JPS6230101A - モノシアロガングリオシドの製造法 - Google Patents
モノシアロガングリオシドの製造法Info
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- JPS6230101A JPS6230101A JP60167385A JP16738585A JPS6230101A JP S6230101 A JPS6230101 A JP S6230101A JP 60167385 A JP60167385 A JP 60167385A JP 16738585 A JP16738585 A JP 16738585A JP S6230101 A JPS6230101 A JP S6230101A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
- C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
- C07H15/10—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical containing unsaturated carbon-to-carbon bonds
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- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明はモノシアロガングリオシドを製造する方法に関
するものである。
するものである。
ガングリオシドは人及び動物の脳に多く含まれているス
フィンゴ糖脂質の一種で、次の一般式（１）％式％ （式中Ｇａ１ＮＡｃはＮ−アセチルガラクトサミン、Ｇ
ａｌはガラクトース、Ｇｌｃはグルコース、ＮｅｕＮＡ
ｃはＮ−アセチル、および／又はＮ−グリコリル−ノイ
ラミン酸（一般に単に／アル酸と称する）、Ｃｅｒはセ
ラミド ｎは０〜３．ｍは１〜３の整数を示す）で表わ
され、その構成成分の一つであるシアル酸残基の結合数
及び結合位置によって多数の分子種があり、従って本発
明に云うガングリオシドとはそれ等の総称である。
フィンゴ糖脂質の一種で、次の一般式（１）％式％ （式中Ｇａ１ＮＡｃはＮ−アセチルガラクトサミン、Ｇ
ａｌはガラクトース、Ｇｌｃはグルコース、ＮｅｕＮＡ
ｃはＮ−アセチル、および／又はＮ−グリコリル−ノイ
ラミン酸（一般に単に／アル酸と称する）、Ｃｅｒはセ
ラミド ｎは０〜３．ｍは１〜３の整数を示す）で表わ
され、その構成成分の一つであるシアル酸残基の結合数
及び結合位置によって多数の分子種があり、従って本発
明に云うガングリオシドとはそれ等の総称である。
ガングリオシドは１分子に結合しているシアル酸残基の
数によりモノシアロガングリオシド（略号ＧＭ）、ジン
アロガングリオシド（略号ＧＤ）。
数によりモノシアロガングリオシド（略号ＧＭ）、ジン
アロガングリオシド（略号ＧＤ）。
トリシアロガ／グリオ／ド（略号ＧＴ）及び４個のシア
ル酸残基が結合したテトランアロガングリオシド（略号
ＧＱ）に大別され、更に／アル酸残基の、拮合位置によ
り細別しＧＭはＧＭ、（一般式のｎ ＝ ０１ｍ−１）
、ＧＤはＧＩ）＋ａ （ｎ＝１． ｍ＝１）とＧＤ、ｂ
（ｎ ＝ ０１ｍ−２）、ＧＴはＧＴ、ｂ（ｎ ＝ １
、 ｍ＝２ ）、 ＧＱは（３Ｑｔｂ （ｎ＝２．
ｍ−２）等が知られている。
ル酸残基が結合したテトランアロガングリオシド（略号
ＧＱ）に大別され、更に／アル酸残基の、拮合位置によ
り細別しＧＭはＧＭ、（一般式のｎ ＝ ０１ｍ−１）
、ＧＤはＧＩ）＋ａ （ｎ＝１． ｍ＝１）とＧＤ、ｂ
（ｎ ＝ ０１ｍ−２）、ＧＴはＧＴ、ｂ（ｎ ＝ １
、 ｍ＝２ ）、 ＧＱは（３Ｑｔｂ （ｎ＝２．
ｍ−２）等が知られている。
またＱＭｌの数字は基本糖鎖の４つの糖がそろっている
ことを示しており、 Ｃ）ｒＭｌかも末端のＧａ ｌ
ＮＡｃが脱離したものは（３Ｍ２、さらにＧａｌ が
脱離したまたはＧＡｌと称する。
ことを示しており、 Ｃ）ｒＭｌかも末端のＧａ ｌ
ＮＡｃが脱離したものは（３Ｍ２、さらにＧａｌ が
脱離したまたはＧＡｌと称する。
近年ガングリオノドの生体内での作用の解明が進歩して
おりＧＭｌは中枢神経及び末梢神経の障害の修復、治療
に有効であると報告されている（例えばＡｃｔａ Ｎｅ
ｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ ６２巻 ４６−５０
（１９８３） 、 Ａｇｎａｔｉ 、Ｌ、Ｆ、他 Ａ
ＣｔａＰｈｙｓｉｏｌｇｉｃａ ５ｃａｎｄｉｎａｖｉ
ｃａ １１９巻３４７−３６３（１９８３））。
おりＧＭｌは中枢神経及び末梢神経の障害の修復、治療
に有効であると報告されている（例えばＡｃｔａ Ｎｅ
ｕｒｏｐａｔｈｏｌｏｇｉｃａ ６２巻 ４６−５０
（１９８３） 、 Ａｇｎａｔｉ 、Ｌ、Ｆ、他 Ａ
ＣｔａＰｈｙｓｉｏｌｇｉｃａ ５ｃａｎｄｉｎａｖｉ
ｃａ １１９巻３４７−３６３（１９８３））。
イタリアではクロナシアル［Ｆ］なるイ１１を含むガン
