JPS6234039A - 免疫反応測定に用いる蛍光検出装置 - Google Patents
免疫反応測定に用いる蛍光検出装置Info
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- JPS6234039A JPS6234039A JP60173895A JP17389585A JPS6234039A JP S6234039 A JPS6234039 A JP S6234039A JP 60173895 A JP60173895 A JP 60173895A JP 17389585 A JP17389585 A JP 17389585A JP S6234039 A JPS6234039 A JP S6234039A
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- Japan
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- light
- light source
- fluorescent
- signal
- fluorescence
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- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
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- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
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- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔発明の利用分野〕
本発明は、抗原抗体結合物の量を螢光物質を介して検出
測定する装置に関するものである。
測定する装置に関するものである。
従来より、生体物質の微量を検出しあるいは測定する免
疫学的手法の一つとして、免疫反応に由来して得られた
試料中の螢光物質の螢光強度ヲ計るフロロイムノアッセ
イ（ＦＩＡ トいつ）、７０ロエンザイムイムノアツセ
イ（ＦＥＩＡ トイう）の方法が知られている。前者は
抗原抗体結合物に標識した螢光物質を測定する直接的方
法であり、後者は抗原抗体結合物に酵素を標識し、この
酵素の活性を螢光物質に作用させて測定する間接的方法
である。
疫学的手法の一つとして、免疫反応に由来して得られた
試料中の螢光物質の螢光強度ヲ計るフロロイムノアッセ
イ（ＦＩＡ トいつ）、７０ロエンザイムイムノアツセ
イ（ＦＥＩＡ トイう）の方法が知られている。前者は
抗原抗体結合物に標識した螢光物質を測定する直接的方
法であり、後者は抗原抗体結合物に酵素を標識し、この
酵素の活性を螢光物質に作用させて測定する間接的方法
である。
そしてこれらの方法においては、螢光物質の強度を測定
するためく、これを含む試料に光を照射する投光系と、
この結果螢光物質から生ずる螢光を受光しその螢光強度
を検出測定する受光測定系とを含む螢光光度計等の螢光
検出装置が用いられている。
するためく、これを含む試料に光を照射する投光系と、
この結果螢光物質から生ずる螢光を受光しその螢光強度
を検出測定する受光測定系とを含む螢光光度計等の螢光
検出装置が用いられている。
ところで、従来のこの種の螢光検出装置においては、投
光系に連続点灯する光源を用い、また受光測定系ではフ
ォトダイオードあるいは、光電子増倍管等の受光センサ
で光信号を電気信号に変換し、これを直流増幅して螢光
強度を求めるようにしているものが普通である。
光系に連続点灯する光源を用い、また受光測定系ではフ
ォトダイオードあるいは、光電子増倍管等の受光センサ
で光信号を電気信号に変換し、これを直流増幅して螢光
強度を求めるようにしているものが普通である。
しかしこのような方式のものでは、外乱光の入射、暗電
流、増幅器のオフセット等の誤差要因に対する配慮を要
するため、例えば外乱光の入射を完全に防止した密閉形
の装置構造くしなければならない他、免疫反応という極
めて微量な量の測定のために高感度な性能を要求される
装置としての構成上の難かしさが多くちった。
流、増幅器のオフセット等の誤差要因に対する配慮を要
するため、例えば外乱光の入射を完全に防止した密閉形
の装置構造くしなければならない他、免疫反応という極
めて微量な量の測定のために高感度な性能を要求される
装置としての構成上の難かしさが多くちった。
本発明はかかる問題点に鑑み、免疫反応の測定用として
