JPS62220197A - ヒト非小細胞肺癌および一定の他のヒト癌腫に対する単クロ−ン性抗体および抗原 - Google Patents
ヒト非小細胞肺癌および一定の他のヒト癌腫に対する単クロ−ン性抗体および抗原Info
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- JPS62220197A JPS62220197A JP62042467A JP4246787A JPS62220197A JP S62220197 A JPS62220197 A JP S62220197A JP 62042467 A JP62042467 A JP 62042467A JP 4246787 A JP4246787 A JP 4246787A JP S62220197 A JPS62220197 A JP S62220197A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（１）発明の分野
本発明は新規な単クローン性抗体、並びに癌腫抗原に特
異的なそのような新規単クローン性抗体を生成および使
用する方法に関する。より詳しくは、本発明の単クロー
ン性抗体はヒト非小細胞肺癌（ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃ
ｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）（ＮＳＣＬＣ
） ！６よび乳房、結腸などの若干の癌を含む一定の他
のヒト癌に関連するタンパク質抗原に対し免疫特異性お
よび（または）免疫活性である。
異的なそのような新規単クローン性抗体を生成および使
用する方法に関する。より詳しくは、本発明の単クロー
ン性抗体はヒト非小細胞肺癌（ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ ｃ
ｅｌｌ ｌｕｎｇ ｃａｒｃｉｎｏｍａ）（ＮＳＣＬＣ
） ！６よび乳房、結腸などの若干の癌を含む一定の他
のヒト癌に関連するタンパク質抗原に対し免疫特異性お
よび（または）免疫活性である。
本発明の単クローン性抗体はＮ５ＣＬＣに関連するかま
たは乳癌、結腸癌および小細胞肺癌を含む他の癌に関連
する糖タンパク質抗原の決定基と反応する。本発明の単
クローン性抗体は、そのような抗体を生体内および試験
管内の両方の臨床診断目的に適するようにする明確な特
性および能力を有する。さらに本発明の抗原は治療用途
に適する。例えば、新規な抗体は化学療法薬、毒素、免
疫応答修飾剤および放射性同位元素を含み、しかしそれ
らに限定されない抗腫瘍効果を有する種々の試薬の標的
選択性担体として使用できる。さらに、そのような抗体
を生ずるハイブリドーマは、生ずる抗体が抗体依存性細
胞毒を仲介することができるかまたは補体成分の存在下
に腫瘍細胞に対し細胞毒性であることができるように組
換えＤＮＡ技術を用いて修飾することができる。
たは乳癌、結腸癌および小細胞肺癌を含む他の癌に関連
する糖タンパク質抗原の決定基と反応する。本発明の単
クローン性抗体は、そのような抗体を生体内および試験
管内の両方の臨床診断目的に適するようにする明確な特
性および能力を有する。さらに本発明の抗原は治療用途
に適する。例えば、新規な抗体は化学療法薬、毒素、免
疫応答修飾剤および放射性同位元素を含み、しかしそれ
らに限定されない抗腫瘍効果を有する種々の試薬の標的
選択性担体として使用できる。さらに、そのような抗体
を生ずるハイブリドーマは、生ずる抗体が抗体依存性細
胞毒を仲介することができるかまたは補体成分の存在下
に腫瘍細胞に対し細胞毒性であることができるように組
換えＤＮＡ技術を用いて修飾することができる。
（２）発明の背景
（２：１） ヒト肺癌
肺癌は男子中の癌による死亡の主な原因であり、また女
子中の焦死の最も多い原因としての乳癌を越えている。
子中の焦死の最も多い原因としての乳癌を越えている。
この疾患は４つの主要組織学型：（ｉ）類表皮または扁
平上皮（３０％）、（ｉｉ ）腺癌（３５％）、（ｉｉ
ｉ ）大細胞未分化（１５％）、および（ｉｖ ）小細
胞（２０％）に分けることができる。非小細胞肺癌（ｒ
ＮｓｃＬｃｊ ）という語には次の細胞型：類表皮癌細
胞、腺癌細胞および大未分化癌細胞、が含まれる。
平上皮（３０％）、（ｉｉ ）腺癌（３５％）、（ｉｉ
ｉ ）大細胞未分化（１５％）、および（ｉｖ ）小細
胞（２０％）に分けることができる。非小細胞肺癌（ｒ
ＮｓｃＬｃｊ ）という語には次の細胞型：類表皮癌細
胞、腺癌細胞および大未分化癌細胞、が含まれる。
肺癌は多くの場合に化学療法および放射線療法によって
は不治である。小細胞肺癌は化学療法および放射線療法
に応答して縮小するが、しかしこれは全治には至らない
。腫瘍の完全な外科除去が唯一の有効療法であると思わ
れる。しかし不幸にも肺癌患者の３０％未満が診断で完
全に切除できる腫瘍を有する。この中３分の１未満が腫
瘍の見掛は上完全な外科除去の後５年生存する。従って
、肺癌の早期診断、癌の広がりの程度の良好な限定およ
び一層有効な療法を可能にする方法が強く要求されてい
る。
は不治である。小細胞肺癌は化学療法および放射線療法
に応答して縮小するが、しかしこれは全治には至らない
。腫瘍の完全な外科除去が唯一の有効療法であると思わ
れる。しかし不幸にも肺癌患者の３０％未満が診断で完
全に切除できる腫瘍を有する。この中３分の１未満が腫
瘍の見掛は上完全な外科除去の後５年生存する。従って
、肺癌の早期診断、癌の広がりの程度の良好な限定およ
び一層有効な療法を可能にする方法が強く要求されてい
る。
（２，２）単クローン性抗体
特異的結合またはアフィニティ一定数で抗原上の単分子
部位（すなわちエピトープ）に結合する相同抗体分子に
相当する単クローン性抗体が公知３方法により調製され
る。
部位（すなわちエピトープ）に結合する相同抗体分子に
相当する単クローン性抗体が公知３方法により調製され
る。
単クローン性抗体はコーラ−ほか（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎ
ｄＭｉｌｓｔｅｉｎ） （１９７５、ネーチ−？ （
Ｎａｔｕｒｅ） 、２５６：４９５；１９７６、ヨーロ
ピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（εｕｒ、Ｊ
、［ｍｍｕｎｏｌ、）、６：５１１）により考案された
ハイブリドーマ技術により製造することができる。抗体
産生細胞（牌リンパ球）と骨髄腫細胞との融合によりコ
ーラ−ほか（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ
）は抗体を生ずる能力および細胞培養中で永久的に成
長する能力の両方を有するイモータル（ｉｍｍｏｒｔａ
ｌ） 細胞系を生ずるハイブリッド細胞を作り出した
。ハイブリドーマは、リンパ球が予め暴露された抗原に
より予め規定された抗原特異性の単一型の免疫グロブリ
ンを分泌する。
ｄＭｉｌｓｔｅｉｎ） （１９７５、ネーチ−？ （
Ｎａｔｕｒｅ） 、２５６：４９５；１９７６、ヨーロ
ピアン・ジャーナル・オブ・イムノロジー（εｕｒ、Ｊ
、［ｍｍｕｎｏｌ、）、６：５１１）により考案された
ハイブリドーマ技術により製造することができる。抗体
産生細胞（牌リンパ球）と骨髄腫細胞との融合によりコ
ーラ−ほか（Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ
）は抗体を生ずる能力および細胞培養中で永久的に成
長する能力の両方を有するイモータル（ｉｍｍｏｒｔａ
ｌ） 細胞系を生ずるハイブリッド細胞を作り出した
。ハイブリドーマは、リンパ球が予め暴露された抗原に
より予め規定された抗原特異性の単一型の免疫グロブリ
ンを分泌する。
あるいは、単クローン性抗体は哺乳動物末梢血液Ｂリン
パ球の例えばエプスタイン・バーウィルス（ＥＢＶ）に
よる試験管内トランスフォーメーションにより生成させ
ることができる。ウィルスは抗体生成リンパ球をイモー
タル化する。そのようなトランスフォーメーションの技
術は当業者に知られている〔例えばスタインメッッ（Ｓ
ｔｅｉｎｍｅｔｚ）ほか、１９７７ 、Ｎａｔｕｒｅ、
２６９ ： ４２ Ｑ ； り。
パ球の例えばエプスタイン・バーウィルス（ＥＢＶ）に
よる試験管内トランスフォーメーションにより生成させ
ることができる。ウィルスは抗体生成リンパ球をイモー
タル化する。そのようなトランスフォーメーションの技
術は当業者に知られている〔例えばスタインメッッ（Ｓ
ｔｅｉｎｍｅｔｚ）ほか、１９７７ 、Ｎａｔｕｒｅ、
２６９ ： ４２ Ｑ ； り。
ラフオード（ｃｒａｗｆｏｒｄ） ほか、１９８３、
ザ・ランセット（Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ） 、ｉ ％
３８６参照〕。
ザ・ランセット（Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ） 、ｉ ％
３８６参照〕。
最後に、単クローン性抗体はＥＢＶイモ−タリーｔ／−
ジョンおよび細胞融合またはハイブリドーマ技術の両方
を組合せた技術を用いて生成させることができる。コウ
ル（ｃｏｌｅ） ほかＩ：１９８５、［単クローン性
抗体および癌療法（Ｍｏｎｏｃ １ｏｎａ ＩＡｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ
） Ｊ 、７ ラフ ・ＩＪス社（Ａｌａｎ Ｌｉ５ｓ
、 Ｉｎｃ、）、ｐｐ、 ７７〜９６ ）はヒト形
質細胞腫またはリンパ芽球様細胞系融合パートナ−と、
予め細胞系として決定されたＥＢＶ ）ランスフオーム
供与体リンパ球とを融合する方法を記載している。その
ような系において両者の親細胞系はイモータルである。
ジョンおよび細胞融合またはハイブリドーマ技術の両方
を組合せた技術を用いて生成させることができる。コウ
ル（ｃｏｌｅ） ほかＩ：１９８５、［単クローン性
抗体および癌療法（Ｍｏｎｏｃ １ｏｎａ ＩＡｎｔｉ
ｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ
） Ｊ 、７ ラフ ・ＩＪス社（Ａｌａｎ Ｌｉ５ｓ
、 Ｉｎｃ、）、ｐｐ、 ７７〜９６ ）はヒト形
質細胞腫またはリンパ芽球様細胞系融合パートナ−と、
予め細胞系として決定されたＥＢＶ ）ランスフオーム
供与体リンパ球とを融合する方法を記載している。その
ような系において両者の親細胞系はイモータルである。
従って融合パートナ−は、融合ハイブリドーマを培養す
るときに親細胞に対して逆選択する適当な薬物標識を有
さねばならない。生ずるＥＢＶハイブリドーマは用いた
ＥＢＶ−！Ｊンパ球細胞系の特異性を有する抗体を生ず
る。
るときに親細胞に対して逆選択する適当な薬物標識を有
さねばならない。生ずるＥＢＶハイブリドーマは用いた
ＥＢＶ−！Ｊンパ球細胞系の特異性を有する抗体を生ず
る。
単クローン性抗体は特定のハイブリドーマまたはトラン
スフオーム細胞系の試験管内細胞培養により多量に作る
ことができる。さらに、ハイブリドーマ細胞系の適合性
哺乳動物例えばマウスの腹膜腔中への接種が、高濃度（
１〜２０ｍｇ／ｍβ）の単クローン性抗体を腫瘍腹水液
中へ分泌する腫瘍を生ずる。ｌ夏水液をとり出し単クロ
ーン性抗体を精製することにより単一マウスが数千の診
断検定に使用する十分な抗体を与えることができる。
スフオーム細胞系の試験管内細胞培養により多量に作る
ことができる。さらに、ハイブリドーマ細胞系の適合性
哺乳動物例えばマウスの腹膜腔中への接種が、高濃度（
１〜２０ｍｇ／ｍβ）の単クローン性抗体を腫瘍腹水液
中へ分泌する腫瘍を生ずる。ｌ夏水液をとり出し単クロ
ーン性抗体を精製することにより単一マウスが数千の診
断検定に使用する十分な抗体を与えることができる。
（２，３） 肺癌に関連する単クローン性抗体および
抗原 ヒト肺癌抗原に対する単クローン性抗体はシコラ（Ｓｉ
ｋｏｒａ） ほか、１９８１、ブリティッシュ・、ジ
ャーナル・オン・カンサー（Ｂｒｉｔ、 Ｊ、Ｃａｎｃ
ｅｒ）、４３：６９６；カテイタ（ｃｕｔｔｉｔａ）ほ
か、１９８１、プロシーディング・オン・ザ・ナショナ
ル・アカデミイ・オン・サイエンス（Ｐｒａｃ。
抗原 ヒト肺癌抗原に対する単クローン性抗体はシコラ（Ｓｉ
ｋｏｒａ） ほか、１９８１、ブリティッシュ・、ジ
ャーナル・オン・カンサー（Ｂｒｉｔ、 Ｊ、Ｃａｎｃ
ｅｒ）、４３：６９６；カテイタ（ｃｕｔｔｉｔａ）ほ
か、１９８１、プロシーディング・オン・ザ・ナショナ
ル・アカデミイ・オン・サイエンス（Ｐｒａｃ。
Ｎａｔ１＾ｃａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ）、７８：４５
９１；ムーデイ（Ｍｏｏｄｙ）ほか、１９８１、サイエ
ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２１４：１２４６；ミンチ（Ｍ
ｉｎｎａ）ほか、１９８１、インヒトｏ （Ｉｎ Ｖｉ
ｔｒｏ） 、１ユニ１０５８；ケンネル（Ｋｅｎｎｅｌ
） ほか、１９８１、カンサー・リサーチ（ｃａｎｃ
ｅｒ Ｒｅ５ｅａｒｅｈ）、４ユニ３４６５ ；ケミカ
ル・アブストラクト（ｃｂｅｍ。
９１；ムーデイ（Ｍｏｏｄｙ）ほか、１９８１、サイエ
ンス（Ｓｃｉｅｎｃｅ）２１４：１２４６；ミンチ（Ｍ
ｉｎｎａ）ほか、１９８１、インヒトｏ （Ｉｎ Ｖｉ
ｔｒｏ） 、１ユニ１０５８；ケンネル（Ｋｅｎｎｅｌ
） ほか、１９８１、カンサー・リサーチ（ｃａｎｃ
ｅｒ Ｒｅ５ｅａｒｅｈ）、４ユニ３４６５ ；ケミカ
ル・アブストラクト（ｃｂｅｍ。
八ｂｓｔ、）、９５ （１５）： １３０８５０２
．；ベイリン（Ｂａｙｌｉｎ） ほか、１９８２ 、
Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ。
．；ベイリン（Ｂａｙｌｉｎ） ほか、１９８２ 、
Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ。
Ｓｃｉ、ＬＩＳＡ、 ７９ ： ４６５０ ；カーネー
（ｃａｒｎｅｙ）ほか、１９８２、パンバイオロジー・
アニュ７）Ｌ／（Ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ Ａｎｎｕ
ａｌ） 、ユ２：１１５；ガズター（Ｇａｚｄａｒ）
ほか、１９８３、セミナーズ・イン・オンコロジー（
Ｓｅｍｉｎａｒｅ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ） 、１
０ ：３；ホリンスヘッド（Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ）
ほか、１９８３、カンサー・デテクション・アンド・プ
レベンジＥ、 ７ （ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔ、
Ｐｒｅｖｅｎｔ） 、６ ：１８５；ムルシナ（Ｍｕ
ｌｓｈｉｎｅ） ほか、１９８３、ジャーナル・オン
