JPS6234727B2 - - Google Patents
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- JPS6234727B2 JPS6234727B2 JP54021339A JP2133979A JPS6234727B2 JP S6234727 B2 JPS6234727 B2 JP S6234727B2 JP 54021339 A JP54021339 A JP 54021339A JP 2133979 A JP2133979 A JP 2133979A JP S6234727 B2 JPS6234727 B2 JP S6234727B2
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- Japan
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- yit
- cells
- administered
- mice
- bacterial
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- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
- A61K35/741—Probiotics
- A61K35/744—Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
- A61K35/747—Lactobacilli, e.g. L. acidophilus or L. brevis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/245—Lactobacillus casei
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は、乳酸桿菌ラクトバチルスカゼイの菌
体を有効成分として含有する抗腫瘍剤に係るもの
である。 近年、悪性腫瘍の治療等に関する研究が盛んで
あるが、その成果の一つとして、細菌菌体または
その抽出物を用いた抗腫瘍剤がある。特公昭43−
6690号公報に記載されている溶血性連鎖球菌（以
下溶連菌という）の生菌体を用いたものや、乳酸
菌の菌体抽出物を用いた特公昭45−28558号の方
法などがその例として挙げられる。 ところで、生菌体を悪性腫瘍の治療に用いるこ
とは、菌体抽出物を利用する場合に較すれば、製
造上抽出、分離、精製等の複雑な処理を必要とし
ないという利点があるが、反面、菌体を使用に供
するまで生かしておく必要があるので、そのため
の処理を施さなければならない。その結果、生菌
体を用いる場合には、菌体そのものによる直接的
な副作用の他に菌を生かしておくための処理によ
る二次的な副作用が発現する可能性が大きい。 本発明者らは、上述のような現状を背景に、菌
体そのものの抗腫瘍作用が顕著でしかも毒性が低
く、また生菌体であることを必要としない細菌の
検索を進めた結果、乳酸桿菌の一菌株ラクトバチ
ルスカゼイ（Lactobacillus casei）YIT−9018
（微工研条寄第665号；以下YIT−9018という）が
この目的に適合する菌株であることを知つた。 YIT−9018は抗腫瘍作用が他の乳酸桿菌よりも
強く、一般的に宿主介在性の抗腫瘍剤が効果を示
すマウスのザルコーマ180の結節型、腹水型に対
して、静脈内投与をはじめ、皮下投与、経口投
与、腹腔内投与のいずれかの投与方法によつても
顕著な効果を示すのみならず、市販の溶連菌製剤
では無効とされているマウス自血病、Ｌ−1210お
よびＰ−388に対しても有効である。さらに本菌
は、他の乳酸桿菌および市販溶連菌製剤に比較し
て著しく毒性が低い。 以下これらの点について試験例を示して説明す
る。なお試験に用いた菌体試料は次のようにして
調製したものであり、また腫瘍増殖の阻止率は次
式により算出したものである。 阻止率＝対照区腫瘍重量−試験区腫瘍重量／対照区腫瘍
重量×100 〔菌体試料の調製〕 水１中に トリプチケース 10ｇ 酵母エキス ５ｇ トリプトース ３ｇ K2HPO4 ３ｇ KH2PO4 ３ｇ クエン酸アンモニウム ２ｇ 酢酸ナトリウム １ｇ ツイーン 80ｇ グルコース 20ｇ システイン 0.2ｇ MgSO4・7H2O 0.5ｇ FeSO4・7H2O 0.04ｇ MnSO4・2H2O 0.12ｇ を含有するPH6.8の培地を121℃で15分間滅菌後、
あらかじめ前培養したスターターを接種する。37
℃で20〜40時間培養したのち、培養液から菌体を
遠心分離し、得られた菌体を蒸留水で洗浄後、凍
結乾燥して粉末化する。 試験例 １ （抗腫瘍作用の試験） (1) ICR系雄マウスを１群10匹として用い、マウ
ス１匹あたり１〜２×106個のザルコーマ180細
胞を接種し、その24時間後から乳酸桿菌の凍結