、極めて微量な測定対象物の量を高感度に測定するのに
適した螢光検出装置を提供することを目的としてなされ
たものである。
、極めて微量な測定対象物の量を高感度に測定するのに
適した螢光検出装置を提供することを目的としてなされ
たものである。
また本発明の別の目的は、かかる高感度な螢光強度の検
出に適当し、かつ構造が簡易で耐久性に優れた装置を提
供するところにある。
出に適当し、かつ構造が簡易で耐久性に優れた装置を提
供するところにある。
また更に本発明の別の目的は、多数の試料を対象とした
螢光強度の検出測定を、能率よく行なりのに適した装置
を安価に提供することを実現できるようにしだところに
ある。
螢光強度の検出測定を、能率よく行なりのに適した装置
を安価に提供することを実現できるようにしだところに
ある。
而してかかる目的を達成するためになされた本発明より
なる免疫反応に用いる螢光検出装置の特徴は、免疫反応
に由来して得られた螢光物質を含む試料に対して光源光
を照射する投光系と、試料の発する螢光を受光しこれを
電気信号に変換して螢光強度を測定する受光測定系とを
有する螢光検出装置において、前記投光系には、光源光
の照射を所定周波数で点滅させる手１段を設け、前記受
光測定系には、前記光源光の間欠点灯のクロック信号を
用いて受光信号を同期検波する検波器を設けたところに
ある。
なる免疫反応に用いる螢光検出装置の特徴は、免疫反応
に由来して得られた螢光物質を含む試料に対して光源光
を照射する投光系と、試料の発する螢光を受光しこれを
電気信号に変換して螢光強度を測定する受光測定系とを
有する螢光検出装置において、前記投光系には、光源光
の照射を所定周波数で点滅させる手１段を設け、前記受
光測定系には、前記光源光の間欠点灯のクロック信号を
用いて受光信号を同期検波する検波器を設けたところに
ある。
本発ＦＩＡにおいて測定対象とされる試料は、小容器の
セル内あるいはシート表面等で抗原抗体結合物が生成さ
れる免疫反応を生じ、この結合物に螢光物質が標識され
ているもの、あるいは標識された酵素によってこれに接
触する基質が螢光を生ずるようＫなるもののいずれであ
ってもよい。
セル内あるいはシート表面等で抗原抗体結合物が生成さ
れる免疫反応を生じ、この結合物に螢光物質が標識され
ているもの、あるいは標識された酵素によってこれに接
触する基質が螢光を生ずるようＫなるもののいずれであ
ってもよい。
本発明における光源光照射の投光系は、光源、フィルタ
、ミラー、集光レンズ等を適宜組合せた一般的構成と、
光源光を点滅点灯させる手段とからなっておυ、この点
滅手段としては、投光光路中に回転羽根を配置して光を
断続させるなどの機械式チッパを用いてもよいが、長時
間の連続運転に適しかつ耐久性に優れたものとしては、
光源ランプとして放電管あるいは螢光管′ を用い、こ
れを交流点灯、パルス点灯させるよりに構成することが
望ましい。試料に対する照射光源光の点滅の程度は、使
用するランプ、受光測定系の増幅器の周波数特性に依存
するが、通常数ＩＱＨｚ〜数１０ ｋＨｚの範囲で用い
ればよいＯ 本発明における受光測定系は、ミラー、集光レンズ、フ
ィルタ、７オートダイオード、光電子増倍管等の受光セ
ンサ、増幅器、電圧計等を適宜組合せた一般的構成と、
例えば螢光管等への印加電圧のクロック信号を用いて受
光センサからの電気信号を同期検波する検波器とからな
っている。同期検波によって、受光センサから得られる
信号は外光等の影響が除去され、試料中の螢光物質にお
ける光源光に依存した励起螢光の成分を取り出すことが
でき、高精度な螢光強度の検出が可能になる。
、ミラー、集光レンズ等を適宜組合せた一般的構成と、
光源光を点滅点灯させる手段とからなっておυ、この点
滅手段としては、投光光路中に回転羽根を配置して光を
断続させるなどの機械式チッパを用いてもよいが、長時
間の連続運転に適しかつ耐久性に優れたものとしては、
光源ランプとして放電管あるいは螢光管′ を用い、こ
れを交流点灯、パルス点灯させるよりに構成することが
望ましい。試料に対する照射光源光の点滅の程度は、使
用するランプ、受光測定系の増幅器の周波数特性に依存
するが、通常数ＩＱＨｚ〜数１０ ｋＨｚの範囲で用い
ればよいＯ 本発明における受光測定系は、ミラー、集光レンズ、フ
ィルタ、７オートダイオード、光電子増倍管等の受光セ
ンサ、増幅器、電圧計等を適宜組合せた一般的構成と、
例えば螢光管等への印加電圧のクロック信号を用いて受
光センサからの電気信号を同期検波する検波器とからな
っている。同期検波によって、受光センサから得られる
信号は外光等の影響が除去され、試料中の螢光物質にお
ける光源光に依存した励起螢光の成分を取り出すことが
でき、高精度な螢光強度の検出が可能になる。