・イムノロジー（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、） −１１３１
：４９７：ヒユアング（ｌｕａｎｇ）ほか、１．９８３
、アチーブズ・オン・バイオケミストリー・アンド・バ
イオフィジックス（Ａｒｃｈ、Ｂｉｏｃｈ−ｅｍ、 Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ、 ）、２２０：３１８；サジ（Ｓａｊｉ
）ほか、１９８４、バイブリド−７（）Ｉｙｂｒｉｄｏ
ｍａ）、３ ：１１９；バイオロジカル・アブストラク
ト（Ｂｉｏ。
（ｃａｒｎｅｙ）ほか、１９８２、パンバイオロジー・
アニュ７）Ｌ／（Ｐａｔｈｏｂｉｏｌｏｇｙ Ａｎｎｕ
ａｌ） 、ユ２：１１５；ガズター（Ｇａｚｄａｒ）
ほか、１９８３、セミナーズ・イン・オンコロジー（
Ｓｅｍｉｎａｒｅ ｉｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ） 、１
０ ：３；ホリンスヘッド（Ｈｏｌｌｉｎｓｈｅａｄ）
ほか、１９８３、カンサー・デテクション・アンド・プ
レベンジＥ、 ７ （ｃａｎｃｅｒ Ｄｅｔｅｃｔ、
Ｐｒｅｖｅｎｔ） 、６ ：１８５；ムルシナ（Ｍｕ
ｌｓｈｉｎｅ） ほか、１９８３、ジャーナル・オン
・イムノロジー（Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、） −１１３１
：４９７：ヒユアング（ｌｕａｎｇ）ほか、１．９８３
、アチーブズ・オン・バイオケミストリー・アンド・バ
イオフィジックス（Ａｒｃｈ、Ｂｉｏｃｈ−ｅｍ、 Ｂ
ｉｏｐｈｙｓ、 ）、２２０：３１８；サジ（Ｓａｊｉ
）ほか、１９８４、バイブリド−７（）Ｉｙｂｒｉｄｏ
ｍａ）、３ ：１１９；バイオロジカル・アブストラク
ト（Ｂｉｏ。
Ａｂｓｔ） 、７９００５５６９ ；ボスレフト（Ｂ
ｏｓｓｌｅｔ）ほか、ベージング・インステイチ二−ト
・ミッテイルンゲ７ （Ｂｅｈｒｉｎｇ ［ｎｓｔ、
Ｍｉｔｔ、）、ユ４：２７；Ｃｈｅｍ、 八ｂｓｔ、
ＡＣＩＯＩ （９） ニア０６６８６ ；ロ
セフト（Ｒｏｓｅｔ）ほか、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、、
４ユニ２０５２ ；Ｂｉｏ、Ａｂｓｔ、、 ７９
０２３６０５ ；プリンクラ−（Ｐｒｉｎｃｌｅｒ
）ほか、１９８２ 、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｏ、４２：８
４３；マゾーリック（Ｍａｚａｕｒｉｃ ）ほか、１９
８２ 、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、、 ４２ ： １５０
；ブラー７ （Ｂｒａａｔｚ） ほか、１９ ｇ
２ 、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、。
ｏｓｓｌｅｔ）ほか、ベージング・インステイチ二−ト
・ミッテイルンゲ７ （Ｂｅｈｒｉｎｇ ［ｎｓｔ、
Ｍｉｔｔ、）、ユ４：２７；Ｃｈｅｍ、 八ｂｓｔ、
ＡＣＩＯＩ （９） ニア０６６８６ ；ロ
セフト（Ｒｏｓｅｔ）ほか、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、、
４ユニ２０５２ ；Ｂｉｏ、Ａｂｓｔ、、 ７９
０２３６０５ ；プリンクラ−（Ｐｒｉｎｃｌｅｒ
）ほか、１９８２ 、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｏ、４２：８
４３；マゾーリック（Ｍａｚａｕｒｉｃ ）ほか、１９
８２ 、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、、 ４２ ： １５０
；ブラー７ （Ｂｒａａｔｚ） ほか、１９ ｇ
２ 、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、。
４２：８４９；ソヘル（ＳＯｂｅｌ）ほか、１９’８２
、フエデレーション・プロシーディング（Ｆｅｄ。
、フエデレーション・プロシーディング（Ｆｅｄ。
Ｐｒｏｃ、） 、４１：４０９；：ｌ：ｌウル（ｃｏｌ
ｅ） ほか、１９８５、「単クローン性抗体および癌
療法（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ） Ｊ、アラン
・リス社（Ａｌａｎ Ｌｉ５ｓ、 Ｉｎｃ、）、ｐｐ
、７７〜９６；およびバルキ（Ｖａｒｋｉ）ほか、１９
８５、「単クローン性抗体および癌療法（Ｍｏｎｏｃｌ
ｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ
Ｔｈｅｒａｐｙ ） Ｊ 、アラン・リス社（Ａｌａ
ｎ Ｌｉ５ｓ、 Ｉｎｃ、） ｐ、 ２０ ？、によ
り記載された。
ｅ） ほか、１９８５、「単クローン性抗体および癌
療法（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ
ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ） Ｊ、アラン
・リス社（Ａｌａｎ Ｌｉ５ｓ、 Ｉｎｃ、）、ｐｐ
、７７〜９６；およびバルキ（Ｖａｒｋｉ）ほか、１９
８５、「単クローン性抗体および癌療法（Ｍｏｎｏｃｌ
ｏｎａｌＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ
Ｔｈｅｒａｐｙ ） Ｊ 、アラン・リス社（Ａｌａ
ｎ Ｌｉ５ｓ、 Ｉｎｃ、） ｐ、 ２０ ？、によ
り記載された。
米国特許出願第６６７．５２１号（１９８４年１１月２
日提出）および第７８５．１７７号（１９８５年１０月
７日提出）並びに出願第６８４，７５９号（１９８４年
１２月２１日提出）および第７７６、３２１号（１９８
５年１０月１８日提出）並びに出願第７３８．６１２号
（１９８５年５月２８日提出）にはヒト非小細胞肺癌に
対する一定の単クローン性抗体が記載されている。
日提出）および第７８５．１７７号（１９８５年１０月
７日提出）並びに出願第６８４，７５９号（１９８４年
１２月２１日提出）および第７７６、３２１号（１９８
５年１０月１８日提出）並びに出願第７３８．６１２号
（１９８５年５月２８日提出）にはヒト非小細胞肺癌に
対する一定の単クローン性抗体が記載されている。
単クローン性抗体は肺癌の初期診断、癌のひろがりの良
好な規定、および肺癌の一層有効な治療法を可能にする
方法に使用できる。しかし、先要条件は正常成人組織よ
りも肺癌中に強く発現される抗原に対する抗体を見出す
ことである。腫瘍細胞集団の公知の異質性、同一抗原分
子上の若干の決定基の存在、診断標識としての安定性お
よび治療標的に関する抗原間の予想される差異、並びに
同一抗原に対する異なる抗体の異なる生物学的特性にて
らして、多くの異なる抗原に対する多くの異なる抗体が
必要であろう。
好な規定、および肺癌の一層有効な治療法を可能にする
方法に使用できる。しかし、先要条件は正常成人組織よ
りも肺癌中に強く発現される抗原に対する抗体を見出す
ことである。腫瘍細胞集団の公知の異質性、同一抗原分
子上の若干の決定基の存在、診断標識としての安定性お
よび治療標的に関する抗原間の予想される差異、並びに
同一抗原に対する異なる抗体の異なる生物学的特性にて
らして、多くの異なる抗原に対する多くの異なる抗体が
必要であろう。
（３）発明の概要
本発明は、Ｌ２０によって示され、ヒト非小細胞肺癌（
ＮＳＣＬＣ）細胞に関連する糖タンパク質抗原上の決定
基部位に対し特異的である新規クラスの単クローン性抗
体に関する。「Ｎ５ＣＬＣ細胞」゛という語には類表皮
癌細胞、腺癌細胞および大細胞未分化癌細胞が含まれる
。決定基部位はまた若干の他の癌例えば乳房および結腸
の若干の癌、並びに小細胞肺癌の抗原上に見出すことが
できる。従って、本発明の抗体はまた他の癌からの細胞
に結合し、抗体Ｌ２０により同定される抗原を発現する
他のすべての腫瘍の診断および治療に有用である。この
単クローン性抗体は正常成人細胞に対し腫瘍細胞よりも
非常にわずかな程度に結合する。「非常にわずかな程度
に結合する」という語は免疫組織学的手法を用いたとき
に結合が全く検出されないか、または単に非常に弱い染
色として検出できることを意味する。従って、抗体はＮ
５ＣＬＣおよび一定の他の癌の特性的抗原に対する高度
の特異性を有する。
ＮＳＣＬＣ）細胞に関連する糖タンパク質抗原上の決定
基部位に対し特異的である新規クラスの単クローン性抗
体に関する。「Ｎ５ＣＬＣ細胞」゛という語には類表皮
癌細胞、腺癌細胞および大細胞未分化癌細胞が含まれる
。決定基部位はまた若干の他の癌例えば乳房および結腸
の若干の癌、並びに小細胞肺癌の抗原上に見出すことが
できる。従って、本発明の抗体はまた他の癌からの細胞
に結合し、抗体Ｌ２０により同定される抗原を発現する
他のすべての腫瘍の診断および治療に有用である。この
単クローン性抗体は正常成人細胞に対し腫瘍細胞よりも
非常にわずかな程度に結合する。「非常にわずかな程度
に結合する」という語は免疫組織学的手法を用いたとき
に結合が全く検出されないか、または単に非常に弱い染
色として検出できることを意味する。従って、抗体はＮ
５ＣＬＣおよび一定の他の癌の特性的抗原に対する高度
の特異性を有する。
本発明はまた抗体Ｌ２０により同定された新規なＬ２０
抗原を含み、結合する抗体のクラスはこの抗原に対し免
疫特異性または免疫反応性である。
抗原を含み、結合する抗体のクラスはこの抗原に対し免
疫特異性または免疫反応性である。
さらに、精製またはクローンしたＬ２０抗原をワクチン
として一定の癌に対する免疫処置に用いる方法が包含さ
れる。
として一定の癌に対する免疫処置に用いる方法が包含さ
れる。
本発明はまた本発明の単クローン性抗体を用いる一定の
診断法に関する。例えば抗体を、ヒト肺組織および他の
ヒト組織中の悪性状態の存在を決定する方法に用いるこ
とができる。方法には抗体Ｌ２０により規定された１１
０．０００ドルトン糖タンパク質の特性を有する抗原の
存在に対する組織の試験が含まれる。例えば、組織を、
抗体Ｌ２０により規定される抗原の特性を有する抗原に
関連する細胞上の決定基部位を規定する抗体、この抗体
の機能等漬物またはフラグメントと接触させ、前記抗体
と抗原決定基との相互作用を検出することができる。そ
のような方法の１つには、そのような細胞を含むと思わ
れる験体中のＮ５ＣＬＣ細胞の存在を決定することが含
まれる。
診断法に関する。例えば抗体を、ヒト肺組織および他の
ヒト組織中の悪性状態の存在を決定する方法に用いるこ
とができる。方法には抗体Ｌ２０により規定された１１
０．０００ドルトン糖タンパク質の特性を有する抗原の
存在に対する組織の試験が含まれる。例えば、組織を、
抗体Ｌ２０により規定される抗原の特性を有する抗原に
関連する細胞上の決定基部位を規定する抗体、この抗体
の機能等漬物またはフラグメントと接触させ、前記抗体
と抗原決定基との相互作用を検出することができる。そ
のような方法の１つには、そのような細胞を含むと思わ
れる験体中のＮ５ＣＬＣ細胞の存在を決定することが含
まれる。
検体を、そのような細胞を検体中に存在できる他の細胞
型から識別できる単クローン性抗体と接触させる。接触
はそのような細胞に対し抗体が結合する条件下に行なわ
れる。接触後、験体中の細胞に対する抗体の結合の存在
または不在を測定する。
型から識別できる単クローン性抗体と接触させる。接触
はそのような細胞に対し抗体が結合する条件下に行なわ
れる。接触後、験体中の細胞に対する抗体の結合の存在
または不在を測定する。
この結合は験体中のＮ５ＣＬＣ細胞の存在または不在に
関連する。一般に、験体は単クローン性抗体の標識した
特異的結合パートナ−に接触させる。
関連する。一般に、験体は単クローン性抗体の標識した
特異的結合パートナ−に接触させる。
この標識は検出可能なシグナルを生ずることができる。
他の診断法には検出可能なシグナルを与える試薬で標識
した本発明の精製抗体または抗体フラグメントを患者に
投与することによる腫瘍の生体内限定（ｌｏｃａｌ １
ｚａｔｉｏｎ） が含まれる。限定は次いで外部シント
ゲラフ４−（ｅｘｔｅｒｎａｌ ｓｃｉｅｎｔｏｇｒａ
ｐｈｙ）、発光断層撮影法（ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｔｏｍ
ｏｇｒａｐｈｙ ）または放射性核走査（ｒａｄｉｏｎ
ｅｕｃｌｅａｒ ｓｃａｎｎｉｎｇ）を用いて検出され
る。この方法はまた患者の程度に関して癌患者の病期の
決定上よび治療に応答した変化をモニターする良好な方
法を与えることができる。
した本発明の精製抗体または抗体フラグメントを患者に
投与することによる腫瘍の生体内限定（ｌｏｃａｌ １
ｚａｔｉｏｎ） が含まれる。限定は次いで外部シント
ゲラフ４−（ｅｘｔｅｒｎａｌ ｓｃｉｅｎｔｏｇｒａ
ｐｈｙ）、発光断層撮影法（ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｔｏｍ
ｏｇｒａｐｈｙ ）または放射性核走査（ｒａｄｉｏｎ
ｅｕｃｌｅａｒ ｓｃａｎｎｉｎｇ）を用いて検出され
る。この方法はまた患者の程度に関して癌患者の病期の
決定上よび治療に応答した変化をモニターする良好な方
法を与えることができる。
本発明はまた、Ｌ２０抗体および類似の抗体が腫瘍細胞
表面において高濃度で発現されるＬ２０抗原と反応でき
るので治療上の応用を有する。従って抗体は、化学療法
薬、毒素、免疫学応答修飾剤および放射性同位元素を含
み、それらに制限されない抗腫瘍効果を有する種々の薬
剤の担体として使用することができる。
表面において高濃度で発現されるＬ２０抗原と反応でき
るので治療上の応用を有する。従って抗体は、化学療法
薬、毒素、免疫学応答修飾剤および放射性同位元素を含
み、それらに制限されない抗腫瘍効果を有する種々の薬
剤の担体として使用することができる。
さらに、Ｌ２０抗体は、抗体依存性細胞毒（ＡＤＣＣ）
を仲介できる、すなわちヒトリンパ球またはマクロファ
ージの存在下にＮ５ＣＬＣ細胞を殺すことができるか、
あるいはヒト補体の存在下に腫瘍細胞に対し細胞溶解性
になるように修飾することができる。そのような修飾は
、例えば「キメラ抗体」の生成のために最近開発された
技術により行なうことができる。従って、Ｌ２０抗体分
子の可変領域をコードする遺伝子を、適当な生物学的活
性（例えばヒト補体を活性化し、およびＡＤＣＣを仲介
する能力）を有する抗体のＦＣ領域をコードするヒト遺
伝子とともにスプライスする。マウスまたはヒト由来の
新規抗体はまた適当な生物学的機能を有するＬ２０抗原
に対して作らせることができる。
を仲介できる、すなわちヒトリンパ球またはマクロファ
ージの存在下にＮ５ＣＬＣ細胞を殺すことができるか、
あるいはヒト補体の存在下に腫瘍細胞に対し細胞溶解性
になるように修飾することができる。そのような修飾は
、例えば「キメラ抗体」の生成のために最近開発された
技術により行なうことができる。従って、Ｌ２０抗体分