乾燥粉末を含む懸濁液（生理的食塩水１ml中に
菌体を2.5mg含む）0.1mlを５日間１日１回尾静
脈より注射した。３週間後にマウスの腫瘍を摘
出し、その重量を測定して各乳酸桿菌による腫
瘍の増殖阻止率を求めた。その結果を第１表に
示す。 各種乳酸桿菌の腫瘍増殖率は菌種（または菌
株）の間で差異が認められるが、おおむね40〜
70％であつた。またこの値は市販溶連菌製
体を有効成分として含有する抗腫瘍剤に係るもの
である。 近年、悪性腫瘍の治療等に関する研究が盛んで
あるが、その成果の一つとして、細菌菌体または
その抽出物を用いた抗腫瘍剤がある。特公昭43−
6690号公報に記載されている溶血性連鎖球菌（以
下溶連菌という）の生菌体を用いたものや、乳酸
菌の菌体抽出物を用いた特公昭45−28558号の方
法などがその例として挙げられる。 ところで、生菌体を悪性腫瘍の治療に用いるこ
とは、菌体抽出物を利用する場合に較すれば、製
造上抽出、分離、精製等の複雑な処理を必要とし
ないという利点があるが、反面、菌体を使用に供
するまで生かしておく必要があるので、そのため
の処理を施さなければならない。その結果、生菌
体を用いる場合には、菌体そのものによる直接的
な副作用の他に菌を生かしておくための処理によ
る二次的な副作用が発現する可能性が大きい。 本発明者らは、上述のような現状を背景に、菌
体そのものの抗腫瘍作用が顕著でしかも毒性が低
く、また生菌体であることを必要としない細菌の
検索を進めた結果、乳酸桿菌の一菌株ラクトバチ
ルスカゼイ（Lactobacillus casei）YIT−9018
（微工研条寄第665号；以下YIT−9018という）が
この目的に適合する菌株であることを知つた。 YIT−9018は抗腫瘍作用が他の乳酸桿菌よりも
強く、一般的に宿主介在性の抗腫瘍剤が効果を示
すマウスのザルコーマ180の結節型、腹水型に対
して、静脈内投与をはじめ、皮下投与、経口投
与、腹腔内投与のいずれかの投与方法によつても
顕著な効果を示すのみならず、市販の溶連菌製剤
では無効とされているマウス自血病、Ｌ−1210お
よびＰ−388に対しても有効である。さらに本菌
は、他の乳酸桿菌および市販溶連菌製剤に比較し
て著しく毒性が低い。 以下これらの点について試験例を示して説明す
る。なお試験に用いた菌体試料は次のようにして
調製したものであり、また腫瘍増殖の阻止率は次
式により算出したものである。 阻止率＝対照区腫瘍重量−試験区腫瘍重量／対照区腫瘍
重量×100 〔菌体試料の調製〕 水１中に トリプチケース 10ｇ 酵母エキス ５ｇ トリプトース ３ｇ K2HPO4 ３ｇ KH2PO4 ３ｇ クエン酸アンモニウム ２ｇ 酢酸ナトリウム １ｇ ツイーン 80ｇ グルコース 20ｇ システイン 0.2ｇ MgSO4・7H2O 0.5ｇ FeSO4・7H2O 0.04ｇ MnSO4・2H2O 0.12ｇ を含有するPH6.8の培地を121℃で15分間滅菌後、
あらかじめ前培養したスターターを接種する。37
℃で20〜40時間培養したのち、培養液から菌体を
遠心分離し、得られた菌体を蒸留水で洗浄後、凍
結乾燥して粉末化する。 試験例 １ （抗腫瘍作用の試験） (1) ICR系雄マウスを１群10匹として用い、マウ
ス１匹あたり１〜２×106個のザルコーマ180細
胞を接種し、その24時間後から乳酸桿菌の凍結
乾燥粉末を含む懸濁液（生理的食塩水１ml中に
菌体を2.5mg含む）0.1mlを５日間１日１回尾静
脈より注射した。３週間後にマウスの腫瘍を摘
出し、その重量を測定して各乳酸桿菌による腫
瘍の増殖阻止率を求めた。その結果を第１表に
示す。 各種乳酸桿菌の腫瘍増殖率は菌種（または菌
株）の間で差異が認められるが、おおむね40〜
70％であつた。またこの値は市販溶連菌製
【表】
【表】
剤Ａの場合もほぼ同じであつた。一方YIT−
9018は80％以上の阻止率を示した。 (2) １〜２×106個のザルコーマ180細胞を１mgの
YIT−9018粉末と生理的食塩水中で混合し、直
ちにICR系雄マウスの皮下に移植した。移植３
週間後にマウスを解剖、腫瘍を摘出して、(1)と
同様にしてYIT−9018による腫瘍増殖阻止率を
算出したところ、97.3％という高率を示した。 (3) １〜２×106個のザルコーマ180細胞をICR系
雄マウスの皮下に移植し、その24時間後にYIT
−9018の生理的食塩水懸濁液0.1mlを注射し
た。腫瘍移植３週間後の腫瘍の重量から(1)と同
様に阻止率を算出し、第２表のような結果を得
た。
9018は80％以上の阻止率を示した。 (2) １〜２×106個のザルコーマ180細胞を１mgの
YIT−9018粉末と生理的食塩水中で混合し、直
ちにICR系雄マウスの皮下に移植した。移植３
週間後にマウスを解剖、腫瘍を摘出して、(1)と
同様にしてYIT−9018による腫瘍増殖阻止率を
算出したところ、97.3％という高率を示した。 (3) １〜２×106個のザルコーマ180細胞をICR系
