JPS62286997A - 薬理的に活性のあるペプチッド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 公開公報ＤＥ３３４０２０８ＡＩは、一般式％式％ その特許請求の範囲１および２によると、例えば次記化
合物に具体化できるペプチノドを説明している。

即ち、 Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｄ　　（ＩＩ）Ｄ＝Ｖａｌ　
、Ｌｅｕ　、Ｍｅｔ　、Ｍｅｔ　（０）　、　ｌ　ｌｅ
　、ＰｈｅＴｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｄ　　（ＩＩＩ）
Ｄ：ＶａＩ　、Ｌｅｕ、Ｎｅｔ　、Ｎｅｔ（０）、ｌｉ
ｅ、ＰｈｅＰｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｄ　（Ｉ
Ｖ）Ｄ：Ｖａｌ　、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｍｅｔ（０）、Ｉ
ｌｅ、ＰｈｅＴｙｒ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｄ　ｆ
ｆ）Ｄ：Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｍｅｔ（０）、ＩＩ
ｅ＋Ｐｈｅこれらペプチッドは元来蛙の皮膚から分離さ
れたが、アミノ酸トリプトファンを含んでいる為、トリ
プトフィリンと名付けられた。このトリプトフィリンの
特徴は、殊に欠配構造にある。

Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ　　（ｖｌ）
Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｎｅｔ　　（Ｖｌｌ
）Ｐｈｅ−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ（ｅｕ　　（Ｖｌｌ
ｌ）＜Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｎｅｔ−ＮＲ２（ＩＸ
）この点Ｐ、　Ｃ，モンテクソチその他のＩｎｔ、　Ｊ
、ペプチッド、プロティン　Ｒｅｓ、　　２３．２７８
−２８１．１９８４．１９８３．０３．３１年受理を参
照されたい。この論文は上記公開公ＮＤＥ３３４０２０
８ＡＩの出発点になっており、本出願時点の知識水準を
説明している。即ち、Ｐ、Ｃ，モンテクッチその他（１
９８４）の刊行物の２８０頁右欄最終項によると、ＤＥ
３３４０２０８Ａ１に説明されている化合物は摘出器官
プレパラート（平ｔｎ筋）に活性を示さない。

」−記公開広報、モンテクッチその他（１９８４）の文
献（１９８４）およびその後の報文（ゴ、チイニ外１ｎ
ｔ、　Ｊ、ペブチンド、プロティン　Ｒｅｓ、　　２５
．３２３−３２９．１９８５）はトリプトフィリンの告
通の平滑筋標本での不活性を確認し、その結果、トリプ
トフィリン類のベブチンド中にアヘン様活性であり、従
って摘出器′０標本に活性のある化合物を探求すること
を諦めさせている。いま、驚くべきことに、本発明のペ
プチッド、殊に化合物Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ
　（Ｘ）および同様の構造でＣ−末端の伸長しているペ
プチッドがアヘン様に作用し摘出器官標本に活性である
ことか見出され且つ確認せられた。

本発明の課題はアヘン様の作用をａし摘出器官標本に有
効な新規ペプチソドを創製するに存する。

本発明のこの課題は、薬学的に活性のペプチッドが一般
式 ％式％ 式中、Ｔｙｒはアミノ酸千ロジンを、Ｐｒｏはアミノ酸
プロリンを、Ｔｒｐはアミノ酸トリプトファンを、そし
て、Ｔｈｒはアミノ酸スレオニンを依味し、Ａ、　　Ｂ
。

Ｃ，Ｄ、　　Ｅ、及びＦは、それぞれ、任、像のＤ−形
又はＬ−形のアミノ酸であることができ、Ｔは、０Ｈ１
０Ｒ１ＮＨ２、ＮＨＲ、ＮＨ２またはＮＨＮＨＲ′、式
中、Ｒは、場合により、次記の意味を有する：置換基を
有する直鎖または分岐を仔するＣ１−１０−アルキル、
アダマンチル、ｃｌ−１０−ンクロアルキル又はＣＢ−
訃アラルキル、合目的々には、フェニル、ベンジル又は
フェニルエチルを意味し、またＲｏは水素、直鎖又は分
岐を汀するＣｌ−１０−アルキル、ンクロアルキルまた
は、ＣＧ−８−アラルキル、直鎖、分岐または環状の脂
肪族のＣＩ−ＩＧ−アンルで、それらは場合により、Ｏ
Ｈ、ＮＨ２、Ｃｌ−１４−アルフキ７またはハロゲンで
置換されていてよい、そして、場合により、０Ｈ１ＮＨ
２、ハロゲン、またはＣ１−４アルフキシで置換された
芳香族のアンル；ｔ１１′鎖、分岐又は環状のＣ３−１
１の脂肪族のウレタンである、で示される薬学的活性の
あるペプチノド及びそれらの薬学的に容認できる１−に
よって、解決せられた。