子の可変領域をコードする遺伝子を、適当な生物学的活
性（例えばヒト補体を活性化し、およびＡＤＣＣを仲介
する能力）を有する抗体のＦＣ領域をコードするヒト遺
伝子とともにスプライスする。マウスまたはヒト由来の
新規抗体はまた適当な生物学的機能を有するＬ２０抗原
に対して作らせることができる。
（４）発明の説明
本発明は、このＬ２０と称され、ヒ）ＮＳＣＬＣ細胞、
並びに結腸および乳房の癌並びに小細胞肺癌を含む若干
の他のヒト癌からの細胞上の抗原に対する免疫特異性お
よび（または）免疫反応性である新規な単クローン性抗
体、そのような新規な単クローン性抗体の製造法、並び
に抗体を用いる一定の診断および治療法に関する。
並びに結腸および乳房の癌並びに小細胞肺癌を含む若干
の他のヒト癌からの細胞上の抗原に対する免疫特異性お
よび（または）免疫反応性である新規な単クローン性抗
体、そのような新規な単クローン性抗体の製造法、並び
に抗体を用いる一定の診断および治療法に関する。
本発明はさらに、ヒ）ＮＳＣＬＣ並びに乳房、結腸およ
び肺の一定の他のヒト癌の特性を有する新規な細胞表面
抗原、並びにそのような新規な抗原を用いる方法に関す
る。
び肺の一定の他のヒト癌の特性を有する新規な細胞表面
抗原、並びにそのような新規な抗原を用いる方法に関す
る。
（４，１） Ｎ５ＣＬＣに対する単クローン性抗体を製
造する方法 ヒトＮ５ＣＬＣおよび一定の他のヒト癌に対する単クロ
ーン性抗体はハイブリドーマ融合技術により、ヒト抗体
産生リンパ球のＥＢＶ ）ランスフエクションにより、
または細胞融合およびＥＢＶイモークリゼーション技術
を組合せた技術により調製することができる。
造する方法 ヒトＮ５ＣＬＣおよび一定の他のヒト癌に対する単クロ
ーン性抗体はハイブリドーマ融合技術により、ヒト抗体
産生リンパ球のＥＢＶ ）ランスフエクションにより、
または細胞融合およびＥＢＶイモークリゼーション技術
を組合せた技術により調製することができる。
（４，１，ｌ） 融合技術
本発明の１態様によれば、Ｎ５ＣＬＣに対する単クロー
ン性抗体はハイブリドーマ細胞融合技術の使用により調
製される。例えば、胸膜浸出液からのヒト肺癌細胞、外
植ヒ）ＮＳＣＬＣ腫瘍からの培養細胞、または正常胎児
肺からの細胞あるいはそのような細胞からの溶解物が免
疫原として使用される。１つの例示例において、Ｎ５Ｃ
ＬＣからの外植細胞、ヒト肺腺癌＃３０８２を免疫源と
、して用いた〔セクション（５，１）参照〕。細胞を、
例えばマウスに注入し、十分な時間後にマウスを剖検し
、体細胞抗体産生リンパ球を得る。抗体産生細胞を感作
動物のリンパ節、肺臓および末梢血液から誘導すること
ができる。肺細胞が好ましい。
ン性抗体はハイブリドーマ細胞融合技術の使用により調
製される。例えば、胸膜浸出液からのヒト肺癌細胞、外
植ヒ）ＮＳＣＬＣ腫瘍からの培養細胞、または正常胎児
肺からの細胞あるいはそのような細胞からの溶解物が免
疫原として使用される。１つの例示例において、Ｎ５Ｃ
ＬＣからの外植細胞、ヒト肺腺癌＃３０８２を免疫源と
、して用いた〔セクション（５，１）参照〕。細胞を、
例えばマウスに注入し、十分な時間後にマウスを剖検し
、体細胞抗体産生リンパ球を得る。抗体産生細胞を感作
動物のリンパ節、肺臓および末梢血液から誘導すること
ができる。肺細胞が好ましい。
マウスリンパ球は前記マウス骨髄腫と高率の安定な融合
を与える。ラット、ウサギおよびカエルの体細胞の使用
もまた可能である。肺細胞染色体をエンコードする所望
の免疫グロブリンを、肺細胞と骨髄腫細胞とを一般にポ
リエチレングリコールの存在下に融合させることにより
イモータル化する。若干の骨髄腫細胞系を、マウスから
誘導されたＮｓＩ−Ａｇ４／１、Ｘ６３−Ａｇ、８、Ｍ
ＰＣ１１−４５，６Ｔ Ｇ □１．７、Ｘ６３−Ａｇ、
６５３、Ｓｐ２／ Ｏ−Ａｇ １４ 、Ｆｏおよび
３１９４１５ＸＸ○。
を与える。ラット、ウサギおよびカエルの体細胞の使用
もまた可能である。肺細胞染色体をエンコードする所望
の免疫グロブリンを、肺細胞と骨髄腫細胞とを一般にポ
リエチレングリコールの存在下に融合させることにより
イモータル化する。若干の骨髄腫細胞系を、マウスから
誘導されたＮｓＩ−Ａｇ４／１、Ｘ６３−Ａｇ、８、Ｍ
ＰＣ１１−４５，６Ｔ Ｇ □１．７、Ｘ６３−Ａｇ、
６５３、Ｓｐ２／ Ｏ−Ａｇ １４ 、Ｆｏおよび
３１９４１５ＸＸ○。
Ｂｕｌ、ラットから誘導された２１０．ＲＣＹ３゜Ａｇ
ｌ、２．３、Ｕ−２２６ＡＲおよびＧＭｌ ５００ＧＴ
ｃ、ＡＬ２を含め、融合細胞ハイブリッドの生成に用い
ることができる〔ハンマーリング（ｆｌａｍｍｅｒｌｉ
ｎｇ ）ほか、１９８１、「単クローン性抗体およびＴ
細胞バイプリドーマ（ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−ｃｅｌｌ ｈｙｂｒｉｄｏｍ
ａｓ）Ｊ、リサーチ・モノグラフズ・イン・イムノロジ
ー（ＲｅｓｅａｒｃｈＭｏｎｏｇｒａｐｈｓ ｉｎ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ） 、Ｖｏｌ、 ３、ターフ（Ｊ
、 Ｌ、 Ｔｕｒｋ ）鳩；エル上フィール／ノース・
ホランド・バイオメディカル・プレス（Ｅｌｓｅｖｉｅ
ｒ ／Ｎｏｒｔｈ Ｈｏ１ｌａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃ
ａｌ Ｐｒｅｓｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。
ｌ、２．３、Ｕ−２２６ＡＲおよびＧＭｌ ５００ＧＴ
ｃ、ＡＬ２を含め、融合細胞ハイブリッドの生成に用い
ることができる〔ハンマーリング（ｆｌａｍｍｅｒｌｉ
ｎｇ ）ほか、１９８１、「単クローン性抗体およびＴ
細胞バイプリドーマ（ＭｏｎｏｃｌｏｎａｌＡｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｔ−ｃｅｌｌ ｈｙｂｒｉｄｏｍ
ａｓ）Ｊ、リサーチ・モノグラフズ・イン・イムノロジ
ー（ＲｅｓｅａｒｃｈＭｏｎｏｇｒａｐｈｓ ｉｎ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ） 、Ｖｏｌ、 ３、ターフ（Ｊ
、 Ｌ、 Ｔｕｒｋ ）鳩；エル上フィール／ノース・
ホランド・バイオメディカル・プレス（Ｅｌｓｅｖｉｅ
ｒ ／Ｎｏｒｔｈ Ｈｏ１ｌａｎｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃ
ａｌ Ｐｒｅｓｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。
１つの例示例において、ＮＳＩ細胞を用いた〔セクショ
ン（５，１）参照〕。融合ハイブリドーマを含む生じた
細胞を選択培地例えばＨＡＴ培地中で成長させ、生存細
胞をそのような培地中で限界稀釈条件を用いて成長させ
る。細胞を適当な容器中、例えばマイクロタイターウェ
ル中で成長させ、上澄みを所望の特異性を有する単クロ
ーン性抗体に対してスクリーンする。
ン（５，１）参照〕。融合ハイブリドーマを含む生じた
細胞を選択培地例えばＨＡＴ培地中で成長させ、生存細
胞をそのような培地中で限界稀釈条件を用いて成長させ
る。細胞を適当な容器中、例えばマイクロタイターウェ
ル中で成長させ、上澄みを所望の特異性を有する単クロ
ーン性抗体に対してスクリーンする。
他のタンパク質および他の汚染物を除去するために、単
クローン性抗体を分離および精製する種々の慣用法が存
在する。
クローン性抗体を分離および精製する種々の慣用法が存
在する。
（４，１，２）ＥＢＶ）ランスフォーメーション技術本
発明の他の態様によれば、Ｎ５ＣＬＣに対すル単りロー
ン性抗体はＥＢＶ ）ランスフォーメーション技術を用
いて調製される。例えば、末梢血液、腫瘍流出リンパ節
、骨髄吸引液、腫瘍またはＮ Ｓ Ｃ’Ｌ Ｃを有する
患者からの胸膜浸出液から得たリンパ球を、コウル（ｃ
ｏｌｅ） ほか、１９８４、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、
、 ４４ ： ２７５０により考案された方法によりＥ
ＢＶを用いてイモータル化する。コウル（ｃｏｌｅ）
ほかにより記載されたように、腫瘍抗原に特異的なり
リンパ球は肺癌患者中には希薄である。従って、関連抗
原に対する抗体を生ずるリンパ球を予備選択することに
より抗体を生ずるリンパ球の数を高めることが殊に重要
である。従って、ＥＢＶ）ランスフォーメーション技術
には２段階：（ｉ）所与抗原、すなわちセクション（４
，２）に記載されるＬ２０抗原、に対するレセプターを
有する細胞の濃縮、および（ｉｉ）ＥＢＶで感染するこ
とによるそのような細胞のイモ−クル化が含まれる。
発明の他の態様によれば、Ｎ５ＣＬＣに対すル単りロー
ン性抗体はＥＢＶ ）ランスフォーメーション技術を用
いて調製される。例えば、末梢血液、腫瘍流出リンパ節
、骨髄吸引液、腫瘍またはＮ Ｓ Ｃ’Ｌ Ｃを有する
患者からの胸膜浸出液から得たリンパ球を、コウル（ｃ
ｏｌｅ） ほか、１９８４、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、
、 ４４ ： ２７５０により考案された方法によりＥ
ＢＶを用いてイモータル化する。コウル（ｃｏｌｅ）
ほかにより記載されたように、腫瘍抗原に特異的なり
リンパ球は肺癌患者中には希薄である。従って、関連抗
原に対する抗体を生ずるリンパ球を予備選択することに
より抗体を生ずるリンパ球の数を高めることが殊に重要
である。従って、ＥＢＶ）ランスフォーメーション技術
には２段階：（ｉ）所与抗原、すなわちセクション（４
，２）に記載されるＬ２０抗原、に対するレセプターを
有する細胞の濃縮、および（ｉｉ）ＥＢＶで感染するこ
とによるそのような細胞のイモ−クル化が含まれる。
（４，１Ｊ）ＥＢＶハイブリドーマ技術本発明の他の代
替態様によれば、Ｎ５ＣＬＣに対する単クローン性抗体
はＥＢＶ）ランスフォーメーションと、コウル（ｃｏｌ
ｅ） ほか、１９８５、［単クローン性抗体および筋
原法（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ＾ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａ
ｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ） Ｊ 、アラ
ン−アール・リス社（Ａｌａｎ ＲｏＬｉｓｓ、 Ｉｎ
ｃ、） 、ｐｐ。
替態様によれば、Ｎ５ＣＬＣに対する単クローン性抗体
はＥＢＶ）ランスフォーメーションと、コウル（ｃｏｌ
ｅ） ほか、１９８５、［単クローン性抗体および筋
原法（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ＾ｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａ
ｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ ） Ｊ 、アラ
ン−アール・リス社（Ａｌａｎ ＲｏＬｉｓｓ、 Ｉｎ
ｃ、） 、ｐｐ。
７７〜９６により記載されたハイブリドーマ融合技術と
の組合せを用いて製造される。例えば、骨髄腫細胞系を
、予めＥＢＶによりトランスフオームしたＮ５ＣＬＣ患
者からの供与体リンパ球と融合させ、培養条件で成長お
よび発育できる細胞系として確立させる。生じたＥＢＶ
ハイブリドーマ融合細胞系を選択可能にするために、融
合パートナ−が優性の適当に選択可能な薬物標識例えば
ウアバインまたはネオマイシン耐性を、融合ハイブリド
ーマ細胞系を培養したときに親細胞が発育しないように
有することが必要である。適当な系はコウル（ｃｏｌｅ
） ほか、前掲、に記載されたチオグアニン耐性ＧＭ
−１５０，ウアバイン耐性リンパ芽球様細胞系、ＫＲ−
４である。生じたハイブリドーマは普通の方法によりク
ローンされる。
の組合せを用いて製造される。例えば、骨髄腫細胞系を
、予めＥＢＶによりトランスフオームしたＮ５ＣＬＣ患
者からの供与体リンパ球と融合させ、培養条件で成長お
よび発育できる細胞系として確立させる。生じたＥＢＶ
ハイブリドーマ融合細胞系を選択可能にするために、融
合パートナ−が優性の適当に選択可能な薬物標識例えば
ウアバインまたはネオマイシン耐性を、融合ハイブリド
ーマ細胞系を培養したときに親細胞が発育しないように
有することが必要である。適当な系はコウル（ｃｏｌｅ
） ほか、前掲、に記載されたチオグアニン耐性ＧＭ
−１５０，ウアバイン耐性リンパ芽球様細胞系、ＫＲ−
４である。生じたハイブリドーマは普通の方法によりク
ローンされる。
（４，１，４） 細胞繁殖および抗体生成所望の融合細
胞ハイブリッドまたはトランスフオーム細胞系を選択し
、個々の抗体産生細胞系中ヘクローンした後、各細胞系
を２つの常法のいずれかで繁殖させることができる。個
々の細胞系は試験管内例えば研究室培養容器中で繁殖さ
せることができ、高濃度の単−特異性単クローン性抗体
を含む培養基をデカント、濾過または遠心分離により回
収することができる。あるいは、単クローン性抗体の収
量は、体および骨髄腫細胞を初めの融合をおこなうため
に用いた型の細胞適合性動物中ヘハイブリドーマの試料
を注入することにより高めることができる。融合細胞ハ
イブリッドにより生成された特異釣車クローン性抗体を
分泌する腫瘍が注入動物中で発達する。動物の体液例え
ば腹水または血清が単クローン性抗体を高濃度で与える
。コウル（ｃｏｌｅ） ほか、前掲、により論議され
たように、ヒトハイブリドーマまたはＥＢＶハイブリド
ーマを用いるときに動物例えばマウス中へ注入された異
種移植の拒絶を避けることが必要である。免疫不全また
はヌードマウスを用いることができ、あるいはハイブリ
ドーマを初めに照射ヌードマウス中へ固体皮下腫瘍とし
て継代して試験管内で培養し、次いでブリスタン感作し
た照射ヌードマウス中へ腹腔内注射することができ、そ
れは多量の特異的ヒト単クローン性抗体を分泌する腹水
腫瘍を生ずる〔コウル（ｃｏｌｅ） ほか、前掲参照
〕。
胞ハイブリッドまたはトランスフオーム細胞系を選択し
、個々の抗体産生細胞系中ヘクローンした後、各細胞系
を２つの常法のいずれかで繁殖させることができる。個
々の細胞系は試験管内例えば研究室培養容器中で繁殖さ
せることができ、高濃度の単−特異性単クローン性抗体
を含む培養基をデカント、濾過または遠心分離により回
収することができる。あるいは、単クローン性抗体の収
量は、体および骨髄腫細胞を初めの融合をおこなうため
に用いた型の細胞適合性動物中ヘハイブリドーマの試料
を注入することにより高めることができる。融合細胞ハ
イブリッドにより生成された特異釣車クローン性抗体を
分泌する腫瘍が注入動物中で発達する。動物の体液例え
ば腹水または血清が単クローン性抗体を高濃度で与える
。コウル（ｃｏｌｅ） ほか、前掲、により論議され
たように、ヒトハイブリドーマまたはＥＢＶハイブリド
