓｍａ）、精液、尿および前立腺液（ｐｒｏｓｔａ
ｔｉｃ ｆ ｌ ｕ ｉｄ）を包含する。体液
は当業者によく知られているかあるいは当業者により容
易に決定される方法により得ることができる。
体液を、この分野においてよく知られている免疫化学的
アッセも例えば、次の文献に記載されているアッセイに
より、モノクローナル抗体に対して暴露し、そして体液
中の物質に結合したモノクローナル抗体の量を決定する
：クルグ（Ｋ １ ｕｇ）、Ｔ、Ｌ、ら、 ｆ （ｃａ
ｎ ｃ ｅ ｒ 旦ｅｓ、）、土４：１０４８ （
１９８４）、 ヘルリン（Ｈｅｒｌｙｎ）、Ｍ、ら、ジ
ャーナル−、ｉ／Φクリニカル−イムノロジー（Ｊ、Ｃ
１１ｎ、Ｉｍｍｕｎｏ ｌ 、） 、 ２ 、１３５
（１９８２） 、メツズガー（Ｍｅｔｚｇａｒ）、Ｒ，
Ｓ、ら、！…クシ−ィンゲス・土ノ・ナショナル・アカ
デミ−・土２−サイエンシズ（Ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔ
１ 。
アッセも例えば、次の文献に記載されているアッセイに
より、モノクローナル抗体に対して暴露し、そして体液
中の物質に結合したモノクローナル抗体の量を決定する
：クルグ（Ｋ １ ｕｇ）、Ｔ、Ｌ、ら、 ｆ （ｃａ
ｎ ｃ ｅ ｒ 旦ｅｓ、）、土４：１０４８ （
１９８４）、 ヘルリン（Ｈｅｒｌｙｎ）、Ｍ、ら、ジ
ャーナル−、ｉ／Φクリニカル−イムノロジー（Ｊ、Ｃ
１１ｎ、Ｉｍｍｕｎｏ ｌ 、） 、 ２ 、１３５
（１９８２） 、メツズガー（Ｍｅｔｚｇａｒ）、Ｒ，
Ｓ、ら、！…クシ−ィンゲス・土ノ・ナショナル・アカ
デミ−・土２−サイエンシズ（Ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔ
１ 。
Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、）、ＵＳＡ、８１．５２４２
（１９８４）、パプシデロ（Ｐａｐｓｉｄｅｒｏ）、
Ｉ、、［）、ら、癌の研究（ｃａｎｃｅｒＲｅｓ、）、
４４：４６５３ （１９８４）、 ハイズ（Ｈａｙ
ｅｓ）、Ｄ、Ｆ、ら、ジャーナル・オ゛ブ・クリニカル
・イムノロジー（Ｊ、Ｃｌ１ｎ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、
）、７５．１６７１（１９８５）、キリアン（Ｋｉｌｌ
ｉａｎ）、Ｃ。
（１９８４）、パプシデロ（Ｐａｐｓｉｄｅｒｏ）、
Ｉ、、［）、ら、癌の研究（ｃａｎｃｅｒＲｅｓ、）、
４４：４６５３ （１９８４）、 ハイズ（Ｈａｙ
ｅｓ）、Ｄ、Ｆ、ら、ジャーナル・オ゛ブ・クリニカル
・イムノロジー（Ｊ、Ｃｌ１ｎ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、
）、７５．１６７１（１９８５）、キリアン（Ｋｉｌｌ
ｉａｎ）、Ｃ。
Ｓ、ら、ジャーナル・土ノ・ナショナル・キャンサー・
インスチチュー）（Ｊ、 Ｎａｔｌ、 Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｉｎ５ｔ、）、７６．１７９（１９８６）、キリ
アン（Ｋｉ ｌ １ ｉ ａｎ・） 、Ｃ，Ｓ。
インスチチュー）（Ｊ、 Ｎａｔｌ、 Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｉｎ５ｔ、）、７６．１７９（１９８６）、キリ
アン（Ｋｉ ｌ １ ｉ ａｎ・） 、Ｃ，Ｓ。
ら、癌の研究（ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、）、４５：
８８６ （１９８５）、 ヘディン（Ｈｄｉｎ）。
８８６ （１９８５）、 ヘディン（Ｈｄｉｎ）。
Ａ、ら、プロシーディンゲス・土フ・ナショナルΔ、炙
及、３４７０ （１９８３）、ペカリイ（Ｐト リ −
（ｃＩｉｎ、 Ｃｈｅｍ、）、３０：１２１３
−１２１５ （１９８４）、バスト（Ｂａｇｌａｎｄ
Ｊ、 Ｍｅｄ、）、３０９，８８３−８８７ （１
９８３）、べＬ／−／ト（Ｂｅｌｌｅ９８４）（これら
のすべてを特別にここに引用によって加える）。
及、３４７０ （１９８３）、ペカリイ（Ｐト リ −
（ｃＩｉｎ、 Ｃｈｅｍ、）、３０：１２１３
−１２１５ （１９８４）、バスト（Ｂａｇｌａｎｄ
Ｊ、 Ｍｅｄ、）、３０９，８８３−８８７ （１
９８３）、べＬ／−／ト（Ｂｅｌｌｅ９８４）（これら
のすべてを特別にここに引用によって加える）。
適当なよく知られた免疫化学的アッセイの例は、「サン
ドイッチ」または「２部位」免疫放射線測定アッセイ、
競合的結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ、
およびエンザイムイムノアッセイを包含し、そしてエン
ザイムイムノアッセイにおいて酵素試薬は分光光度測定
または分光蛍光測定により検出することができる。
ドイッチ」または「２部位」免疫放射線測定アッセイ、
競合的結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ、
およびエンザイムイムノアッセイを包含し、そしてエン
ザイムイムノアッセイにおいて酵素試薬は分光光度測定
または分光蛍光測定により検出することができる。
本発明において有用な免疫化学的アッセイの１つのタイ
プの例はサンドイッチ免疫放射線測定アッセイ（ＩＲＭ
Ａ）であり、ここで抗原はそれを過剰の標識抗体と反応
させることによって直接測定される。このようなアッセ
イにおいて、抗原を標識抗体と反応させる前に、抗原を
特異的に結合する免疫吸着剤上に固定化する。免疫吸着
剤は本発明のモノクローナル抗体を添付することによっ
て形成される。七ツマ−である抗原のためのサンドイッ
チアッセイにおいて、抗原への結合について競合が起こ
らないように、抗原上の明確なエピトープを認識する２
つの抗体を必要とする。
プの例はサンドイッチ免疫放射線測定アッセイ（ＩＲＭ
Ａ）であり、ここで抗原はそれを過剰の標識抗体と反応
させることによって直接測定される。このようなアッセ
イにおいて、抗原を標識抗体と反応させる前に、抗原を
特異的に結合する免疫吸着剤上に固定化する。免疫吸着
剤は本発明のモノクローナル抗体を添付することによっ
て形成される。七ツマ−である抗原のためのサンドイッ
チアッセイにおいて、抗原への結合について競合が起こ
らないように、抗原上の明確なエピトープを認識する２
つの抗体を必要とする。
一方は免疫吸着剤を形成するために使用し、そして他方
は標識トレーサーとして使用する。二量体またはポリマ
ーの抗原のためのアッセイにおいて、同一の抗体を使用
して標識トレーサーとして免疫吸着剤を形成することが
できる。
は標識トレーサーとして使用する。二量体またはポリマ
ーの抗原のためのアッセイにおいて、同一の抗体を使用
して標識トレーサーとして免疫吸着剤を形成することが
できる。
サンドイッチＩＲＭＡは前進、逆あるいは同時のモード
で実施することができる。
で実施することができる。
ヒト前立腺腫瘍関連抗原のための前進サンドイッチアッ
セイにおいて、本発明のモノクローナル抗体を固相に添
付して、ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対して特異的な免疫
吸着剤を形成する。ヒト前立腺腫瘍関連抗原を含有する
液体試料を免疫吸着剤とともにインキュベーションする
。インキュベーションは、液体試料中のヒト前立腺腫瘍
関連抗原が免疫吸着剤上の免疫化モノクローナル抗体と
結合できるために十分な時間の間維持する。この第１イ
ンキユベーシヨン後、固相の免疫吸着剤をインキュベー
ション混合物から分離する。この免疫吸着剤を洗浄して
、また、液体試料中に存在することがある結合しない妨
害物質、例えば、非特異的結合蛋白質を除去する。免疫
化モノクローナル抗体へ結合したヒト前立腺腫瘍関連抗
原を含有する免疫吸着剤を、引続いて、本発明の標識モ
ノクローナル抗体とともにインキュベーションする。再
び、インキュベーションをヒト前立腺腫瘍関連抗原への
標識抗体の結合を保証するために十分な時間にわたって
かつ条件下に実施する。第２インキユベーシヨン後、他
の洗浄を実施して結合しない標識抗体を固相の免疫吸着
剤から除去する。次いで、固相の免疫吸着剤へ結合した
標識抗体を測定し、そして検出された標識抗体の量はヒ
ト前立腺腫瘍関連抗原の量の直接の測度として役立つ。
セイにおいて、本発明のモノクローナル抗体を固相に添
付して、ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対して特異的な免疫
吸着剤を形成する。ヒト前立腺腫瘍関連抗原を含有する
液体試料を免疫吸着剤とともにインキュベーションする
。インキュベーションは、液体試料中のヒト前立腺腫瘍
関連抗原が免疫吸着剤上の免疫化モノクローナル抗体と
結合できるために十分な時間の間維持する。この第１イ
ンキユベーシヨン後、固相の免疫吸着剤をインキュベー
ション混合物から分離する。この免疫吸着剤を洗浄して
、また、液体試料中に存在することがある結合しない妨
害物質、例えば、非特異的結合蛋白質を除去する。免疫
化モノクローナル抗体へ結合したヒト前立腺腫瘍関連抗
原を含有する免疫吸着剤を、引続いて、本発明の標識モ
ノクローナル抗体とともにインキュベーションする。再
び、インキュベーションをヒト前立腺腫瘍関連抗原への
標識抗体の結合を保証するために十分な時間にわたって
かつ条件下に実施する。第２インキユベーシヨン後、他
の洗浄を実施して結合しない標識抗体を固相の免疫吸着
剤から除去する。次いで、固相の免疫吸着剤へ結合した
標識抗体を測定し、そして検出された標識抗体の量はヒ
ト前立腺腫瘍関連抗原の量の直接の測度として役立つ。
サンドイッチＩＲＭＡは、また、逆および同時のモード
で実施できる。逆のモードにおいて、試験すべき液体試
料とヒト前立腺腫瘍関連抗原に対して向けられた可溶性
標識抗体とからインキュベーション混合物を形成する。
で実施できる。逆のモードにおいて、試験すべき液体試
料とヒト前立腺腫瘍関連抗原に対して向けられた可溶性
標識抗体とからインキュベーション混合物を形成する。
この混合物をインキュベーションし、次いでヒト前立腺
腫瘍関連抗原に対して向けられたモノクローナル抗体を
また含有する固相の免疫吸着剤とともにインキュベーシ
ョンする。他のインキュベーション後、免疫吸着剤を混
合物から分離し、そして免疫吸着剤に結合した標識を液
体試料中のヒト前立腺腫瘍関連抗原の量の指示として採
用する。
腫瘍関連抗原に対して向けられたモノクローナル抗体を
また含有する固相の免疫吸着剤とともにインキュベーシ
ョンする。他のインキュベーション後、免疫吸着剤を混
合物から分離し、そして免疫吸着剤に結合した標識を液
体試料中のヒト前立腺腫瘍関連抗原の量の指示として採
用する。
同時のモードにおいて、インキュベーション混合物を液
体試料、標識モノクローナル抗体および固相の免疫吸着
剤から形成する。適当なインキュベーション後、固相の
免疫吸着剤を混合物が分離し、そして免疫吸着剤に関連
する標識を測定して液体試料中のヒト前立腺腫瘍関連抗
原の量の指示を得る。
体試料、標識モノクローナル抗体および固相の免疫吸着
剤から形成する。適当なインキュベーション後、固相の
免疫吸着剤を混合物が分離し、そして免疫吸着剤に関連
する標識を測定して液体試料中のヒト前立腺腫瘍関連抗
原の量の指示を得る。
アッセイの種々のフォーマットにおける各インキュベー
ション工程のため、インキュベーション時間および条件
は、固定化抗体および標識抗体に対してヒト前立腺腫瘍
関連抗原が最高に結合するように選択する。
ション工程のため、インキュベーション時間および条件
は、固定化抗体および標識抗体に対してヒト前立腺腫瘍
関連抗原が最高に結合するように選択する。
ここに記載するＩＲＭＡに加えて、本発明において有用
な他のイムノアッセイは競合的結合アッセイ、例えば、
ラジオイムノアッセイ（ＲＩ Ａ）を包含する。ＲＩＡ
の１つの適当なタイプは固相ＲＩＡである。
な他のイムノアッセイは競合的結合アッセイ、例えば、
ラジオイムノアッセイ（ＲＩ Ａ）を包含する。ＲＩＡ
の１つの適当なタイプは固相ＲＩＡである。
固相の免疫吸着剤はＩＲＭＡについて説明したように調
製する。
製する。
次いで、免疫吸着剤を液体試料および既知量の標識ヒト
前立腺腫瘍関連抗原とともに、免疫吸着剤へのヒト前立
腺腫瘍関連抗原を可能とするために十分な時間にわたっ
てかつ条件下にインキュベーションする。免疫吸着剤を
液体試料から分離し、そしてそれと関連する標識を評価
する。免疫吸着剤に関連する（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ
ｗｉｔｈ）標識ヒト前立腺腫瘍関連抗原の間の関係を
定める前もって確立した阻害曲線を参照することによっ
て、液体試料中の非標識ヒト前立腺腫瘍関連抗原の量を
決定する。
前立腺腫瘍関連抗原とともに、免疫吸着剤へのヒト前立
腺腫瘍関連抗原を可能とするために十分な時間にわたっ
てかつ条件下にインキュベーションする。免疫吸着剤を
液体試料から分離し、そしてそれと関連する標識を評価
する。免疫吸着剤に関連する（ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ
ｗｉｔｈ）標識ヒト前立腺腫瘍関連抗原の間の関係を
定める前もって確立した阻害曲線を参照することによっ
て、液体試料中の非標識ヒト前立腺腫瘍関連抗原の量を
決定する。
種々の固相アッセイにおいて、永代試料、標識抗体また
は両者を含有するインキュベーション混合物から免疫吸
着剤を分離する。分離は任意の慣用の分離技術、例えば
、沈降または遠心により達成することができる。好まし
くは、かならずしも必要ではないが、免疫吸着剤はそれ
との接触前に、必要なとき、第２インキユベーシヨン媒
質で洗浄し、次いで免疫吸着剤と関連する標識の量を測
定する。この洗浄は非特異的妨害物質または、アッセイ
の精度および感度に影テを及ぼしうる過剰の標識抗体を
除去する。
は両者を含有するインキュベーション混合物から免疫吸
着剤を分離する。分離は任意の慣用の分離技術、例えば
、沈降または遠心により達成することができる。好まし
くは、かならずしも必要ではないが、免疫吸着剤はそれ
との接触前に、必要なとき、第２インキユベーシヨン媒
質で洗浄し、次いで免疫吸着剤と関連する標識の量を測
定する。この洗浄は非特異的妨害物質または、アッセイ
の精度および感度に影テを及ぼしうる過剰の標識抗体を
除去する。
本発明による生体外診断法の最後の工程として、体液中
に存在する物質に結合するモノクローナル抗体の量を前
もって決定した基本水準と比較する。
に存在する物質に結合するモノクローナル抗体の量を前
もって決定した基本水準と比較する。
予期すべきモノクローナル抗体のモノクローナル抗体ア
ッセイの結合の基本水準の決定は、この種の診断試験の
読取りのために必要なパラメーターを定めるとき、この
分野において日常的になされる決定である。これらの決
定は、不都合な実験を実施しないで、とくにここに記載
する教示に照らしてなすことができる。
ッセイの結合の基本水準の決定は、この種の診断試験の
読取りのために必要なパラメーターを定めるとき、この
分野において日常的になされる決定である。これらの決
定は、不都合な実験を実施しないで、とくにここに記載
する教示に照らしてなすことができる。
一般に、「基本水準（ｂａｓｅ ｌ ｅ ｖ
ｅｌ）Ｊは、（１）正常の個体数（ｐｏｐｕｌａｔｉｏ
ｎ）の平均より上の２つの標準偏差として。
ｅｌ）Ｊは、（１）正常の個体数（ｐｏｐｕｌａｔｉｏ
ｎ）の平均より上の２つの標準偏差として。
あるいは（２）正常の個体数の９９％がそれより低いと
ころにある水準として定義される。
ころにある水準として定義される。
本発明の第３の実施態様において、前立腺腫瘍またはそ
の転移の生体内診断法が提供される。
の転移の生体内診断法が提供される。
この方法は、患者にマーカーに接合した（ｃｎｊｕｇａ
ｔｅｄ）本発明のモノクローナル抗体を投与し、次いで