本発明の別 の構成によると、このペブチッドは Ａ：Ｇ　Ｉｎ　、Ａｒｇ　、Ｇ　ｌｕ　、Ｓｅｒ　、Ｔ
ｈｒ　、Ｐｒｏ　、Ｐｈｅ　、又はＴｙｒＢ＝Ａｒｇ Ｃ＝Ｐｈｅ ｏ：Ｆ！ｈｅ Ｅ”Ｇｌｕ＋又はＡｓｐ Ｆ＝Ｓｅｒ であることを特徴としている。

２位のアミノ酸（Ｐｒｏ２）は有利には、Ｄ　−Ａｌａ
２　　又はＤ−Ｐｒｏ２によって置換されていることが
できる。

このペプチッドの２位のＤ−アミノ酸はアヘン様の作用
を高めまた血中の蛋白分解酵素による分解に対してベブ
チノドを安定化する作用を有している。

４位のアミノ酸（Ｔｈｒ４）は、Ｖａｔ、Ｎｅｔ、Ｎｅ
ｔ（０）山ｅ、Ｐｈｅ又はＰｒｏ以外の任意のアミノ酸
に置換されてそのアヘン様の作用を失うことが無い。

本発明の別の構成によると、一般式 式中、Ｒ３は、水素又は１−４０原子を有するアルキル
基 Ｒ４は水素又は政３と共に、エチレン橋Ｒ５は水素、１
−４Ｃ原子のアルキル基又はＲＧ　Ｃ〇−基 Ｒ６は飽和又は不飽和で、直鎖又は分岐した１−１７Ｃ
原子を有するアルキル残基、７−１２Ｃ原子を（Ｔする
フェニル残基又はフェニルアルキル残基を意味し、その
際、フェニル残基はハロゲン、１−４Ｃ原子のアルキル
又は１−４Ｃ原子のアルコキシからなる群の１個又は２
個の置換基により置換されていることが出来、その際、
Ｒ５−０基は、式式中、Ｗは水素、１−５Ｃ原子のアル
キル、３−５Ｃ原子のアルケニル、ンクロブロピルメチ
ル、チクロブチルメチル、Ｒ８Ｃ０−１Ｈ−ｖａｌ、Ｈ
−Ｖａｌ’Ｖａ１、Ｈ−Ａｒｇ、Ｈ−１ｙｓ、Ｈ−＋１
ｅ、　Ｈ−Ｔｙｒ、　Ｈ−Ｐｈｅ、又は１）４ａｌを、
α味する、で示される残基に対しメタ位又はパラ位に存
する、で示されるＮ−末端Ｌ−チロシンが存在しており
、 式中、Ｒ７は水素、水酸基、１−４０原子を有するアル
キル−又はアルコキシ基を意味し、その窒素には１−４
０原子を汀するアルキル又はアルキル基が結合されてお
り、 その環には１個又は多数のケト基が導入されている、で
示されるプロリンが存在している。