なお螢光検出装置に影響する外光が一般的な室内照明用
の螢光灯によるものである場合には外光との調和波発生
の影響を可及的に低減した光源光の周波数を選ぶことが
好ましい。
の螢光灯によるものである場合には外光との調和波発生
の影響を可及的に低減した光源光の周波数を選ぶことが
好ましい。
本発明における螢光検出装置は、試料に対して同一方向
（例えば上方）から光源光を照射し−かつ螢光を取出す
ようにしたトップ−トップ方式等の他、光源光の照射と
螢光の取出しを異なる方向にする方式のいずれであって
もよいが、多数の試料を対象として連続的な能率のよい
螢光強度測定を行なうためＫは、前者のトップ−トップ
方式による構成のものが好ましく採用される。例えば、
投光系の光路中にハーフミラ−あるいはダイクロイック
ミラー等を配置して、光源光を反射させて下方に照射し
、かつ下方から取出される螢光を上方に透過させるよ’
＞Ｋした投光系および受光測定系からなる螢光検出装置
を、複数個横列させ、これら複数個の螢光検出装置の下
方位置に、横列配置された試料容器の複数例を順次に搬
入させて、１列毎に螢光強度の検出測定を行なえば、連
続かつ高能率な作業が行なえるものとなる。なお、この
ような横列された複数個の螢光検出装置について、その
光源として長尺の水銀放電管あるいは螢光管を共通的に
用いるようＫすれば、部品数の削減、構成の簡略化は一
層達成され、更Ｋまた試料容器等の横列密度を高めて作
業能率の一層の向上を図る場合には、螢光検出装置の設
置容積の限界を考慮して、横列試料容器に対し一つおき
に螢光検出装置列を対向させて検出測定を行なわせ、次
いで間の試料容器に対しては相対的に螢光検出装置列又
は試料容器列を横列方向に移動して対向させ、検出測定
を行なわせるようにしてもよいっ 〔発明の実施例〕 以下本発明を図面に示す実施例に基づいて説。
（例えば上方）から光源光を照射し−かつ螢光を取出す
ようにしたトップ−トップ方式等の他、光源光の照射と
螢光の取出しを異なる方向にする方式のいずれであって
もよいが、多数の試料を対象として連続的な能率のよい
螢光強度測定を行なうためＫは、前者のトップ−トップ
方式による構成のものが好ましく採用される。例えば、
投光系の光路中にハーフミラ−あるいはダイクロイック
ミラー等を配置して、光源光を反射させて下方に照射し
、かつ下方から取出される螢光を上方に透過させるよ’
＞Ｋした投光系および受光測定系からなる螢光検出装置
を、複数個横列させ、これら複数個の螢光検出装置の下
方位置に、横列配置された試料容器の複数例を順次に搬
入させて、１列毎に螢光強度の検出測定を行なえば、連
続かつ高能率な作業が行なえるものとなる。なお、この
ような横列された複数個の螢光検出装置について、その
光源として長尺の水銀放電管あるいは螢光管を共通的に
用いるようＫすれば、部品数の削減、構成の簡略化は一
層達成され、更Ｋまた試料容器等の横列密度を高めて作
業能率の一層の向上を図る場合には、螢光検出装置の設
置容積の限界を考慮して、横列試料容器に対し一つおき
に螢光検出装置列を対向させて検出測定を行なわせ、次
いで間の試料容器に対しては相対的に螢光検出装置列又
は試料容器列を横列方向に移動して対向させ、検出測定
を行なわせるようにしてもよいっ 〔発明の実施例〕 以下本発明を図面に示す実施例に基づいて説。
明する。
第１図は本発明の一実施例である螢光検出装置の構成概
要−例を示した図であり、図中１はクロックパルス発生
器を内蔵したパルス電圧電源回路、２はパルス電圧の印
加される螢光管であυ、所定周波数のパルス電圧によっ
て間欠点灯される。この螢光管２の光は励起側フィルタ
３、集光レンズ４を通して試料容器５中に照射される。
要−例を示した図であり、図中１はクロックパルス発生
器を内蔵したパルス電圧電源回路、２はパルス電圧の印
加される螢光管であυ、所定周波数のパルス電圧によっ
て間欠点灯される。この螢光管２の光は励起側フィルタ
３、集光レンズ４を通して試料容器５中に照射される。
以上が投光系を構成している。
試料容器５は、例えば酵素で標識された抗原抗体結合物
と、この酵素の活性の作用を受けて螢光物質に変化する
基質とがセル内に充填されているものであυ、測定に先
立って酵素活性の作用を停止させたものであっても、作
用させながら測定するものであってもよい。
と、この酵素の活性の作用を受けて螢光物質に変化する
基質とがセル内に充填されているものであυ、測定に先
立って酵素活性の作用を停止させたものであっても、作
用させながら測定するものであってもよい。
前記の投光系からの光照射によシ、試料容器内の基質は
、酵素活性の程度に応じた強度の励起螢光を発する。
、酵素活性の程度に応じた強度の励起螢光を発する。