患者を適当な検出装置に暴露することによってマーカー
の存在を検出することを包含する。
ｔｅｄ）本発明のモノクローナル抗体を投与し、次いで
患者を適当な検出装置に暴露することによってマーカー
の存在を検出することを包含する。
マーカーに接合したモノクローナル抗体の投与および検
出ならびにマーカーへの抗体の接合法は、当業者によく
知られた方法あるいは当業者により容易に決定される方
法により達成される。例えば、次の文献を参照：ゴール
デンバーグ（Ｇ。
出ならびにマーカーへの抗体の接合法は、当業者によく
知られた方法あるいは当業者により容易に決定される方
法により達成される。例えば、次の文献を参照：ゴール
デンバーグ（Ｇ。
ｌｄｅｎｂｅｒｇ）、Ｄ、Ｍ、ら、ニュー・ヱｚグラン
ドφジャーナル・オブ・メディシン（ＮｅＷ 旦ユｌ
土ａｎｄ Ｊ、 Ｍｅｄ、）、２９旦、１３Ｂ４−
１３８８ （１９７８）、ゴールデンバーグ（Ｇｏ ｌ
ｄｅｎｂｅｒｇ）、Ｄ、Ｍ。
ドφジャーナル・オブ・メディシン（ＮｅＷ 旦ユｌ
土ａｎｄ Ｊ、 Ｍｅｄ、）、２９旦、１３Ｂ４−
１３８８ （１９７８）、ゴールデンバーグ（Ｇｏ ｌ
ｄｅｎｂｅｒｇ）、Ｄ、Ｍ。
ら、ジャーナル−＋ｉ・アメリカン・メディカル書アソ
シエーション（止ユ Δユ 鼠ユΔユ）、２５０，６３
０−６３５ （１９８３）、ゴールデンバーグ（Ｇｏｌ
ｄｅｎｂｅｒｇ）。
シエーション（止ユ Δユ 鼠ユΔユ）、２５０，６３
０−６３５ （１９８３）、ゴールデンバーグ（Ｇｏｌ
ｄｅｎｂｅｒｇ）。
Ｄ、Ｍ、ら、消化器病学（Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅ ｒｏ
ｌ 、）、 ｕ、５２４−５３２ （１９８３）・
シラカルブ４ （Ｓｉｃｃａｒｄｉ）、Ａ。
ｌ 、）、 ｕ、５２４−５３２ （１９８３）・
シラカルブ４ （Ｓｉｃｃａｒｄｉ）、Ａ。
Ｇ、ら５ｆ（ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、）。
土６ ： ４８１７−４８２２ （１９８６）、エペネ
トス（Ｅｐｅｎｅｔ ｏｓ）、Ａ、Ａ、ら、痛（且ａｎ
ｃｅｒ）、ｌ１： ９８４−９８７ （１９８５）、フ
ィルベン（Ｐｈｉ １ｂｅｎ）、Ｖ、Ｊ 。
トス（Ｅｐｅｎｅｔ ｏｓ）、Ａ、Ａ、ら、痛（且ａｎ
ｃｅｒ）、ｌ１： ９８４−９８７ （１９８５）、フ
ィルベン（Ｐｈｉ １ｂｅｎ）、Ｖ、Ｊ 。
ら、Ｊｉ％（ｃａｎｃｅｒ）、５７：５７１−５７６（
１９８６）、チオウ（ｃｈ ｉ ｏ ｕ） 、 Ｒ、
ら。
１９８６）、チオウ（ｃｈ ｉ ｏ ｕ） 、 Ｒ、
ら。
癌の研究（ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、）、４５：６１４
０−６１４６ （１９８５）およびワンプ（Ｈｗａｎｇ
）、に、Ｍ、ら、ジャーナル・オブ・す旦、８４９−８
５５ （１９８６）（これらのすべてを特別にここに引
用によって加える）。
０−６１４６ （１９８５）およびワンプ（Ｈｗａｎｇ
）、に、Ｍ、ら、ジャーナル・オブ・す旦、８４９−８
５５ （１９８６）（これらのすべてを特別にここに引
用によって加える）。
投与量は患者の年令および体重に依存して変化するであ
ろうが、一般に約０．１〜２０ｍｇ（のマーカーに接合
したモノクローナル抗体）／患者の１回の投与量は十分
である。より好ましい投与量は約１．０〜２ 、０ｍｇ
（のマーカーに接合したモノクローナル抗体）／患者
である。
ろうが、一般に約０．１〜２０ｍｇ（のマーカーに接合
したモノクローナル抗体）／患者の１回の投与量は十分
である。より好ましい投与量は約１．０〜２ 、０ｍｇ
（のマーカーに接合したモノクローナル抗体）／患者
である。
抗体に接合することができるマーカーの例は、この分野
においてよく知られており、そして核磁気共鳴の像形成
、すなわち、核磁気スピン共鳴アイソトープ、および放
射性物質により検出できる物質を包含する。
においてよく知られており、そして核磁気共鳴の像形成
、すなわち、核磁気スピン共鳴アイソトープ、および放
射性物質により検出できる物質を包含する。
核磁気スピン共鳴アイソトープの好ましい例はガドリニ
ウム（Ｇｄ）である。
ウム（Ｇｄ）である。
放射性マーカーの適当な例は、１１２５、Ｉ１３＋、１
１２３．１ｎ１１１．Ｊｎ＋１３、Ｇａ６７、Ｇａ６８
．Ｒｕ９’、Ｒｕ”３．Ｈｇ１９７．）ｉｇ２０３およ
び’ｌ”Ｃ９９を包含する １ｎ１１１および’ｌ’Ｑ
９９ は、エネルギーが低くかつ長い範囲の検出に適
するので、好ましい。
１２３．１ｎ１１１．Ｊｎ＋１３、Ｇａ６７、Ｇａ６８
．Ｒｕ９’、Ｒｕ”３．Ｈｇ１９７．）ｉｇ２０３およ
び’ｌ”Ｃ９９を包含する １ｎ１１１および’ｌ’Ｑ
９９ は、エネルギーが低くかつ長い範囲の検出に適
するので、好ましい。
放射性マーカーの検出は、上の文献中に記載されるガン
マシンチレーションカメラなどによる。
マシンチレーションカメラなどによる。
核磁気像形成装置を使用して核磁気スピン共鳴アイソト
ープのマーカーを検出することができる。
ープのマーカーを検出することができる。
第４実施態様において、本発明は前立腺腫瘍またはその
転移に悩む患者を処置する方法を提供する。
転移に悩む患者を処置する方法を提供する。
この方法は患者に製薬学的に有効な量のモノクローナル
抗体−治療剤を投与することを包含し、ここでモノクロ
ーナル抗体は本発明によるものである。
抗体−治療剤を投与することを包含し、ここでモノクロ
ーナル抗体は本発明によるものである。
モノクローナル抗体−治療剤を調製しかつ投与する方法
ならびに適当な投与量は、この分野においてよく知られ
ているか、あるいは当業者により容易に決定される。代
表的プロトコールは下に引用する文献に記載されている
。
ならびに適当な投与量は、この分野においてよく知られ
ているか、あるいは当業者により容易に決定される。代
表的プロトコールは下に引用する文献に記載されている
。
治療において使用するモノクローナル抗体−治療剤の例
は１次のものを包含する：薬物、例えば、メトトレキセ
ートおよびアドリアマイシンに結合した抗体、例えば、
次の文献に記載されているもの、デグチ（Ｄｅｇｕｃｈ
ｉ）、Ｔ、ら、痛の研究（ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、）
、４６：３７５１ （１９８６）、デグチ（Ｄｅｇｕｃ
ｈｉ）。
は１次のものを包含する：薬物、例えば、メトトレキセ
ートおよびアドリアマイシンに結合した抗体、例えば、
次の文献に記載されているもの、デグチ（Ｄｅｇｕｃｈ
ｉ）、Ｔ、ら、痛の研究（ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、）
、４６：３７５１ （１９８６）、デグチ（Ｄｅｇｕｃ
ｈｉ）。
Ｔ、ら、フェデレイション・プロシーデングス（Ｆｅｄ
、 Ｐｒｏｃ、）、４４：１６８４（１９８５）、！
ムブレトン（Ｅｍｂｌｅｔｏｎ）。
、 Ｐｒｏｃ、）、４４：１６８４（１９８５）、！
ムブレトン（Ｅｍｂｌｅｔｏｎ）。
Ｍ、Ｊ、ら、プリティツク・ジャーナル・土ノ・キャン
サー（Ｂｒ、 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ）、４旦、５５
９ （１９８４）およびピム（Ｐｉｍエユ）、エヱ、１
２５−１３４ （１９８２）、（これらのすべてを特別
にここに引用によって加える）；毒素に結合した抗体、
例えば、次の文献に記載されているもの、ウール（Ｕｈ
ｒ）、Ｊ。
サー（Ｂｒ、 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ）、４旦、５５
９ （１９８４）およびピム（Ｐｉｍエユ）、エヱ、１
２５−１３４ （１９８２）、（これらのすべてを特別
にここに引用によって加える）；毒素に結合した抗体、
例えば、次の文献に記載されているもの、ウール（Ｕｈ
ｒ）、Ｊ。
Ｃａｎｃｅｒ）、アカデミツク・プレス・インコーホレ
ーテッド（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ ｒ ｅｓｓ、
Ｉｎｃ、）、８５−９８ページ（１９８３）、ビテッタ
（Ｖｉｔｅｔｔａ）、Ｅ、Ｓ。
ーテッド（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐ ｒ ｅｓｓ、
Ｉｎｃ、）、８５−９８ページ（１９８３）、ビテッタ
（Ｖｉｔｅｔｔａ）、Ｅ、Ｓ。
ｓ）、Ｐ、Ｈ，ｘイベルソｙ（Ａｂｅｌｓ。
ｎ）、７３−８５ページ（１９８４）およびビテッタ（
Ｖｉｔｅｔｔａ）、Ｅ、Ｓ、ら、サイエｙＸ（Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ）、２１９，６４４−６５０（１９８３）、（こ
れらのすべてを特別にここに引用によって加える）；ア
イソトープ、例えば、１１３１、Ｙｔ９０、Ｓｃ４ ’
、Ｃｕ６７．１３ｉ２１２．ｐｂ２１２およびＡｔ２
１１に結合した抗体、例えば、次の文献に記載されてい
るもの、ゴールデンバーグ（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒクイｏ
（ｃａｒｒａｓｑｕｉｌｌｏ）、Ｊ、Ａ。
Ｖｉｔｅｔｔａ）、Ｅ、Ｓ、ら、サイエｙＸ（Ｓｃｉｅ
ｎｃｅ）、２１９，６４４−６５０（１９８３）、（こ
れらのすべてを特別にここに引用によって加える）；ア
イソトープ、例えば、１１３１、Ｙｔ９０、Ｓｃ４ ’
、Ｃｕ６７．１３ｉ２１２．ｐｂ２１２およびＡｔ２
１１に結合した抗体、例えば、次の文献に記載されてい
るもの、ゴールデンバーグ（Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒクイｏ
（ｃａｒｒａｓｑｕｉｌｌｏ）、Ｊ、Ａ。
ザルクバーグ（Ｚａｌｃｂｅｒｇ）、Ｊ、Ｒ。
ら、ジャーナル・土プ・力乞□−ｋ）Ｉｉ・キャンサー
４）、ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）、Ｄ、Ｈ，ら。
４）、ジョーンズ（Ｊｏｎｅｓ）、Ｄ、Ｈ，ら。
インターナショナル・ジャーナル・土フ・キャンｆ 二
（Ｉｎｔ、 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ）、３５ニア１５
（１９８５）、ラング（Ｌｎｇｅ）、Ｐ。
（Ｉｎｔ、 Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ）、３５ニア１５
（１９８５）、ラング（Ｌｎｇｅ）、Ｐ。
Ｈｏら、外科学（Ｓｕｒｇｅｒｙ）、９旦、１４３ （
１９８５）、 カルトヴイッチ（Ｋａｌｔｏｖｉｃｈ）
、Ｆ、Ａ、ら、ジャーナル拳主ノ・クー（Ｏｄｅｒ）、
Ｓ、Ｅ、ら、Ｉｎｔ、 Ｊ。
１９８５）、 カルトヴイッチ（Ｋａｌｔｏｖｉｃｈ）
、Ｆ、Ａ、ら、ジャーナル拳主ノ・クー（Ｏｄｅｒ）、
Ｓ、Ｅ、ら、Ｉｎｔ、 Ｊ。
二Ｐｈｙｓ、） 、旦、 １２１ （１９８２）および
コーテナイールック（ｃｏｕｒｔｅｎａｙ−Ｌｕｃｋ）
、Ｎ、ら、ランセット（Ｌ ａ ｎ ｃ ｅ↓）、１
：１４４１ （１９８４）、（これらのすべてを特別に
ここに引用によって加える）；ヘテロ二官能性（ｈｅｔ
ｅｒｏｂｉｆｕｎｃｔ １ｏｎａｌ）抗体、例えば、複
合体が腫瘍および体自身のキラー細胞の両者に結合する
ように、他の抗体へ結合またはスプライシングされた抗
体、例えば、次の文献に記載されているもの、ペレズ（
Ｐｅｒｅｚ）、Ｐ、ら、ジャーナルｅ土グ・イクスペリ
メンタル・メディシン（去ユ Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ、）
、１６３：１６６−１７８ （１９８６）およびダウ（
Ｌａｕ）、Ｍ、Ａ、ら、プロシーディンゲス・土ノ・九
ヱユ土上・アカデミ−会オフ’−サイエンシズ（Ｐｒｏ
ｃ、 Ｎａｔ ｌ 、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、）
、ＵＳＡ、８２．８６４８−８６５２ （１９Ｂ４）、
（これらの両者を特別にここに引用によって加える）；
および自然の、すなわち、接合または複合体化されてい
ない、抗体、例えば、次の文献に記載されているもの、
ヘルリｙ（Ｈｅｒｌｙｎ）、Ｄ、ら、プロシーディンゲ
ス＃土ノΦナショナル・アカデミ−・土ｊ・サイエンシ
ズ（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ ｌ 、 Ａｃａｄ、
Ｓｃｉ 、）、ＵＳＡ、ヱ９，４７６１（１９８２）、
シュルズ（Ｓｃｈｕｌｚ）、Ｇ、らｔ上、 Ａｃａｄ
、 Ｓｃｉ、）、ＵＳＡ、ｌ１゜５４０７ （１９８
３）、ケイボン（ｃａｐｏｎｅ）、Ｐ、Ｍ、ら、プロシ
ーディンゲス・土り・上よ）、ＵＳＡ、旦０．７３２８
（１９８３）、シアーズ（Ｓ ｅ ａ ｒ ｓ）
、 Ｈ、Ｆ 、ら、癌の研究（ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ
、）、４５：５９１０（１９８５）、ネポム（Ｎｅｐｏ
ｍ）、Ｇ、Ｔ。
コーテナイールック（ｃｏｕｒｔｅｎａｙ−Ｌｕｃｋ）
、Ｎ、ら、ランセット（Ｌ ａ ｎ ｃ ｅ↓）、１
：１４４１ （１９８４）、（これらのすべてを特別に
ここに引用によって加える）；ヘテロ二官能性（ｈｅｔ
ｅｒｏｂｉｆｕｎｃｔ １ｏｎａｌ）抗体、例えば、複
合体が腫瘍および体自身のキラー細胞の両者に結合する
ように、他の抗体へ結合またはスプライシングされた抗
体、例えば、次の文献に記載されているもの、ペレズ（
Ｐｅｒｅｚ）、Ｐ、ら、ジャーナルｅ土グ・イクスペリ
メンタル・メディシン（去ユ Ｅｘｐ、 Ｍｅｄ、）
、１６３：１６６−１７８ （１９８６）およびダウ（
Ｌａｕ）、Ｍ、Ａ、ら、プロシーディンゲス・土ノ・九
ヱユ土上・アカデミ−会オフ’−サイエンシズ（Ｐｒｏ
ｃ、 Ｎａｔ ｌ 、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、）
、ＵＳＡ、８２．８６４８−８６５２ （１９Ｂ４）、
（これらの両者を特別にここに引用によって加える）；
および自然の、すなわち、接合または複合体化されてい
ない、抗体、例えば、次の文献に記載されているもの、
ヘルリｙ（Ｈｅｒｌｙｎ）、Ｄ、ら、プロシーディンゲ
ス＃土ノΦナショナル・アカデミ−・土ｊ・サイエンシ
ズ（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ ｌ 、 Ａｃａｄ、
Ｓｃｉ 、）、ＵＳＡ、ヱ９，４７６１（１９８２）、
シュルズ（Ｓｃｈｕｌｚ）、Ｇ、らｔ上、 Ａｃａｄ
、 Ｓｃｉ、）、ＵＳＡ、ｌ１゜５４０７ （１９８
３）、ケイボン（ｃａｐｏｎｅ）、Ｐ、Ｍ、ら、プロシ
ーディンゲス・土り・上よ）、ＵＳＡ、旦０．７３２８
（１９８３）、シアーズ（Ｓ ｅ ａ ｒ ｓ）
、 Ｈ、Ｆ 、ら、癌の研究（ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ
、）、４５：５９１０（１９８５）、ネポム（Ｎｅｐｏ
ｍ）、Ｇ、Ｔ。
ら、プロシーディンゲス−土１１１力ヱユ土上・ヱカデ
ミー〇土ノ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ、 Σａｔ１．
Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、）、ＵＳＡ、旦１．２８６４ （１
９８４）、コブロウスキー（Ｋｏｐｒｏｗｓｋｆ）、Ｈ
，ら、プロシーディングＺ−土ブ・土ヱ□土四・アカデ
ミ−・土ノ・竺コーエンシズ（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ
、 Ａｃａｄ−３ｃｉ、）、ＵＳＡ、８ユ、２１８（
１９８４）およびホウブトン（Ｈｏｕｇｈｔｏｎ）。
ミー〇土ノ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ、 Σａｔ１．
Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、）、ＵＳＡ、旦１．２８６４ （１
９８４）、コブロウスキー（Ｋｏｐｒｏｗｓｋｆ）、Ｈ
，ら、プロシーディングＺ−土ブ・土ヱ□土四・アカデ
ミ−・土ノ・竺コーエンシズ（Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｌ
、 Ａｃａｄ−３ｃｉ、）、ＵＳＡ、８ユ、２１８（
１９８４）およびホウブトン（Ｈｏｕｇｈｔｏｎ）。
Ａ、Ｎ、ら、プロシーディンゲス・土１ ＠ ＋ショ±
上・アカデミ−＋１−！Ｅｉ・サイエンシズ（Ｐｒ。
上・アカデミ−＋１−！Ｅｉ・サイエンシズ（Ｐｒ。
ｃ、 Ｎａｔ ｌ 、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ、）
、ＵＳＡ、８２．１２４２ （１９８５）、 （これら
のすべてを特別にここに引用によって加える）。
、ＵＳＡ、８２．１２４２ （１９８５）、 （これら
のすべてを特別にここに引用によって加える）。
本発明のこの実施態様において、モノクローナル抗体−
治療剤は腫瘍部位に直接供給し、これにより腫瘍組織を
治療剤に直接暴露することができス 次の実施例は例示のみを目的とし、そして本発明の範囲
をいかなる方法においても限定しない。
治療剤は腫瘍部位に直接供給し、これにより腫瘍組織を
治療剤に直接暴露することができス 次の実施例は例示のみを目的とし、そして本発明の範囲
をいかなる方法においても限定しない。
実施例１
モノクローナル抗体ＴＵＲＰ−２７およ３匹の雌のＢＡ
ＬＢ／ｃ［バーラン・スプレィクーダウレイ（Ｈａｒｌ
ａｎ Ｓｐｒａｑｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）、 インデ
ィアナ州インディアナポリス、生後２０週］を、３つの
良性前立腺増生（ＢＰ）ｉ）検体および１つの前立腺腺
癌の経尿道切除検体のプールから誘導された粗製膜抗原
調製物に対して超免疫化した。
ＬＢ／ｃ［バーラン・スプレィクーダウレイ（Ｈａｒｌ
ａｎ Ｓｐｒａｑｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）、 インデ
ィアナ州インディアナポリス、生後２０週］を、３つの
良性前立腺増生（ＢＰ）ｉ）検体および１つの前立腺腺
癌の経尿道切除検体のプールから誘導された粗製膜抗原
調製物に対して超免疫化した。
粗製膜抗原調製物は、単細胞懸濁液を２０ミリモルのヘ
ベス（Ｈｅｐｅｓ）（ｐＨ７，１）、５．０ミリモルの
ＮａＣ１，１，０ミリモルのＭｇＣ１２，０，１モルの
ＮａＦおよび１．０ミリモルのＦＭＳＦからなる低張緩
衝液中で１〜２時間インキュベーションした。次いで、
細胞をダウンス（Ｄｏｕｎｃｅ）ホモジナイゼイション
により溶解した。核部分（ｎｕｃｌｅａｒ ｆｒａｃ
ｔｉｏｎ）を２００Ｘｇにおいて５分間遠心することに
より除去し、そして上澄みをデカンテーションし、そし
て２５ 、ＯＯＯＸｇおよび４℃において３０分間再遠
心した。次いで、生ずる沈殿物を２０ミリモルのヘペス
（ｐＨ６，８）、４０ミリモ）Ｌｔ７） Ｎ ａ Ｃｌ
、０．１ミリモルのＥＤＴＡおよび２．０ミリモルのＦ
ＭＳＦからなる膜緩衝液中の３７％（Ｖ／Ｖ）スクロー
ス溶液の１．５ｍｌ中に再溶解し、膜緩衝液中の２０％
（Ｖ／Ｖ）スクロース溶液の３．０ｍｌを上に配置し、
そして２．００Ｏｒｐｍおよび２℃において１６時間遠
心した。次いで、膜に富んだ（２０〜３７％）界面をほ
ぼ１．０ｍｌにおいて除去し、１０ｍ１の膜緩衝液で希
釈し、そして４０ 、００Ｏｒｐｍおよび１０℃におい
て遠心して粗製膜抗原調製物を得た。
ベス（Ｈｅｐｅｓ）（ｐＨ７，１）、５．０ミリモルの
ＮａＣ１，１，０ミリモルのＭｇＣ１２，０，１モルの
ＮａＦおよび１．０ミリモルのＦＭＳＦからなる低張緩
衝液中で１〜２時間インキュベーションした。次いで、
細胞をダウンス（Ｄｏｕｎｃｅ）ホモジナイゼイション
により溶解した。核部分（ｎｕｃｌｅａｒ ｆｒａｃ
ｔｉｏｎ）を２００Ｘｇにおいて５分間遠心することに
より除去し、そして上澄みをデカンテーションし、そし
て２５ 、ＯＯＯＸｇおよび４℃において３０分間再遠
心した。次いで、生ずる沈殿物を２０ミリモルのヘペス
（ｐＨ６，８）、４０ミリモ）Ｌｔ７） Ｎ ａ Ｃｌ
、０．１ミリモルのＥＤＴＡおよび２．０ミリモルのＦ
ＭＳＦからなる膜緩衝液中の３７％（Ｖ／Ｖ）スクロー
ス溶液の１．５ｍｌ中に再溶解し、膜緩衝液中の２０％
（Ｖ／Ｖ）スクロース溶液の３．０ｍｌを上に配置し、
そして２．００Ｏｒｐｍおよび２℃において１６時間遠
心した。次いで、膜に富んだ（２０〜３７％）界面をほ
ぼ１．０ｍｌにおいて除去し、１０ｍ１の膜緩衝液で希
釈し、そして４０ 、００Ｏｒｐｍおよび１０℃におい
て遠心して粗製膜抗原調製物を得た。
等体積の完全フロインドアジュバントと混合した１００
ルｇの粗製膜抗原：Ａ製物で、マウスを皮下的に（０，
１ｍ１）および筋肉内に（後部の脇腹、０．０５ｍ１）
免疫化した（第０日）。これらのマウスを、第６日およ
び第３６日に、０．１ｍｌのＰＢＳ中の１００ルｇの粗
製膜抗原調製物の腹腔的注射により促進（ｂｏｏｓｔ）
した。第６６日に、マウスに０．１ｍｌのＰＢＳ中ノ１
０ｏｇｇの粗製膜抗原調製物を静脈内注射し、モして肺
臓を融合のため４日後に除去した。超免疫化したマウス
からの肺細胞を、コーラ−（Ｋｏｈｌｅｒ）、Ｇ、ら、
ユーロビアンｅジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｅｕ
ｒ、 Ｊ、 Ｉｍｍｕ旦、）、旦、２９２−２９５
（１９７６）（特別にここに引用によって加える）に
記載されているようにして、５０％のポリエチレングリ
コールの存在下に［アメリカン・タイプ・カルチャー・
コレクシ、、ン（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃ
ｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）、分子量１３
００−１６００１ 、ｍｌプロウスキー（Ｋｏｐｒｉ、
）、ＵＳＡ、７４．２９８５−２９８８ （１９７７
）（特別にここに引用によって加える）により確立され
た手順に従い、Ｐ３−ＭＳ−１−Ａｇ４−１マウス骨髄
腫細胞と融合した。融合後。
ルｇの粗製膜抗原：Ａ製物で、マウスを皮下的に（０，
１ｍ１）および筋肉内に（後部の脇腹、０．０５ｍ１）
免疫化した（第０日）。これらのマウスを、第６日およ
び第３６日に、０．１ｍｌのＰＢＳ中の１００ルｇの粗
製膜抗原調製物の腹腔的注射により促進（ｂｏｏｓｔ）
した。第６６日に、マウスに０．１ｍｌのＰＢＳ中ノ１
０ｏｇｇの粗製膜抗原調製物を静脈内注射し、モして肺
臓を融合のため４日後に除去した。超免疫化したマウス
からの肺細胞を、コーラ−（Ｋｏｈｌｅｒ）、Ｇ、ら、
ユーロビアンｅジャーナル・オブ・イムノロジー（Ｅｕ
ｒ、 Ｊ、 Ｉｍｍｕ旦、）、旦、２９２−２９５
（１９７６）（特別にここに引用によって加える）に
記載されているようにして、５０％のポリエチレングリ
コールの存在下に［アメリカン・タイプ・カルチャー・
コレクシ、、ン（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃ
ｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ）、分子量１３
００−１６００１ 、ｍｌプロウスキー（Ｋｏｐｒｉ、
）、ＵＳＡ、７４．２９８５−２９８８ （１９７７
）（特別にここに引用によって加える）により確立され
た手順に従い、Ｐ３−ＭＳ−１−Ａｇ４−１マウス骨髄
腫細胞と融合した。融合後。
細胞（３、Ｏｘｌ ０８ の牌および３．０Ｘ１０７の
骨髄腫）を洗浄し、そして１０％（Ｖ／Ｖ）のウシ胎児
血清［ハイクローン番ラボラトリーズ（Ｈｙｃｌｏｎｅ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ。
骨髄腫）を洗浄し、そして１０％（Ｖ／Ｖ）のウシ胎児
血清［ハイクローン番ラボラトリーズ（Ｈｙｃｌｏｎｅ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ。
Ｌｏｇａｎ、Ｕｔａｈ）］、 １．０Ｘ１０”−’モル
のハイポキサンチン、４．０Ｘ１０−７モルのアミノプ
テリン、６．４Ｘ１０−″５モルのチミジンおよび５０
）Ｌｇ／ｍｌのゲンタマイシン［グランド番アイランド
ーバイオロジカル拳カンパニー（Ｇｒａｎｄ ｌ５ｌ
ａｎｄ ＢｉｏｌｇｉｃａＹｏｒｋ）］を含有する３
００ｍｌのＨＳＩＬｏＳＭ培地［ハイブリドーマ・サイ
エンシズ・インコーホレーデラド（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ
５ｃｉｅｎｃｅｓ、Ｉｎｃ、、Ａｔ １ａｎｔａ、
Ｇｅｏｒｇｉａ）］中に再懸濁した。次いで、細胞を０
．２ｍｌのアリコートで９６ウエル（ｗｅｔｌ）のマイ
クロタイタープレート［コースタ−（ｃｏｓｔａｒ）、
Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔ’ｔｓ）
中に分散させた。問題のものであることが決定された、
すなわち、前立腺抗原に対する結合特異性をもつが、前
立腺抗原以外の抗原に対する結合特異性をもたないモノ
クローナル抗体を生産するハイブリドーマを、限界希釈
により二重クローニングした。この方法で、ＴＵＲＰ−
２７およびＴＵＲＰ−７３と表示するモノクローナル抗
体を生産する２つのハイブリドーマが発現された。ＴＵ
ＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３はアメリカン・タイプ
・カルチャーΦｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏ
ｎ、１２３０１ Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ、
Ｒｏｃｋｙｆｉｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、Ｕ、Ｓ、Ａ、
２０８５２）に、それぞれ、ＡＴＣＣＮｏ、４０２９２
およびＡＴＣＣＮｏ、４０２９３で受託された。
のハイポキサンチン、４．０Ｘ１０−７モルのアミノプ
テリン、６．４Ｘ１０−″５モルのチミジンおよび５０
）Ｌｇ／ｍｌのゲンタマイシン［グランド番アイランド
ーバイオロジカル拳カンパニー（Ｇｒａｎｄ ｌ５ｌ
ａｎｄ ＢｉｏｌｇｉｃａＹｏｒｋ）］を含有する３
００ｍｌのＨＳＩＬｏＳＭ培地［ハイブリドーマ・サイ
エンシズ・インコーホレーデラド（Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ
５ｃｉｅｎｃｅｓ、Ｉｎｃ、、Ａｔ １ａｎｔａ、
Ｇｅｏｒｇｉａ）］中に再懸濁した。次いで、細胞を０
．２ｍｌのアリコートで９６ウエル（ｗｅｔｌ）のマイ
クロタイタープレート［コースタ−（ｃｏｓｔａｒ）、
Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔ’ｔｓ）
中に分散させた。問題のものであることが決定された、
すなわち、前立腺抗原に対する結合特異性をもつが、前
立腺抗原以外の抗原に対する結合特異性をもたないモノ
クローナル抗体を生産するハイブリドーマを、限界希釈
により二重クローニングした。この方法で、ＴＵＲＰ−
２７およびＴＵＲＰ−７３と表示するモノクローナル抗
体を生産する２つのハイブリドーマが発現された。ＴＵ
ＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３はアメリカン・タイプ
・カルチャーΦｕｌｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏ
ｎ、１２３０１ Ｐａｒｋｌａｗｎ Ｄｒｉｖｅ、
Ｒｏｃｋｙｆｉｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ、Ｕ、Ｓ、Ａ、
２０８５２）に、それぞれ、ＡＴＣＣＮｏ、４０２９２
およびＡＴＣＣＮｏ、４０２９３で受託された。
ニング
活性的に生長するハイブリドーマからの上澄みを、ある
数の正常の、増生の、ウィルス形質転換した悪性細胞系
［スターリング（Ｓｔａｒｌｉｎｇ）、Ｊ、Ｊ、ら、癌
の研究（ｃａｎｃｅｒ 旦ｅｓ、）、旦： ３０Ｂ４
−３０８９ （１９８２）］ （特別にここに引用によ
って加える）、および粗製膜抽出物に対する結合活性を
、スターリング（Ｓｔａｒｔｉｎｇ）、Ｊ、Ｊ、ら、ジ
ャーナル・オブ轡スプラモレキュラー・ストラフ５ｒ＋
−（Ｊ、 Ｓｕｐｒａｍｏｌ、 ５ｔｒｕｃ−Ｌエ
エ）よ１，５６３−５７７（１９７９）（特別にここに
引用によって加える）に記載されている固相ＲＩＡを用
いてスクリーニングした。
数の正常の、増生の、ウィルス形質転換した悪性細胞系
［スターリング（Ｓｔａｒｌｉｎｇ）、Ｊ、Ｊ、ら、癌
の研究（ｃａｎｃｅｒ 旦ｅｓ、）、旦： ３０Ｂ４
−３０８９ （１９８２）］ （特別にここに引用によ
って加える）、および粗製膜抽出物に対する結合活性を
、スターリング（Ｓｔａｒｔｉｎｇ）、Ｊ、Ｊ、ら、ジ
ャーナル・オブ轡スプラモレキュラー・ストラフ５ｒ＋
−（Ｊ、 Ｓｕｐｒａｍｏｌ、 ５ｔｒｕｃ−Ｌエ
エ）よ１，５６３−５７７（１９７９）（特別にここに
引用によって加える）に記載されている固相ＲＩＡを用
いてスクリーニングした。
モノクローナル抗体は、標準の培養条件下に１０％（ｖ
／ｖ）の胎児子牛血清の存在下に生長さ゛せたハイブリ
ドーマからの培養上澄みとして使用した。蛋白質濃度は
、ロウジー（Ｌ ｏ ｗ ｒ Ｖ） ＴＯｌＨｌら、
ジャーナル・オブ・バイオロジカ土・ケミストリー（Ｊ
、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈ ｅ工よ）１９３：２６５
−２７５ （１９５１）（特別にここに引用によって加
える）の方法により決定した。培養上澄みはほぼ１５〜
３“Ｏｐｇ／ｍｌのモノクローナル抗体を含有すること
がわかった。
／ｖ）の胎児子牛血清の存在下に生長さ゛せたハイブリ
ドーマからの培養上澄みとして使用した。蛋白質濃度は
、ロウジー（Ｌ ｏ ｗ ｒ Ｖ） ＴＯｌＨｌら、
ジャーナル・オブ・バイオロジカ土・ケミストリー（Ｊ
、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈ ｅ工よ）１９３：２６５
−２７５ （１９５１）（特別にここに引用によって加
える）の方法により決定した。培養上澄みはほぼ１５〜
３“Ｏｐｇ／ｍｌのモノクローナル抗体を含有すること
がわかった。
全細胞または粗製膜抽出物は、９６ウエルのポリ塩化ビ
ニルのマイクロタイタープレート［ダイナチク会うボラ
トリーズｅインコーポーレーテッド（Ｄｙｎａｔｅｃｈ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ、、Ａｌｅｘａ
ｎｄｒｉａ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ）］の個々のウェルに取
り付けた。さらに詳しくは、全細胞または粗製膜抽出物
３．ＯＩＬｇ／ウェルを各ウェルに添加し、そしてウェ
ルを乾燥した。次いで、０．１％（Ｖ／Ｖ）のグルタル
アルデヒドを各ウェルに数分間添加し、そしてＰＢＳで
洗浄した。固定された細胞をハイブリドーマ培養上澄み
とともに室温において１時間インキュベーションした。
ニルのマイクロタイタープレート［ダイナチク会うボラ
トリーズｅインコーポーレーテッド（Ｄｙｎａｔｅｃｈ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｎｃ、、Ａｌｅｘａ
ｎｄｒｉａ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ）］の個々のウェルに取
