JPS62275689A - L−カルニチンの製造法 - Google Patents

L−カルニチンの製造法

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JPS62275689A
JPS62275689A JP27518185A JP27518185A JPS62275689A JP S62275689 A JPS62275689 A JP S62275689A JP 27518185 A JP27518185 A JP 27518185A JP 27518185 A JP27518185 A JP 27518185A JP S62275689 A JPS62275689 A JP S62275689A
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JP
Japan
Prior art keywords
genus
carnitine
crotonobetaine
converting
aspergillus
Prior art date
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Pending
Application number
JP27518185A
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English (en)
Inventor
Kiyoshi Nakayama
清 中山
Yukie Ogawa
小川 幸江
Akiko Morita
森田 彰子
Tetsuo Oota
哲夫 太田
Tatsuya Ozawa
達也 小沢
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BIO-LE KK
Chuo Kaseihin Co Inc
Original Assignee
BIO-LE KK
Chuo Kaseihin Co Inc
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Publication date
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  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 3発明の詳細な説明 産業上の利用分野 本発明はクロトノベタインに微生物を作用させて一一カ
ルニテンを製造する方法に関するものである。本発明に
よυ製造さnるL−カルニテ/は、長鎖脂肪酸がミトコ
ンドリア映を通洒して代謝系に入るために必要な物質で
、心臓疾患等に医薬として使われる。また幼児、病人等
の栄養強化でも重要な役割をもち用途がある。
(R,A、 FrenkelおよびJ、 O,M、 C
arry編: 0arni−tine biosynt
hesis 、  metabolism ana f
uncl −ons、    Acaaemic   
Press  、    1  9  8  0  年
 〕 。
従来の技術 従来り一カルエテンの製法としては種々の方法が知らn
ておυ、近年生化学的方法も報告烙nでいる。しかし、
これらは工業的に安価なL−カルニチンを供給するには
なお不満足なものである。生化学的方法の中で特に本発
明方法と関連のある方法について述べると、クロトノベ
タインをL−カルニチンに変換せしめる微生物としてエ
ンテロバクタ−(Kntsl obactar )属細
菌(公開特公昭59−183694)、糧々の細菌、酵
母、放線菌(公開特公昭59−192095、公開特公
昭60−137295)を用いる方法が知られている。
こnらの方法に反応収率が低かつ九シ、収率が高くても
基質濃度が低くて生産性からみてなお満足なものとほい
\難い。
発明が解決しようとする問題点と解決するための手段 上記したように従来OL−カルニチン製造法が工業的に
はなお難点がある次め、本発明者らはよシ効率的なL−
カルニチンの製造法を確立すべく研究を重ねた。その結
果、これまでクロトノベタインからL−カルニチンへの
f換能力の知られていない6徨のカビ、放線菌、酵母、
細菌にその能力を見い友し、この発見に基いて本発明を
完成するにいたった。
発明の効果、作用 本発明によれば容易に製造しうるクロトノベタインから
L−カルニチンを効率よく製造することが可能である。
本発明に使用する微生物に、アスベルギルスイoスポラ
(lJeurosporaJ 属、ペニシリウム(Pe
nicilliumJ属、リゾープス(Rhizopu
a]属、トリコブル? (Trichoderma)属
、アy’s’s−ビア(Ashbya)  属、ブレタ
ノミセス(nrettanomyces )属、ブレラ
(Bullsra)属、シゾサツ力ロミセスイトファガ
(Cytophaga )属、ミクロシクルスO何1か
の属に属する微生物でめり、6属に楓する微生物の具体