グリオシド混合物が末梢神経疾患治療薬とじて止車され
ており、これに関しては特許（特開昭５２−３４９１２
）が出願されている。
グリオシド混合物が末梢神経疾患治療薬とじて止車され
ており、これに関しては特許（特開昭５２−３４９１２
）が出願されている。
従来の技術
小４１以外のガングリオノドからＧＭ １を生成する従
来の方法としてはガングリオ・ノドに脱シアル酸酵素で
あるノイラミニダーゼを作用させる方法（例えばＲｉｃ
ｈａｒｄ Ｋｕｈｎ、他Ｃｈｅｍｉ ５ｃｈｅＢｅｒｉ
ｃｈｔｅ ９６巻８６６（１９６３′））がある。
来の方法としてはガングリオ・ノドに脱シアル酸酵素で
あるノイラミニダーゼを作用させる方法（例えばＲｉｃ
ｈａｒｄ Ｋｕｈｎ、他Ｃｈｅｍｉ ５ｃｈｅＢｅｒｉ
ｃｈｔｅ ９６巻８６６（１９６３′））がある。
なお酵素を用いずにＧＭｌを生成させた例（Ｓ。
Ａｎｃｌｏ、他Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏ
ｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉ ｓｔ ｒｙ ２５４巻Ａ２
３ １２２２４ １２２２９（１９７９））も報告され
ている。即ちＧＱを蟻酸水溶液中ｐＨ３８０°Ｃで３０
分間維持することでＧＴｌａ、 ＧＴｔ ｂ、 ＧＤｔ
ｂ、 ＧＤｌａ、 ＧＭｌの混合物が生成した。と報
告されている。しかしこの報告の薄層クロマトダラム図
によればこの生成混合物中の（Ａｈの量はきわめてわず
かであり、ＧＭｌの生成については確認しなければなら
ない。
ｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉ ｓｔ ｒｙ ２５４巻Ａ２
３ １２２２４ １２２２９（１９７９））も報告され
ている。即ちＧＱを蟻酸水溶液中ｐＨ３８０°Ｃで３０
分間維持することでＧＴｌａ、 ＧＴｔ ｂ、 ＧＤｔ
ｂ、 ＧＤｌａ、 ＧＭｌの混合物が生成した。と報
告されている。しかしこの報告の薄層クロマトダラム図
によればこの生成混合物中の（Ａｈの量はきわめてわず
かであり、ＧＭｌの生成については確認しなければなら
ない。
またガングリオシドのシアル酸残基は酸加水分室により
脱離することが知られている（例えばＥ。
脱離することが知られている（例えばＥ。
Ｋｌｅｎｋ、Ｈｏｐｐｅ−８ｅｙｌｅｒ’５−Ｚｅｉｔ
ｓｃｈｒｉｆｔｆｕｒ Ｐｙｓｉｏｌｏｇｉｓｃｈｅ
Ｃｈｅｍｉｅ ２７０巻、１８５（１９４１）、及びり
、Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍ、他Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２
４８巻７４０（１９７３） ）。
ｓｃｈｒｉｆｔｆｕｒ Ｐｙｓｉｏｌｏｇｉｓｃｈｅ
Ｃｈｅｍｉｅ ２７０巻、１８５（１９４１）、及びり
、Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍ、他Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ
ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２
４８巻７４０（１９７３） ）。
これらは兎に角全てのシアル酸を脱離することを目的と
したもので、生成物はＧＡｌやさらに基本糖鎖の糖が１
〜３個脱離した中性糖脂質であり（３ｔｖＩ １の生成
を目的としたものではない。
したもので、生成物はＧＡｌやさらに基本糖鎖の糖が１
〜３個脱離した中性糖脂質であり（３ｔｖＩ １の生成
を目的としたものではない。
またガングリオノドのシアル酸残基は酸により加水分解
され／アル酸が脱離することが知られているが、しかし
ながらこれは選択的にシアル酸を脱離してＧＭｌを生成
する方法ではない。
され／アル酸が脱離することが知られているが、しかし
ながらこれは選択的にシアル酸を脱離してＧＭｌを生成
する方法ではない。
解決しようとする問題点
現在産業上利用されるガングリオシドの供給源としては
牛、豚等の脳が充当されている。これらの脳から得られ
るガングリオノドは通常ＧＭ１よりも０Ｍ１以外のガン
グリオノド分子種を多く含んでいる。本発明者らが通常
の方法、即ち牛脳をアセトンで処理して脱水し、これを
スペンナーホルム（Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍ）もの方法
（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａ
Ａｃｔａ ６１７巻９７〜１０９（１９８０））Ｋより
クロロホルム、メタノール、及び水の混合液により抽出
し、フォルテの分配（Ｊ、Ｆｏｌｃｈ 。
牛、豚等の脳が充当されている。これらの脳から得られ
るガングリオノドは通常ＧＭ１よりも０Ｍ１以外のガン
グリオノド分子種を多く含んでいる。本発明者らが通常
の方法、即ち牛脳をアセトンで処理して脱水し、これを