り付けた。さらに詳しくは、全細胞または粗製膜抽出物
３．ＯＩＬｇ／ウェルを各ウェルに添加し、そしてウェ
ルを乾燥した。次いで、０．１％（Ｖ／Ｖ）のグルタル
アルデヒドを各ウェルに数分間添加し、そしてＰＢＳで
洗浄した。固定された細胞をハイブリドーマ培養上澄み
とともに室温において１時間インキュベーションした。
よく洗浄した後、ウサギ抗マウスＩｇＧ血清［マイルズ
働ラボラトリーズ（Ｍｉｌｅｓ Ｌｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ、Ｅｌｋｈａｒｄｔ 、Ｉｎｄｉａｎａ）］の親和
精製した［グイメゼインス（Ｇｕｉｍｅｚａｎｅｓ）。
働ラボラトリーズ（Ｍｉｌｅｓ Ｌｂｏｒａｔｏｒｉ
ｅｓ、Ｅｌｋｈａｒｄｔ 、Ｉｎｄｉａｎａ）］の親和
精製した［グイメゼインス（Ｇｕｉｍｅｚａｎｅｓ）。
Ａ、ら、ユーロビアン・ジャーナル・土フ・（Ａノロジ
ー（Ｅｕｒ、 工、 Ｉｍｍｕｎ、）。
ー（Ｅｕｒ、 工、 Ｉｍｍｕｎ、）。
旦、６９−７２（１９７６）］ （特別にここに引用
によって加える）、１２５１標識［ハンター（Ｈｕｎｔ
ｅｒ）、Ｒ，ら、プロシーディンゲス・＋ｙ・ナショナ
ル・アカデミ−・土ノ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔ １． Ａｃａｄ。
によって加える）、１２５１標識［ハンター（Ｈｕｎｔ
ｅｒ）、Ｒ，ら、プロシーディンゲス・＋ｙ・ナショナ
ル・アカデミ−・土ノ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ、
Ｎａｔ １． Ａｃａｄ。
Ｓ ｃ ｉ 、） 、ＵＳＡ 、１３３．９８９−
９９２（１９７０）］ （特別にここに引用によって
加える）、Ｆ（ａｂ’）２断片［フリドマン（Ｆｒｉｄ
ｍａｎ）、Ｗ、Ｈ，ら、旦・イムノロジー（ｃｅｌｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、１１，４４２−４４５ （１９
７４）］ （特別にここに引用によって加える）の２
５ ｍ ｌを、各ウェル（１００，０００ｃｐｍ）に１
時間添加した。プレートを洗浄し、そして個々のウェル
を柔軟なマイクロタイタープレートから切取り、モして
ガンマカウンターで計数した。結果を下の表１および表
２に示す。
９９２（１９７０）］ （特別にここに引用によって
加える）、Ｆ（ａｂ’）２断片［フリドマン（Ｆｒｉｄ
ｍａｎ）、Ｗ、Ｈ，ら、旦・イムノロジー（ｃｅｌｌ
Ｉｍｍｕｎｏｌ、）、１１，４４２−４４５ （１９
７４）］ （特別にここに引用によって加える）の２
５ ｍ ｌを、各ウェル（１００，０００ｃｐｍ）に１
時間添加した。プレートを洗浄し、そして個々のウェル
を柔軟なマイクロタイタープレートから切取り、モして
ガンマカウンターで計数した。結果を下の表１および表
２に示す。
曽−曽０ 曽■ ０■ ■で ■−Ｎ 〜■
％−１”−一 （１）−−〇Ｎ クロ 膿曽
ｎト ロ曽 Ｎへ％ べ％ ぢ％ く％
％％ 早りＩ ＩＩ ＩＩ
羅１ １１ 。
％−１”−一 （１）−−〇Ｎ クロ 膿曽
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％％ 早りＩ ＩＩ ＩＩ
羅１ １１ 。
ＣＣＲＦ−ＳＲＢ細胞 １．５１ｕ９３７
組織球 １．９１ａ 結合比は、へ
イプリドーマ培養上澄みを＋ｙする細胞結合計数の合計
の数を、ＭＯＰ（ＩＩｇＧ＋を含有するＰ３Ｘ６３／Ａ
ｇ８骨１（ＡＴＣＣＮｏ、Ｔ Ｉ Ｂ ９）上澄みを
使用場細胞結合計数で割った値である。結合比が９大き
いとさ、その反応に陽性のスコアをる。結果はいずれか
１つの試験についてのル開の変動が２０％より小さい反
復試験のの平均である。
組織球 １．９１ａ 結合比は、へ
イプリドーマ培養上澄みを＋ｙする細胞結合計数の合計
の数を、ＭＯＰ（ＩＩｇＧ＋を含有するＰ３Ｘ６３／Ａ
ｇ８骨１（ＡＴＣＣＮｏ、Ｔ Ｉ Ｂ ９）上澄みを
使用場細胞結合計数で割った値である。結合比が９大き
いとさ、その反応に陽性のスコアをる。結果はいずれか
１つの試験についてのル開の変動が２０％より小さい反
復試験のの平均である。
コ田ａｌｄａｌａｌ−田−−−−−田
一ロ（Ｊ Ｃ＋）ＣＪ ＣＪロロ（ＪＣＪ口■υ０ａ
表１における脚注［ａｌを参照。
表１における脚注［ａｌを参照。
ｂ 外科および剖検の検体はｍ、密性を維持するため識
別番号を割当てた。検体は粗製膜調製物のために利用す
るまで、−７０℃で貯蔵した。
別番号を割当てた。検体は粗製膜調製物のために利用す
るまで、−７０℃で貯蔵した。
ＣプールしたＢＰＨおよび前立腺癌の検体を、ハイブリ
ドーマの生産のための免疫源として使用した。
ドーマの生産のための免疫源として使用した。
衷ｌおよび表２中の結果が示すように、Ｔ−２７と表示
するモノクローナル抗体は試ヒト細胞系のいずれに対し
ても反応性でなく（表１）、４種類の前立腺腺癌の４種
類、５種類のＢＰＨのうちの４種類および７種類の正常
の前立線膜調製物の１種類に結合しなかった（表２）
。ＴＵＲＰ−２７は、マタ、膀胱、卵巣。
するモノクローナル抗体は試ヒト細胞系のいずれに対し
ても反応性でなく（表１）、４種類の前立腺腺癌の４種
類、５種類のＢＰＨのうちの４種類および７種類の正常
の前立線膜調製物の１種類に結合しなかった（表２）
。ＴＵＲＰ−２７は、マタ、膀胱、卵巣。
結腸、腎、肝、リンパ節、膵臓、牌、蒙丸、尿道および
乳房を包含するＲＩＡにおいて検査した他の正常組織の
いずれとも反応しなかった（表口おいて、ＴＵＲＰ−７
３と表示する七ノール抗体はより広い範囲の細胞系およ
び組−る反応性を示した。詳しくは、ＴＵＲＰ＝３種類
のよく特徴づけられたヒト前立腺１系（ＤＵ１４５、Ｐ
Ｃ−３、ＬＮＣａびにＺＲ−７５−１乳癌および５ＷＩ
Ｉびｃｘ−ｉ結腸直腸癌の細胞系に結合し）、ＴＵＲＰ
−７３は、また、試験したすべての正常の、良性の増生
、および悪性の前立線膜調製物と強く反応し、そしてま
た、正常の腎に結合した（表２）。
乳房を包含するＲＩＡにおいて検査した他の正常組織の
いずれとも反応しなかった（表口おいて、ＴＵＲＰ−７
３と表示する七ノール抗体はより広い範囲の細胞系およ
び組−る反応性を示した。詳しくは、ＴＵＲＰ＝３種類
のよく特徴づけられたヒト前立腺１系（ＤＵ１４５、Ｐ
Ｃ−３、ＬＮＣａびにＺＲ−７５−１乳癌および５ＷＩ
Ｉびｃｘ−ｉ結腸直腸癌の細胞系に結合し）、ＴＵＲＰ
−７３は、また、試験したすべての正常の、良性の増生
、および悪性の前立線膜調製物と強く反応し、そしてま
た、正常の腎に結合した（表２）。
（ｃ） 免疫蛍光着色
生きている細胞および固定された細胞の免疫蛍光は、ス
ターリング（Ｓｔａｒｌｉｎｇ）、Ｊ。
ターリング（Ｓｔａｒｌｉｎｇ）、Ｊ。
Ｊ、ら、癌の研究（ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、）。
４２： ３０８４−３０８９ （１９８２）、およびス
ターリング（Ｓｔａｒｌｉｎｇ）、Ｊ、Ｊ。
ターリング（Ｓｔａｒｌｉｎｇ）、Ｊ、Ｊ。
ら、癌の研究（ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、）、４５：８
０４−８０８ （１９８５）（これらの両者を特別にこ
こに引用によって加える）に記載されているようにして
実施した。
０４−８０８ （１９８５）（これらの両者を特別にこ
こに引用によって加える）に記載されているようにして
実施した。
さらに詳しくは、１０６の細胞をプラスチック管内に入
れ、そして冷ＰＢＳで２回洗浄した。細胞の沈殿を１０
０．１のハイブリドーマ培養上澄み中に再懸濁し、モし
て４°Ｃで３０分間インキュベーションした。細胞の沈
殿を冷ＰＢＳで２回洗浄し、次いでフルオレセインイソ
チオシアネート接合抗マウスＩｇＧ［重鎖および軽鎖特
異的；カッペル［相］ラボラトリーズ（ｃａｐｐｅｌ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｃｏｃｈｒａｎｖｉｌｌ
ｅ、Ｐｅｎｎ５ｙｌｖａｎｉａ）］ の１ ：２０希釈
物の２５ｍ１と混合し、そして４°Ｃで３０分間インキ
ュベーションした。細胞を冷ＰＢＳ中で２回以上洗浄し
、そして再調査の準備が整うまで氷上で貯蔵した。細胞
の懸濁液の湿ったマウントをできるだけ早くつくり、そ
してツァイス（Ｚｅｉｓｓ）蛍光顕微鏡で検査した０合
計３００の細胞のなかから陽性の蛍光を示す細胞の数を
計数して、蛍光を示す細胞の百分率を決定した。
れ、そして冷ＰＢＳで２回洗浄した。細胞の沈殿を１０
０．１のハイブリドーマ培養上澄み中に再懸濁し、モし
て４°Ｃで３０分間インキュベーションした。細胞の沈
殿を冷ＰＢＳで２回洗浄し、次いでフルオレセインイソ
チオシアネート接合抗マウスＩｇＧ［重鎖および軽鎖特
異的；カッペル［相］ラボラトリーズ（ｃａｐｐｅｌ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｃｏｃｈｒａｎｖｉｌｌ
ｅ、Ｐｅｎｎ５ｙｌｖａｎｉａ）］ の１ ：２０希釈
物の２５ｍ１と混合し、そして４°Ｃで３０分間インキ
ュベーションした。細胞を冷ＰＢＳ中で２回以上洗浄し
、そして再調査の準備が整うまで氷上で貯蔵した。細胞
の懸濁液の湿ったマウントをできるだけ早くつくり、そ
してツァイス（Ｚｅｉｓｓ）蛍光顕微鏡で検査した０合
計３００の細胞のなかから陽性の蛍光を示す細胞の数を
計数して、蛍光を示す細胞の百分率を決定した。
ＴＵＲＰ−２７は、免疫蛍光により、生きているか、あ
るいはメタノール：酢酸、ホルマリンまたはエタノール
で固定されたＤＵ１４５または０Ｃ−３細胞に結合しな
いことがわかり、これによりＲＩＡで観測した前立腺腫
瘍細胞系にこのモノクローナル抗体が非反応性であるこ
とが確証された。他方において、ＴＵＲＰ−７３は、ア
ルコールまたはホルマリンの固定後に生存し続けるＰＣ
−３細胞の強い膜の蛍光を提供することがわかった。
るいはメタノール：酢酸、ホルマリンまたはエタノール
で固定されたＤＵ１４５または０Ｃ−３細胞に結合しな
いことがわかり、これによりＲＩＡで観測した前立腺腫
瘍細胞系にこのモノクローナル抗体が非反応性であるこ
とが確証された。他方において、ＴＵＲＰ−７３は、ア
ルコールまたはホルマリンの固定後に生存し続けるＰＣ
−３細胞の強い膜の蛍光を提供することがわかった。
（Ｄ） 定量的吸収
粗製膜抗原調製物または全廁胞を利用するモノクローナ
ル抗体吸収分析を、スターリング（Ｓｔａｒｌｉｎｇ）
、Ｊ、Ｊ、ら、癌の研究（ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、）
、４２：３０Ｂ４−３０８９（１９８２）（特別にここ
に引用によって加える）に記載されるようにして実施し
、そして蛋白質の決定をロウジー（Ｌｏｗｒｙ）、Ｏ，
Ｈ。
ル抗体吸収分析を、スターリング（Ｓｔａｒｌｉｎｇ）
、Ｊ、Ｊ、ら、癌の研究（ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、）
、４２：３０Ｂ４−３０８９（１９８２）（特別にここ
に引用によって加える）に記載されるようにして実施し
、そして蛋白質の決定をロウジー（Ｌｏｗｒｙ）、Ｏ，
Ｈ。
ら、ジャーナル−土フ・バイオロジカルｅケミスト ジ
ー Ｑ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、）１９
３：２６５−２７５（１９５１）（特別にここに引用に
よって加える）の方法により実施した。それぞれ、ＴＵ
ＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３からの培養上澄みの希
釈物（１：２０およびｌ：５００）を使用した。変化量
の粗製膜抗原調製物を鰯加し、そして最終体積は０ 、
１１ ｍ ｌであった。
ー Ｑ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、）１９
３：２６５−２７５（１９５１）（特別にここに引用に
よって加える）の方法により実施した。それぞれ、ＴＵ
ＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３からの培養上澄みの希
釈物（１：２０およびｌ：５００）を使用した。変化量
の粗製膜抗原調製物を鰯加し、そして最終体積は０ 、
１１ ｍ ｌであった。
アッセイはライト（Ｗｒｉｇｈｔ）、Ｇ、Ｌ。
ら、泌尿器科学（Ｕｒｏｌ、）、１旦、３５１−３５５
（１９８２）（特別にここに引用によって加える）に記
載されているようにして実施した。
（１９８２）（特別にここに引用によって加える）に記
載されているようにして実施した。
結果を第１Ａ図および第１Ｂ図に示す。
第１Ａ図および第１Ｂ図において、台はＣａ１１２４前
立腺腺癌を表わし、■はＣａ １１２ ’６前
立１１！腺癌を表わし、ムはＰ−１４４−８０良性前立
腺増生を表わし、ΔはＰ−１５１−８０良性前立腺増生
を表わし、ＯはＣａ−１１２２良性前立腺増生を表わし
、口はＰ−１６−８０正常前立腺を表わし、ＬｌはＰ−
１１７−８０正常前立腺を表わし、ＯはＣａ １０２
６正常肝を表わし、そしてＧはＣａ １００５正常結
腸を表わす、第１Ａ図および第１Ｂ図において、結合活
性の百分率は次のように定義する： （ａ−ｂ） ００Ｘ− （ｃ−ｂ） ここでａは吸着されたモノクローナル抗体のｃｐｍであ
り、ｂはＰ ３Ｘ６３／Ａ ｇ ８骨髄腫ＭＯＰＣ２１
ＩｇＧ１対照モノクローナル抗体のＣｐｍであり、モし
てＣは吸着されないモノクローナル抗体のｃｐｍである
。使用した標的抗原はＣａ １１２４前立腺腺癌膜調
製物であった。
立腺腺癌を表わし、■はＣａ １１２ ’６前
立１１！腺癌を表わし、ムはＰ−１４４−８０良性前立
腺増生を表わし、ΔはＰ−１５１−８０良性前立腺増生
を表わし、ＯはＣａ−１１２２良性前立腺増生を表わし
、口はＰ−１６−８０正常前立腺を表わし、ＬｌはＰ−
１１７−８０正常前立腺を表わし、ＯはＣａ １０２
６正常肝を表わし、そしてＧはＣａ １００５正常結
腸を表わす、第１Ａ図および第１Ｂ図において、結合活
性の百分率は次のように定義する： （ａ−ｂ） ００Ｘ− （ｃ−ｂ） ここでａは吸着されたモノクローナル抗体のｃｐｍであ
り、ｂはＰ ３Ｘ６３／Ａ ｇ ８骨髄腫ＭＯＰＣ２１
ＩｇＧ１対照モノクローナル抗体のＣｐｍであり、モし
てＣは吸着されないモノクローナル抗体のｃｐｍである
。使用した標的抗原はＣａ １１２４前立腺腺癌膜調
製物であった。
第１Ａ図および第１Ｂ図が立証するように、ＴＵＲＰ−
２７はＲＩＡにおいて明らかな結合活性をもたない組織
（正常肝、正常結腸、正常前立腺Ｐ１Ｂ−８０）と反応
性ではないが、ＲＩＡにおいて事実反応した組織（表２
）は、また、ＴＵＲＰ−２７について有意の吸収活性示
した。ＴＵＲＰ−７３は同様なパターンを示したが、Ｒ
ＩＡにおいてＴＵＲＰ−７３と反応性ではない正常結腸
１１λ抽出物（ｃａ １００５）（表２）の高いレベ
ルで多少の吸収が観測された。
２７はＲＩＡにおいて明らかな結合活性をもたない組織
（正常肝、正常結腸、正常前立腺Ｐ１Ｂ−８０）と反応
性ではないが、ＲＩＡにおいて事実反応した組織（表２
）は、また、ＴＵＲＰ−２７について有意の吸収活性示
した。ＴＵＲＰ−７３は同様なパターンを示したが、Ｒ
ＩＡにおいてＴＵＲＰ−７３と反応性ではない正常結腸
１１λ抽出物（ｃａ １００５）（表２）の高いレベ
ルで多少の吸収が観測された。
また、１０１のＤＵ１４５、ＰＣ−３またはＬＮＣａＰ
細胞あるいは１００ｕ、ｇのこれらの前立腺腫瘍経の細
胞蛋白質抽出物によるＴＵＲＰ−２７の吸収は、このモ
ノクローナル抗体のＣａ １１２６前立腺癌標的抗原
への結合を減少できないことが発見され、これに対して
、標的抗原へのＴＵＲＰ−７３の結合の５０〜８５％は
全細胞または細胞リゼイトにより減少されることが発見
された。
細胞あるいは１００ｕ、ｇのこれらの前立腺腫瘍経の細
胞蛋白質抽出物によるＴＵＲＰ−２７の吸収は、このモ