的例は実施例に示す如くである。これらの属の微生物で
クロトノベタインをL−カルニチンに変換する能力を有
する微生物を培地に培養してえた菌体もしくにその処理
物をクロトノベタインに接触反応せしめるとL−カルニ
チンがえられる。本発明に使用する微生物菌体をえるた
めの培養法は、通常の培養法によればよく、特に説明を
要しないが、基質として用いるクロトノベタインを含有
せしめ次培地に微生物を生育せしめると転換活性の高い
菌体をえることができる。このようにしてえた菌体を基
質に作用せしめてもよく、まt菌体からえ九酵素系含有
物を基質に作用せしめてもよい。
また微生物菌体を培養液から分けることなく、生育培養
の培養液に基質を刃口えて反応せしめてもよい。また菌
の生育培地に基質を加えて生育と同時に反応場せる方式
も可能である。
基質濃度にパッチ式、連続式、反応時間などによって異
ってくるが、通常α1〜30%で行なう。反応温度も通
常10〜60℃で行われるが、酵素系の失活を伴なわな
い温度でろnば割限にない。反応−pHについても同様
で、失活を伴わないpHが望ましく、通常pH4〜10
で行われる。反応時間は静置、攪拌、流下などの手段、
おるいは菌のもつ活性の強弱などによって異るが、一般
に30分〜72時間程度である。
反応は生成するL−カルニチンをベアンンらの酵素法(
Method of Enz7matic Analy
sis、第2版第4巻1758頁、1974.年〕で分
析することによシ、あるいは高速液体クロマトグラフィ
ー、薄層クロマトグラフィーなどの分析手段を応用して
追跡できる。
反応終了後、反応液をイオン交換樹脂カラムにかけ、溶
出濃縮するなど公知の方法によシー−カルニチンに回収
さnる。
次に本発明の実施例を示す。
実施例1 第1表に示した培地5dをふくむ大型試験管に第2表に
示し次カビ、酵母を植菌して26℃で、カビrX7日、
酵母は48振とり培養し次。
培養液5−から遠心分離ま友に濾過によシえ九菌体を2
回水洗後クロトノベタインを10岬/−の@度にふくむ
pH7,0の燐酸緩衝液α5−を加え、30℃で18時
間振とり培養で反応させ次結果、第2表に示した転換率
(モル収率)でL−カルニチンが生成した。
第  1  嵌 培地成分       培地ム  培地B  培地OK
、HPO47,5t/l  7.5’l/l  7.5
?/LKH,Po、           2.5  
 2.5   2.5Mg804・7馬0      
 α1   α1    α1Fe804・7H10C
LOl    α01    α01NH4C21,O
to     tO NaCt5.0    5.0    5.0グルコー
ス         IQ、Q     −−フマール
酸ナトリウム     −2(LO−グリセロール  
      −    −2α0肉エキス      
     却    5.0    5.0ポリペプト
ン        an    s、o     s、
口酵母エキス          五〇    五〇 
   五ロクロトノペタイン       1αOIQ
、Q    1αOpH&Op)L 6.0   pH
6,0第  2  表 アスペルギルス・ニゲルfmフル  −   −12,
5%テイベス (Aapergllua n1cer var。
altipes) エIPO4067 アスベルギルスーニゲル変糧フエ  −   −12,
9ルメンタリウス (Aspergillus  niger  var。
fermentariusJ  IIFO4068アス
ペルギルス・フエニクス     −       1
2.6(Aapergillus phoenicus
)ATOo  11363 フfUウム・オキシスボルム     −   −15
,1(Fusarium oxysporum  f、
sp。
1ini )工F05880 ジベレラーラテリテウム           5.5
(Gibbarella 1ateritiumJ工F
0 71813 モナスクス・アンカ         −   −12
,8(Monaecus  ankaJ 工FO447B リゾムコール・ミーヘイ       −   &2(
Rhizomucor m1eheiJATOO220
64 ノイロスポラ・シトフィラ      −−9,8(と
当とり1臼」幻j」恵玉聾) IFO4596 ペニシリウム・カマンベルf      −−15,0
(Penicillium  camenberti)
IFo 5855 犬 ペニシリウム・シトリスム      −   −19
4(Penicillium citrinumJAT
OO14994 リゾープス・ギネンシス変極りキファシ −−2.5c
互しり旦辺些 chinensis var+l紐己!
9正互)工IFO4737 トリコデルマ・リーセイ       −   −al
ATCC13631 トリコデルマ・ビリデ        −   7.2
−工F0 4847 アッシュビア・ゴクビー       9.2  4.