スペンナーホルム（Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍ）もの方法
（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ ｅｔＢｉｏｐｈｙｓｉｃａ
Ａｃｔａ ６１７巻９７〜１０９（１９８０））Ｋより
クロロホルム、メタノール、及び水の混合液により抽出
し、フォルテの分配（Ｊ、Ｆｏｌｃｈ 。
Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２２６巻４９７−５０９（１９５
７）） によってガングリオシドの水溶液としこれを
ＤＥＡＥ−セファデックス−Ａ２５により精製しくＲ，
Ｗ、Ｌｅｄｅｅｎ他Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２１巻 ８２９（１９７３））、
更に珪酸カラムに付して精製したガングリオシドの組成
はおよそ”” １４ ％ 、ＧＤ １３４５チ、ＧＤ
ｔｂｌＯ％、ＧＴ１ｂ２２％、 ＧＱｌｂ ２係であ
った。
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２２６巻４９７−５０９（１９５
７）） によってガングリオシドの水溶液としこれを
ＤＥＡＥ−セファデックス−Ａ２５により精製しくＲ，
Ｗ、Ｌｅｄｅｅｎ他Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏ
ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２１巻 ８２９（１９７３））、
更に珪酸カラムに付して精製したガングリオシドの組成
はおよそ”” １４ ％ 、ＧＤ １３４５チ、ＧＤ
ｔｂｌＯ％、ＧＴ１ｂ２２％、 ＧＱｌｂ ２係であ
った。
なお前記のガングリオシド製剤、クロナシアル■のＧＭ
ｌの含量は当該製剤の説明書によれば２１係である。
ガングリオノド混合物中の０Ｍ１以外のガングリオシド
分子種をＧＭｌに変換することが出来ればそれだけ有効
成分をより多く取得することができる。ガングリオ・ノ
ドにノイラミニダーゼを作用させてＧＭｌを生成させる
ことが出来るが、この酵素は高価なものであり、経済的
にあまり有利な方法とは云えない。
ｌの含量は当該製剤の説明書によれば２１係である。
ガングリオノド混合物中の０Ｍ１以外のガングリオシド
分子種をＧＭｌに変換することが出来ればそれだけ有効
成分をより多く取得することができる。ガングリオ・ノ
ドにノイラミニダーゼを作用させてＧＭｌを生成させる
ことが出来るが、この酵素は高価なものであり、経済的
にあまり有利な方法とは云えない。
間１迫を解決するための手段
本発明者らは各種ガングリオシド分子種及びガングリオ
シド混合物の加水分解性を比較検討したところ、その分
子種により加水分解の受は易さに差があることを知った
。
シド混合物の加水分解性を比較検討したところ、その分
子種により加水分解の受は易さに差があることを知った
。
即ら ＧＤｌａからＧＭｌへと、（３Ｍ １からＧＡｌ
へとの反応速度は１両反応ともその分子から１個のシア
ル酸が脱離する反応であることは同じであるがその反応
速度には差があり、ＧＤｌａからＧＭ １の反応速度は
速り、ＧＭｌからＧＡｌの反応速度は遅いことを見い出
した。
へとの反応速度は１両反応ともその分子から１個のシア
ル酸が脱離する反応であることは同じであるがその反応
速度には差があり、ＧＤｌａからＧＭ １の反応速度は
速り、ＧＭｌからＧＡｌの反応速度は遅いことを見い出
した。
また池のガングリオ７ド分子種ＧＴ１ｂについても同様
の結果であった。
の結果であった。
本発明者らは更に詳細に加水分解条件を検討した結果Ｇ
Ｎ１１以外のガングリオ７ドは加水分解を５けＧＮｉｌ
に変換されかつＧｉ’ｖｉ １は比較的安定に存在する
ような加水分解条件を見い出し本発明を完成した。
Ｎ１１以外のガングリオ７ドは加水分解を５けＧＮｉｌ
に変換されかつＧｉ’ｖｉ １は比較的安定に存在する
ような加水分解条件を見い出し本発明を完成した。
即ちガングリオシドの溶液を、必要があれば酸を加えｐ
Ｈ３，５乃至７の範囲で適当な）誌度に加熱すると高い
生成率でＧＮ・１１が生成することを見い出し１本発明
を完成した。
Ｈ３，５乃至７の範囲で適当な）誌度に加熱すると高い
生成率でＧＮ・１１が生成することを見い出し１本発明
を完成した。
次にその方法について詳しく説明する。
ＧＭ １製造の原料として好適に利用できるガングリオ
シドはガングリオテトラオース系のガングリオシドであ
って、それ以外のガングリオシドは原料としては必ずし
も適しているとは云えないがそれらが混入していてもさ
しつかえない。
シドはガングリオテトラオース系のガングリオシドであ
って、それ以外のガングリオシドは原料としては必ずし
も適しているとは云えないがそれらが混入していてもさ
しつかえない。
ガングリオテトラオース１分子に結合しているノアル酸
残基が２個以上のガングリオシド分子種それらのガング
リオシドの混合物、この混合物において（３Ｍ １が混