ーマを用いるときに動物例えばマウス中へ注入された異
種移植の拒絶を避けることが必要である。免疫不全また
はヌードマウスを用いることができ、あるいはハイブリ
ドーマを初めに照射ヌードマウス中へ固体皮下腫瘍とし
て継代して試験管内で培養し、次いでブリスタン感作し
た照射ヌードマウス中へ腹腔内注射することができ、そ
れは多量の特異的ヒト単クローン性抗体を分泌する腹水
腫瘍を生ずる〔コウル（ｃｏｌｅ） ほか、前掲参照
〕。
（４，２） 単クローン性抗体
本発明の抗体は、Ｌ２０抗原と称され、ヒトＮ５ＣＬＣ
細胞および一定の他のヒト癌からの細胞の特性を有する
新規な細胞表面糖タンパク質抗原に関する〔セクション
（４，２，１’）参照〕。糖りンバク質はポリアクリル
アミドゲル電気泳動で免疫沈降にかけたときに約１１０
．０００ドルトンのの分子量を有する〔セクシ目ン（５
，３）参照）。
細胞および一定の他のヒト癌からの細胞の特性を有する
新規な細胞表面糖タンパク質抗原に関する〔セクション
（４，２，１’）参照〕。糖りンバク質はポリアクリル
アミドゲル電気泳動で免疫沈降にかけたときに約１１０
．０００ドルトンのの分子量を有する〔セクシ目ン（５
，３）参照）。
Ｌ２０抗原をグリカナーゼで消化するとそれがＮ連結オ
リゴ糖鎖を含むことが示された。
リゴ糖鎖を含むことが示された。
本発明の例示例としてＬ２０抗体はセクション（５，１
）に記載したＬ２０マウスハイブリドーマにより生成さ
れる。Ｌ２０抗体はＩｇＧ １アイソタイプであり〔
セクション（５，２，２）参照〕、約３ＸＩＯ” の結
合性を有する。それは正常細胞例えば主要器官中の線維
芽細胞、内皮細胞または上皮細胞で検出される程度には
結合しない。「検出可能に結合しない」という譜は免疫
組織学により単に非常に弱い染色が検出されるかまたは
染色が全く検出されないことを意味する。
）に記載したＬ２０マウスハイブリドーマにより生成さ
れる。Ｌ２０抗体はＩｇＧ １アイソタイプであり〔
セクション（５，２，２）参照〕、約３ＸＩＯ” の結
合性を有する。それは正常細胞例えば主要器官中の線維
芽細胞、内皮細胞または上皮細胞で検出される程度には
結合しない。「検出可能に結合しない」という譜は免疫
組織学により単に非常に弱い染色が検出されるかまたは
染色が全く検出されないことを意味する。
本発明の範囲内にはまた、上記単クローン性抗体の有用
な結合フラグメント例えばＦａｂ％Ｐ（ａｂ ’）ｓ、
Ｆｖフラグメントなどが含まれる。抗体フラグメントは
常法により得られる。例えば、有用な結合フラグメント
はパパインまたはペプシンを用いる抗体のペプチダーゼ
消化により調製することができる。
な結合フラグメント例えばＦａｂ％Ｐ（ａｂ ’）ｓ、
Ｆｖフラグメントなどが含まれる。抗体フラグメントは
常法により得られる。例えば、有用な結合フラグメント
はパパインまたはペプシンを用いる抗体のペプチダーゼ
消化により調製することができる。
異なるアイソタイプ、異なるアフィニティーおよび新規
な生物学的機能、例えば補体またはエフエタター細胞例
えばリンパ球またはマクロファージの存在下に腫瘍細胞
を殺す能力、の抗体を含め、類似の抗体もまた本発明の
範囲内である。本発明の新規な抗体の上記特定例はそれ
ぞれの抗原上の特定の決定基部位に結合し、マウス源が
らのＩｇＧ１サブクラスである抗体を指向するけれども
、これは限定であることを意味しない。上記抗体および
、マウス源、ヒトを含む他の哺乳動物源または他の源、
あるいはそれらの組合せであっても、上記抗体と機能的
に等しい抗体、並びに他のアイソタイプの抗体は本発明
の範囲内に含まれる。「機械的に等しい」という語は抗
体が上記決定基部位に結合でき、またそのような部位に
対し本発明の特定抗体と競合できることを意味する。す
なわち、そのような抗体は、上記決定基部位を有する細
胞または細胞フラグメントを含む験体と組合せたときに
そのような決定基部位に結合し、本発明の抗体が上記部
位に結合するのをブロックする。さらに、本発明の抗原
が１つ以上の決定基部位を有することができるので、本
発明には前記単クローン性抗体により規定される決定基
部位以外の決定基部位を規定し、公知の逐次免疫検定に
より固定できる単クローン性抗体が含まれる。
な生物学的機能、例えば補体またはエフエタター細胞例
えばリンパ球またはマクロファージの存在下に腫瘍細胞
を殺す能力、の抗体を含め、類似の抗体もまた本発明の
範囲内である。本発明の新規な抗体の上記特定例はそれ
ぞれの抗原上の特定の決定基部位に結合し、マウス源が
らのＩｇＧ１サブクラスである抗体を指向するけれども
、これは限定であることを意味しない。上記抗体および
、マウス源、ヒトを含む他の哺乳動物源または他の源、
あるいはそれらの組合せであっても、上記抗体と機能的
に等しい抗体、並びに他のアイソタイプの抗体は本発明
の範囲内に含まれる。「機械的に等しい」という語は抗
体が上記決定基部位に結合でき、またそのような部位に
対し本発明の特定抗体と競合できることを意味する。す
なわち、そのような抗体は、上記決定基部位を有する細
胞または細胞フラグメントを含む験体と組合せたときに
そのような決定基部位に結合し、本発明の抗体が上記部
位に結合するのをブロックする。さらに、本発明の抗原
が１つ以上の決定基部位を有することができるので、本
発明には前記単クローン性抗体により規定される決定基
部位以外の決定基部位を規定し、公知の逐次免疫検定に
より固定できる単クローン性抗体が含まれる。
本発明にはまた抗原結合部位に応答して調製された抗体
またはＬ２Ｇ抗体のイディオタイプが含まれ、これはそ
のような抗イデイオタイプ抗体を診断のための腫瘍抗原
に対する免疫応答の分析、および治療または予防目的の
ための免疫応答の誘発に使用できるからである〔ネポム
（Ｎｅｐｏｍ）ほか、１９８４ 、Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ
’ｌ、＾ｃａｄ、 Ｓｃｉ、、 ８１．２６６４）。
またはＬ２Ｇ抗体のイディオタイプが含まれ、これはそ
のような抗イデイオタイプ抗体を診断のための腫瘍抗原
に対する免疫応答の分析、および治療または予防目的の
ための免疫応答の誘発に使用できるからである〔ネポム
（Ｎｅｐｏｍ）ほか、１９８４ 、Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ
’ｌ、＾ｃａｄ、 Ｓｃｉ、、 ８１．２６６４）。
（４，２，１＞ 単クローン性抗体により認識される
Ｌ２０抗原 本発明の単クローン性抗体により認識される抗原にはＮ
５ＣＬＣ細胞、並びに乳癌、結腸癌および小細胞肺癌を
含む一定の他の癌の特性を有する新規な細胞表面機タン
パク質抗原が含まれる。該抗原は約１１０．０００ドル
トンの分子量を有する。
Ｌ２０抗原 本発明の単クローン性抗体により認識される抗原にはＮ
５ＣＬＣ細胞、並びに乳癌、結腸癌および小細胞肺癌を
含む一定の他の癌の特性を有する新規な細胞表面機タン
パク質抗原が含まれる。該抗原は約１１０．０００ドル
トンの分子量を有する。
新規な糖タンパク質抗原のアミノ末端アミノ酸配列は次
のとおりである： １ ５ １０ １５ ２ＯＬ−
１１−Ｖ−０−Ｖ−Ｐ−トＸ−Ｐ−Ｖ−Ｖ−Ａ−Ｌ−Ｖ
−Ｇ−Ｔ−０−Ａ−Ｘ−Ｌ（式中、Ｘはまだ同定されて
いないアミノ酸を示し、残りの文字はアミノ酸に対する
普通の一文字記号を表わす。） この配列と現在のタンパク質データベースに蓄えられた
もの（’ＰＩＲレリース６．０．１９８５年１１月）と
を比較して他の公知配列と何ら有意な配列相同性が示さ
れない。
のとおりである： １ ５ １０ １５ ２ＯＬ−
１１−Ｖ−０−Ｖ−Ｐ−トＸ−Ｐ−Ｖ−Ｖ−Ａ−Ｌ−Ｖ
−Ｇ−Ｔ−０−Ａ−Ｘ−Ｌ（式中、Ｘはまだ同定されて
いないアミノ酸を示し、残りの文字はアミノ酸に対する
普通の一文字記号を表わす。） この配列と現在のタンパク質データベースに蓄えられた
もの（’ＰＩＲレリース６．０．１９８５年１１月）と
を比較して他の公知配列と何ら有意な配列相同性が示さ
れない。
（４，３） 単クローン性抗体およびＬ２Ｇ抗原の使用
（４，３，１）診断適用 本発明の単クローン性抗体はヒ）ＮＳＣＬＣおよび他の
ヒト腫瘍中の個別の抗原の検出におけるプローブとして
使用できる。本発明の１つの方法には組織をＬ２０抗原
の特性を有する糖タンパク質抗原の発現または発現の存
在しないことについて試験することにより肺組織および
他めヒト組織中の悪性状態の存在を決定することが含ま
れる。
（４，３，１）診断適用 本発明の単クローン性抗体はヒ）ＮＳＣＬＣおよび他の
ヒト腫瘍中の個別の抗原の検出におけるプローブとして
使用できる。本発明の１つの方法には組織をＬ２０抗原
の特性を有する糖タンパク質抗原の発現または発現の存
在しないことについて試験することにより肺組織および
他めヒト組織中の悪性状態の存在を決定することが含ま
れる。
「特性を有する」という語は抗原がＬ２０抗原を認識す
る抗体と反応性であることを意味する。この抗原の発現
または発現の存在しないことは標準組織病理学技術で入
手できない臨床に利用できる情報を与えることができる
。
る抗体と反応性であることを意味する。この抗原の発現
または発現の存在しないことは標準組織病理学技術で入
手できない臨床に利用できる情報を与えることができる
。
本発明の単クローン性抗体は、例えば組織学および細胞
学験体中の非小細胞肺癌細胞の検出に使用できる。例え
ば、セクション（５゜４）に記載される免疫ベルオキシ
ダ、−ゼ染色技術を用いたとき肺の腺癌、類表皮癌およ
び小細胞癌の切除組織験体が強い陽性染色を示した。正
常な肺臓、＊＠、乳房、結腸、腎臓、肝臓、脳、心臓、
皮膚、甲状腺、精巣、膣および正常リンパ球は陰性であ
った。
学験体中の非小細胞肺癌細胞の検出に使用できる。例え
ば、セクション（５゜４）に記載される免疫ベルオキシ
ダ、−ゼ染色技術を用いたとき肺の腺癌、類表皮癌およ
び小細胞癌の切除組織験体が強い陽性染色を示した。正
常な肺臓、＊＠、乳房、結腸、腎臓、肝臓、脳、心臓、
皮膚、甲状腺、精巣、膣および正常リンパ球は陰性であ
った。
本発明の単クローン性抗体の他の重要な試験管内診断適
用はＮ５ＣＬＣ以外の癌の評価である。
用はＮ５ＣＬＣ以外の癌の評価である。
抗体を乳房、結腸の癌、および小細胞肺癌中のエピトー
プの検出に用いた。これらの組織の正常試料は決定基を
発現しなかった。従って、単クローン性抗体は腫瘍に関
連するこれらの癌中の抗原決定基の検出に有用である。
プの検出に用いた。これらの組織の正常試料は決定基を
発現しなかった。従って、単クローン性抗体は腫瘍に関
連するこれらの癌中の抗原決定基の検出に有用である。
従って、単クローン性抗体は乳癌および結腸並びに小細
胞肺癌に対する有用な診断試薬であることができる。
胞肺癌に対する有用な診断試薬であることができる。
あるいは、免疫螢光技術を用いてヒト組織験体を本発明
の単クローン性抗体で試験することができる。典型的な
プロトコルにおいて、凍結した非固定化組織生検のクリ
オスタット切片または切除腫瘍試料あるいは細胞学塗抹
標本を含むスライドを風乾し、単クローン性抗体ととも
に増湿室中で室温でインキユベートする。細胞学塗抹標
本には脱落細胞験体が含まれる。「脱落」という語は分
離された細胞または組織の表面をかき落すかまたは洗浄
することにより得られた細胞の集団が含まれることを意
味し、それらの細胞は個々にあるいは鱗屑または薄片と
して除去される。脱落細胞験体は切除細胞、例えば生検
で得られた組織、と区別すべきである。肺例えば痰試料
から、口咽頭、口腔を含む気管支、胃腸管管からの脱落
細胞標本、頚管塗抹標本など中の悪性状態の検出に有用
性を見出すことができる。
の単クローン性抗体で試験することができる。典型的な
プロトコルにおいて、凍結した非固定化組織生検のクリ
オスタット切片または切除腫瘍試料あるいは細胞学塗抹
標本を含むスライドを風乾し、単クローン性抗体ととも
に増湿室中で室温でインキユベートする。細胞学塗抹標
本には脱落細胞験体が含まれる。「脱落」という語は分
離された細胞または組織の表面をかき落すかまたは洗浄
することにより得られた細胞の集団が含まれることを意
味し、それらの細胞は個々にあるいは鱗屑または薄片と
して除去される。脱落細胞験体は切除細胞、例えば生検
で得られた組織、と区別すべきである。肺例えば痰試料
から、口咽頭、口腔を含む気管支、胃腸管管からの脱落
細胞標本、頚管塗抹標本など中の悪性状態の検出に有用
性を見出すことができる。
乾燥後、スライドを抗体の調製物で単クローン性抗体、
用いた単クローン性抗体がマウス胛リンパ球とマウス骨
髄腫系との融合から誘導されれば通常若干の型の抗マウ
ス免疫グロブリン、が接触するように層にする。この抗
マウス免疫グロブリンは公知技術を用いて、特定波長で
螢光を発するローダミンまたはイソチオシアン酸フルオ
レセインのような化合物と接合させる。次いで試料内の
染色パターンおよび強度を螢光顕微鏡法により測定し、
場合により写真記録する。
用いた単クローン性抗体がマウス胛リンパ球とマウス骨
髄腫系との融合から誘導されれば通常若干の型の抗マウ
ス免疫グロブリン、が接触するように層にする。この抗
マウス免疫グロブリンは公知技術を用いて、特定波長で
螢光を発するローダミンまたはイソチオシアン酸フルオ
レセインのような化合物と接合させる。次いで試料内の
染色パターンおよび強度を螢光顕微鏡法により測定し、
場合により写真記録する。
上記記載は主に本発明の抗体の免疫螢光法における使用
に向けられている。しかし、本発明の抗体は抗原−抗体
反応を含む多くの検定に使用できる。検定は均質または
不均質であることができる。
に向けられている。しかし、本発明の抗体は抗原−抗体
反応を含む多くの検定に使用できる。検定は均質または
不均質であることができる。
均質検定（ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ ａｓｓａｙ）にお
いて験体は溶解し、清澄化して破片を除いた組織である
ことができる。免疫学反応は通常特定抗体、標識アナラ
イ） （ａｎａｌｙｔｅ）、および問題の試料を含む。
いて験体は溶解し、清澄化して破片を除いた組織である
ことができる。免疫学反応は通常特定抗体、標識アナラ
イ） （ａｎａｌｙｔｅ）、および問題の試料を含む。
標識から生ずるシグナルは標識アナライトに対し抗体が
結合すると直接または間接的に修飾される。免疫反応お
よびその程度の検出の両方が均質溶液中で行なわれる。
結合すると直接または間接的に修飾される。免疫反応お
よびその程度の検出の両方が均質溶液中で行なわれる。
使用できる免疫化学標識には遊離基、螢光染料、酵素、
バクテリオファージ、補酵素などが含まれる。
バクテリオファージ、補酵素などが含まれる。
不均質検定法において、試薬は通常験体、特異的抗体お
よび検出可能シグナルを生ずる手段である。単クローン
性抗体は通常固体支持体または固体相上に被覆される。
よび検出可能シグナルを生ずる手段である。単クローン
性抗体は通常固体支持体または固体相上に被覆される。
次いで液相中の験体を固体相中の抗体に接触させる。次