試料容器から外部に発光された螢光は、集光レンズ６、
螢光側フィルタ７を通して受光センサ８に受光され、こ
の受光センサ８の特性ニ応じて得られる電気信号は増幅
器を介して同期検波器１０に入力される。同期検波器１
０は、パルス電圧電源回路１のクロックパルス発生器か
らのクロックパルス信号を受け、増幅器９からの信号を
同期検波するととくより、試料容器５内の基質の光源光
による励起螢光成分が検波され、外光の影響、暗成流、
オフセット成分の効果的な除去がなされる。検波された
信号は不図示の電圧計に入力されて、例えば一定時間範
囲における螢光強度の変化量として測定され、試料容器
中の抗原抗体結合物の量を算出するデータとされる。以
上が受光測定系を構成している。
螢光側フィルタ７を通して受光センサ８に受光され、こ
の受光センサ８の特性ニ応じて得られる電気信号は増幅
器を介して同期検波器１０に入力される。同期検波器１
０は、パルス電圧電源回路１のクロックパルス発生器か
らのクロックパルス信号を受け、増幅器９からの信号を
同期検波するととくより、試料容器５内の基質の光源光
による励起螢光成分が検波され、外光の影響、暗成流、
オフセット成分の効果的な除去がなされる。検波された
信号は不図示の電圧計に入力されて、例えば一定時間範
囲における螢光強度の変化量として測定され、試料容器
中の抗原抗体結合物の量を算出するデータとされる。以
上が受光測定系を構成している。
第２図は以上の装置において各部ａＰ Ｊ ｃｌｄ
、ｅに現われる信号の波形特性を示したものである。
、ｅに現われる信号の波形特性を示したものである。
以上の構成の螢光検出装置によれば、パルス電圧の印加
によって点滅される螢光管２を光源とし、同期検波器を
設けたという比較的簡易なる構成によシ、極めて微量な
生体物質の量を精度よく検出測定することが可能となり
、また暗所でなくとも測定誤差の影響が少ないため、そ
の実際上の効果は多大なるものである。
によって点滅される螢光管２を光源とし、同期検波器を
設けたという比較的簡易なる構成によシ、極めて微量な
生体物質の量を精度よく検出測定することが可能となり
、また暗所でなくとも測定誤差の影響が少ないため、そ
の実際上の効果は多大なるものである。
第３図は本発明の他の実施例を示したものであり、この
例では複数（５個）の横列された螢光検出装置に対して
１本の長尺な螢光放電管を共通的に配置しておシ、また
ダイクロイックミラー１１によって光源光を反射させる
ことにより、試料容器５に対する光源光の照射および螢
光の取出しを上方側としたトップ−トップ方式のものと
している。他の構成は前記第１図のものと実質的に同じ
であり、その説明は省略する。
例では複数（５個）の横列された螢光検出装置に対して
１本の長尺な螢光放電管を共通的に配置しておシ、また
ダイクロイックミラー１１によって光源光を反射させる
ことにより、試料容器５に対する光源光の照射および螢
光の取出しを上方側としたトップ−トップ方式のものと
している。他の構成は前記第１図のものと実質的に同じ
であり、その説明は省略する。
このような構成によれば、光源の共通化によって装置全
体の一層の小型化、低コスト化が得られ、また横列させ
た試料容器を同時に測定できるため、連続的かつ能率の
よい螢光検出測定が実現できる。
体の一層の小型化、低コスト化が得られ、また横列させ
た試料容器を同時に測定できるため、連続的かつ能率の
よい螢光検出測定が実現できる。
以上述べたように、本発明よシなる螢光検出装（ｔは、
免疫測定用のものとしての極めて微散かつ高精度な測定
が要求される装置として、測定誤差の極めて少ない測定
が実現される効果があり、また装置が小型でかつ安価に
構成できると共に、測定のために暗所を形成させる必要
性も解消されるために、通常かかる螢光検出装置を組込
んで構成される診断用装置等の設計自由度も大幅に改善
されるなど、その有用性は極めて大なるものがある。
免疫測定用のものとしての極めて微散かつ高精度な測定
が要求される装置として、測定誤差の極めて少ない測定
が実現される効果があり、また装置が小型でかつ安価に
構成できると共に、測定のために暗所を形成させる必要
性も解消されるために、通常かかる螢光検出装置を組込
んで構成される診断用装置等の設計自由度も大幅に改善
されるなど、その有用性は極めて大なるものがある。
第１図は本発明の一実施例である螢光検出装置の構成概
要−例を示す図、第２図は同装置各部の信号の波形特性
を示す図、第３図は本発明の他の実施例である螢光検出
装置の一部構成の概要を示す図である。 １・・・パルス電圧電源回路 ２・・・螢光管２′・・
・螢光放電管 ３・・・励起側フィルタ４・・・集
光レンズ ５・・・試料容器６・・・集光レンズ