入しているガングリオシド混合物、及びこれらのガング
リオシドの含１の少ない粗製ガングリオ７ド等が原料と
して利用することができる。
残基が２個以上のガングリオシド分子種それらのガング
リオシドの混合物、この混合物において（３Ｍ １が混
入しているガングリオシド混合物、及びこれらのガング
リオシドの含１の少ない粗製ガングリオ７ド等が原料と
して利用することができる。
先ずこれらのガングリオシドを溶媒に溶解する。
溶媒としては水が最適であるが、有機溶媒を含む水でも
かまわない。この場合の有機溶媒としては。
かまわない。この場合の有機溶媒としては。
シタノール、またはエタノール、インプロパツール、テ
トラヒドロフラン、ジメチルスルホオキサイドまたはク
ロロホルムなどであり、これらは単一でもまたは数種の
混合でもかまわない。通常は水溶媒を用いるのが好まし
いが原料ガングリオシドが粗製品で水に溶解し難い場合
には適宜有機溶媒を併用すると好い結果が得られること
もある。
トラヒドロフラン、ジメチルスルホオキサイドまたはク
ロロホルムなどであり、これらは単一でもまたは数種の
混合でもかまわない。通常は水溶媒を用いるのが好まし
いが原料ガングリオシドが粗製品で水に溶解し難い場合
には適宜有機溶媒を併用すると好い結果が得られること
もある。
次にこのガングリオノド溶液を、必要があれば酸を加え
て、ｐＨを３．５乃至７に調節する。用いる酸としては
蟻酸、酢酸、プロピオン酸、等の有機酸及び塩酸、硫酸
、燐酸等の鉱酸であってよい。
て、ｐＨを３．５乃至７に調節する。用いる酸としては
蟻酸、酢酸、プロピオン酸、等の有機酸及び塩酸、硫酸
、燐酸等の鉱酸であってよい。
粗製ガングリオシドのナトリウム、カリウム等のアルカ
リ金属塩あるいはカル・／ラム、バリウム等のアルカリ
土類金属塩を原料として用いた場合は酸を加えて所定の
ｐＨに調整する。
リ金属塩あるいはカル・／ラム、バリウム等のアルカリ
土類金属塩を原料として用いた場合は酸を加えて所定の
ｐＨに調整する。
しかしガングリオシドを陰イオン交換樹脂に吸着して酢
酸アンモニウムで溶出することにより精製したガングリ
オシドや、また陽イオン交換樹脂（ＮＨ４＋型）で処理
して得られるアンモニウム塩型のガングリオシドを原料
として用いた場合その溶゛府のｐＨはｌｅｔ鼾んど中外
で”Ｄ）−Ｉ６〜７シ示１．酸を加える必要がない。
酸アンモニウムで溶出することにより精製したガングリ
オシドや、また陽イオン交換樹脂（ＮＨ４＋型）で処理
して得られるアンモニウム塩型のガングリオシドを原料
として用いた場合その溶゛府のｐＨはｌｅｔ鼾んど中外
で”Ｄ）−Ｉ６〜７シ示１．酸を加える必要がない。
低いｐＨで反応させる場合は低い温度で、高めのｐＨで
反応させる場合は高い温度で行なうことが好ましいが、
少くとも５０°Ｃ乃至は当該溶液の沸点に加熱する。
反応させる場合は高い温度で行なうことが好ましいが、
少くとも５０°Ｃ乃至は当該溶液の沸点に加熱する。
反応が進行するに従って反応液のｐｒ−ｔは低下するが
ｐＨを低めに調節した場合は低下する巾は小さい。反応
中にｐＨが低下してもｐＨは３．５を下まわらないのが
好ましく、必要があればアルカリを加えｐＨが低下し過
ぎるのを抑える方がよい。
ｐＨを低めに調節した場合は低下する巾は小さい。反応
中にｐＨが低下してもｐＨは３．５を下まわらないのが
好ましく、必要があればアルカリを加えｐＨが低下し過
ぎるのを抑える方がよい。
加熱時間は３０分乃至高々３０時間で、通常は１時間乃
至１５時間である。
至１５時間である。
反応の進行程度１反応生成物の管理は次の方法によって
行なう。
行なう。
反応液及び標準純ガングリオノド分子種の一定量を薄層
クロマトグラフで展開しレゾル／ノール試薬で発色後こ
れを２波長クロマトスキヤナーで測定し定量する（生体
膜実験法、北、（蛋白核酸酵素別冊）、共立出版、Ｐ２
Ｏ５（１９７４））。
クロマトグラフで展開しレゾル／ノール試薬で発色後こ
れを２波長クロマトスキヤナーで測定し定量する（生体
膜実験法、北、（蛋白核酸酵素別冊）、共立出版、Ｐ２
Ｏ５（１９７４））。
加水分解条件を適切：て選ぶと６Ｍ１以外のガングリオ
ノドの約６５係はＧＭｌに変換される。
ノドの約６５係はＧＭｌに変換される。
加水分解が終了した反応液は、アンモニア水で中和し既
知の方法（例えばＭｏｍｏｉ他Ｂｉ ｏｃｈ ｉｍｉ
ｃａｅｔ Ｂｉｏｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ４４１巻４８
８−４９７（１９７６））でＧＭｌを分画精製する。即
ち中和しり反応液ヲＤＥＡＥ−セファテックスＡ２５（
ａ（３ＣｏＯ−型）のカラムに通し、 ０．０５Ｎ酢
酸アンモニウム／メタノールで溶出し、 ＧＭ１画分を
透析脱塩した後さらに珪酸（イヤトロビーズ）のカラム
でｆｆｆｆしてい１１を得る。収量は計算量の５０〜５
４φに達する。
知の方法（例えばＭｏｍｏｉ他Ｂｉ ｏｃｈ ｉｍｉ
ｃａｅｔ Ｂｉｏｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ４４１巻４８