9   5.3工FOQ560 ブレタノミセス・フラケセレンシス  6.5   −
   −工FO0677 ブレラ・アルバ           7.7   4
.8  −工FO1192 シゾサツカロミセス・ボンベ     1.9   −
   −pombs)ATCC2a76 シユワニオミセス・オク7テン    &0   − 
  −スボロボロミセスーサルモニカラー  Mu  
  −1,7rs1co1or) 工F0 1038ス
テリグマトミセス−ハロフィルス  −       
1.2(13terigmatomyces halo
−philus)工F0 1488 トリゴノグシス・パリアビリス    −−α6ATC
C10679 ウィッカーハミア・フルオレスンス  −114工FO
1116 m:実施せず、 ′第1表の培地 実施例2 第3表に示した培地と第4表に示した微生物を用い、菌
体収得の為の培養時間4io日とするほかに実施例」1
と同様に実施し之場合OL−カルニチンの生成1α弔4
表に示した如くであった。
第  3  表 培地成分     培地D  培地E K!HP 04        7.5 ?/17.5
 ?/1KH2PO42,512,5// Mg5o、・7HtOQ、1  tt   α1 〃F
e804−7H2OO,01tt   O,01pNE
4CL         1.Ott   1.OpN
ail          5.Ott   5onグ
ルコース          1αOp    −グリ
セロール        −     IQ  //肉
エキス            5,0 1    5
.Onポリペプトン         5.0  //
    5.Op酵母エキス          α3
  tr    (13trジクロノベタイン    
   iaO〃   1αo 〃pH7,2pH7,2 第  4  表 り一カルニチン式率 アクテノマジュラ・ツーシラ          α5
   −ムTCC27296 アクチノプラネス・ミズーリエンシス    α7  
 −工F0 1343 ミクロモノスポラープルプレオクロモ    1.1−
ゲネス chromogensa)工1P013524ストレグ
トスポランギウム・ピリド     五5  −グリゼ
ウム griseum)ムTCC25242 ノカルジオイデス・アルプス         1.9
−ATCC27980 ミクロテトラスポラ・フスカ         −  
  1.6(Microtetraspora  fu
sca))TCo  23058 − 二実施せず、    ” 第3表の培地実施例5 実施例1のB培地でpHを12に調整し次培地を用い、
菌体収得の為の培養時間t−2日とするほかに実施例1
と同様に実施した場合、第5表に示し7ta菌で第5衆
に示しt率OL−力ルニチンか生成し九。
第5表 クロモバクテリウム・ヨージヌム         1
.7(Chromo’bacterium iodin
um)工F05558 サイト7アガ菌&                 
 Q、3(Cytophaga  sp、)ATO(!
  2947aミクロシクルス拳エパーネウス    
       13(Microcyclus  5b
urneusツムToe 21373 パラコツカス・デニトリフィカンス         
zl(Paracoccua  denitrific
ans)ATCO1956ア 実施例4 ペニシリウム・シトリヌムムTO(:! 14974 
 i用い、実施例1と同じ東件で実施した反応液から面
体を除いてえた」:コ液400−をイオン交換樹脂(ダ
ウエックス5o)crカラムに通し、稀塩酸で溶出し、
a縮径エチルアルコールtfiMIによ、91−カルニ
チン・クロライドの#i結晶560岬をえ九。
特許出願人   パイオール株式会社 代表者 申出  清 中央化成品株式会社 代表者 水島喜三部

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 1、アスペルギルス(¥Aspergillus¥)属
    、フザリウム(¥Fusarium¥)属、ジベレラ(
    ¥Gibbe−rella¥)属、モナスクス(¥Mo
    nasus¥)属、リゾムコール(¥Rhizomuc
    or¥)属、ノイロスポラ(¥Neurospora¥
    )属、ペニシリウム(¥Penicillium¥)属
    、リゾープス(¥Rhizopus¥)属、トリコデル
    マ(¥Trichoderma¥)属、アッシュビア(
    ¥Ashbya¥)属、ブレタノミセス(¥Brett
    anomyces¥)属、ブレラ(¥Bullera¥
    )属、シゾサッカロミセス(¥Schizosacch
    aro−myces¥)属、シユワニオミセス(¥Sc
    hwanni−omyces¥)属、スポロボロミセス
    (¥Sporobo−lomyces¥)属、ステリグ
    マトミセス(¥Steri−gmatomyces¥)
    属、トリゴノプシス(¥Trigo−nopsis¥)
    属、ウィッカーハミア(¥Wicker−hama¥)
    属、アクチノマジュラ(¥Actinoma−dura
    ¥)属、アクテノプラネス(¥Actinopla−n
    es¥)属、ミクロモノスポラ(¥Micromono
    s−pora¥)属、ミクロテトラスポラ(¥Micr
    otet−raspora¥)属、ノカルジオイデス(
    ¥Nocardi−oides¥)属、ストレプトスポ
    ランギウム(¥Streptosporangium¥
    )属、サイトファガ(¥Cytophaga¥)属、ミ
    クロシクルス(¥Micro−cyclus¥)属、パ
    ラコッカス(¥Paracoccus¥)属、クロモバ
    クテリウム(¥Chromobacterium¥)属
    の何れかの属に属し、クロトノベタインをL−カルニチ
    ン変換する能力を有する微生物をクロトノベタインに作
    用せしめて、クロトノベタインをL−カルニチンに変換
    せしめることを特徴とするL−カルニチンの製造法。
JP27518185A 1985-12-09 1985-12-09 L−カルニチンの製造法 Pending JPS62275689A (ja)

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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS60224488A (ja) * 1984-03-29 1985-11-08 ロンザ リミテツド 微生物学的手段によるl−カルニチンの製造
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