本発明のベブチノドにあっては、アミノ酸プロリンはデ
ヒドロアミノ酸として存在していることができる。

本発明の別の構成によると、第３のアミノ酸位置のトリ
プトファン（Ｔｒｐ３）はＤ型で存在している。

特にそのスレオニン（Ｔｈｒ４）がＤ型で存在している
ときに汀利である。本発明の汀利なペプチッドは次記の
構造式を仔している。

Ｖａｌ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−ＴｈｒＴｙｒ−Ｐｒ
ｏ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−ＧｉｎＴｙｒ−Ｐｒ
ｏ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−ＰｈｅＴｙｒ−Ｐｒｏ−
Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｃ１ｎ−Ｐｈｅ−ＰｈｅＴｙｒ−ｐｒ
ｏ−ｉｒｐ−τｈｒ−Ｇｉｎ−Ｐｈｅ−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ
τｙｒ−Ｆ’ｒｏ−τｒｐ−Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−ｔ’ｈｅ
−Ｐｈｅ−Ｇｌｕ−人５ｐＴｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｔ
ｈｒ−Ｇ　Ｉｎ−ｐｈｅ−Ｆ’ｈｅ−ｃ　１ｕ−Ｓｅｒ
Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−ＮＨ２Ｔｙｒ−Ｄ−
人１ａ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−ＯＨＴｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｔ
ｒｐ−Ｔｈｒ−ＮＨ２Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｔｒｉ）−
Ｐｒｏ−ＯＲＴｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ｎ
Ｈ２Ｔｙｒ−Ｄ−Ａｌａ−Ｔｒｐ−Ｐｒｏ−Ｇｌｙ−Ｏ
ＨＴｙｒ−Ｄ−人１ａ−Ｔｒｐ−Ｄ−Ｔｈｒ−τｙｒ−
ＯＨＴｙｒ−Ｄ−人１ａ−τｒｐ−Ｄ−τｈｒ−ｆ’ｈ
ｅ−Ｏｔ１本発明のベプチ、ドは、チログロブＩＪンま
た（よその他の高分子蛋白質に力・ノブリングした後、
１ｌｉｌｉ乳動物体内に抗体を造る為に抗原としてＪＩ
Ｊ　Ｌ　％ること力くできる。

この場合、そのペプチ・ンドを汗通カルボジアミドで品
分子にカップリングし、うさぎの背中及び蝮の皮膚に皮
下注射する。

こうして得られた抗体は、体組織又は体液中の本発明の
ペプチノドの測定のために使用できる。

このものは、外部から導入されたベブチッドおよび内因
性のベプチンドの測定にも使用できる（臨床検査）。

本発明のペプチンド及び／又はそれらの誘導体及び／又
はそれらの酸付加塩及び／又は金属錯化合物は医薬中に
含をされていることができる。

これらの医薬は、殊に、鎮咳剤、下痢止剤、鎮届剤、向
精神薬、中枢血管及び末梢血管血流促進剤、トランキラ
イザー、外傷治癒促進剤として用いることができる。

ユ通１１↓ 本発明の２つのペプチッド　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒ
ｐ−Ｔｈｒ−ＯＨ及び　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−丁ｒｐ−
Ｔｈｒ−Ｇｌｎ−ＯＨの合成は、９−フルオレニルメト
キシカルボニルｌ去を使用するペブチッド化学で普通の
合成装置（ＦＡ、　Ａｐｐｌｉｅｄ　８１ｏｓｙｓｔｅ
ｉｓ、モデル　４３０　Ａ）で行った。（この点、Ｍｅ
ｌｅｎｈｏｆｅｒ等のＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　　Ｐｅｐｔｉｄｅ　Ｐｒｏｔｅｉ
ｎ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　、　１３　、ｐ、３５−４２　
、１９７９　、参照）。アミノ酸は、ツバビオヘム社（
Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｎ＋社　スイス）より人手した。

その他の本発明のペプチッドの製造はこの例と同様に行
った　。次いで、合成ベプチソドを”逆相Ｃ１８”高圧
液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により　Ｒｊ製し
た（この点、プランチルによるｒＨＰＬＣｊｎ　　Ｐｒ
ｏｔｅｉｎ　ａｎｄ　Ｐｅｐｔｉｄ　　Ｃｈｅａ＋１ｓ
ｔｒｙ”Ｊ　（Ｅｄｓ。

Ｆ、Ｌｏｔｔｓｐｅｉｃｈ、　　Ａ、Ｈｅｎ５ｃｈｅｎ
、に、Ｐ、Ｈｕｐｅ）　　、　育ａｌｔｅｒｄｅ　　Ｇ
ｒｕｙｔｅｒ、　　Ｂｅｒ目ｎ、　Ｐ、３６５−３８４
．■９８！を参照されたい）。薬学的な活性分利はその
アミノ酸組成に酸性加水分解して調べた。そして予期し
たアミノ酸組成の正しいモル組成が得られた。方法に就
いてはロットスパイヒ外、ホッペーザ・イラーの物理化
学雑誌３Ｅｔｌ、１８３５−１８３９．１９８０を参艙
されたい。