８−４９７（１９７６））でＧＭｌを分画精製する。即
ち中和しり反応液ヲＤＥＡＥ−セファテックスＡ２５（
ａ（３ＣｏＯ−型）のカラムに通し、 ０．０５Ｎ酢
酸アンモニウム／メタノールで溶出し、 ＧＭ１画分を
透析脱塩した後さらに珪酸（イヤトロビーズ）のカラム
でｆｆｆｆしてい１１を得る。収量は計算量の５０〜５
４φに達する。
発明の効果
本発明の方法によればガングリオシドの溶液のｐＨを調
節して加熱する簡単な方法によりＧＭ＋以外のガングリ
オ７ドの過半数を医薬として利用価値の高いＧＭｌに変
換することができ、 ＧＭｌの製造法として有効な方法
である。
節して加熱する簡単な方法によりＧＭ＋以外のガングリ
オ７ドの過半数を医薬として利用価値の高いＧＭｌに変
換することができ、 ＧＭｌの製造法として有効な方法
である。
本発明をさらに具体的に説明するために実施例を示す。
実施例−１
牛脳より調製したＧＭ １を１４チ含むガングリオシド
混合物のす） ＩＪウム塩６．０りを水１８８−に溶解
し０゜ＩＮ酢酸１２７ｎ！、を加えた。この溶液のｐｌ
−（は４．８１であった。
混合物のす） ＩＪウム塩６．０りを水１８８−に溶解
し０゜ＩＮ酢酸１２７ｎ！、を加えた。この溶液のｐｌ
−（は４．８１であった。
この溶液を８０°Ｃで６時間加熱し冷却した。
ｐＨは４．３１であった。反応液を分析した結果圀１の
量は反応前と比べ３．７倍に増していた。
量は反応前と比べ３．７倍に増していた。
反応液を０．Ｉ Ｎアンモニアで中和しＤＥＡＥ−セフ
ｙ テックスＡ −２５（ＣＨ３ＣＯＯ） ６００
ｆｎｌツカラムに通し、水１１．メタノール１．５１、
クロロホルム−メタノール（１：１）０．７１、メタノ
ール１１の順にカラムに流して洗滌した。
ｙ テックスＡ −２５（ＣＨ３ＣＯＯ） ６００
ｆｎｌツカラムに通し、水１１．メタノール１．５１、
クロロホルム−メタノール（１：１）０．７１、メタノ
ール１１の順にカラムに流して洗滌した。
次＜ ｏ、ｏｓＮ酢酸アンモニウム／メタノール溶液
２１で溶出した。溶出液の５００〜１７５０ ｍ／にＧ
Ｍｌが溶出した。このＧＭ１区を濃縮乾固して水１５０
−に溶解してこれを透析脱塩後濃縮乾固した。
２１で溶出した。溶出液の５００〜１７５０ ｍ／にＧ
Ｍｌが溶出した。このＧＭ１区を濃縮乾固して水１５０
−に溶解してこれを透析脱塩後濃縮乾固した。
乾固重量は３．２ｇであった。
これをクロロホルム−メタノール−水（５５：４５ ：
２ ） １５０−に溶解し、同溶媒で平衡化した６０
０ｍ１の珪酸（イヤトロビーズ）カラムに流した。
２ ） １５０−に溶解し、同溶媒で平衡化した６０
０ｍ１の珪酸（イヤトロビーズ）カラムに流した。
クロロホルム−メタノール−水（５５：４５：２）１１
と同（１０： ９０ ： ２ ） １．２５１の溶媒
でグラジェント溶出をして得たＧＭｉ画分を濃縮乾固し
た。
と同（１０： ９０ ： ２ ） １．２５１の溶媒
でグラジェント溶出をして得たＧＭｉ画分を濃縮乾固し
た。
残有を少量のクロロホルム−メタノール（２：１）に溶
かしアセトン３００−を加え、氷冷し、析出物を遠沈し
て上澄液を除去したのち乾燥してｅｈ ２，６５９を
得た。
かしアセトン３００−を加え、氷冷し、析出物を遠沈し
て上澄液を除去したのち乾燥してｅｈ ２，６５９を
得た。
実施例−２
ＧＤｌａのアンモニウム塩（純度９９チ以上） ８００
ｍ９を水４００−に溶かした。溶液のｐＨは６．１７で
あった。この溶液を１００’Ｃで５時間加熱した。
ｍ９を水４００−に溶かした。溶液のｐＨは６．１７で
あった。この溶液を１００’Ｃで５時間加熱した。
反応液を分析した結果計算量の６６係のＧＭｌが生成し
ていた。実施例−１と同様の方法で反応液を処理して分
離精製し３６０〜（収率５４％）のＧ・１１を得た。
ていた。実施例−１と同様の方法で反応液を処理して分
離精製し３６０〜（収率５４％）のＧ・１１を得た。
実施例−３
ＧＭｌを１４％含有するガングリオシド混合物のナトリ
ウム塩１ｇを水１００ｒｎｌに溶解しイオン交換樹脂ア
ンバーリスト１５ （ＮＨ４＋型）１０イのカラムに２
時間を要して流し、樹脂を水２００Ｔｎ！で洗った。通
過液、洗液を合わせて５００−に希釈してガングリオノ
ドのアンモニウム塩水溶液を調製した。この溶液はｐＨ
６，６６を示した。
ウム塩１ｇを水１００ｒｎｌに溶解しイオン交換樹脂ア
ンバーリスト１５ （ＮＨ４＋型）１０イのカラムに２
時間を要して流し、樹脂を水２００Ｔｎ！で洗った。通
過液、洗液を合わせて５００−に希釈してガングリオノ
ドのアンモニウム塩水溶液を調製した。この溶液はｐＨ
６，６６を示した。
これをｓｏ’ｃで８時間加熱し５反応液を分析した結果
ＧＭ１の量は反応前と比べ３．６倍に増加していた。こ
の液のｐＨは４．４６を示した。反応液は実施例−１と
同様の方法で分離精製し４３２ｒｎ９のＱ旧を得た。
ＧＭ１の量は反応前と比べ３．６倍に増加していた。こ
の液のｐＨは４．４６を示した。反応液は実施例−１と
同様の方法で分離精製し４３２ｒｎ９のＱ旧を得た。
実施例−４
ＱＭ １を１４％含有するガングリオシド混合物のす）