ノクローナル抗体のＣａ １１２６前立腺癌標的抗原
への結合を減少できないことが発見され、これに対して
、標的抗原へのＴＵＲＰ−７３の結合の５０〜８５％は
全細胞または細胞リゼイトにより減少されることが発見
された。
（Ｅ） 免疲緻塁止ヱ
ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３の結合特異性を、
また、免疫ペルオキシダーゼアッセイにより評価した。
また、免疫ペルオキシダーゼアッセイにより評価した。
アビジン−ビオチン免疫ペルオキシダーゼの分析は、Ａ
ＢＣベクタスチン（Ｖｅｃｔａｓｔｉｎ）キット［ベク
ター・ラボラトリーズ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ。
ＢＣベクタスチン（Ｖｅｃｔａｓｔｉｎ）キット［ベク
ター・ラボラトリーズ（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｏｒａ
ｔｏｒｉｅｓ。
Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ）］を使
用して、ライト（Ｗｒｉｇｈｔ）、Ｇ、Ｌ−ら、癌の研
究（ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ 、）、±ユニ５５０９−
５５１６（１９８３）（特別にここに引用によって加え
る）に記載されているようにして実施した。結果を下表
３に記載する。
用して、ライト（Ｗｒｉｇｈｔ）、Ｇ、Ｌ−ら、癌の研
究（ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ 、）、±ユニ５５０９−
５５１６（１９８３）（特別にここに引用によって加え
る）に記載されているようにして実施した。結果を下表
３に記載する。
人−３
組織のイムノペルオキシダーゼ着色１
腎 −次ｌ、 Ｏ／６
０／Ｇ正常 ０／８ ５／ＢｅＩ
Ｉ Ｊｌ：２°ｑ Ｏ／４
０４ａ ホルマリンで固定した組織の系統的切片をは
ぽ３，０〜６．０μｇの抗体／スライドと反応させた。
０／Ｇ正常 ０／８ ５／ＢｅＩ
Ｉ Ｊｌ：２°ｑ Ｏ／４
０４ａ ホルマリンで固定した組織の系統的切片をは
ぽ３，０〜６．０μｇの抗体／スライドと反応させた。
ｂ パネルは５つの前立腺癌のリンパ節転移お上び１つ
の１１ｕ転移から成っていた。
の１１ｕ転移から成っていた。
Ｃ検体は１ＩＩｌ織病理学検査に基づいて病気の証拠を
もたない年令１８〜２３才の若い男性から得た。’ｌ’
ＵＲＰ−２７は切片内の線要素の１０％より少ない率で
わずかの細胞と反応性であった。
もたない年令１８〜２３才の若い男性から得た。’ｌ’
ＵＲＰ−２７は切片内の線要素の１０％より少ない率で
わずかの細胞と反応性であった。
」 い（つかの細胞は正常の管内で着色された。
３ 基部の＃ＩＩＩ管は５／６の検体において弱（着色
された。３つの検体における腎円柱（ｒｃｎａｌｃａｓ
ｔ）は強く着色された。
された。３つの検体における腎円柱（ｒｃｎａｌｃａｓ
ｔ）は強く着色された。
＼、
上の表３中の結果から明らかなように、ＴＵＲＰ−２７
はすべての前立腺検体と反応し、そして膀胱、結腸、腎
、肺または膵臓から誘導された正常または悪性の組織に
結合しなかった。ＴＵＲＰ−２７は６つの乳癌の検体と
反応性ではなかったが、６つの正常乳房組織の試料のう
ち３つと事実反応したが、反応性は正常の肝のあるもの
をライニング（ｌｉｎｉｎｇ）するわずかの細胞に限定
された。しかしながら、上において考察したように、定
量的吸着分析はこれらの乳房組織へのＴＵＲＰ−２７モ
ノクロ一ナル抗体による結合を検出することができなか
った。モノクローナル抗体ＴＵＲＰ−７３は、また、免
疫ペルオキシダーゼアッセイにおいて正常の、良性の増
生、および悪性の前立腺組織と反応性であり、そして６
つの結腸癌のうち２つに対して反応性であった。正常の
腎検体における基部細管および腎円柱（ｒｅｎａｌ
ｃａｓｔ）の弱い着色は、また、ＴＵＲＰ−７３で観測
された。
はすべての前立腺検体と反応し、そして膀胱、結腸、腎
、肺または膵臓から誘導された正常または悪性の組織に
結合しなかった。ＴＵＲＰ−２７は６つの乳癌の検体と
反応性ではなかったが、６つの正常乳房組織の試料のう
ち３つと事実反応したが、反応性は正常の肝のあるもの
をライニング（ｌｉｎｉｎｇ）するわずかの細胞に限定
された。しかしながら、上において考察したように、定
量的吸着分析はこれらの乳房組織へのＴＵＲＰ−２７モ
ノクロ一ナル抗体による結合を検出することができなか
った。モノクローナル抗体ＴＵＲＰ−７３は、また、免
疫ペルオキシダーゼアッセイにおいて正常の、良性の増
生、および悪性の前立腺組織と反応性であり、そして６
つの結腸癌のうち２つに対して反応性であった。正常の
腎検体における基部細管および腎円柱（ｒｅｎａｌ
ｃａｓｔ）の弱い着色は、また、ＴＵＲＰ−７３で観測
された。
（Ｆ） ＰＡＰおよびＰＳＡへのモノクローナ前述の
ように乾燥しかつポリ塩化ビニルのマイクロタイタープ
レートの個々のウェルに固定した３０ｎｇのＰＡＰおよ
び１５０ｎｇのＰＳＡに対する直接結合性固相ＲＩＡを
用いて、精製したヒトＰＡＰおよびＰＳＡへの精製した
ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３の結合活性を評価
した。
ように乾燥しかつポリ塩化ビニルのマイクロタイタープ
レートの個々のウェルに固定した３０ｎｇのＰＡＰおよ
び１５０ｎｇのＰＳＡに対する直接結合性固相ＲＩＡを
用いて、精製したヒトＰＡＰおよびＰＳＡへの精製した
ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３の結合活性を評価
した。
ＴＵＲＰ−２７およびＴｔＴＲＰ−７３は、ライト（Ｗ
ｒｉｇｈｔ）、Ｇ、Ｌ、ら、癌の研究（ｐａｎｃｅｒ
Ｒｅ５−）、旦： ５５０９−５５１６ （１９８３
）（特別にここに引用によって加える）に従来記載され
ているようにして、ＴＵＲＰ−７３（ＩｇＧ２ ａ）に
ついてプロティ７−Ａ−−１＝７７０−ス（Ｓｅｐｈａ
ｒｏｓｅ）［シグマ・ケミカル・カンパニー−（Ｓｉｇ
ｍａ Ｃｈｅｍｉｅａｌ Ｃｏ、、Ｓｔ、 ＬＯ
ｕｉＳ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ］親和クロマトグラフィーに
により、およびＴＵＲＰ−２７モノクロ一ナル抗体（Ｉ
ｇＧ２）を５．０ミリモルのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７，
２に対する透析により沈殿させ、モしてＪ。
ｒｉｇｈｔ）、Ｇ、Ｌ、ら、癌の研究（ｐａｎｃｅｒ
Ｒｅ５−）、旦： ５５０９−５５１６ （１９８３
）（特別にここに引用によって加える）に従来記載され
ているようにして、ＴＵＲＰ−７３（ＩｇＧ２ ａ）に
ついてプロティ７−Ａ−−１＝７７０−ス（Ｓｅｐｈａ
ｒｏｓｅ）［シグマ・ケミカル・カンパニー−（Ｓｉｇ
ｍａ Ｃｈｅｍｉｅａｌ Ｃｏ、、Ｓｔ、 ＬＯ
ｕｉＳ、Ｍｉｓｓｏｕｒｉ］親和クロマトグラフィーに
により、およびＴＵＲＰ−２７モノクロ一ナル抗体（Ｉ
ｇＧ２）を５．０ミリモルのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７，
２に対する透析により沈殿させ、モしてＪ。
Ｊ、ランゴー７ （Ｌａｎｇｏ ｎｅ）、ジャーナル・
土フ・イムノロジカル・メソッズ（Ｊエ エ旦ｍｕｎｏ
ｌ 、 Ｍｅｔ ｈ、）５互： ２７７−２９６（
１９８２）およびＪ 、Ｗ、ボウディング（Ｇｏ ｄ
Ｉ ｎ ｇ） ＋ジャーナル・土フ・イムノロジカル
・メソッズ（Ｊ 、 Ｉｍｍｕｎｏ ｌ 、 Ｍｅ
ｔ基ユ）旦：２８５−３０８ （１９８０） （これ
らの両者を特別にここに引用によって加える）に開示さ
れている方法に従い再構成することにより、血清不合培
地［：Ｈ５Ｉ ＬｏＳＭ、ＩＴＳ予［１ｆｆｉ合物が
補充された、コラポレイティブ舎リサーチ・インコポー
レーテッド（ｃｏｌｌａｂ。
土フ・イムノロジカル・メソッズ（Ｊエ エ旦ｍｕｎｏ
ｌ 、 Ｍｅｔ ｈ、）５互： ２７７−２９６（
１９８２）およびＪ 、Ｗ、ボウディング（Ｇｏ ｄ
Ｉ ｎ ｇ） ＋ジャーナル・土フ・イムノロジカル
・メソッズ（Ｊ 、 Ｉｍｍｕｎｏ ｌ 、 Ｍｅ
ｔ基ユ）旦：２８５−３０８ （１９８０） （これ
らの両者を特別にここに引用によって加える）に開示さ
れている方法に従い再構成することにより、血清不合培
地［：Ｈ５Ｉ ＬｏＳＭ、ＩＴＳ予［１ｆｆｉ合物が
補充された、コラポレイティブ舎リサーチ・インコポー
レーテッド（ｃｏｌｌａｂ。
ｒａｔｉｖｅ Ｒｅ５ｅａｃｈ、Ｉｎｃ、、Ｌｅｘｉ
ｎｇｔ ｏｎ、ｒｖｔａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔＳ）］中
で生長させたハイブリドーマから９５％の均質性（ｈｏ
ｍｏｇｅｎｅｉｔｙ）に精製した。精製の程度はボリア
クリルアミントゲルの電気泳動により決定し、そして定
性的に評価した。
ｎｇｔ ｏｎ、ｒｖｔａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔＳ）］中
で生長させたハイブリドーマから９５％の均質性（ｈｏ
ｍｏｇｅｎｅｉｔｙ）に精製した。精製の程度はボリア
クリルアミントゲルの電気泳動により決定し、そして定
性的に評価した。
血清不合調製物を１〜２．３ｍｇ／ｍｌのモノクローナ
ル抗体に濃縮した。
ル抗体に濃縮した。
前立腺特異性抗［（ＰＳＡ）は、ヒト精子漿かラワング
（Ｗａｎｇ）、Ｍ、Ｃ，ら、腫瘍学（！２ｎｃｏ１．）
、３旦：１−５ （１９８２）（特別にここに引用によ
って加える）に記載される方法に従い精製した。また、
それはハイブリチクΦインコボレーテッド（Ｈｙｂｒｉ
ｔｅｃｈ、Ｉｎｃ、、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、Ｃａ１ｉｆ
ｏｒｎｉａ）から商業的に入手可能である。前立腺酸性
ホスファターゼはシグマ・ケミカルφカンパニー（Ｓｉ
ｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、）から商業的に
入手できる。
（Ｗａｎｇ）、Ｍ、Ｃ，ら、腫瘍学（！２ｎｃｏ１．）
、３旦：１−５ （１９８２）（特別にここに引用によ
って加える）に記載される方法に従い精製した。また、
それはハイブリチクΦインコボレーテッド（Ｈｙｂｒｉ
ｔｅｃｈ、Ｉｎｃ、、Ｌａ Ｊｏｌｌａ、Ｃａ１ｉｆ
ｏｒｎｉａ）から商業的に入手可能である。前立腺酸性
ホスファターゼはシグマ・ケミカルφカンパニー（Ｓｉ
ｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ、）から商業的に
入手できる。
表Ａ
直接結合ＲＩＡにおける前立腺酸性ホスファターゼ（Ｐ
ＡＰ）および前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）に対するモノ
クローナル抗体ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３の
反応性抗体（ａ） 標的 結合したＣＰＭ抗
−ＰＡＰ ＰＡＰ １４５０ＴＵＲＰ−２
７ＰＡＰ ２１０ＴＵＲＰ−７３ＰＡＰ
Ｌ６５ＭＯＰＸ ２ ＰＡＰ
３００抗ＰＳＡ ＰＳＡ １６５９０Ｔ
ＵＲＰ−２７ＰＳＡ ４０８ＴＵＲＰ−７３
ＰＳＡ ２１０Ｍ０ＰＸ ２１ ＰＳＡ
３２０ａ 抗体は７．０ＪＬｇ／ｍｌの濃
度で使用した。
ＡＰ）および前立腺特異性抗原（ＰＳＡ）に対するモノ
クローナル抗体ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３の
反応性抗体（ａ） 標的 結合したＣＰＭ抗
−ＰＡＰ ＰＡＰ １４５０ＴＵＲＰ−２
７ＰＡＰ ２１０ＴＵＲＰ−７３ＰＡＰ
Ｌ６５ＭＯＰＸ ２ ＰＡＰ
３００抗ＰＳＡ ＰＳＡ １６５９０Ｔ
ＵＲＰ−２７ＰＳＡ ４０８ＴＵＲＰ−７３
ＰＳＡ ２１０Ｍ０ＰＸ ２１ ＰＳＡ
３２０ａ 抗体は７．０ＪＬｇ／ｍｌの濃
度で使用した。
２、 ブロッキングラジオイムノアッセイ３００ｎｇ
の精製したＰＡＰまたは４．Ｏ，ｇのＰＳＡの不存在下
または存在下に１０％（Ｖ／Ｖ）のガンマグロブリンネ
合ウマ血清を含有する０、１１ｍ１の最終体積のＰＨ３
中で２０１Ｌｇ／ｍ１５度の各モノクローナル抗体（２
，０ｐｇ／ｍｌ）の１１．１をインキュベーションする
ことによって、ブロッキングラジオイムノアッセイをま
た実施した。ヒト前立１１！１１１１！ｌｌ癌膜粗製抽
出物Ｃａ１１２６を標的抗原として３．ＯＩＬｇ／ウェ
ルで使用した。結果を下表５に示す。
の精製したＰＡＰまたは４．Ｏ，ｇのＰＳＡの不存在下
または存在下に１０％（Ｖ／Ｖ）のガンマグロブリンネ
合ウマ血清を含有する０、１１ｍ１の最終体積のＰＨ３
中で２０１Ｌｇ／ｍ１５度の各モノクローナル抗体（２
，０ｐｇ／ｍｌ）の１１．１をインキュベーションする
ことによって、ブロッキングラジオイムノアッセイをま
た実施した。ヒト前立１１！１１１１！ｌｌ癌膜粗製抽
出物Ｃａ１１２６を標的抗原として３．ＯＩＬｇ／ウェ
ルで使用した。結果を下表５に示す。
表５
精製した前立腺酸性ホスファターゼ（ＦＡＰ）および前
立腺特異性抗原（Ｐ Ｓ Ａ）によるＴＵＲＰ−２７お
よびＴＵＲＰ−７３のそれらの標的抗原への結合の阻害 抗体 ブロッキング抗原 結合したＣＰＭ抗−ＰＡ
Ｐ なし ５４００抗−ＰＡＰ
ＰＡＰ ４５０抗−ＰＡＰ Ｃａ １１
２６ １７８抗−ＰＳＡ なし ８
４００抗−ＰＳＡ ＰＳＡ １４５０抗
−ＰＳ Ｃａ １１２６ １２０４ＴＵＲＰ−な
し ４２００ ＴＵＲＰ−ＰＡＰ ４３００ＴＵＲＰ−Ｐ
ＳＡ ４０００ＴＵＲＰ−Ｃａ １１２
６ ２７０ＴＵＲＰ−なし ８７００ ＴＵＲＰ−ＰＡＰ ８８００ＴＵＲＰ−Ｐ
ＳＡ ７８００ＴＵＲＰ−Ｃａ １１２
６ １００豐 −雷 Ａ 壽）−１Ｃ主ζ−１
１デ＊ｉ： ｉＩＬ去く石そ÷ 計 ”＋Ｌ、ＴＵＲＰ
−２７およびＴＵＲＰ−７３は直接結合ＲＩＡにおいて
マイクロタイタープレートへ吸収させかつ固定したＰＡ
ＰまたはＰＳＡに結合せず（表４）、またＴＵＲＰ−２
７およびＴＵＲＰ−７３とＰＡＰまたはＰＳＡとのイン
キュベーションはブロッキングアッセイにおいて標的抗
［へのＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３の結合を減
少させなかった（表５）。
立腺特異性抗原（Ｐ Ｓ Ａ）によるＴＵＲＰ−２７お
よびＴＵＲＰ−７３のそれらの標的抗原への結合の阻害 抗体 ブロッキング抗原 結合したＣＰＭ抗−ＰＡ
Ｐ なし ５４００抗−ＰＡＰ
ＰＡＰ ４５０抗−ＰＡＰ Ｃａ １１
２６ １７８抗−ＰＳＡ なし ８
４００抗−ＰＳＡ ＰＳＡ １４５０抗
−ＰＳ Ｃａ １１２６ １２０４ＴＵＲＰ−な
し ４２００ ＴＵＲＰ−ＰＡＰ ４３００ＴＵＲＰ−Ｐ
ＳＡ ４０００ＴＵＲＰ−Ｃａ １１２
６ ２７０ＴＵＲＰ−なし ８７００ ＴＵＲＰ−ＰＡＰ ８８００ＴＵＲＰ−Ｐ
ＳＡ ７８００ＴＵＲＰ−Ｃａ １１２
６ １００豐 −雷 Ａ 壽）−１Ｃ主ζ−１
１デ＊ｉ： ｉＩＬ去く石そ÷ 計 ”＋Ｌ、ＴＵＲＰ
−２７およびＴＵＲＰ−７３は直接結合ＲＩＡにおいて
マイクロタイタープレートへ吸収させかつ固定したＰＡ
ＰまたはＰＳＡに結合せず（表４）、またＴＵＲＰ−２
７およびＴＵＲＰ−７３とＰＡＰまたはＰＳＡとのイン
キュベーションはブロッキングアッセイにおいて標的抗
［へのＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３の結合を減
少させなかった（表５）。
３、 競合的結合アッセイ
競合的結合アッセイは、マークウェル（Ｍａｒ（特別に
ここに引用によって加える）に記載される方法に従い、
ヨウドビード（Ｉｏｄｅｂｅａｄ）［ピアース・ケミカ
ル・カンパニー（Ｐ ｉ ｅｒｃｅ Ｃｈｍｅｍｉｃ
ａｌ Ｃｏ、、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ｌ１ｌｉｎｏｉｓ