ｌ胤桝２ 本発明の二つのペプチノド（Ｈ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒ
ｐ−Ｔｈｒ−ＯＨと　Ｈ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｔ
ｈｒ−Ｇｌｎ−ＯＨ）の薬理作用それら２つの物質は、
モルモット回腸の電気刺激した筋層間神経叢長筋標品（
ＧＰＩ）で、特異的なアヘン作用を示す（シュルツ及び
ボルドシュタイン法：　Ｊ、ｐｈａｒｍａｃｏｌ、　Ｅ
ｘｐｔｌ、　Ｔｈｅｒ、　１８３．４００．１９７２参
照）。

その結果を次表１に記す。

物質　　　　　　　　　　　　　　　　　ＧＰＩＴｙｒ
−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ　　　　　　　　　　　　　
４５．２Ｔｒｙ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｇｉｎ　　
　　　　　　　　　４　Ｂ、　　１ノルそフィン　　　
　　　　　　　　　　　　０．　１表４１本発明による
２つのベプチソドのアヘン様作用；それら数値は、モル
モア）−腸一標品（ＧＰＩ）の電気的に誘導された収縮
を５０％抑制するに必要な濃度（μＭ）（ＩＣ５０−値
）を示すものである。

これらの数値は４−８回の測定の平均値である。平均値
からの標準偏差は１４％以下である。ＧＰＩのそれら抑
制値は、特異的なアヘン薬−拮抗体ナロキソンで解消で
きるか若しくは前処理で封鎖することができる。（器官
浴中のナロキソンの最終濃度は、０．５μＭであった）
。

アヘ／様の作用はラットに脳室内注射しても観察できる
。その場合、プラントル等、ライフサイエンス、２８、
１９０３−１９０９．１９８１に説明されている様に実
施した。

汀効な鎮届用晴としては、上記ペプチアドの３５０−５
００μｇであることが明らかになった。その鎮痛作用は
体重Ｋｇ当たりナロキソン１０ａｇ（腸腔内注射）で排
除できるか、若しくはナロキソンでの前処理することに
より封鎖できる。

２つの合成ペプチッドに対する抗体の収得は、正にβ−
カッモルフインに関して、まさにハメル等により説明さ
れている様に行われたＣ６ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　　Ｄａ
ｔｒｙ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　、５２　、１３９−１４８
　、１９８５参照）。要約すると欠配の通りである。そ
れら２つのベプチ、ドをカルボジイミドを用いてチログ
ロブリンに力、プリングさせ、モルモットの背中及び腹
の皮下に注射する。マークした物質として１２５１−Ｔ
ｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−ＯＨおよび　＋２５　
Ｉ−Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ−Ｇｌｒ−ＯＨを
用いた。