ＩＪウム塩１ｇを４００１ｒＬｔの水に溶解し、希塩
酸を加えてはｙｐＨ６，５に調節し、水を加え５００ｍ
１にした。ｐＨ６，４７を示すこの溶液を１００’Ｃで
２時間加熱した。反応液を分析した結果、 ＧＭｌの量
は反応前と比べ４．０倍に増加していた。ｐＨは５．６
１であった。反応液を実施例−１と同様の方法で処理し
、４５０ｍ９のＣｒＭ １を得た。
ＩＪウム塩１ｇを４００１ｒＬｔの水に溶解し、希塩
酸を加えてはｙｐＨ６，５に調節し、水を加え５００ｍ
１にした。ｐＨ６，４７を示すこの溶液を１００’Ｃで
２時間加熱した。反応液を分析した結果、 ＧＭｌの量
は反応前と比べ４．０倍に増加していた。ｐＨは５．６
１であった。反応液を実施例−１と同様の方法で処理し
、４５０ｍ９のＣｒＭ １を得た。
実施例−５
塩酸、硫酸、蟻酸、酢酸を用いて実施例−４と同様に反
応し５反応液を分析して得た試験結果を実施例−６ ＧＤｌａのアンモニウム塩２００ ｍｙを含水率０．２
係のメタノール１００ゼに加えオートクレーブ中１００
°Ｃで８時間反応した。反応液を分析した結累計算景の
７０チのＧＭ １が生成していた。
応し５反応液を分析して得た試験結果を実施例−６ ＧＤｌａのアンモニウム塩２００ ｍｙを含水率０．２
係のメタノール１００ゼに加えオートクレーブ中１００
°Ｃで８時間反応した。反応液を分析した結累計算景の
７０チのＧＭ １が生成していた。
実施例−７
ＧＤ１ａノアンモニウム塩２００■ヲ１．０ モル
の酢酸を含む、含水率０．２％のメタノール１００−に
加えオートクレーブ中１００’Ｃで反応した。
の酢酸を含む、含水率０．２％のメタノール１００−に
加えオートクレーブ中１００’Ｃで反応した。
経時的に反応液をサンプリングしＧ〜■１生成率を分析
した。各時間毎の分析結果を表−２に示した。
した。各時間毎の分析結果を表−２に示した。
表−２
実施例−８
ＱＭ １を１４％含有するガングリオシドのナトリウム
塩２００ｒｎ９を酢酸１０ モルを含むクロロホルム
−メタノール−水（６：４：１）の混合液に加えオート
クレーブ中１００ ’Ｇで８時間反応した。反応液を分
析した結果ＧＭ１の量は反応前と比べ４．６倍に増加し
ていた。
塩２００ｒｎ９を酢酸１０ モルを含むクロロホルム
−メタノール−水（６：４：１）の混合液に加えオート
クレーブ中１００ ’Ｇで８時間反応した。反応液を分
析した結果ＧＭ１の量は反応前と比べ４．６倍に増加し
ていた。
比較例
ＧＤ １ａのアンモニウム塩２００ ｒｎ９ヲ０．０１
Ｎノ蟻酸１００−に溶解した。ｐ Ｈ３、１３のこの
溶液を１００℃で８０分間加熱した。反応液を分析した
結果原料ＧＤ１ａの残量は痕跡程度で、 ＧＭｌの生成
量は計算量の７％であった。反応液の薄層クロマトグラ
ムをオルシノール試薬で発色すると、多数のスポットが
観察されたが主な生成物はシアル酸が全部脱離したＧＡ
ｌ等の中性糖脂質でちった。
Ｎノ蟻酸１００−に溶解した。ｐ Ｈ３、１３のこの
溶液を１００℃で８０分間加熱した。反応液を分析した
結果原料ＧＤ１ａの残量は痕跡程度で、 ＧＭｌの生成
量は計算量の７％であった。反応液の薄層クロマトグラ
ムをオルシノール試薬で発色すると、多数のスポットが
観察されたが主な生成物はシアル酸が全部脱離したＧＡ
ｌ等の中性糖脂質でちった。
特許出願人 三井東圧化学株式会社
手 続 補 正 書
昭和６０年９月１２日
特許庁長官 殿
１、事件の表示
昭和６０年特許願第１６７３８５ 号２、発明の名称
モノシアロガングリオノドの製造法
３、補正をする者
４、補正の対象
明細書の特許請求の範囲の欄
５、補正の内容 。、′ 別
紙 −葉 く別紙 ２、特許請求の範囲 グリオノドを製造する方法。
紙 −葉 く別紙 ２、特許請求の範囲 グリオノドを製造する方法。
（２）媒体のｐＨが３．５乃至７であることを特徴とす
る特許請求の範囲第１項に記載の方法。
る特許請求の範囲第１項に記載の方法。
（３）媒体がアルコールまたはりｏｏホルムヲ含ムこと
を特徴とする特許請求の範囲第１項又は第２項；・て記
載の方法。
を特徴とする特許請求の範囲第１項又は第２項；・て記
載の方法。
手 続 補 正 書
昭和６１年０６月７２日
特許庁長官 殿
１、事件の表示
昭和６０年特許願第１６７３８５号
２、発明の名称
モノシアロガングリオシドの製造法
３６補正をする者
事件との関係 特許出願人
住所 東京都千代田区霞が関３−２−５４、補正の対象
明細書の発明の詳細な説明の欄
５、補正の内容
（１）明細書第３頁第７行及び第８行の記載を次のとう
りに補正する。
りに補正する。
「ていることを示しており、ＧＭＩから末端の脱離した
」 （２）明細書第５頁第６行から第１２行までの記載を次
のとうりに補正する。
」 （２）明細書第５頁第６行から第１２行までの記載を次
のとうりに補正する。
「を目的としたもので、叶、の生成を目的としたもので
はなく、生成物ばＧＡ、やさらに基本糖鎖の塘が１〜３
個脱離した中性糖脂質である。」
はなく、生成物ばＧＡ、やさらに基本糖鎖の塘が１〜３
個脱離した中性糖脂質である。」
Claims (3)