いで固体相支持体を液相から分離し、固体相または液相
を、そのようなシグナルを生ずる手段に用いた検出可能
シグナルについて試験する。シグナルは験体中のアナラ
イトの存在に関連する。検出できるシグナルを生ずる手
段には放射性標識、螢光物質、酵素などの使用が含まれ
る。不均質免疫検定の例は放射免疫検定法、免疫螢光法
、酵素結合抗体免疫検定法などである。
いで固体相支持体を液相から分離し、固体相または液相
を、そのようなシグナルを生ずる手段に用いた検出可能
シグナルについて試験する。シグナルは験体中のアナラ
イトの存在に関連する。検出できるシグナルを生ずる手
段には放射性標識、螢光物質、酵素などの使用が含まれ
る。不均質免疫検定の例は放射免疫検定法、免疫螢光法
、酵素結合抗体免疫検定法などである。
上記免疫検定技術のより詳細な論議にはマギオ（Ｅｉｄ
ｗａｒｄ Ｔ、 Ｍａｇｇｉｏ）による［酵素免疫検定
（Ｅｎｚｙｍｅ−１ｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ） Ｊ、１
９８０、ＣＲＣプＬ／ス社（ｃＲＣＰｒｅｓｓ、 Ｉ
ｎＣ，、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ。
ｗａｒｄ Ｔ、 Ｍａｇｇｉｏ）による［酵素免疫検定
（Ｅｎｚｙｍｅ−１ｍｍｕｎｏａｓｓａｙ ） Ｊ、１
９８０、ＣＲＣプＬ／ス社（ｃＲＣＰｒｅｓｓ、 Ｉ
ｎＣ，、Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ。
Ｆｌｏｒｉｄａ ）が参照される。例えば米国特許第３
．６９０．８３４号；第３．７９１．９３２；第３，８
１７．８３７号；第３．８５０．５７８号；第３．８５
３．９８７号；第３．８６７．５１７号：第３．９０１
．６５４号；第３．９３５．０７４号；第３．９８４．
５３３号；第３．９９６．３４５号および第４．０９８
．８７６号もまた参照され、それらの記載は網羅する意
図ではない。
．６９０．８３４号；第３．７９１．９３２；第３，８
１７．８３７号；第３．８５０．５７８号；第３．８５
３．９８７号；第３．８６７．５１７号：第３．９０１
．６５４号；第３．９３５．０７４号；第３．９８４．
５３３号；第３．９９６．３４５号および第４．０９８
．８７６号もまた参照され、それらの記載は網羅する意
図ではない。
本発明の抗体はまた、生体内診断適用に用いることがで
きる。例えば、抗体または抗体から調製されたフラグメ
ント例えばＦａｂおよびＰ（ａｂ’）、フラグメント、
を用いてＮ５ＣＬＣを有するヒト患者中の転移沈着を含
む腫瘍を、ラルシン（Ｌａｒｓｏｎ ）ほか、１９８３
、ジャーナル・オン・二ニークリア・メデイシン（Ｊ、
Ｎｕｃｌ、 Ｍｅｄ、 ） 、２４ ： １２３および
ラルシン（Ｌａｒｓｏｎ） ほか、１９８３、ジャー
ナル・オン・クリニカル・インペステイゲーシａ ７
（Ｊ、ｃｌｉｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、） 、？ ２ ： ２
１０１中に悪性黒色腫について記載されたと類似の方法
で検出することができる。精製抗体またはそのフラグメ
ントは検出可能シグナルを与える試薬、例えば１３１！
のような放射性同位元素で標識し、適当な担体中で患者
に、例えば静脈内に投与する。腫瘍結合抗体の限定は外
部シントグラフィー、発光断層撮影または放射性核走査
により例えばガンマカメラを用いて検出される。
きる。例えば、抗体または抗体から調製されたフラグメ
ント例えばＦａｂおよびＰ（ａｂ’）、フラグメント、
を用いてＮ５ＣＬＣを有するヒト患者中の転移沈着を含
む腫瘍を、ラルシン（Ｌａｒｓｏｎ ）ほか、１９８３
、ジャーナル・オン・二ニークリア・メデイシン（Ｊ、
Ｎｕｃｌ、 Ｍｅｄ、 ） 、２４ ： １２３および
ラルシン（Ｌａｒｓｏｎ） ほか、１９８３、ジャー
ナル・オン・クリニカル・インペステイゲーシａ ７
（Ｊ、ｃｌｉｎ、Ｉｎｖｅｓｔ、） 、？ ２ ： ２
１０１中に悪性黒色腫について記載されたと類似の方法
で検出することができる。精製抗体またはそのフラグメ
ントは検出可能シグナルを与える試薬、例えば１３１！
のような放射性同位元素で標識し、適当な担体中で患者
に、例えば静脈内に投与する。腫瘍結合抗体の限定は外
部シントグラフィー、発光断層撮影または放射性核走査
により例えばガンマカメラを用いて検出される。
（４，３，２） 治療適用
本発明の抗体はまた治療に用いることができる。
単クローン性抗体は広域スペクトルの薬剤または細胞毒
薬とともに使用できる。例えば抗体は毒素に結合させて
抗毒素を形成でき〔ヤンセン（Ｊａｎｓｅｎ） ほか
、１９８２、イムノロジカル・レビｘ −（Ｉａ＋５ｕ
ｎｏｌ、 Ｒｅｖ、）、６ユ：１８５〕、あるいは放射
性物質例えば１１１ｇ、 １ｕｌｌなど〔オーダー（Ｏ
ｒｄｅｒ）、１９８４、コンプル、セ／’、 （ｃｏ
ｍｐｒ。
薬とともに使用できる。例えば抗体は毒素に結合させて
抗毒素を形成でき〔ヤンセン（Ｊａｎｓｅｎ） ほか
、１９８２、イムノロジカル・レビｘ −（Ｉａ＋５ｕ
ｎｏｌ、 Ｒｅｖ、）、６ユ：１８５〕、あるいは放射
性物質例えば１１１ｇ、 １ｕｌｌなど〔オーダー（Ｏ
ｒｄｅｒ）、１９８４、コンプル、セ／’、 （ｃｏ
ｍｐｒ。
Ｔｈｅｒ、 ） 、ユ１：９；う７にシン（Ｌａｒｓｏ
ｎ） ほか、１９８３、ジャーナル・オプ・クリニカ
ル・インベステイゲーシーン（Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｉｎ
ｖｅｓｔ、） 、ユニ：２１０１カラスキロ（ｃａｒｒ
ａｓｑｕ ｉ Ｉ ｔｏ） ほか、１９８４、カンサ
ー・トリートメント・レポート（ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅ
ａｔｍｅｎｔ Ｒｅｐｏｒｔｓ） 、６８ ： ３１
？ ）または薬物（ｏ−５ｙド（Ｒｏｗｌａｎｄ）ほ
か、１９８５、カンサー・イムノロジー・アンド・イム
ノセラピー（ｃａｎｃｅｒ Ｉｍａ＋ｕｎｏ１．Ｉｓｍ
ｕｎｏｔｈｅｒ、）、１９、ｌ）に結合させて放射性薬
物または医薬を形成できる。接合した抗体は患者に投与
して抗体部分の結合力を基にして腫瘍に対し供給された
化学療法剤の細胞毒作用により高い腫瘍破壊効果を達成
することができる。
ｎ） ほか、１９８３、ジャーナル・オプ・クリニカ
ル・インベステイゲーシーン（Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｉｎ
ｖｅｓｔ、） 、ユニ：２１０１カラスキロ（ｃａｒｒ
ａｓｑｕ ｉ Ｉ ｔｏ） ほか、１９８４、カンサ
ー・トリートメント・レポート（ｃａｎｃｅｒ Ｔｒｅ
ａｔｍｅｎｔ Ｒｅｐｏｒｔｓ） 、６８ ： ３１
？ ）または薬物（ｏ−５ｙド（Ｒｏｗｌａｎｄ）ほ
か、１９８５、カンサー・イムノロジー・アンド・イム
ノセラピー（ｃａｎｃｅｒ Ｉｍａ＋ｕｎｏ１．Ｉｓｍ
ｕｎｏｔｈｅｒ、）、１９、ｌ）に結合させて放射性薬
物または医薬を形成できる。接合した抗体は患者に投与
して抗体部分の結合力を基にして腫瘍に対し供給された
化学療法剤の細胞毒作用により高い腫瘍破壊効果を達成
することができる。
マウス抗原結合ドメインをヒト一定領域ドメインととも
に含む本発明の抗体のいわゆる「キメラ抗体」分子を調
製することができ〔モリシン（Ｍｏｒｒ＋ｓｏｎ ）ほ
か、１９８４ 、Ｐｒｏｃ、 ｒａｔ’ １＾ｃａｄ。
に含む本発明の抗体のいわゆる「キメラ抗体」分子を調
製することができ〔モリシン（Ｍｏｒｒ＋ｓｏｎ ）ほ
か、１９８４ 、Ｐｒｏｃ、 ｒａｔ’ １＾ｃａｄ。
Ｓｃｉ、ＵＳＡ、１ユニ６８５１；タケダ（Ｔａｋｅｄ
ａ） ホか、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ、 ３１４ ：
４５２］ 、この方法は所望のエフェクター機能例えば
ヒト補体を活性化し、＾ＤＣＣを仲介する能力を有する
新規抗体分子の構築に使用することができる〔ノイバー
ガー（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ）ほか、ｌ ９ ｇ ４ 、
Ｎａｔｕｅｒ。
ａ） ホか、１９８５、Ｎａｔｕｒｅ、 ３１４ ：
４５２］ 、この方法は所望のエフェクター機能例えば
ヒト補体を活性化し、＾ＤＣＣを仲介する能力を有する
新規抗体分子の構築に使用することができる〔ノイバー
ガー（Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ）ほか、ｌ ９ ｇ ４ 、
Ｎａｔｕｅｒ。
３１２：６０４） 。
本発明の単クローン性抗体の他の治療使用はＬ２０抗体
を免疫原として用いて抗イデイオタイプ抗体をａ＠する
ことである〔例えば、ネポム（Ｎａｐｏ＊）ほか、１９
８４ 、Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｔ＾ｃａｄ、 Ｓｃｉ。
を免疫原として用いて抗イデイオタイプ抗体をａ＠する
ことである〔例えば、ネポム（Ｎａｐｏ＊）ほか、１９
８４ 、Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔｔ＾ｃａｄ、 Ｓｃｉ。
ｔｌｓＡ、 ８１ ： ２８６４ ：ジー（Ｌｅｅ）ほ
か、１９８５、Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ１＾ｃａｄ、 Ｓｃ
ｉ、、 ８２ ： ６２８６参照〕。
か、１９８５、Ｐｒｏｃ、 Ｎａｔ１＾ｃａｄ、 Ｓｃ
ｉ、、 ８２ ： ６２８６参照〕。
本発明の魅力的観点はこの抗体がＮ−３ＣＬＣまたは他
の腫瘍に対する他の抗体、例えば米国特許出願第６６７
．５２１号（１９８４年１１月２日提出）、出願第６８
４，７５９号（１９８４年１２月２１日提出）および出
願第７３８．６１２号（１９８５年５月２８日提出）中
に開示されたもの、と組合せることがで舎る。組合せは
上記型の非小１ｍ１ｌｌ肺癌、すなわち大細胞未分化肺
癌、腺癌および類表皮癌の検出に有効である。
の腫瘍に対する他の抗体、例えば米国特許出願第６６７
．５２１号（１９８４年１１月２日提出）、出願第６８
４，７５９号（１９８４年１２月２１日提出）および出
願第７３８．６１２号（１９８５年５月２８日提出）中
に開示されたもの、と組合せることがで舎る。組合せは
上記型の非小１ｍ１ｌｌ肺癌、すなわち大細胞未分化肺
癌、腺癌および類表皮癌の検出に有効である。
本発明の単クローン性抗体はまた他の癌例えば乳癌、結
腸癌および小細胞肺癌に関連する抗原上の決定部位を規
定する〔噌りシ欝ン（５）、表１１照〕。
腸癌および小細胞肺癌に関連する抗原上の決定部位を規
定する〔噌りシ欝ン（５）、表１１照〕。
従って、この抗体は治療方法およびそのような瘍を指向
する治療用生成物における利用を見出すことができる。
する治療用生成物における利用を見出すことができる。
抗原Ｌ２０として示される本発明の新規抗原はまた治療
適用に用いることができる。該抗原は腫瘍からＭ製する
かまたは組換えＤＮＡ技術により生成させることができ
る〔ブラウン（Ｂｒｏｗｎ）ほか、同時係属米国特許出
願第８２７．３１３号（１９８６年２月７日提出）、参
照によりここに加入される〕。Ｌ２０抗原をコードする
遺伝子は初めにＬ２０抗原のｍＲＮＡを濃縮する方法に
よりクローンすることができる。そのような方法の１つ
により、ポリソーム（ｍＲＮＡリポソームおよび新生ポ
リペプチド鎖）を新生鎮上のＬ２０抗原決定基を認識す
る抗体でイムノアフィニティークロマトグラフィーによ
り精製することができる。
適用に用いることができる。該抗原は腫瘍からＭ製する
かまたは組換えＤＮＡ技術により生成させることができ
る〔ブラウン（Ｂｒｏｗｎ）ほか、同時係属米国特許出
願第８２７．３１３号（１９８６年２月７日提出）、参
照によりここに加入される〕。Ｌ２０抗原をコードする
遺伝子は初めにＬ２０抗原のｍＲＮＡを濃縮する方法に
よりクローンすることができる。そのような方法の１つ
により、ポリソーム（ｍＲＮＡリポソームおよび新生ポ
リペプチド鎖）を新生鎮上のＬ２０抗原決定基を認識す
る抗体でイムノアフィニティークロマトグラフィーによ
り精製することができる。
ｍＲＮＡは、例えばＬ２０抗体による免疫沈降により分
離し、ｃＤＮＡを適当な発現ベクター中でクローンする
。あるいはＬ２０抗体またはＬ２０抗原に対する抗血清
を、発現ベクターを用いるｃＤＮＡライブラリーのスク
リーニングに使用することができる。精製またはクロー
ンＬ２０抗原は単独で免疫原として、または適当な免疫
アジュバントとともに投与することができる。あるいは
抗原をコードする遺伝子をウィルス、例えばワタシニア
ウイルスに対する遺伝子中へ挿入し、免疫原として使用
する組換え体ＤＮＡ生成物を生成させることができる〔
ブラウン（Ｂｒｏｗｎ）ほか、同時係属米国特許出願第
８２７．３１３号（１９８６年２月７日提出）〕。
離し、ｃＤＮＡを適当な発現ベクター中でクローンする
。あるいはＬ２０抗体またはＬ２０抗原に対する抗血清
を、発現ベクターを用いるｃＤＮＡライブラリーのスク
リーニングに使用することができる。精製またはクロー
ンＬ２０抗原は単独で免疫原として、または適当な免疫
アジュバントとともに投与することができる。あるいは
抗原をコードする遺伝子をウィルス、例えばワタシニア
ウイルスに対する遺伝子中へ挿入し、免疫原として使用
する組換え体ＤＮＡ生成物を生成させることができる〔
ブラウン（Ｂｒｏｗｎ）ほか、同時係属米国特許出願第
８２７．３１３号（１９８６年２月７日提出）〕。
（４，４）診断キット
本発明にはまた、上記方法を行なうための診断キットが
包含される。１態様において、診断キットは（ａ）前に
一層特定的に規定した単クローン性抗体および（ｂ）単
クローン性抗体に対する特異的結合パートナ−と検出可
能シグナルを生ずることができる標識との接合体を含む
。試薬はまた補助薬剤例えば緩衝剤およびタンパク質安
定化剤例えば多糖などを含むことができる。診断キット
はさらに必要な場合に、バックグラウンドの干渉を低下
させる薬剤を含むシグナル生成系の他の成分、対照試薬
、試験実施装置などを含むことができる。他の態様にお
いて、診断キットは本発明の単クローン性抗体と検出可
能シグナルを生成できる標識との接合体を含む。上記補
助剤もまた存在することができる。
包含される。１態様において、診断キットは（ａ）前に
一層特定的に規定した単クローン性抗体および（ｂ）単
クローン性抗体に対する特異的結合パートナ−と検出可
能シグナルを生ずることができる標識との接合体を含む
。試薬はまた補助薬剤例えば緩衝剤およびタンパク質安
定化剤例えば多糖などを含むことができる。診断キット
はさらに必要な場合に、バックグラウンドの干渉を低下
させる薬剤を含むシグナル生成系の他の成分、対照試薬
、試験実施装置などを含むことができる。他の態様にお
いて、診断キットは本発明の単クローン性抗体と検出可
能シグナルを生成できる標識との接合体を含む。上記補
助剤もまた存在することができる。
（５）実施例