）］を使用して、１４０ＪＬｇの精製したモノクローナ
ル抗体ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３を０．５ｍ
ＧｏのＮａ１２５Ｉ （ＩＣＮ、Ｉｒｖｉｎｅ、Ｃａ１
ｉｆｏ ｒ ｎ ｉ ａ）でＴＵＲＰ−２７について２
．５×１１０６ｃｐ／ＰｇおよびＴＵＲＰ−７３につい
て３．ＯＸ１０６ｃｐｍ／ルｇに比活性に標識すること
によって実施した。
ここに引用によって加える）に記載される方法に従い、
ヨウドビード（Ｉｏｄｅｂｅａｄ）［ピアース・ケミカ
ル・カンパニー（Ｐ ｉ ｅｒｃｅ Ｃｈｍｅｍｉｃ
ａｌ Ｃｏ、、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ｌ１ｌｉｎｏｉｓ
）］を使用して、１４０ＪＬｇの精製したモノクローナ
ル抗体ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３を０．５ｍ
ＧｏのＮａ１２５Ｉ （ＩＣＮ、Ｉｒｖｉｎｅ、Ｃａ１
ｉｆｏ ｒ ｎ ｉ ａ）でＴＵＲＰ−２７について２
．５×１１０６ｃｐ／ＰｇおよびＴＵＲＰ−７３につい
て３．ＯＸ１０６ｃｐｍ／ルｇに比活性に標識すること
によって実施した。
変化量の非放射性モノクローナル抗体を、標的抗原、す
なわち、Ｃａ １１３６前立腺腺癌の粗製脱調製物に
室温で１時間結合させた。結合しないモノクローナル抗
体を洗浄除去した後、２５Ｑ、０００ｃｐｍの１２５
Ｉ標識モノクローナル抗体を室温において１時間添加し
た。その後、プレートを洗浄し、そして個々のウェルを
ガンマカウンターで計数した。結果を第２Ａ図および第
２Ｂ図に示す。
なわち、Ｃａ １１３６前立腺腺癌の粗製脱調製物に
室温で１時間結合させた。結合しないモノクローナル抗
体を洗浄除去した後、２５Ｑ、０００ｃｐｍの１２５
Ｉ標識モノクローナル抗体を室温において１時間添加し
た。その後、プレートを洗浄し、そして個々のウェルを
ガンマカウンターで計数した。結果を第２Ａ図および第
２Ｂ図に示す。
第２Ａ図および第２Ｂ図において、ＯはＰＳＡに対して
特異性のモノクローナル抗体による結合の阻害を表わし
、ΔはＰＡＰに対して特異性のモノクローナル抗体によ
る結合の阻害を表わし、そして拳はＴＵＲＰ−２７（第
２Ａ図）またはＴＵＲＰ−７３（第２Ｂ図）による遺伝
子の阻害を表わす。第２Ａ図および第２Ｂ図において、
阻害の百分率は次のように定義される： ここでａはブロッキング抗体の存在下のＣａ １１２
６標識抗原へ結合した１２５Ｉ標識ＴＵＲＰ−２７また
は１２５工標識ＴＵＲＰ−７３のｃｐｍであり、ｂは標
的抗原を含有しないＰＢＳ対照ウェルへ結合した１２５
工標識ＴＵＲＰ−２７または１２５Ｉ標識ＴＵＲＰ−７
３のＣｐｍであり、そしてＣはブロッキング抗体の不存
在下の結合した１２５Ｉ標識ＴＵＲＰ−２７または１２
５工標識ＴＵＲＰ−７３のｃｐｍである。
特異性のモノクローナル抗体による結合の阻害を表わし
、ΔはＰＡＰに対して特異性のモノクローナル抗体によ
る結合の阻害を表わし、そして拳はＴＵＲＰ−２７（第
２Ａ図）またはＴＵＲＰ−７３（第２Ｂ図）による遺伝
子の阻害を表わす。第２Ａ図および第２Ｂ図において、
阻害の百分率は次のように定義される： ここでａはブロッキング抗体の存在下のＣａ １１２
６標識抗原へ結合した１２５Ｉ標識ＴＵＲＰ−２７また
は１２５工標識ＴＵＲＰ−７３のｃｐｍであり、ｂは標
的抗原を含有しないＰＢＳ対照ウェルへ結合した１２５
工標識ＴＵＲＰ−２７または１２５Ｉ標識ＴＵＲＰ−７
３のＣｐｍであり、そしてＣはブロッキング抗体の不存
在下の結合した１２５Ｉ標識ＴＵＲＰ−２７または１２
５工標識ＴＵＲＰ−７３のｃｐｍである。
第２Ａ図および第２Ｂ図中の結果から明らかなように、
ＰＳＡまたはＰＡＰに対するモノクローナル抗体はＣａ
１１２６膜標的への１２５工標識ＴＵＲＰ−２７ま
たは１２５Ｉ標識ＴＵＲＰ−７３の結合を効果的にブロ
ッキングすることはできなかったが、非標識ＴＵＲＰ−
２７およびＴＵＲＰ−７３はそれぞれ放射性ＴＵＲＰ−
２７およびＴＵＲＰ−７３結合のブロッキングにおいて
非常に効率的であった。
ＰＳＡまたはＰＡＰに対するモノクローナル抗体はＣａ
１１２６膜標的への１２５工標識ＴＵＲＰ−２７ま
たは１２５Ｉ標識ＴＵＲＰ−７３の結合を効果的にブロ
ッキングすることはできなかったが、非標識ＴＵＲＰ−
２７およびＴＵＲＰ−７３はそれぞれ放射性ＴＵＲＰ−
２７およびＴＵＲＰ−７３結合のブロッキングにおいて
非常に効率的であった。
（Ｇ） 相Ｔ的（ｒｅｃｉｐｒｏｃａｌ）結合アッセ
イ 精製したＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３を前述の
ように１２５■で標識した。１系列の非標識モノクロー
ナル抗体の２倍希釈物を標的抗原（３，０μｇ、Ｃａ
１１２６）に添加し、そして室温において１時間イン
キュベーションした。
イ 精製したＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３を前述の
ように１２５■で標識した。１系列の非標識モノクロー
ナル抗体の２倍希釈物を標的抗原（３，０μｇ、Ｃａ
１１２６）に添加し、そして室温において１時間イン
キュベーションした。
洗浄後、ＩｌＸ１０６ｃｐの標識ＴＵＲＰ−２７または
ＴＵＲＰ−７３を各ウェルに添加し、そして室温におい
てさらに１時間インキュベーションした。ウェルを洗浄
し、そして放射滝をガンマカウンターで計数した。結果
を第３Ａ図および第３Ｂ図に示す。
ＴＵＲＰ−７３を各ウェルに添加し、そして室温におい
てさらに１時間インキュベーションした。ウェルを洗浄
し、そして放射滝をガンマカウンターで計数した。結果
を第３Ａ図および第３Ｂ図に示す。
第３Ａ図において、１は非標識抗体を添加しない場合を
表わし、２は非標識ＴＵＲＰ−２７の添加後を表わし、
モして３は非標識ＴＵＲＰ−７３の添加後を表わす。第
３Ｂ図において、４は非標識抗体を添加しない場合を表
わし、５は非標識ＴＵＲＰ−７３の添加後を表わし、モ
して６は非標識ＴＵＲＰ−２７の添加後を表わす。
表わし、２は非標識ＴＵＲＰ−２７の添加後を表わし、
モして３は非標識ＴＵＲＰ−７３の添加後を表わす。第
３Ｂ図において、４は非標識抗体を添加しない場合を表
わし、５は非標識ＴＵＲＰ−７３の添加後を表わし、モ
して６は非標識ＴＵＲＰ−２７の添加後を表わす。
第３Ａ図および第３Ｂ図から明らかなように、標識モノ
クローナル抗体の結合は地元の（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ
）クローンからの非標識抗体によってのも阻害される。
クローナル抗体の結合は地元の（ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ
）クローンからの非標識抗体によってのも阻害される。
これらのデータが立証するように、ＴＵＲＰ−２７およ
びＴＵＲＰ−７３は明確な抗原決定基を検出する。
びＴＵＲＰ−７３は明確な抗原決定基を検出する。
（Ｈ） モノクローナル抗体のアイソタイピングベー
リンガーーマンハイムΦバイオケミカルス（Ｂｏｅｈｒ
ｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃ
ａｌｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄｉａｎａ）
から入手可能なマウス免疫グロブリンサブタイプ（ｓｕ
ｐｔｙｐｅ）同定キットを使用して、抗体の重鎖および
軽鎖のクラスを決定した。ＴＵＲＰ−２７はアイソタイ
プエｇＧ３．にであると決定され、そしてＴＵＲＰ−７
３はアイソタイプＩｇ０２ ａ、にであると決定された
。
リンガーーマンハイムΦバイオケミカルス（Ｂｏｅｈｒ
ｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃ
ａｌｓ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、Ｉｎｄｉａｎａ）
から入手可能なマウス免疫グロブリンサブタイプ（ｓｕ
ｐｔｙｐｅ）同定キットを使用して、抗体の重鎖および
軽鎖のクラスを決定した。ＴＵＲＰ−２７はアイソタイ
プエｇＧ３．にであると決定され、そしてＴＵＲＰ−７
３はアイソタイプＩｇ０２ ａ、にであると決定された
。
（Ｉ） 結果の要約
ＴＵＲＰ−２７は試験したヒト細胞系のいずれに対して
も反応性ではなかった（表１）が、ＢＰＨおよび前立腺
腺癌組織検体対して事実反応した（表２および表３）反
応性は、また、７つの正常前立護膜調製物の１つに対し
て観察された。ＲＩＡ（表２）におけるＴＵＲＰ−２７
の前立腺特異性結合活性は、また、わずかの正常管内に
いくつかの青色細胞を含有する３つの正常乳房検体を除
外して、イムノペルオキシダーゼアッセイにおいて見ら
れた（表３）。３つの乳房検体の２つは凍結組織として
入手可能であり、そして粗製脱調製物の調製に利用した
。モノクローナル抗体ＴＵＲＰ−２７は固相ＲＩＡにお
いて３つの検体と反応性ではなく、またこれらの組織の
いずれを用いても１１００ＪＬ程度に高い吸収性蛋白質
の濃度においても吸収活性が観測されなかった。しかし
ながら、実質的な吸収活性は、１００．ｇより非常に低
い蛋白質レベルにおいてＴＵＲＰ−２７反応性試料によ
り観測された（第１Ａ図）。
も反応性ではなかった（表１）が、ＢＰＨおよび前立腺
腺癌組織検体対して事実反応した（表２および表３）反
応性は、また、７つの正常前立護膜調製物の１つに対し
て観察された。ＲＩＡ（表２）におけるＴＵＲＰ−２７
の前立腺特異性結合活性は、また、わずかの正常管内に
いくつかの青色細胞を含有する３つの正常乳房検体を除
外して、イムノペルオキシダーゼアッセイにおいて見ら
れた（表３）。３つの乳房検体の２つは凍結組織として
入手可能であり、そして粗製脱調製物の調製に利用した
。モノクローナル抗体ＴＵＲＰ−２７は固相ＲＩＡにお
いて３つの検体と反応性ではなく、またこれらの組織の
いずれを用いても１１００ＪＬ程度に高い吸収性蛋白質
の濃度においても吸収活性が観測されなかった。しかし
ながら、実質的な吸収活性は、１００．ｇより非常に低
い蛋白質レベルにおいてＴＵＲＰ−２７反応性試料によ
り観測された（第１Ａ図）。
モノクローナル抗体ＴＵＲＰ−７３は、正常の、ＢＰＨ
ｌおよび悪性の前立腺組織に、ならびに結腸直腸癌、乳
癌、および正常の腎検体に強く結合した（表１、表２お
よび表３）、このモノクローナル抗体は前立腺以外の正
常または悪性の細胞と広く交差反応性ではないが、その
抗原はＴＵＲＰ−２７抗原より広い細胞のタイプおよび
組織の列上に存在した。
ｌおよび悪性の前立腺組織に、ならびに結腸直腸癌、乳
癌、および正常の腎検体に強く結合した（表１、表２お
よび表３）、このモノクローナル抗体は前立腺以外の正
常または悪性の細胞と広く交差反応性ではないが、その
抗原はＴＵＲＰ−２７抗原より広い細胞のタイプおよび
組織の列上に存在した。
ＴＵＲＰ−２７は、構想ＲＩＡにより６つの正常前立腺
物質膜調製物の１つに結合した（表２）。６つの非反応
性正常前立腺検体は年令が１８〜２３才の若い男性から
のものであったが、１つの反応性試料は６６オの女性の
ものであった。
物質膜調製物の１つに結合した（表２）。６つの非反応
性正常前立腺検体は年令が１８〜２３才の若い男性から
のものであったが、１つの反応性試料は６６オの女性の
ものであった。
この年令における男性について潜在的な増生および新生
物の出現率は前立腺において高い［スターリング（Ｓｔ
ａｒｌｉｎｇ）、Ｊ、Ｊ、ら、±ヱ工）、２５３−２８
６ページ（１９８４）。
物の出現率は前立腺において高い［スターリング（Ｓｔ
ａｒｌｉｎｇ）、Ｊ、Ｊ、ら、±ヱ工）、２５３−２８
６ページ（１９８４）。
ニューヨーク、マーセル拳デツカ−（Ｍａｒｃｅｌ
Ｄｅｋｋｅｒ）］ （特別にここに引用によって加え
る）ので、この検体が正常でない細胞で汚染されていた
可能性がある。このＴＵＲＰ−２７による正常前立腺へ
の明らかな低い反応性を、また、定量的眼前分析により
検査した（第１Ａ図）。この技術が示唆するように、Ｔ
ＵＲＰ−２７抗原は正常の前立腺組織中に存在するが、
その能動はＢＰＨおよび前立腺腺癌におけるよりは非常
に低くかった（表２および第１Ａ図）、免疫ペルオキシ
ダーゼアッセイにおいて検査した正常の前立腺検体（表
３）のうちで、管上皮細胞のわずかに１０％がＴＵＲＰ
−２７モノクロ一ナル抗体と反応性であった。この結果
は、これらの検体についての酵素ＲＩＡおよび定量的吸
着アッセイにおけるＴＵＲＰ−２７の低い結合活性と一
致した。集約すると、ＴＵＲＰ−２７抗原は良性および
／または悪性の生長のために有用なマーカーであろうこ
とをデータは立証している。
Ｄｅｋｋｅｒ）］ （特別にここに引用によって加え
る）ので、この検体が正常でない細胞で汚染されていた
可能性がある。このＴＵＲＰ−２７による正常前立腺へ
の明らかな低い反応性を、また、定量的眼前分析により
検査した（第１Ａ図）。この技術が示唆するように、Ｔ
ＵＲＰ−２７抗原は正常の前立腺組織中に存在するが、
その能動はＢＰＨおよび前立腺腺癌におけるよりは非常
に低くかった（表２および第１Ａ図）、免疫ペルオキシ
ダーゼアッセイにおいて検査した正常の前立腺検体（表
３）のうちで、管上皮細胞のわずかに１０％がＴＵＲＰ
−２７モノクロ一ナル抗体と反応性であった。この結果
は、これらの検体についての酵素ＲＩＡおよび定量的吸
着アッセイにおけるＴＵＲＰ−２７の低い結合活性と一
致した。集約すると、ＴＵＲＰ−２７抗原は良性および
／または悪性の生長のために有用なマーカーであろうこ
とをデータは立証している。
（Ｊ） ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３対既知
の前立腺抗体 ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３と前立腺抗原に対
して誘導された他のモノクローナル抗体と比較すると、
ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３は新規な前立腺器
官および腫瘍に関連する抗原を定めたことが明らかとな
る。モノクローナル抗体０８３．２１ ［スターリン
グ（Ｓｔａｒｌｉ２）およびスターリング（Ｓｔａｒｌ
ｉｎｇ）＋Ｃａｎｃｅｒ）、２５３−２８６ページ（１
９８４）、ニューヨーク、マーセル・デツカ−（Ｍａｒ
ｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ）］ （これらの両者を特別
にここに引用によって加える）、およびＰＣ，２［ライ
ト （Ｗｒｉｇｈｔ）、Ｇ、Ｌ、ら。
の前立腺抗体 ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３と前立腺抗原に対
して誘導された他のモノクローナル抗体と比較すると、
ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３は新規な前立腺器
官および腫瘍に関連する抗原を定めたことが明らかとな
る。モノクローナル抗体０８３．２１ ［スターリン
グ（Ｓｔａｒｌｉ２）およびスターリング（Ｓｔａｒｌ
ｉｎｇ）＋Ｃａｎｃｅｒ）、２５３−２８６ページ（１
９８４）、ニューヨーク、マーセル・デツカ−（Ｍａｒ
ｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ）］ （これらの両者を特別
にここに引用によって加える）、およびＰＣ，２［ライ
ト （Ｗｒｉｇｈｔ）、Ｇ、Ｌ、ら。
％ （ｃａｎｃｅ ｒ Ｒｅｓ 、）、±ユニ５５０
９−５５１６ （１９８３）およびスターリング（Ｓｔ
ａｒｌｉｎｇ）、Ｊ、Ｊ、ら、モノク２５３−２８６ペ
ージ（１９８４）、ニューヨーク、マーセル・デツカ−