- （１）ガングリオシドを水性媒体中５０°乃至当該媒体
の沸点の温度で加熱しモノシアロガングリオシドを製造
する方法。 - （２）水性媒体のｐＨが３．５乃至７であることを特徴
とする特許請求の範囲第１項に記載の方法。 - （３）水性媒体がアルコールまたはクロロホルムを含む
ことを特徴とする特許請求の範囲第１項又は第２項に記
載の方法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60167385A JPH0653764B2 (ja) | 1985-07-31 | 1985-07-31 | モノシアロガングリオシドの製造法 |
| US06/888,183 US4868292A (en) | 1985-07-31 | 1986-07-22 | Preparation of monosialoganglioside |
| DE19863624816 DE3624816A1 (de) | 1985-07-31 | 1986-07-23 | Verfahren zur herstellung von monosialgangliosid |
| FR868610959A FR2585707B1 (fr) | 1985-07-31 | 1986-07-29 | Procede de preparation de monosialoganglioside |
| IT8621294A IT1213467B (it) | 1985-07-31 | 1986-07-29 | Procedimento di preparazione di monosialoganglioside. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60167385A JPH0653764B2 (ja) | 1985-07-31 | 1985-07-31 | モノシアロガングリオシドの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6230101A true JPS6230101A (ja) | 1987-02-09 |
| JPH0653764B2 JPH0653764B2 (ja) | 1994-07-20 |
Family
ID=15848723
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60167385A Expired - Lifetime JPH0653764B2 (ja) | 1985-07-31 | 1985-07-31 | モノシアロガングリオシドの製造法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4868292A (ja) |
| JP (1) | JPH0653764B2 (ja) |
| DE (1) | DE3624816A1 (ja) |
| FR (1) | FR2585707B1 (ja) |
| IT (1) | IT1213467B (ja) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1223408B (it) * | 1987-12-09 | 1990-09-19 | Crinos Industria Farmaco | Procedimento per la preparazione di monosialoganglioside |
| US5177062A (en) * | 1988-08-09 | 1993-01-05 | Mect Corporation | Method for treating immune complex diseases with n-acetylneuraminic acid |
| WO1993002686A1 (en) * | 1991-07-31 | 1993-02-18 | The Regents Of The University Of California | Gangliosides with immunosuppressive ceramide moieties |
| EP0540790B1 (en) * | 1991-11-05 | 1996-09-11 | Technochemical Corporation S.A. | Method of obtaining monosialogangliosides |
| JP3845121B2 (ja) * | 1994-09-30 | 2006-11-15 | 雪印乳業株式会社 | ガングリオシドの製造法 |
| JP3615798B2 (ja) * | 1994-09-30 | 2005-02-02 | 雪印乳業株式会社 | ガングリオシドの製造法 |
| US5532141A (en) * | 1995-06-13 | 1996-07-02 | Holler; Larry D. | Process for obtaining ganglioside lipids |