本発明はさらに次の非限定例示実施例により示される。
（５，１） 単クローン性抗体の調製単クローン性抗
体はイエ−（Ｙｅｈ）ほか、１９７９、インターナショ
ナル・ジャ・−ナル・オン・カンサー（Ｉｎｔ、Ｊ、
Ｃａｎｃｅｒ） 、２９ ： ２９９により前に記載さ
れたハイブリドーマ融合技術を用いて製造した。３刃金
Ｂａ１ｂ／ｃマウスを、３０８２と称されるヒト肺腺癌
からの外植培養細胞を免疫原として用いて免疫処置した
。マウスに約１０７細胞の４同腹腔内注入を与えた。最
後の免疫処置の３日後、その膵臓をとり出し、培養基中
に懸濁し、ＮＳＩマウス骨髄腫細胞〔コーラ−ほか（に
ｏｈｌｅｒ ａｎｄ １４ｉ１ｓｔｅｉｎ）、前掲〕と
融合させた。混合物を接種し、単回融合細胞（クローン
）に由来する低密度培養を形成させた。
体はイエ−（Ｙｅｈ）ほか、１９７９、インターナショ
ナル・ジャ・−ナル・オン・カンサー（Ｉｎｔ、Ｊ、
Ｃａｎｃｅｒ） 、２９ ： ２９９により前に記載さ
れたハイブリドーマ融合技術を用いて製造した。３刃金
Ｂａ１ｂ／ｃマウスを、３０８２と称されるヒト肺腺癌
からの外植培養細胞を免疫原として用いて免疫処置した
。マウスに約１０７細胞の４同腹腔内注入を与えた。最
後の免疫処置の３日後、その膵臓をとり出し、培養基中
に懸濁し、ＮＳＩマウス骨髄腫細胞〔コーラ−ほか（に
ｏｈｌｅｒ ａｎｄ １４ｉ１ｓｔｅｉｎ）、前掲〕と
融合させた。混合物を接種し、単回融合細胞（クローン
）に由来する低密度培養を形成させた。
ハイブリッド細胞からの上澄みを、ＥＬＩＳＡ検定およ
びオートラジオグラフィー間接１２５■標識プロテイン
Ａ検定〔ブラウン（Ｂｒｏｗｎ）ほか、１９７９、ジャ
ーナル・オン・イムノロジカル・メソーズ（Ｊ、 （ｍ
ｍｕｎｏ１８Ｍｅｔｈ、 ） 、３ユ１ｏｔ）の両方
を用いて肺癌細胞系上の直接結合活性についてスクリー
ンした。免疫処置に用いた腫瘍からの細胞膜の抽出物は
コルシャ（ｃｏｌｃｈｅｒ）ほか、１９８１、Ｃａｎｃ
ｅｒＲｅｓ、、４２ ：１４５１ ：イｘ −（Ｙｅｈ
）ほか、前掲、から変形した手順を用いて調製した。組
織をＰＢＳで洗浄し、インタクト腫瘍からの細胞をステ
ンレス鋼スクリーンに通すことにより懸濁させた。この
後、１ｍＭフェニルメタンスルホニルフルオリド〔カル
ビオケム・ベーリング社（ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｅ
ｈｒｉｎｇ Ｃａｒｐ、、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）
製〕を含む１ ｍＭ −ＮａＨＣＯ３を加え、次いで物
質を氷上でドウンス（Ｄ′ｏｕｎｃｅ）ホモジナイザー
の日ペストル５０ストロークで均質化した。１５分間２
７、０００Ｘｇで遠心分離した後、上澄みを除き、ペレ
ットをＰＢＳ中に再び懸濁し、１分間超音波処理し、−
７０℃で貯蔵した。
びオートラジオグラフィー間接１２５■標識プロテイン
Ａ検定〔ブラウン（Ｂｒｏｗｎ）ほか、１９７９、ジャ
ーナル・オン・イムノロジカル・メソーズ（Ｊ、 （ｍ
ｍｕｎｏ１８Ｍｅｔｈ、 ） 、３ユ１ｏｔ）の両方
を用いて肺癌細胞系上の直接結合活性についてスクリー
ンした。免疫処置に用いた腫瘍からの細胞膜の抽出物は
コルシャ（ｃｏｌｃｈｅｒ）ほか、１９８１、Ｃａｎｃ
ｅｒＲｅｓ、、４２ ：１４５１ ：イｘ −（Ｙｅｈ
）ほか、前掲、から変形した手順を用いて調製した。組
織をＰＢＳで洗浄し、インタクト腫瘍からの細胞をステ
ンレス鋼スクリーンに通すことにより懸濁させた。この
後、１ｍＭフェニルメタンスルホニルフルオリド〔カル
ビオケム・ベーリング社（ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ−Ｂｅ
ｈｒｉｎｇ Ｃａｒｐ、、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）
製〕を含む１ ｍＭ −ＮａＨＣＯ３を加え、次いで物
質を氷上でドウンス（Ｄ′ｏｕｎｃｅ）ホモジナイザー
の日ペストル５０ストロークで均質化した。１５分間２
７、０００Ｘｇで遠心分離した後、上澄みを除き、ペレ
ットをＰＢＳ中に再び懸濁し、１分間超音波処理し、−
７０℃で貯蔵した。
細胞膜抽出物に結合する抗体を生じたハイブリドーマを
クローンし、試験管内で展開させ、さらに抗体特異性に
ついて試験した。ヒト肺癌に対する顕性特異性の抗体を
生じたハイブリドーマを再びクローンし、展開させ、ブ
リスタン感作した３刃金ＢＡＬＢ／ｃマウス中へ注入し
、そこでそれらを腹水癌として成長させた。
クローンし、試験管内で展開させ、さらに抗体特異性に
ついて試験した。ヒト肺癌に対する顕性特異性の抗体を
生じたハイブリドーマを再びクローンし、展開させ、ブ
リスタン感作した３刃金ＢＡＬＢ／ｃマウス中へ注入し
、そこでそれらを腹水癌として成長させた。
この手順後、ハイブリドーマ細胞系Ｌ２０を得、クロー
ンし、マウス中へ注入して腹水癌として発育させた。腹
水中へ分泌された抗体をプロティンＡセファＯ−ス（Ｓ
ｅｐｈａｒｏｓｅ） （ｚイ（Ｂｙ） ほか、１９７
８、イムノケミストリー（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ１５：４２９Ｅ上で、またはセファクリル（Ｓｅｐ
ｈａｃｒｙｌ） Ｓ −３００中のゲル濾過により精製
した。精製抗体を後の確認に用いた。
ンし、マウス中へ注入して腹水癌として発育させた。腹
水中へ分泌された抗体をプロティンＡセファＯ−ス（Ｓ
ｅｐｈａｒｏｓｅ） （ｚイ（Ｂｙ） ほか、１９７
８、イムノケミストリー（Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔ
ｒｙ１５：４２９Ｅ上で、またはセファクリル（Ｓｅｐ
ｈａｃｒｙｌ） Ｓ −３００中のゲル濾過により精製
した。精製抗体を後の確認に用いた。
（５，２）Ｌ２０単クローン性抗体の＠ Ｋｎ（５，２
，１） 培養細胞に対するシ２０の検出および結合抗原
の細胞レベル下局在を、非イオン界面活性剤で浸透性化
する前または後に細胞に結合する抗体を測定することに
より決定した。インタクト培養細胞の細胞表面に結合す
る抗体は、１２５Ｉ標識抗体による直接結合検定〔ブラ
ウン（Ｂｒｏｗｎ）ほか、１９８１ 、Ｐｒｏｃ、 Ｎ
ａｔ’ｌ Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、 ｔｌｓＡ、 ７８ ：
５３９〕により、または螢光活性化細胞ソーター（ＦＡ
Ｃ３）ｎを用いる間接螢光法により同定した。細胞内位
置に結合する抗体は、１′ｌ標識抗体を、バラホルムア
ルデヒドで固定した後の細胞に直接結合させ、次に非イ
オン界面活性剤ＮＰ−４０で浸透化することにより測定
した。
，１） 培養細胞に対するシ２０の検出および結合抗原
の細胞レベル下局在を、非イオン界面活性剤で浸透性化
する前または後に細胞に結合する抗体を測定することに
より決定した。インタクト培養細胞の細胞表面に結合す
る抗体は、１２５Ｉ標識抗体による直接結合検定〔ブラ
ウン（Ｂｒｏｗｎ）ほか、１９８１ 、Ｐｒｏｃ、 Ｎ
ａｔ’ｌ Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、 ｔｌｓＡ、 ７８ ：
５３９〕により、または螢光活性化細胞ソーター（ＦＡ
Ｃ３）ｎを用いる間接螢光法により同定した。細胞内位
置に結合する抗体は、１′ｌ標識抗体を、バラホルムア
ルデヒドで固定した後の細胞に直接結合させ、次に非イ
オン界面活性剤ＮＰ−４０で浸透化することにより測定
した。
〉、 放射性標識抗体を用いて行なう結合検定〔ブラウ
ン（Ｂｒｏｗｎ）ほか、前掲〕のために、培養細胞（１
０’）を氷上で３０分間１２５Ｉ標識抗体１１０６ｃｐ
とともに結合緩衝液１００μβ中でインキュベートし
た。懸濁液を０．２ｍｉ！フタル酸ジノニル：フタル酸
ジブチル（１： １．Ｖ／Ｖ）上に層化し、遠心分離し
た。ペレットおよび水相を１１５１について計数した。
ン（Ｂｒｏｗｎ）ほか、前掲〕のために、培養細胞（１
０’）を氷上で３０分間１２５Ｉ標識抗体１１０６ｃｐ
とともに結合緩衝液１００μβ中でインキュベートし
た。懸濁液を０．２ｍｉ！フタル酸ジノニル：フタル酸
ジブチル（１： １．Ｖ／Ｖ）上に層化し、遠心分離し
た。ペレットおよび水相を１１５１について計数した。
非特異的結合を測定するために、平行インキュベーショ
ンを拮抗剤として非標識抗体を用いて行なっまた〔ブラ
ウン（Ｂｒｏｗｎ）はか〕。
ンを拮抗剤として非標識抗体を用いて行なっまた〔ブラ
ウン（Ｂｒｏｗｎ）はか〕。
表 ■
（：ａｊ！ｕ −１肺腺癌 ４５．４０
０Ｈ３０８５肺腺癌 ５０．１００Ｈ２
９８１肺腺癌 ６４．１００Ｈ２９８４
肺腺癌 １１９，３００ＭＣＦ ７乳癌７
８．８００ ３０１７黒色腫 ２．２００正常Ｔ
細胞 ２００ジユルカト（Ｊ
ｕｒｋａｔ） Ｔ白血病 ２００ダウジ（Ｄａ
ｕｄｉ） Ｂリンパ腫 ２００（５，２，２
） Ｌ ２０抗体のアイソタイプの決定Ｌ２０ハイブ
リドーマ細胞系により生成された免疫グロブリンのクラ
スを決定するために次の技術を利用した： （ａ）オフテルロ二−免疫拡散法 個々のハイブリドーマ細胞の上澄みの一定部分を２５％
寒天平板の中心ウェル中へ入れた。
０Ｈ３０８５肺腺癌 ５０．１００Ｈ２
９８１肺腺癌 ６４．１００Ｈ２９８４
肺腺癌 １１９，３００ＭＣＦ ７乳癌７
８．８００ ３０１７黒色腫 ２．２００正常Ｔ
細胞 ２００ジユルカト（Ｊ
ｕｒｋａｔ） Ｔ白血病 ２００ダウジ（Ｄａ
ｕｄｉ） Ｂリンパ腫 ２００（５，２，２
） Ｌ ２０抗体のアイソタイプの決定Ｌ２０ハイブ
リドーマ細胞系により生成された免疫グロブリンのクラ
スを決定するために次の技術を利用した： （ａ）オフテルロ二−免疫拡散法 個々のハイブリドーマ細胞の上澄みの一定部分を２５％
寒天平板の中心ウェル中へ入れた。
単一特異性ウサギ抗マウスＩｇアイソタイプ抗体〔サザ
ン・バイオテクノロジー（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ、 Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、 ＡＬ）
製〕を外側ウェル中に入れ、平板を室温で２時間および
４℃で一夜インキユベートした。
ン・バイオテクノロジー（ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｉｏｔｅ
ｃｈｎｏｌｏｇｙ、 Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、 ＡＬ）
製〕を外側ウェル中に入れ、平板を室温で２時間および
４℃で一夜インキユベートした。
ら）ＥＬＩＳＡアイソタイプ型化
ダイナチク・イムオｏ ン（Ｄｙｎａｔｅｃｈ Ｉｍｍ
ｕｏｌｏｎ）’９６ウエルプレートをそれぞれＰＢＳ中
１μｇ／ｍｌ！濃度で５０μｍ／ウェルの血清で覆い、
４０℃で一夜漬って放置した。プレートをＰＢＳ／ツイ
ーン２０，０．０５％で洗浄し、培地１００μｌ／ウエ
ルで１時間室温でブロックした。プレートを洗浄した後
、Ｌ２０ハイブリドーマからの上澄みを加え、室温で１
時間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後、ウシ血
清アルブミン（ＢＳＡ）プレートをペルオキシダーゼ〔
ザイムド（Ｚｙｍｅｄ）製〕に結合した単一特異性ウサ
ギ抗マウスＩｇアイソタイプ抗体、とともに２時間３７
℃でインキュベートした。洗浄後プレートを０．１Ｍク
エン酸塩緩衝液ｐＨ４，５中の１ｍｇ／ｍｊ２のオルト
フェニレンジアミンおよび０．０３％Ｈ２Ｏ２とともに
インキュベートした。
ｕｏｌｏｎ）’９６ウエルプレートをそれぞれＰＢＳ中
１μｇ／ｍｌ！濃度で５０μｍ／ウェルの血清で覆い、
４０℃で一夜漬って放置した。プレートをＰＢＳ／ツイ
ーン２０，０．０５％で洗浄し、培地１００μｌ／ウエ
ルで１時間室温でブロックした。プレートを洗浄した後
、Ｌ２０ハイブリドーマからの上澄みを加え、室温で１
時間インキュベートした。ＰＢＳで洗浄した後、ウシ血
清アルブミン（ＢＳＡ）プレートをペルオキシダーゼ〔
ザイムド（Ｚｙｍｅｄ）製〕に結合した単一特異性ウサ
ギ抗マウスＩｇアイソタイプ抗体、とともに２時間３７
℃でインキュベートした。洗浄後プレートを０．１Ｍク
エン酸塩緩衝液ｐＨ４，５中の１ｍｇ／ｍｊ２のオルト
フェニレンジアミンおよび０．０３％Ｈ２Ｏ２とともに
インキュベートした。
６３０ｎｍにおける光学濃度をダイナチク（Ｄｙｎａｔ
ｅｃ） Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａプレートリーダーで測定し
た。
ｅｃ） Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａプレートリーダーで測定し
た。
Ｌ２０単クローン性抗体はＩｇＧ１アイソタイプに属す
る。
る。
（５，３） Ｌ ２０抗体により認識される抗原タン
パク質抗原を同定するために、肺癌細胞を表面放射性ヨ
ウ素化またはＳＳ −メチオニンで代謝的に標識した。
パク質抗原を同定するために、肺癌細胞を表面放射性ヨ
ウ素化またはＳＳ −メチオニンで代謝的に標識した。
抗原を細胞溶解物から単クローン性抗体とのインキュベ
ーション、ヤギ抗マウスＩｇＧ の添加、およびスタヒ
ロコツカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ ａｕｒｅｕｓ）に対する吸着により分離した。免疫
沈降物を洗浄し、１０〜２０％アミドゲル上で調製用ド
デシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）にかけた。電気泳動後、ゲルをク
ーマシーブリリアントブルー（０，５〜１０重量％酢酸
および３０％インプロパツル）で染色し、酢酸〈５％、
■：■）およびメタノール（１７％、Ｖ：Ｖ）の溶液中
で脱色した。染色したＬ２０抗原バンドをレザーブレー
ドで切り取り直ちにバンカピラー（’Ｈｕｎｋａｐｉｌ
ｌｅｒ）ほか、１９８３、メソーズ・イン・エンジモロ
ジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｂｎｚｙｍｏｌ、）、９
ユニ２２７〜２３６により記載された方法に従いＥＣＬ
Ｉ−０４０エレクトロエリュ−９−／コンセントレータ
ー（ｃ，Ｂ、Ｓ、サイエンティフィック社（ｃ、Ｂ 、
Ｓ 、 ５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ１５ａｎ Ｄｉｅ
ｇｏ。
ーション、ヤギ抗マウスＩｇＧ の添加、およびスタヒ
ロコツカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕ
ｓ ａｕｒｅｕｓ）に対する吸着により分離した。免疫
沈降物を洗浄し、１０〜２０％アミドゲル上で調製用ド
デシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動