（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ）］（これらの両者を
特別にここに引用によって加える）（それぞれ、ミツケ
イ（Ｍｉｃｋｅ？）、Ｄ、Ｄ、ら、 Ｌロ］工Ｃ１ｉ
ｎ 。
９−５５１６ （１９８３）およびスターリング（Ｓｔ
ａｒｌｉｎｇ）、Ｊ、Ｊ、ら、モノク２５３−２８６ペ
ージ（１９８４）、ニューヨーク、マーセル・デツカ−
（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ）］（これらの両者を
特別にここに引用によって加える）（それぞれ、ミツケ
イ（Ｍｉｃｋｅ？）、Ｄ、Ｄ、ら、 Ｌロ］工Ｃ１ｉ
ｎ 。
Ｂｉｏｌ、 Ｒｅｓ、、３７：６７−８４（１９８０
）（特別にここに引用によって加える）に記載れるＤＵ
１４５細胞系、およびカイン（Ｋａｉｇｈｎ）、Ｍ、Ｅ
、ら、Ｆｒｏｇ、 Ｃｌ１ｎ。
）（特別にここに引用によって加える）に記載れるＤＵ
１４５細胞系、およびカイン（Ｋａｉｇｈｎ）、Ｍ、Ｅ
、ら、Ｆｒｏｇ、 Ｃｌ１ｎ。
Ｂｉｏｌ、 Ｒｅｓ、、３７：８５−１０９（１９８
０）（特別にここに引用によって加える）に記載れるＰ
Ｃ−３細胞系に対して誘導された）のの血清学的活性は
、ＴＵＲＰ−２７が試験した細胞系のいずれとにも結合
せず（表１）モしてＴＵＲＰ−７３がＢＰＨ検体に強く
結合する（表２および表３）が、Ｄ８３．２１またはＰ
Ｃ，２のいずれもＦＢＨに対して高い活性もたないとい
うことにおいて、ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３
と非常に異なる。さらに、限られた研究において、０８
３．２１およびＰＣ，２のいずれもＴＵＲＰ−２７およ
びＴＵＲＰ−７３のそれらへのそれぞれの標的への結合
をブロッキングしなかった。
０）（特別にここに引用によって加える）に記載れるＰ
Ｃ−３細胞系に対して誘導された）のの血清学的活性は
、ＴＵＲＰ−２７が試験した細胞系のいずれとにも結合
せず（表１）モしてＴＵＲＰ−７３がＢＰＨ検体に強く
結合する（表２および表３）が、Ｄ８３．２１またはＰ
Ｃ，２のいずれもＦＢＨに対して高い活性もたないとい
うことにおいて、ＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３
と非常に異なる。さらに、限られた研究において、０８
３．２１およびＰＣ，２のいずれもＴＵＲＰ−２７およ
びＴＵＲＰ−７３のそれらへのそれぞれの標的への結合
をブロッキングしなかった。
ウェアー（Ｗａｆｅ）、Ｊ、Ｌ、ら、疲凶菫ヌ（ｃａｎ
ｃｅｒ Ｒｅｓ、）、４２：１２１５−１２２２ （
１９８４）に記載れる。ＰＣ−３細胞系に対して生成さ
れた、モノクローナル抗体Ｐｒｏ−３は、免疫化性細胞
系に強く結合するが、ＤＵ１４５前立腺腫瘍細胞に結合
せず、モしてＢＰＨ組織を使用するときよりも非常に強
く前立１１！１ＩＩＩ！Ｉ！癌を反応する。ＴＵＲＰ−
２７は、他方において、ＤＵ１４５またはＰＣ−３細胞
系のいずれにも結合しないが、ＴＵＲＰ−７３は両者の
細胞系に結合する（表１）、ＴＵＲＰ−２７およびＴＵ
ＲＰ−７３は、また、ＢＰＨおよび悪性前立腺組織の両
者と反応する（表２および表３および第Ａ２図および第
２Ｂ図）。
ｃｅｒ Ｒｅｓ、）、４２：１２１５−１２２２ （
１９８４）に記載れる。ＰＣ−３細胞系に対して生成さ
れた、モノクローナル抗体Ｐｒｏ−３は、免疫化性細胞
系に強く結合するが、ＤＵ１４５前立腺腫瘍細胞に結合
せず、モしてＢＰＨ組織を使用するときよりも非常に強
く前立１１！１ＩＩＩ！Ｉ！癌を反応する。ＴＵＲＰ−
２７は、他方において、ＤＵ１４５またはＰＣ−３細胞
系のいずれにも結合しないが、ＴＵＲＰ−７３は両者の
細胞系に結合する（表１）、ＴＵＲＰ−２７およびＴＵ
ＲＰ−７３は、また、ＢＰＨおよび悪性前立腺組織の両
者と反応する（表２および表３および第Ａ２図および第
２Ｂ図）。
モノクローナル抗体３５および２４は、フランケル（Ｆ
ｒａｎｋｅｌ）、Ａ、Ｅ、ら、プロシーディンゲス・土
プ・−ｋｆユ土亜拳アカデミ−・第２−サイエンシズ（
Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ ｌ 、 Ａｃａｄ、 Ｓｃ
ｉ、）、ＵＳＡ、９旦、９０３−９０７ （１９８２）
（特別にここに引用によって加える）に記載された。こ
れらのモノクローナル抗体はＴＵＲＰ−２７およびＴＵ
ＲＰ−７３と異なり、モノクローナル抗体２４はＰＣ−
３細胞系と反応し、そしてまた悪性前立腺組織へよりも
正常の前立腺に強く結合する［フランケル（Ｆｒａｎｋ
ｅｌ）、Ａ、Ｅ、ら、プロシーディンゲス舎−Ａ−ｊ−
ナショナル・アカデミ−・土ノ・サイエン＆：ｒ（Ｐｒ
ｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ 、）
、ＵＳＡ、且、９０３−９０７ （１９８２）］（特別
にここに引用によって加える）。
ｒａｎｋｅｌ）、Ａ、Ｅ、ら、プロシーディンゲス・土
プ・−ｋｆユ土亜拳アカデミ−・第２−サイエンシズ（
Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ ｌ 、 Ａｃａｄ、 Ｓｃ
ｉ、）、ＵＳＡ、９旦、９０３−９０７ （１９８２）
（特別にここに引用によって加える）に記載された。こ
れらのモノクローナル抗体はＴＵＲＰ−２７およびＴＵ
ＲＰ−７３と異なり、モノクローナル抗体２４はＰＣ−
３細胞系と反応し、そしてまた悪性前立腺組織へよりも
正常の前立腺に強く結合する［フランケル（Ｆｒａｎｋ
ｅｌ）、Ａ、Ｅ、ら、プロシーディンゲス舎−Ａ−ｊ−
ナショナル・アカデミ−・土ノ・サイエン＆：ｒ（Ｐｒ
ｏｃ、 Ｎａｔｌ、 Ａｃａｄ、 Ｓｃｉ 、）
、ＵＳＡ、且、９０３−９０７ （１９８２）］（特別
にここに引用によって加える）。
他方において、ＴＵＲＰ−２７はＰＣ−３に結合せず（
表１）そしてこのモノクローナル抗体は正常の前立腺よ
りも前立１１！Ｉｉ腺癌と強く反応する（表２および表
４および第２Ａ図）。モノクローナル抗体３５はＴＵＲ
Ｐ−７３と区別され、モノクローナル抗体３５はＴＫ−
２４膀胱癌の細胞におよび正常の乳房組織に決定する［
フランケル（Ｆ（１９８２）］ （特別にここに引用
によって加える）が、ＴＵＲＰ−７３はこれらの抗原源
のいずれとも反応しない（表１、表２および表３）。
表１）そしてこのモノクローナル抗体は正常の前立腺よ
りも前立１１！Ｉｉ腺癌と強く反応する（表２および表
４および第２Ａ図）。モノクローナル抗体３５はＴＵＲ
Ｐ−７３と区別され、モノクローナル抗体３５はＴＫ−
２４膀胱癌の細胞におよび正常の乳房組織に決定する［
フランケル（Ｆ（１９８２）］ （特別にここに引用
によって加える）が、ＴＵＲＰ−７３はこれらの抗原源
のいずれとも反応しない（表１、表２および表３）。
ＰＣ−３前立腺腫瘍細胞系に対して向けられたモノクロ
ーナル抗体、ＫＲ−Ｐ８、はレイナー１よ）、１ユ、６
１７−６２５（１９８４）（特別にここに引用によって
加える）に記載された。
ーナル抗体、ＫＲ−Ｐ８、はレイナー１よ）、１ユ、６
１７−６２５（１９８４）（特別にここに引用によって
加える）に記載された。
ＫＲ−Ｐ８抗原は新規な前立腺特異性マーカーであると
述べられているが、ヒト正常および肺部組織の大きいパ
ネル対するこのモノクローナル抗体の広範な結合研究は
実施されていない。ＴＵＲＰ−２７はＰＣ−３細胞と反
応しないので、ＴＵＲＰ−２７はＫＲ−Ｐ８抗原に対し
て向けられていると思われない（表１）。ＴＵＲＰ−７
３は、また、ＫＲ−Ｐ８と区別され、ＴＵＲＰ−７３抗
原の免疫ペルオキシダーゼ着色は柱上上皮細胞の内腔境
界に位置するが、ＫＲ−Ｐ８抗原はこれらの細胞の細胞
質中に広く見出される［し°イナー（Ｒ支よ）、７．３
．６１７−６２５ （１９８４）］（特別にここに引用
によって加える）。
述べられているが、ヒト正常および肺部組織の大きいパ
ネル対するこのモノクローナル抗体の広範な結合研究は
実施されていない。ＴＵＲＰ−２７はＰＣ−３細胞と反
応しないので、ＴＵＲＰ−２７はＫＲ−Ｐ８抗原に対し
て向けられていると思われない（表１）。ＴＵＲＰ−７
３は、また、ＫＲ−Ｐ８と区別され、ＴＵＲＰ−７３抗
原の免疫ペルオキシダーゼ着色は柱上上皮細胞の内腔境
界に位置するが、ＫＲ−Ｐ８抗原はこれらの細胞の細胞
質中に広く見出される［し°イナー（Ｒ支よ）、７．３
．６１７−６２５ （１９８４）］（特別にここに引用
によって加える）。
ＰＣ−３に対して生成された３つのモノクローナル抗体
は、力ｏル（ｃａｒｏ ｌ ｌ）、Ａ、Ｍ。
は、力ｏル（ｃａｒｏ ｌ ｌ）、Ａ、Ｍ。
う、クリニカル・イムノロジー会アントーイムノパンロ
ジ−（ｃＩｉｎ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 Ｉｍｍｕｎ
ｏｐａｔｈ、）、３３：２６８−２８１（１９８４）（
特別にここに引用によって加える）に記載された。すべ
ての３つのモノクローナル抗体はＰＣ−３標的に結合す
るが、これに対してＴＵＲＰ−２７は試験したいずれの
腫瘍細胞系にも結合しない（表１）。ＴＵＲＰ−７３は
、また、これらの３つのモノクローナル抗体と区別され
、ＴＵＲＰ−７３は乳房腺癌細胞系ＢＴ−２０（表１）
および乳癌組織（表３）に結合しないが、これらの３つ
のモノクローナル抗体の１つはこれらの両者に強く結合
した。これらのモノクローナル抗体は、また、正常乳房
組織の切片を着色することが発見されたが、これに対し
て、ＴＵＲＰ−７３は正常の乳房組織に結合しなかった
（表２および表３）。
ジ−（ｃＩｉｎ、 Ｉｍｍｕｎｏｌ、 Ｉｍｍｕｎ
ｏｐａｔｈ、）、３３：２６８−２８１（１９８４）（
特別にここに引用によって加える）に記載された。すべ
ての３つのモノクローナル抗体はＰＣ−３標的に結合す
るが、これに対してＴＵＲＰ−２７は試験したいずれの
腫瘍細胞系にも結合しない（表１）。ＴＵＲＰ−７３は
、また、これらの３つのモノクローナル抗体と区別され
、ＴＵＲＰ−７３は乳房腺癌細胞系ＢＴ−２０（表１）
および乳癌組織（表３）に結合しないが、これらの３つ
のモノクローナル抗体の１つはこれらの両者に強く結合
した。これらのモノクローナル抗体は、また、正常乳房
組織の切片を着色することが発見されたが、これに対し
て、ＴＵＲＰ−７３は正常の乳房組織に結合しなかった
（表２および表３）。
ヒト前立腺癌細胞系に対して向けられた８つのモノクロ
ーナル抗体のパネルは、最近、リンドグレン（Ｌｉｎｄ
ｇｒｅｎ）、Ｊ、ら、ハイブリドーマ（Ｈｙｂｒｉｄｏ
ｍａ）、４．３７−４５（１９８５）（特別にここに引
用によって加える）に記載された。これらのモノクロー
ナル抗体の７つは免疫ペルオキシダーゼアッセイにおい
て固定された組織と強く反応せず、これによりこれらの
モノクローナル抗体はＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−
７３と区別される。この報告中に記載される１つの免疫
組織化学的に反応性のモノクローナル抗体は試験したす
べての細胞中に存在する核の抗原に結合し、これはＴＵ
ＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３により見られるパター
ン（表３）と明瞭に異なる。
ーナル抗体のパネルは、最近、リンドグレン（Ｌｉｎｄ
ｇｒｅｎ）、Ｊ、ら、ハイブリドーマ（Ｈｙｂｒｉｄｏ
ｍａ）、４．３７−４５（１９８５）（特別にここに引
用によって加える）に記載された。これらのモノクロー
ナル抗体の７つは免疫ペルオキシダーゼアッセイにおい
て固定された組織と強く反応せず、これによりこれらの
モノクローナル抗体はＴＵＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−
７３と区別される。この報告中に記載される１つの免疫
組織化学的に反応性のモノクローナル抗体は試験したす
べての細胞中に存在する核の抗原に結合し、これはＴＵ
ＲＰ−２７およびＴＵＲＰ−７３により見られるパター
ン（表３）と明瞭に異なる。
前立腺癌をもつ患者からの領域のドレイニング（ｒｅｇ
ｉｏｎａｌ ｄｒａｉｎｉｎｇ）リンパ節からのリン
パ球をネズミ骨髄腫細胞と融合することによって生成さ
れたヒトＩｇＭモノクローナル抗体、ＭＧＨ−７と表示
される、は最近ロウエ（Ｌｏｗｅ）、Ｄ、Ｈ，ら、ジャ
ーナル・土２−ウロロジー（Ｊ、 Ｕｒｏｌ、）、１
３２＋７８０−７８５ （１９８４）（特別にここに引
用によって加える）に記載された。この抗体は正常およ
び悪性の前立腺組織の両者に結合し、こうして、ＴＵＲ
Ｐ−２７およびＴＵＲＰ−７３の両者の結合に類似する
。ＴＵＲＰ−２７とＭＧＨ−７との相違は、ＴＵＲＰ−
２７がヒト細胞系のいずれとも結合しないが、これに対
して、ＭＧＨ−７はＬＮＣａＰおよびＰＣ−３前立腺腫
瘍細胞系の両者に結合するが、ＤＵ１４５前立腺腫瘍細
胞系に結合しないことである。ＤＵ１４５細胞への結合
および肺腺癌細胞への結合に欠けることは、これらの細
胞のタイプのいずれとも反応しない（表１および表３）
ＴＵＲＰ−７３とＭＧＨ−７の結合を区別する。
ｉｏｎａｌ ｄｒａｉｎｉｎｇ）リンパ節からのリン
パ球をネズミ骨髄腫細胞と融合することによって生成さ
れたヒトＩｇＭモノクローナル抗体、ＭＧＨ−７と表示
される、は最近ロウエ（Ｌｏｗｅ）、Ｄ、Ｈ，ら、ジャ
ーナル・土２−ウロロジー（Ｊ、 Ｕｒｏｌ、）、１
３２＋７８０−７８５ （１９８４）（特別にここに引
用によって加える）に記載された。この抗体は正常およ
び悪性の前立腺組織の両者に結合し、こうして、ＴＵＲ
Ｐ−２７およびＴＵＲＰ−７３の両者の結合に類似する
。ＴＵＲＰ−２７とＭＧＨ−７との相違は、ＴＵＲＰ−
２７がヒト細胞系のいずれとも結合しないが、これに対
して、ＭＧＨ−７はＬＮＣａＰおよびＰＣ−３前立腺腫
瘍細胞系の両者に結合するが、ＤＵ１４５前立腺腫瘍細
胞系に結合しないことである。ＤＵ１４５細胞への結合
および肺腺癌細胞への結合に欠けることは、これらの細
胞のタイプのいずれとも反応しない（表１および表３）
ＴＵＲＰ−７３とＭＧＨ−７の結合を区別する。
実施例２
ラジオイムノロー力リゼイション
ＴＵＲＰ−７３をヌードマウス（ｎｕｄｅ ｍ１ｃｅ
）中で生長するヒト腫瘍を標的にする（ｔａｒｇｅｔ）
能力について分析した。さらに詳しくは、完全な親和精
製したＴＵＲＰ−７３をｌ。
）中で生長するヒト腫瘍を標的にする（ｔａｒｇｅｔ）
能力について分析した。さらに詳しくは、完全な親和精
製したＴＵＲＰ−７３をｌ。
ＱｍＣｉのＮａ ｌＩ２５で前述の方法によりより、
はぼ４．Ｏｕ、Ｃｉ／Ｊｉ−ｇの比活性に標識した。抗
原の特異性は、前述のように直接結合固相ＲＩＡにより
決定し、そして生物分布の研究を次のように実施した。
はぼ４．Ｏｕ、Ｃｉ／Ｊｉ−ｇの比活性に標識した。抗
原の特異性は、前述のように直接結合固相ＲＩＡにより
決定し、そして生物分布の研究を次のように実施した。
６つのＬＳＩ７４Ｔ（結腸癌）またはＣ−３（前立腺癌
）の群に、８．０牌ＣｉのＩＩ ２５ ＴＵＲＰ−７３
またはＩ１２５ＣＭ７２（無関係のモノクローナル抗体
に合致するアイソタイプ）を静脈内注射した。マウスの
群を２４．４８．７２および９６時間後に殺し、そして
器官を取り出し、秤量し、モしてガンマカウンターで計
数して、Ｉｔ ２ Ｓ ＴＵＲＰ−７３または１１２Ｓ
ＣＭ７２の生物分布を決定した。ＰＣ−３前立腺腫瘍異
質移植物（ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ）ＮＯＴＵＲＰ−７３
０−力リゼイシヨン（Ｉｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）につ
いての生物分布のデータの結果を下表６に示す。
）の群に、８．０牌ＣｉのＩＩ ２５ ＴＵＲＰ−７３
またはＩ１２５ＣＭ７２（無関係のモノクローナル抗体
に合致するアイソタイプ）を静脈内注射した。マウスの
群を２４．４８．７２および９６時間後に殺し、そして