| JP3703199B2 (ja) * | 1996-03-01 | 2005-10-05 | タカラバイオ株式会社 | モノシアロガングリオシドｇｍ１の製造方法 |
| JP3929085B2 (ja) * | 1996-04-26 | 2007-06-13 | 雪印乳業株式会社 | ガングリオシド高含有組成物の製造法 |
| JP2000234001A (ja) * | 1999-02-16 | 2000-08-29 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ガングリオシド高含有組成物の製造法 |
| US7407773B2 (en) * | 2000-11-03 | 2008-08-05 | Procognia, Ltd. | Method for characterizing a carbohydrate polymer |
| EP1709443A2 (en) * | 2003-12-18 | 2006-10-11 | Procognia, Ltd. | Method for analyzing a glycomolecule |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2929764A (en) * | 1951-11-08 | 1960-03-22 | Hultin Eskil Alexis | Dextran glucosides, preparation thereof, and blood substitutes containing the same |
| JPS5366442A (en) * | 1976-11-18 | 1978-06-13 | Takuma Sasaki | Antitumors |
| US4593091A (en) * | 1981-08-04 | 1986-06-03 | Fidia, S.P.A. | Method for preparing ganglioside derivatives and use thereof in pharmaceutical compositions |
| US4476119A (en) * | 1981-08-04 | 1984-10-09 | Fidia S.P.A. | Method for preparing ganglioside derivatives and use thereof in pharmaceutical compositions |
| CH658458A5 (fr) * | 1981-12-17 | 1986-11-14 | Lucchini Lab Sa | Procede pour l'obtention du lacto-n-norhexaosyl ceramide. |
| IT1168205B (it) * | 1983-07-21 | 1987-05-20 | Wellcome Italia | Derivato di monsialo ganglioside dotato di attivita' antibatterica, antifungina ed antitumorale, composizioni che lo contengono e procedimento per la loro preparazione |
-
1985
- 1985-07-31 JP JP60167385A patent/JPH0653764B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1986
- 1986-07-22 US US06/888,183 patent/US4868292A/en not_active Expired - Fee Related
- 1986-07-23 DE DE19863624816 patent/DE3624816A1/de active Granted
- 1986-07-29 FR FR868610959A patent/FR2585707B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1986-07-29 IT IT8621294A patent/IT1213467B/it active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2585707B1 (fr) | 1991-08-30 |
| IT8621294A0 (it) | 1986-07-29 |
| JPH0653764B2 (ja) | 1994-07-20 |
| IT1213467B (it) | 1989-12-20 |
| US4868292A (en) | 1989-09-19 |
| DE3624816A1 (de) | 1987-02-05 |
| FR2585707A1 (fr) | 1987-02-06 |
| DE3624816C2 (ja) | 1990-09-13 |
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