（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）にかけた。電気泳動後、ゲルをク
ーマシーブリリアントブルー（０，５〜１０重量％酢酸
および３０％インプロパツル）で染色し、酢酸〈５％、
■：■）およびメタノール（１７％、Ｖ：Ｖ）の溶液中
で脱色した。染色したＬ２０抗原バンドをレザーブレー
ドで切り取り直ちにバンカピラー（’Ｈｕｎｋａｐｉｌ
ｌｅｒ）ほか、１９８３、メソーズ・イン・エンジモロ
ジー（Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｂｎｚｙｍｏｌ、）、９
ユニ２２７〜２３６により記載された方法に従いＥＣＬ
Ｉ−０４０エレクトロエリュ−９−／コンセントレータ
ー（ｃ，Ｂ、Ｓ、サイエンティフィック社（ｃ、Ｂ 、
Ｓ 、 ５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ１５ａｎ Ｄｉｅ
ｇｏ。
ＣＡ）製〕で電気溶離にかけた。
自動エドマン分解（Ｅｄｍａｎ ｄｅｇｒａｄａｔｉｏ
ｎ）をＬ２０抗原約２３ｐｍｏｌ （同定したＬ−１の
収量を基にして）で、気相シーケンサ−〔モデル４７０
Ａ、アプライド・バイオシステムズ社（Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、 Ｉｎｃ、、 Ｆｏｓｔｅｒ
Ｃ１ｔｙ、 ＣＡ）製〕中で行なった。フェニルチオ
ヒダントインアミノ酸誘導体をモデル１２０Δオンライ
ンＨＰＬＣ１置（アプライド・バイオシステムズ社（Ａ
ｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙ−ｓｔｅｍｓ、 Ｉｎｃ、）
製〕をＰＴＨ−Ｃ１８カラム〔２，ｌＸ２２０ｍｍ、ア
プライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ、）製〕および溶離のための酢
酸ナトリウム／テトラヒドロ７ラン／アセトニトリルグ
ラジエントを用いて逆相高速液体クロマトグラフィー（
ＨＰＬＣ）により分析した。
ｎ）をＬ２０抗原約２３ｐｍｏｌ （同定したＬ−１の
収量を基にして）で、気相シーケンサ−〔モデル４７０
Ａ、アプライド・バイオシステムズ社（Ａｐｐｌｉｅｄ
Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、 Ｉｎｃ、、 Ｆｏｓｔｅｒ
Ｃ１ｔｙ、 ＣＡ）製〕中で行なった。フェニルチオ
ヒダントインアミノ酸誘導体をモデル１２０Δオンライ
ンＨＰＬＣ１置（アプライド・バイオシステムズ社（Ａ
ｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙ−ｓｔｅｍｓ、 Ｉｎｃ、）
製〕をＰＴＨ−Ｃ１８カラム〔２，ｌＸ２２０ｍｍ、ア
プライド・バイオシステムズ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏ
ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｉｎｃ、）製〕および溶離のための酢
酸ナトリウム／テトラヒドロ７ラン／アセトニトリルグ
ラジエントを用いて逆相高速液体クロマトグラフィー（
ＨＰＬＣ）により分析した。
アミノ酸配列は次のとおりである：
（式中、Ｘは同定されなかったアミノ酸を表わす。）こ
の配列は現在のタンパク質データベース（ＦＩＲレリー
ス６．０．１９８５年１１月）と比較して他の公知の配
列との有意な配列同性を示さなかった。
の配列は現在のタンパク質データベース（ＦＩＲレリー
ス６．０．１９８５年１１月）と比較して他の公知の配
列との有意な配列同性を示さなかった。
Ｌ２０抗体により認識される抗原は約１１０．０００ド
ルトンの分子■の糖タンパク質抗原である。
ルトンの分子■の糖タンパク質抗原である。
（５，４）試験管内免疫組織学適用
ガリグース（Ｇａｒｒｉｇｕｅｓ）ほか、１９ ｇ ２
、Ｉｎｔ。
、Ｉｎｔ。
Ｊ、 Ｃａｎｃｅｒ、 ２９ ： ５１１により変形さ
れたスターンバーガー（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ ）
％ １９７９ Ｓ［ｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ジ
ョン・ワイジー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅ
ｙ ＆ ５ｏｎｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ） 、ｐｐ
：１０４〜１６９の未標識抗体技術を凍結切片上の免疫
組織学研究に用いた。この試験に対する標的組織は外科
で人手し、液体窒素中で予冷したインペンクン中でとり
出し、４時間内で凍結した。次、いて組織を液体窒素中
または一７０℃で使用まで貯蔵した。ウサギ抗マウスＩ
ｇＧ Ｃスターンバーガー・メイヤー・イムノケミカ
ルズ社（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ−Ｍｅｙｅｒ Ｉｍｍ
ｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ＩｎｃｌＪａｒｅｔｔｓｖ
ｉｌｌｅ、ＭＯ）製〕を１１５０の稀釈度で用いた。特
に精製したＰＡＰ２ｍｇ／＋ｎｌを含むマウスペルオキ
シダーゼ−抗ペルオキシダーゼ複合体（ＰＡＰ、スター
ンバーガー・メイヤー・イムノケミカルズ社（Ｓｔｅｒ
ｎｂｅｒｇｅｒ−Ｍｅｙｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉ
ｃａｌｓ、Ｉｎｃ、）製〕は１／８０の稀釈度で用いた
。凍結切片を調製し、乾燥し、アセトンで処理し、乾燥
した〔ガリグース（Ｇａｒｒｉｇｕｅｓ）ほか、前掲〕
。組織学評価に用いる切片はヘマトキシリンで染色した
。非特異的バツクグラウンドを低下させるために切片を
１１５に稀釈した正常ヒト血清で前インキュベートした
〔ガリグーｘ （Ｇａｒｒｉｇｕｅｓ）ほか、前掲〕。
れたスターンバーガー（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ ）
％ １９７９ Ｓ［ｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、ジ
ョン・ワイジー・アンド・サンズ（Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅ
ｙ ＆ ５ｏｎｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ） 、ｐｐ
：１０４〜１６９の未標識抗体技術を凍結切片上の免疫
組織学研究に用いた。この試験に対する標的組織は外科
で人手し、液体窒素中で予冷したインペンクン中でとり
出し、４時間内で凍結した。次、いて組織を液体窒素中
または一７０℃で使用まで貯蔵した。ウサギ抗マウスＩ
ｇＧ Ｃスターンバーガー・メイヤー・イムノケミカ
ルズ社（Ｓｔｅｒｎｂｅｒｇｅｒ−Ｍｅｙｅｒ Ｉｍｍ
ｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ、ＩｎｃｌＪａｒｅｔｔｓｖ
ｉｌｌｅ、ＭＯ）製〕を１１５０の稀釈度で用いた。特
に精製したＰＡＰ２ｍｇ／＋ｎｌを含むマウスペルオキ
シダーゼ−抗ペルオキシダーゼ複合体（ＰＡＰ、スター
ンバーガー・メイヤー・イムノケミカルズ社（Ｓｔｅｒ
ｎｂｅｒｇｅｒ−Ｍｅｙｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉ
ｃａｌｓ、Ｉｎｃ、）製〕は１／８０の稀釈度で用いた
。凍結切片を調製し、乾燥し、アセトンで処理し、乾燥
した〔ガリグース（Ｇａｒｒｉｇｕｅｓ）ほか、前掲〕
。組織学評価に用いる切片はヘマトキシリンで染色した
。非特異的バツクグラウンドを低下させるために切片を
１１５に稀釈した正常ヒト血清で前インキュベートした
〔ガリグーｘ （Ｇａｒｒｉｇｕｅｓ）ほか、前掲〕。
マウス抗体、ヤギ抗マウス［ｇＧ 、およびマウスＰＡ
Ｐを１０％正常ヒト血清および３％ウサギ血清の溶液中
に稀釈した。
Ｐを１０％正常ヒト血清および３％ウサギ血清の溶液中
に稀釈した。
染色手順は一連の切片を特定または対照抗体で２．５時
間処理し、１１５０に稀釈したラビット抗マウスＩｇＧ
で３０分間インキュベートし、１／８０に稀釈したマ
ウスＰＡＰ複合体に３０分間さらすことで構成した。抗
体による各処理後、スライドをＰＢＳ中で２回洗浄した
。免疫組織化学反応は新に調製した０、 ０５ Ｍ ）
リス緩衝液、ｐＨ７，６中の０．５％３．３′−ジア
ミノベンジジン四塩酸塩〔ジグ７ （Ｓｉｇｍａ、 Ｓ
ｔ、 Ｌｏｕｓ、 ＭＯ） 製〕および０．０１％Ｈ
２Ｏ２で展開した。さらに蒸留水中の１％０Ｓ０４溶液
に２０分間暴露して染色を強めた。切片を水で洗浄し、
アルコール中で脱水し、キシレン中で清浄にし、スライ
ド上に装備した。
間処理し、１１５０に稀釈したラビット抗マウスＩｇＧ
で３０分間インキュベートし、１／８０に稀釈したマ
ウスＰＡＰ複合体に３０分間さらすことで構成した。抗
体による各処理後、スライドをＰＢＳ中で２回洗浄した
。免疫組織化学反応は新に調製した０、 ０５ Ｍ ）
リス緩衝液、ｐＨ７，６中の０．５％３．３′−ジア
ミノベンジジン四塩酸塩〔ジグ７ （Ｓｉｇｍａ、 Ｓ
ｔ、 Ｌｏｕｓ、 ＭＯ） 製〕および０．０１％Ｈ
２Ｏ２で展開した。さらに蒸留水中の１％０Ｓ０４溶液
に２０分間暴露して染色を強めた。切片を水で洗浄し、
アルコール中で脱水し、キシレン中で清浄にし、スライ
ド上に装備した。
スライドをそれぞさコード下に評価し、コード試料を独
立の研究者に調べさせた。典型的なスライドを微分干渉
コントラストオプテイクス（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ
１ｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｏｐ
ｔｉｃｓ）〔ツアイス・ノマルスキ（Ｚｅｉｓｓ−Ｎｏ
ｍａｒｓｋｉ） ！りの使用により写真に撮った。抗
体染色程度はＯ（反応性なし）、＋（若干の弱陽性細胞
）、＋＋（少くとも１／３の細胞が陽性）、＋＋＋（大
部分の細胞が陽性） 、＋＋＋＋ （はぼすべての細胞
が強拍性）として評価した。十と０との染色の差は十と
＋＋との間の染色よりカットが明らかでなかったので、
＋＋またはそれより大きいと等級づけられた染色を「陽
性」とみなした。新生物および間質細胞はともに腫瘍試
料中に認められた。間質細胞は全く染色されないかまた
は腫瘍細胞よりも非常に弱く染色されたので記録された
染色は、腫瘍細胞の染色である。
立の研究者に調べさせた。典型的なスライドを微分干渉
コントラストオプテイクス（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ
１ｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ ｃｏｎｔｒａｓｔ ｏｐ
ｔｉｃｓ）〔ツアイス・ノマルスキ（Ｚｅｉｓｓ−Ｎｏ
ｍａｒｓｋｉ） ！りの使用により写真に撮った。抗
体染色程度はＯ（反応性なし）、＋（若干の弱陽性細胞
）、＋＋（少くとも１／３の細胞が陽性）、＋＋＋（大
部分の細胞が陽性） 、＋＋＋＋ （はぼすべての細胞
が強拍性）として評価した。十と０との染色の差は十と
＋＋との間の染色よりカットが明らかでなかったので、
＋＋またはそれより大きいと等級づけられた染色を「陽
性」とみなした。新生物および間質細胞はともに腫瘍試
料中に認められた。間質細胞は全く染色されないかまた
は腫瘍細胞よりも非常に弱く染色されたので記録された
染色は、腫瘍細胞の染色である。
表 ■
Ｌ２０単クローン性抗体心よる腫瘍および正常組肺癌：
腺 癌 １ ８／２ ０
類表皮 ３／３ 気管支 ０／１ 小細胞 ４／４ 肺癌： 細胞株 ３／３ 乳 癌 ４／７結腸
癌 ５／８ 黒色腫 ５／８ 腎臓癌 １／１ 脂肪肉腫 ０／１ 正常肺 試験３試料中１試料が弱染色正常膵臓
陰 性 正常乳房 陰 性 正常結腸 陰 性 正常腎臓 陰 性 正常肝臓 陰 性 正常脳 陰 性 正常心臓 陰 性 正常皮膚 陰 性 正常甲状腺 陰 性 正常精巣 陰 性 正常膣 陰 性 正常リンパ球ペレット 陰 性 試験した全験体は外科で得た組織の凍結切片であった。
類表皮 ３／３ 気管支 ０／１ 小細胞 ４／４ 肺癌： 細胞株 ３／３ 乳 癌 ４／７結腸
癌 ５／８ 黒色腫 ５／８ 腎臓癌 １／１ 脂肪肉腫 ０／１ 正常肺 試験３試料中１試料が弱染色正常膵臓
陰 性 正常乳房 陰 性 正常結腸 陰 性 正常腎臓 陰 性 正常肝臓 陰 性 正常脳 陰 性 正常心臓 陰 性 正常皮膚 陰 性 正常甲状腺 陰 性 正常精巣 陰 性 正常膣 陰 性 正常リンパ球ペレット 陰 性 試験した全験体は外科で得た組織の凍結切片であった。
免疫組織学方法の詳細な説明はテキストを参照される。
２＋の染色（少くとも１／３の細胞が陽性を示す）を陽
性とみなした。
性とみなした。
上に示した本発明の多くの変更および変形を発明の精神
および範囲から逸脱することなく行なうことができるこ
とは明らかである。記載した特定態様は単に例として与
えられ、本発明は単に特許請求の範囲の項により限定さ
れる。
および範囲から逸脱することなく行なうことができるこ
とは明らかである。記載した特定態様は単に例として与
えられ、本発明は単に特許請求の範囲の項により限定さ
れる。
細胞系Ｌ２０はアメリカン・タイプ・ティシュ−・カル
チャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ ＴｙｐｅＴ
ｉｓｓｕｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、
Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ）に寄託され、
寄託番号、ＡＴＣＣＮｏ、ＨＢ８９１３を指定された。
チャー・コレクション（Ａｍｅｒｉｃａｎ ＴｙｐｅＴ
ｉｓｓｕｅ Ｃｕ１ｔｕｒｅ Ｃｏ１１ｅｃｔｉｏｎ、
Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、Ｍａｒｙｌａｎｄ）に寄託され、
寄託番号、ＡＴＣＣＮｏ、ＨＢ８９１３を指定された。
ここに記載され、特許請求の範囲に記載された発明は、
寄託態様が本発明の１観点の単なる実証例として意図さ
れているので、寄託細胞系によって範囲を限定されるべ
きではなく、機能的に等しい単クローン性抗体を生ずる
等価の細胞系はいずれも本発明の範囲内である。事実、
ここに示され、記載されたものに加えて本発明の種々の
変形が前記説明から当業者に明らかになるであろう。そ
のような変形は特許請求の範囲内に属するものとする。
寄託態様が本発明の１観点の単なる実証例として意図さ
れているので、寄託細胞系によって範囲を限定されるべ