器官を取り出し、秤量し、モしてガンマカウンターで計
数して、Ｉｔ ２ Ｓ ＴＵＲＰ−７３または１１２Ｓ
ＣＭ７２の生物分布を決定した。ＰＣ−３前立腺腫瘍異
質移植物（ｘｅｎｏｇｒａｆｔｓ）ＮＯＴＵＲＰ−７３
０−力リゼイシヨン（Ｉｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ）につ
いての生物分布のデータの結果を下表６に示す。
上の表６の結果から明らかなように、ＴＵＲＰ−７３は
ＰＣ−３腫瘍を標的にし、ｌｌ２ＳＴＵＲＰ−７３の注
射投与量の平均１１．３０％を濃縮し、これに比較して
ＩｇＧ２ａアイソタイプ合致対照抗体、１１２ＳＣＭ７
２の注射投与量の濃縮はわずかに１．４１％であった。
ＰＣ−３腫瘍を標的にし、ｌｌ２ＳＴＵＲＰ−７３の注
射投与量の平均１１．３０％を濃縮し、これに比較して
ＩｇＧ２ａアイソタイプ合致対照抗体、１１２ＳＣＭ７
２の注射投与量の濃縮はわずかに１．４１％であった。
肝、牌、腎および肺における標識ＴＵＲＰ−７３の高い
腫瘍対組織の比は、ＴＵＲＰ−７３を放射線像形成する
ために応用できることを立証する。 ゛当業者は
種々の変更および変化を本発明の方法および前立腺につ
いてなすことができることは明らかである。こうして、
本発明のこれらの変更および変化が特許請求の範囲内に
包まれるかぎり、本発明はこれらの変更および変化を包
含する。
腫瘍対組織の比は、ＴＵＲＰ−７３を放射線像形成する
ために応用できることを立証する。 ゛当業者は
種々の変更および変化を本発明の方法および前立腺につ
いてなすことができることは明らかである。こうして、
本発明のこれらの変更および変化が特許請求の範囲内に
包まれるかぎり、本発明はこれらの変更および変化を包
含する。
第１Ａ図および第１Ｂ図は、ヒト組織の組成膜調製物を
使用する、それぞれ、モノクローナル抗体ＴＵＲＰ−２
７およびＴＵＲＰ−７３の定量的吸収をグラフで示す。 第２Ａ図および第２Ｂ図は、１前立腺抗原に対して向け
られた非標識モノクローナル抗体による、それぞれ、１
２５工標識ＴＵＲＰ−２７および１２５Ｉ標識ＴＵＲＰ
−７３の結合阻害をグラフで示す。 第３Ａ図および第３Ｂ図は、Ｃａ１１２６前立腺癌の組
成膜抽出抗原調製物に対する、それぞれ、ＴＵＲＰ−２
７およびＴＵＲＰ−７３の間の結合の交差ブロッキング
をグラフで示す。 特許出願人 イースタン・バージニア・メディカル・オ
ーソリティ Ｆｉｇ、ＩＡ 丁ＵＲＰ−２７ Ｆｉｇ、 ＩＢ ＴｔＪＲρ−１３ 暖」ｉ住管白ｖ７．μ滲 ｐｊ−ｇ、 ２Ａ ＋５．６ ３１２ ６２．５ １２５ ２５０ ５００
７゛ロンキンククしイ峯、）、ｌ） ｒｉｇ・ ２Ｂ １５６ コ１．２ ６２．５ １２５ ２５０ ５００
７゛口ソモン７抗１ト、１才 Ｆｉｇ、３Ａ ）’ｉｇ、 ３Ｂ
使用する、それぞれ、モノクローナル抗体ＴＵＲＰ−２
７およびＴＵＲＰ−７３の定量的吸収をグラフで示す。 第２Ａ図および第２Ｂ図は、１前立腺抗原に対して向け
られた非標識モノクローナル抗体による、それぞれ、１
２５工標識ＴＵＲＰ−２７および１２５Ｉ標識ＴＵＲＰ
−７３の結合阻害をグラフで示す。 第３Ａ図および第３Ｂ図は、Ｃａ１１２６前立腺癌の組
成膜抽出抗原調製物に対する、それぞれ、ＴＵＲＰ−２
７およびＴＵＲＰ−７３の間の結合の交差ブロッキング
をグラフで示す。 特許出願人 イースタン・バージニア・メディカル・オ
ーソリティ Ｆｉｇ、ＩＡ 丁ＵＲＰ−２７ Ｆｉｇ、 ＩＢ ＴｔＪＲρ−１３ 暖」ｉ住管白ｖ７．μ滲 ｐｊ−ｇ、 ２Ａ ＋５．６ ３１２ ６２．５ １２５ ２５０ ５００
７゛ロンキンククしイ峯、）、ｌ） ｒｉｇ・ ２Ｂ １５６ コ１．２ ６２．５ １２５ ２５０ ５００
７゛口ソモン７抗１ト、１才 Ｆｉｇ、３Ａ ）’ｉｇ、 ３Ｂ
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結合特異性をもつ
が、前立腺特異性抗原または前立腺酸性ホスファターゼ
に対する結合特異性をもたないモノクローナル抗体。 ２、前記モノクローナル抗体はＡＴＣＣ Ｎｏ．４０２
９２の同定特性を有するＴＵＲＰ−２７である特許請求
の範囲第１項記載のモノクローナル抗体。 ３、前記モノクローナル抗体はＡＴＣＣ Ｎｏ．４０２
９３の同定特性を有するＴＵＲＰ−７３である特許請求
の範囲第１項記載のモノクローナル抗体。 ４、工程： （ａ）患者から体液の試料を入手し、 （ｂ）前記体液をヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結合
特異性をもつが、前立腺特異性 抗原または前立腺酸性ホスファターゼに対する結合特異
性をもたないモノクローナル抗体に暴露し、 （ｃ）体液中に存在する物質に結合するモノクローナル
抗体の量を決定し、そして （ｄ）体液の物質に結合したモノクローナル抗体の量を
前もって決定した基本水準と比 較して、前立腺腫瘍またはその転移の存在を確認する、 を含んでなることを特徴とする前立腺腫瘍またはその転
移を診断する方法。 ５、前記モノクローナル抗体はＡＴＣＣ Ｎｏ．４０２
９２の同定特性を有するＴＵＲＰ−２７である特許請求
の範囲第４項記載の方法。 ６、前記モノクローナル抗体はＡＴＣＣ Ｎｏ．４０２
９３の同定特性を有するＴＵＲＰ−７３である特許請求
の範囲第４項記載の方法。 ７、前記体液は血液、血清、精液漿、精液、尿および前
立腺液から成る群より選択される特許請求の範囲第４項
記載の方法。 ８、体液中に存在する物質に結合するモノクローナル抗
体の量をラジオイムノアッセイにより決定する特許請求
の範囲第４項記載の方法。 ９、体液中に存在する物質に結合するモノクローナル抗
体の量をエンザイムイムノアッセイにより決定する特許
請求の範囲第４項記載の方法。 １０、工程： （ａ）患者に、ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結合特
異性をもつが、前立腺特異性抗原または前立腺酸性ホス
ファターゼに対する結合特異性をもたないモノクローナ
ル抗体を投与し、ここで前記モノクローナル抗体はマー
カーに接合されており、そして （ｂ）前記患者を検出装置に暴露して、前立腺腫瘍部位
またはその転移部位に対応するマーカーの区域を同定す
る、を含んでなることを特徴とする前立腺腫瘍またはそ
の転移の存在を診断する方法。 １１、前記モノクローナル抗体はＡＴＣＣ Ｎｏ．４０
２９２の同定特性を有するＴＵＲＰ−２７である特許請
求の範囲第１０項記載の方法。 １２、前記モノクローナル抗体はＡＴＣＣ Ｎｏ．４０
２９３の同定特性を有するＴＵＲＰ−７３である特許請
求の範囲第１０項記載の方法。 １３、前記マーカーは核磁気スピン共鳴アイソトープで
あり、そして前記検出装置は核磁気像形成装置である特
許請求の範囲第１０項記載の方法。 １４、前記マーカーはガドリニウムである特許請求の範
囲第１３項記載の方法。 １５、前記マーカーは放射性物質であり、そして前記検
出装置はガンマシンチレーションカメラである特許請求
の範囲第１０項記載の方法。 １６、前記放射性物質はＩ＾１＾２＾５、 I ＾１＾３
＾１、１＾１＾２＾３、Ｉｎ＾１＾１＾１、Ｉｎ＾１＾
１＾３、Ｇａ＾６＾７、Ｇａ＾６＾８、Ｒｕ＾９＾７、
Ｒｕ＾１＾０＾３、Ｈｇ＾１＾９＾７、Ｈｇ＾２＾０＾
３およびＴｃ＾９＾９＾＾ｍから成る群より選択される
特許請求の範囲第１５項記載の方法。 １７、前記放射性物質はＩｎ＾１＾１＾１またはＴｃ＾
９＾９＾＾ｍである特許請求の範囲第１６項記載の方法
。 １８、前立腺腫瘍またはその転移に悩む患者に製薬学的
に有効な量のモノクローナル抗体−治療剤を投与するこ
とからなり、ここで前記モノクローナル抗体はヒト前立
腺腫瘍関連抗原に対する結合特異性をもつが、前立腺特
異性抗原または前立腺酸性ホスファターゼに対する結合
特異性をもたないことを特徴とする前立腺腫瘍またはそ
の転移に悩む患者を処置する方法。 １９、前記モノクローナル抗体はＡＴＣＣ Ｎｏ．４０
２９２の同定特性を有するＴＵＲＰ−２７である特許請
求の範囲第１８項記載の方法。 ２０、前記モノクローナル抗体はＡＴＣＣ Ｎｏ．４０
２９３の同定特性を有するＴＵＲＰ−７３である特許請
求の範囲第１８項記載の方法。 ２１、モノクローナル抗体−治療剤は、薬物に結合した
抗体、毒素に結合した抗体、アイソトープに結合した抗
体、ヘテロ二官能性抗体および自然抗体から成る群より
選択される特許請求の範囲第１８項記載の方法。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US80971985A | 1985-12-17 | 1985-12-17 | |
| US94191186A | 1986-12-15 | 1986-12-15 | |
| US941911 | 1986-12-15 | ||
| US809719 | 1986-12-15 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62215870A true JPS62215870A (ja) | 1987-09-22 |
| JP2574269B2 JP2574269B2 (ja) | 1997-01-22 |
Family
ID=27123249
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61301154A Expired - Lifetime JP2574269B2 (ja) | 1985-12-17 | 1986-12-17 | ヒト前立腺腫瘍関連抗原に対する結合特異性を有するモノクロ−ナル抗体類およびそれらを使用する方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0228243B1 (ja) |
| JP (1) | JP2574269B2 (ja) |
| DE (1) | DE3684578D1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002513378A (ja) * | 1996-07-18 | 2002-05-08 | コーネル・リサーチ・ファンデーション・インコーポレイテッド | 癌の治療および診断 |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4690890A (en) * | 1984-04-04 | 1987-09-01 | Cetus Corporation | Process for simultaneously detecting multiple antigens using dual sandwich immunometric assay |
| EP0635575A1 (en) * | 1993-07-22 | 1995-01-25 | Wallac Oy | Monoclonal antibodies against epitopes found in free but not in alpha-1-antichmotrypsin complexed prostate specific antigen |
| US6103237A (en) * | 1993-07-22 | 2000-08-15 | Hybritech Incorporated | Stable variant hK2 polypeptide |
| WO1995030758A1 (en) * | 1994-05-10 | 1995-11-16 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Recombinant hk2 polypeptide |
| US7381407B1 (en) | 1996-03-25 | 2008-06-03 | Medarex, Inc. | Monoclonal antibodies specific for the extracellular domain of prostate-specific membrane antigen |
| US6962981B1 (en) | 1996-03-25 | 2005-11-08 | Medarex, Inc. | Monoclonal antibodies specific for the extracellular domain of prostate-specific membrane antigen |
| CA2261019A1 (en) * | 1996-07-15 | 1998-01-22 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Methods to detect hk2 polypeptides |
| US6479263B1 (en) | 1996-11-14 | 2002-11-12 | Baylor College Of Medicine | Method for detection of micrometastatic prostate cancer |
| EP0981541B1 (en) * | 1997-03-10 | 2004-06-02 | The Regents Of The University Of California | Psca: prostate stem cell antigen |
| US6541212B2 (en) | 1997-03-10 | 2003-04-01 | The Regents Of The University Of California | Methods for detecting prostate stem cell antigen protein |
| WO1998059073A1 (en) | 1997-06-20 | 1998-12-30 | Mayo Foundation For Medical Education And Research | Method for detection of breast cancer |
| AU764911B2 (en) * | 1998-08-31 | 2003-09-04 | Agensys, Inc. | PHELIX: a testis-specific protein expressed in cancer |
| CN101160324B (zh) | 2005-02-18 | 2013-04-24 | 米德列斯公司 | 缺乏岩藻糖残基的抗前列腺特异性膜抗原(psma)单克隆抗体 |
-
1986
- 1986-12-17 EP EP86309857A patent/EP0228243B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1986-12-17 DE DE8686309857T patent/DE3684578D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-12-17 JP JP61301154A patent/JP2574269B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| CANCER RESEACH=1982 * |
| HYBRIDOMA=1985 * |
| INT.J.CANCER=1985 * |
| J.NATL.CANCER INST.=1984 * |
| PROC.NATL.ACAD.SCI.USA=1982 * |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3684578D1 (de) | 1992-04-30 |
| EP0228243B1 (en) | 1992-03-25 |
| EP0228243A1 (en) | 1987-07-08 |
| JP2574269B2 (ja) | 1997-01-22 |
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