７・・・螢光側フィルタ８・・・受光センサ
９・・・増幅器１０・・・受光センサ １１・・・
ダイクロイックミラー〇第１図 ７０：問翻検液番 第２図
要−例を示す図、第２図は同装置各部の信号の波形特性
を示す図、第３図は本発明の他の実施例である螢光検出
装置の一部構成の概要を示す図である。 １・・・パルス電圧電源回路 ２・・・螢光管２′・・
・螢光放電管 ３・・・励起側フィルタ４・・・集
光レンズ ５・・・試料容器６・・・集光レンズ
７・・・螢光側フィルタ８・・・受光センサ
９・・・増幅器１０・・・受光センサ １１・・・
ダイクロイックミラー〇第１図 ７０：問翻検液番 第２図
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 免疫反応に由来して得られた螢光物質を含む試料に
対して光源光を照射する投光系と、試料の発する螢光を
受光しこれを電気信号に変換して螢光強度を測定する受
光測定系とを有する螢光検出装置において、前記投光系
には、光源光の照射を所定周波数で点滅させる手段を設
け、前記受光測定系には、前記光源光の間欠点灯のクロ
ック信号を用いて受光信号を同期検波する検波器を設け
たことを特徴とする免疫測定に用いる螢光検出装置。 ２ 投光系光源が螢光管であり、間欠点灯手段が交流あ
るいはパルス印加電源であることを特徴とする特許請求
の範囲第１項に記載した免疫測定に用いる螢光検出装置
。 ３ 複数列状配置された試料に対し、各々投光系、受光
測定系を対向配置させ、かつ投光系の光源は１本の長尺
ランプで共用されていることを特徴とする特許請求の範
囲第１項又は第２項に記載した免疫測定に用いる螢光検
出装置。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60173895A JPH0663973B2 (ja) | 1985-08-07 | 1985-08-07 | 免疫反応測定に用いる蛍光検出装置 |
| AU60899/86A AU573985B2 (en) | 1985-08-07 | 1986-08-05 | Fluorescence detection apparatus for immunoassay |
| CA000515351A CA1291345C (en) | 1985-08-07 | 1986-08-05 | Fluorescence detection apparatus for immunoassay |
| EP86110884A EP0212455B1 (en) | 1985-08-07 | 1986-08-06 | Fluorescence detection apparatus for immunoassay |
| DE8686110884T DE3675288D1 (de) | 1985-08-07 | 1986-08-06 | Fluoreszenz-erfassungsgeraet fuer immunoassay. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60173895A JPH0663973B2 (ja) | 1985-08-07 | 1985-08-07 | 免疫反応測定に用いる蛍光検出装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6234039A true JPS6234039A (ja) | 1987-02-14 |
| JPH0663973B2 JPH0663973B2 (ja) | 1994-08-22 |
Family
ID=15969079
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60173895A Expired - Lifetime JPH0663973B2 (ja) | 1985-08-07 | 1985-08-07 | 免疫反応測定に用いる蛍光検出装置 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0212455B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0663973B2 (ja) |
| AU (1) | AU573985B2 (ja) |
| CA (1) | CA1291345C (ja) |
| DE (1) | DE3675288D1 (ja) |
Cited By (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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