その後は、ハンメル外の１９８５．１４１頁以下の「ラ
ヂオイムノアセ句に説明されている通りに行われた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）一般式 【アミノ酸配列があります】 式中、Ｔｙｒはアミノ酸チロシンを、Ｐｒｏはアミノ酸
   プロリンを、Ｔｒｐはアミノ酸トリプトファンを、そし
   て、Ｔｈｒはアミノ酸スレオニンを意味し、Ａ、Ｂ、Ｃ
   、Ｄ、Ｅ、及びＦは、それぞれ、任意のＤ−形又はＬ−
   形のアミノ酸であることができ、Ｔは、ＯＨ、ＯＲ、Ｎ
   Ｈ２、ＮＨＲ、ＮＲ２またはＮＨＮＨＲ′、式中、Ｒは
   、場合により、次記の意味を有する：置換基を有する直
   鎖または分岐を有するＣ１−１０−アルキル、アダマン
   チル、Ｃ１−１０−シクロアルキル又はＣ６−８−アラ
   ルキル、合目的々には、フェニル、ベンジル又はフェニ
   ルエチルを意味し、またＲ′は水素、直鎖又は分岐を有
   するＣ１−１０−アルキル、シクロアルキルまたは、Ｃ
   ６−８−アラルキル、直鎖、分岐または環状の脂肪族の
   Ｃ１−１６−アシルで、それらは場合により、ＯＨ、Ｎ
   Ｈ２、Ｃ１−１４−アルコキシまたはハロゲンで置換さ
   れていてよい、そして、場合により、ＯＨ、ＮＨ２、ハ
   ロゲン、またはＣ１−４アルコキシで置換された芳香族
   のアシル；直鎖、分岐又は環状のＣ３−１１の脂肪族の
   ウレタンである、で示される薬学的活性のあるペプチッ
   ド及びそれらの薬学的に容認できる塩。 （２）Ａ＝Ｇｌｎ、Ａｒｇ、Ｇｌｕ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、
   Ｐｒｏ、Ｐｈｅ、又はＴｙｒＢ＝Ａｒｇ Ｃ＝Ｐｈｅ Ｄ＝Ｐｈｅ Ｅ＝Ｇｌｕ、又はＡｓｐ Ｆ＝Ｓｅｒ であることを特徴とする特許請求の範囲１の薬学的活性
   のあるペプチッド （３）２位のプロリンがＤ−Ａｌａ２又はＤ−Ｐｒｏ２
   に置換されていることを特徴とする特許請求の範囲１お
   よび２の薬学的活性のあるペプチッド （４）Ｔｈｒ４がＶａｌ、Ｍｅｔ（Ｏ）、Ｉｌｅ、Ｐｈ
   ｅ及びＰｒｏ以外の任意のアミノ酸に置換されているこ
   とを特徴とする特許請求の範囲１ないし３の薬学的活性
   のあるペプチッド （５）ａ）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ３は、水素又は１−４Ｃ原子を有するアルキル
   基 Ｒ４は水素又はＲ３と共に、エチレン橋 Ｒ５は水素、１−４Ｃ原子のアルキル基又はＲ６ＣＯ−
   基 Ｒ６は飽和又は不飽和で、直鎖又は分岐した１−１７Ｃ
   原子を有するアルキル残基、７−１２Ｃ原子を有するフ
   ェニル残基又はフェニルアルキル残基を意味し、その際
   、フェニル残基はハロゲン、１−４Ｃ原子のアルキル又
   は１−４Ｃ原子のアルコキシからなる群の１個又は２個
   の置換基により置換されていることが出来、その際、Ｒ
   ５−Ｏ基は、式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｗは水素、１−５Ｃ原子のアルキル、３−５Ｃ原
   子のアルケニル、シクロプロピルメチル、チクロブチル
   メチル、Ｒ６ＣＯ−、Ｈ−Ｖａｌ、Ｈ−Ｖａｌ−Ｖａｌ
   、Ｈ−Ａｒｇ、Ｈ−ｌｙｓ、Ｈ−Ｉｌｅ、Ｈ−Ｔｙｒ、
   Ｈ−Ｐｈｅ、又はＤ−Ｖａｌを意味する、で示される残
   基に対しメタ位又はパラ位に存する、で示されるＮ−末
   端Ｌ−チロジンが存在し、 ｂ）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 式中、Ｒ７は水素、水酸基、１−４Ｃ原子を有するアル
   キル−又はアルコキシ基を意味し、 その窒素には１−４Ｃ原子を有するアルキル又はアルコ
   キシ基が結合されており、 その環には１個又は多数のケト基が導入されている、で
   示されるプロリンが存在していることを特徴とする特許
   請求の範囲１−４の薬理的に活性のあるペプチッド。 （６）アミノ酸プロリンがデヒドロアミノ酸として存在
   していることを特徴とする特許請求の範囲１−５の薬理
   的に活性のあるペプチッド。 （７）ペプチッドの第３のアミノ酸位置のトリプトファ
   ンが、Ｄ型で存在していることを特徴とする特許請求の
   範囲１−６の薬学的活性のあるペプチッド（８）第４の
   アミノ酸位置のスレオニンが、Ｄ型で存在していること
   を特徴とする特許請求の範囲１−７の薬学的活性のある
   ペプチッド （９）ペプチッドが、構造式： 【アミノ酸配列があります】 を有することを特徴とする特許請求の範囲１−８の薬理
   的に活性のあるペプチッド。 （１０）チログロブリンまたはその他の高分子蛋白質に
   カップリングした後、哺乳動物体内に抗体を造る為に抗
   原として用いられることを特徴とする特許請求の範囲１
   −９の薬理的に活性のあるペプチッド（１１）本発明の
   ペプチッドに対する抗体が体組織又は体液中のそのもの
   の測定のために使用されることを特徴とする特許請求の
   範囲１−１０の薬理的に活性のあるペプチッド （１２）特許請求の範囲１−９に特徴づけられた薬理的
   に活性のあるペプチッド及び／又はそれらの誘導体及び
   ／又はそれらの酸付加塩及び／又は金属錯化合物を含む
   ことを特徴とする医薬及び動物薬。