きではなく、機能的に等しい単クローン性抗体を生ずる
等価の細胞系はいずれも本発明の範囲内である。事実、
ここに示され、記載されたものに加えて本発明の種々の
変形が前記説明から当業者に明らかになるであろう。そ
のような変形は特許請求の範囲内に属するものとする。
衆国
ト
案国
ウス
ワシントン州９８１０５ シアトル ノーサーバー
ドライヴ ３９２５
ドライヴ ３９２５
Claims (28)
- （１）ＡＴＣＣＮｏ．ＨＢ８９１３の同定特性を有する
連続細胞系により生成される抗体であって、ヒト非小細
胞肺癌細胞の細胞表面糖タンパク質抗原上の決定基部位
に結合する単クローン性抗体並びに前記抗体の機能等価
物、結合フラグメントおよび免疫複合体。 - （２）検定可能なシグナルを生成できる標識に接合した
、特許請求の範囲第（１）項記載の単クローン性抗体。 - （３）標識が螢光体または発色団である、特許請求の範
囲第（２）項記載の単クローン性抗体。 - （４）ＡＴＣＣＮｏ．ＨＢ９８１３の同定特性を有する
連続細胞系により生成され、ヒト非小細胞肺癌細胞の表
面糖タンパク質抗原であってポリアクリルアミドゲル電
気泳動により測定して約 １１０，０００ドルトンの分子量により確認され、次の
アミノ末端アミノ酸配列： 【アミノ酸配列があります】 （式中、Ｘは未同定アミノ酸を表わす） を有する抗原上の細胞決定部位に結合する単クローン性
抗体、並びに前記抗体の機能等価物、結合フラグメント
および免疫複合体。 - （５）骨髄腫細胞と、ヒト非小細胞肺癌細胞の細胞表面
糖タンパク質抗原であってポリアクリルアミドゲル電気
泳動により測定して約 １１０，０００ドルトンの分子量を有し、次のアミノ末
端アミノ酸配列： 【アミノ酸配列があります】 （式中、Ｘは未同定アミノ酸を表わす） を有する抗原上の決定基に結合する抗体を生成できる細
胞との結合により形成されるハイブリドーマ細胞系によ
り生成される単クローン性抗体、並びに前記抗体の機能
等価物、結合フラグメントおよび免疫複合体。 - （６）クラスＩｇＧに属する、特許請求の範囲第（５）
項記載の単クローン性抗体。 - （７）サブクラスＩｇＧ１に属する、特許請求の範囲第
（５）項記載の単クローン性抗体。 - （８）ハイブリドーマ細胞系Ｌ２０、ＡＴＣＣＮｏ．Ｈ
Ｂ８９１３により生成され、ヒト非小細胞肺癌細胞の細
胞表面糖タンパク質抗原であってポリアクリルアミドゲ
ル電気泳動により測定して約１１０，０００ドルトンの
分子量を有し、次のアミノ末端アミノ酸配列： 【アミノ酸配列があります】 （式中、Ｘは未同定アミノ酸を表わす） を有する抗原の決定基に結合する単クローン性抗体、並
びに前記抗体の機能等価物、結合フラグメントおよび免
疫複合体。 - （９）クラスＩｇＧに属する、特許請求の範囲第（８）
項記載の単クローン性抗体。 - （１０）フザクラスＩｇＧ１に属する、特許請求の範囲
第（８）項記載の単クローン性抗体。 - （１１）特許請求の範囲第（１）項、第（４）項、第（
５）項または第（８）項記載の単クローン性抗体をヒト
組織試料と接触させ、前記抗体と前記試料中の抗原的に
相当する癌細胞またはその抗原決定基との相互作用を検
出することを含む非小細胞肺癌を検出する方法。 - （１２）ヒト組織が肺細胞である、特許請求の範囲第（
１１）項記載の方法。 - （１３）相互作用が免疫組織学的染色により検出される
、特許請求の範囲第（１１）項記載の方法。 - （１４）特許請求の範囲第（１）項、第（４）項、第（
５）項または第（８）項記載の単クローン性抗体をヒト
組織試料と反応させ、前記抗体と前記試料中の抗原的に
相当する癌細胞またはその抗原決定基との相互作用を検
出することを含む、小細胞肺癌を検出する方法。 - （１５）特許請求の範囲第（１）項、第（４）項、第（
５）項または第（８）項記載の単クローン性抗体をヒト
組織または体液試料と接触させ、前記抗体と前記試料中
の抗原的に相当する癌細胞またはその抗原決定基との相
互作用を検出することを含む、乳癌を検出する方法。 - （１６）特許請求の範囲第（１）項、第（４）項、第（
５）項または第（８）項記載の単クローン性抗体をヒト
組織または体液試料と接触させ、前記抗体と前記試料中
の抗原的に相当する癌細胞またはその抗原決定基との相
互作用を検出することを含む、結腸癌を検出する方法。 - （１７）ヒト非小細胞肺癌を生体内で限定する方法であ
って、 （ａ）特許請求の範囲第（１）項、第（４）項、第（５
）項または第（８）項記載の単クローン性抗体を精製し
、（ｂ）前記抗体を放射性標識し、 （ｃ）前記抗体を適当な担体中でヒト患者に投与し、 （ｂ）外部シントグラフィー、発光断層撮影、または放
射性核走査により限定する、 ことを含む方法。 - （１８）実質的に精製された形態の糖タンパク質抗原で
あって、ヒト非小細胞肺癌細胞から誘導され、ポリアク
リルアミドゲル電気泳動により測定して約１１０，００
０ドルトンの分子量を有し、次のアミノ末端アミノ酸配
列： 【アミノ酸配列があります】 （式中、Ｘは未同定アミノ酸を表わす） を有する抗原、およびこの抗原の免疫複合体。 - （１９）実質的に精製された形態の糖タンパク質抗原で
あって、ポリアクリルアミドゲルを電気泳動により測定
して約１１０，０００ドルトンの分子量を有し、次のア
ミノ末端アミノ酸配列： 【アミノ酸配列があります】 （式中、Ｘは未同定アミノ酸を表わす） を有する糖タンパク質抗原を含む抗原および前記抗原の
免疫複合体。 - （２０）非小細胞肺癌を治療する免疫療法の方法であっ
て、 （ａ）特許請求の範囲第（１）項、第（４）項、第（５
）項または第（８）項記載の単クローン性抗体を精製し
、（ｂ）前記単クローン性抗体を細胞毒剤、毒素または
放射性薬物に接合させ、 （ｃ）前記接合した単クローン性抗体を適当な担体中で
ヒト肺癌患者に投与する、 ことを含む方法。 - （２１）Ｌ２０抗体により規定される抗原を発現する腫
瘍を治療する免疫療法の方法であって、（ａ）特許請求
の範囲第（１）項、第（４）項、第（５）項または第（
８）項記載の単クローン性抗体を精製し、（ｂ）前記単
クローン性抗体に対する抗イディオタイプ抗体を調製し
、 （ｃ）前記抗イディオタイプ抗体を適当な担体中でヒト
肺癌患者に投与する、 ことを含む方法。 - （２２）肺癌細胞またはその免疫原決定基で免疫処置し
たマウスから得られたリンパ球とマウス骨髄腫細胞との
ハイブリドーマを含み、ヒト非小細胞肺癌細胞の細胞表
面糖タンパク質抗原上の決定基部位に結合する能力によ
り確認される単クローン性抗体を生成する連続細胞系。 - （２３）肺癌を有するヒトから得られたリンパ球と骨髄
腫細胞とのハイブリドーマを含み、ヒト非小細胞肺癌細
胞の細胞表面糖タンパク質抗原上の決定基部位に結合す
る能力により確認される単クローン性抗体を生成する連
続細胞系。 - （２４）肺癌を有するヒトから得られたリンパ球と骨髄
腫細胞とのハイブリドーマを含み、ヒト小細胞肺癌細胞
の細胞表面糖タンパク質抗原上の決定基部位に結合する
能力により確認される単クローン性抗体を生成する連続
細胞系。 - （２５）肺癌を有するヒトから得られたリンパ球と骨髄
腫細胞とのハイブリドーマを含み、ヒト乳癌細胞の細胞
表面糖タンパク質抗原上の決定基部位に結合する能力に
より確認される単クローン性抗体を生成する連続細胞系
。 - （２６）肺癌を有するヒトから得られるリンパ球と骨髄
腫細胞とのハイブリドーマを含み、ヒト結腸癌細胞の細
胞表面糖タンパク質抗原上の決定基部位に結合する能力
により確認される単クローン性抗体を生成する連続細胞
系。 - （２７）ＮＳＩマウス骨髄腫細胞と、ヒト肺癌３０８２
細胞で免疫処置したＢａｌｂ／ｃマウスから得たマウス
脾細胞との融合により形成され、ヒト非小細胞肺癌細胞
の細胞表面糖タンパク質抗原であってポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動により測定して約１１０，０００ドルト
ンの分子量を有し、次のアミノ末端アミノ酸配列： 【アミノ酸配列があります】 （式中、Ｘは未同定アミノ酸である） を有する抗原の決定基に結合する単クローン性抗体を生
成するハイブリドーマ細胞系Ｌ２０、ＡＴＣＣＮｏ．Ｈ
Ｂ８９１３。 - （２８）ヒト非小細胞肺癌の細胞表面糖タンパク質抗原
であって約１１０，０００ドルトンの分子量を有し、次
のアミノ末端アミノ酸配列： 【アミノ酸配列があります】 （式中、Ｘは未同定アミノ酸である） を有する抗原上の決定基部位に結合する能力により確認
される単クローン性抗体を生ずる連続細胞系であって、
前記抗原に対する抗体を生成することができるリンパ球
と骨髄腫細胞とのハイブリドーマを含む連続細胞系。
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/834,172 US5185432A (en) | 1986-02-26 | 1986-02-26 | Monoclonal antibodies and antigen for human non-small cell lung carcinoma and other certain human carcinomas |
| US834172 | 1986-02-26 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS62220197A true JPS62220197A (ja) | 1987-09-28 |
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Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62042467A Pending JPS62220197A (ja) | 1986-02-26 | 1987-02-25 | ヒト非小細胞肺癌および一定の他のヒト癌腫に対する単クロ−ン性抗体および抗原 |
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| CN (1) | CN87100927A (ja) |
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| BE (1) | BE1000611A5 (ja) |
| CA (1) | CA1312025C (ja) |
| CH (1) | CH675880A5 (ja) |
| DD (2) | DD276165A5 (ja) |
| DE (1) | DE3705276A1 (ja) |
| DK (1) | DK98187A (ja) |
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| GB (1) | GB2186885B (ja) |
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| LU (1) | LU86786A1 (ja) |
| NL (1) | NL8700415A (ja) |
| NO (1) | NO174719C (ja) |
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| PT (1) | PT84370B (ja) |
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| US5342774A (en) * | 1991-05-23 | 1994-08-30 | Ludwig Institute For Cancer Research | Nucleotide sequence encoding the tumor rejection antigen precursor, MAGE-1 |
| US5589579A (en) * | 1994-07-19 | 1996-12-31 | Cytoclonal Pharmaceutics, Inc. | Gene sequence and probe for a marker of non-small cell lung carinoma |
| DE69831522T2 (de) | 1997-03-03 | 2006-06-14 | Amersham Biosciences Uk Ltd | In-situ Zellextraktion und Assay-Verfahren |
| DE19725133A1 (de) * | 1997-06-13 | 1998-12-17 | Micromet Ges Fuer Biomedizinis | Nachweis von seltenen Zellen |
| US20050089918A1 (en) * | 1998-02-23 | 2005-04-28 | Amersham Biosciences Uk Limited | In-situ cell extraction and assay method |
| US6117981A (en) * | 1999-06-03 | 2000-09-12 | Cytoclonal Pharmaceutics, Inc. | Hybridomas for lung cancer marker and monoclonal antibodies thereof |
| JP2003512819A (ja) * | 1999-09-03 | 2003-04-08 | ヒューマン ジノーム サイエンシーズ， インコーポレイテッド | Ｂ７様ポリヌクレオチド、ポリペプチドおよび抗体 |
| US6965018B2 (en) | 2000-06-06 | 2005-11-15 | Bristol-Myers Squibb Company | Antibodies directed to B7-related polypeptide, BSL-2 |
| TWI317285B (en) * | 2000-07-28 | 2009-11-21 | Dainippon Sumitomo Pharma Co | New use and kit for remedies for cancer |
| CN101724072B (zh) * | 2008-10-27 | 2013-10-09 | 谷为岳 | 一种抗肿瘤的单克隆抗体的序列及应用 |
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| DK2542256T3 (da) | 2010-03-04 | 2019-08-26 | Macrogenics Inc | Antistoffer reagerende med b7-h3, immunologisk aktive fragmenter deraf og anvendelser deraf |
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-
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