雄マウスの皮下に移植し、その24時間後にYIT
−9018の生理的食塩水懸濁液0.1mlを注射し
た。腫瘍移植３週間後の腫瘍の重量から(1)と同
様に阻止率を算出し、第２表のような結果を得
た。
【表】
(4) YIT−9018の蒸留水懸濁液を胃ゾンデを用い
てICR系雄マウスの胃内に投与し、その10日後
にマウスの皮下に１〜２×106個のザルコーマ
180細胞を移植した。腫瘍細胞を移植してから
１日後および10日後にも同様にして経口的に
YIT−9018を与え、３週間後に阻止率を調べ
た。その結果を第３表に示す。
てICR系雄マウスの胃内に投与し、その10日後
にマウスの皮下に１〜２×106個のザルコーマ
180細胞を移植した。腫瘍細胞を移植してから
１日後および10日後にも同様にして経口的に
YIT−9018を与え、３週間後に阻止率を調べ
た。その結果を第３表に示す。
【表】
(5) ICR系雄マウスの腹腔内にYIT−9018の生理
的食塩水懸濁液を５日間にわたり投与したの
ち、ザルコーマ180細胞（１〜２×106個／マウ
ス）をマウス腹腔内に移植する。腫瘍細胞移植
後マウスが腫瘍死するまでの日数を観察し、生
理的食塩水のみを投与したマウスの平均生存日
数を１として、YIT−9018を投与したときの相
対生存時間を算出した。その結果を第４表に示
す。YIT−9018の投与によつてマウスの生存時
間は大幅に延長され、10mg／Kgの投与によつて
対照群マウス3.7倍もの生存時間を示した。
的食塩水懸濁液を５日間にわたり投与したの
ち、ザルコーマ180細胞（１〜２×106個／マウ
ス）をマウス腹腔内に移植する。腫瘍細胞移植
後マウスが腫瘍死するまでの日数を観察し、生
理的食塩水のみを投与したマウスの平均生存日
数を１として、YIT−9018を投与したときの相
対生存時間を算出した。その結果を第４表に示
す。YIT−9018の投与によつてマウスの生存時
間は大幅に延長され、10mg／Kgの投与によつて
対照群マウス3.7倍もの生存時間を示した。
【表】
(6) BDF1雄マウスの腹腔内に１×106個のマウス
白血病細胞Ｌ−1210またはＰ−388を移植し、
その24時間後より１日１回YIT−9018の生理的
食塩水懸濁液を腹腔内に投与し、(5)と同様に、
YIT−9018による延命効果を調べた。その結果
を第５表に示す。一般にマウス白血病細胞105
個移植のレベルでは市販溶連菌製剤は延命効果
がないとされているから、YIT−9018の効果が
極めて懸著であることがわかる。
白血病細胞Ｌ−1210またはＰ−388を移植し、
その24時間後より１日１回YIT−9018の生理的
食塩水懸濁液を腹腔内に投与し、(5)と同様に、
YIT−9018による延命効果を調べた。その結果
を第５表に示す。一般にマウス白血病細胞105
個移植のレベルでは市販溶連菌製剤は延命効果
がないとされているから、YIT−9018の効果が
極めて懸著であることがわかる。
【表】
【表】
試験例 ２
（YIT−9018の毒性試験）
(1) LD50
体重25ｇ前後のICR系マウスを用いて
Litchfield−Wilcoxon法に従い、試験例１の(1)
において腫瘍阻止率が40％以上であつた乳酸桿
菌及び市販の溶連菌製剤Ａについて、急性毒性
（LD50）を調べた。第６表はその結果である。
YIT−9018のLD50は腹腔内投与の場合雄で650
mg／Kg、雌で730mg／Kgであり、他の菌種（菌
株）に比べて15〜250％高い値を示し、急性毒
性は極めて低いことが判明した。 (2) 抗原性試験 YIT−9018の生理的食塩水懸濁液を１群５匹
の白色モルモツトの腎部皮下に３日間隔で３
回、YIT−9018が総量50mg／Kgになるように投
与し、対照には、卵アルブミンを同様に総量６
mg／Kg投与した。最終投与日から10日目に全身
性アナフイラキシー反応の有無を調べ、12日目
には別のモルモツトから血清を分離し、凝集反
応によつて血清中の抗体価を調べた。その結
果、全身性アナフイラキシー反応では、YIT−
9018投与群モルモツトはすべて陰性であつた
が、対照の卵アルブミン投与群ではアナフイラ
キシー惹起によつて死亡した例
Litchfield−Wilcoxon法に従い、試験例１の(1)
において腫瘍阻止率が40％以上であつた乳酸桿
菌及び市販の溶連菌製剤Ａについて、急性毒性
（LD50）を調べた。第６表はその結果である。
YIT−9018のLD50は腹腔内投与の場合雄で650
mg／Kg、雌で730mg／Kgであり、他の菌種（菌
株）に比べて15〜250％高い値を示し、急性毒
性は極めて低いことが判明した。 (2) 抗原性試験 YIT−9018の生理的食塩水懸濁液を１群５匹
の白色モルモツトの腎部皮下に３日間隔で３
回、YIT−9018が総量50mg／Kgになるように投
与し、対照には、卵アルブミンを同様に総量６
mg／Kg投与した。最終投与日から10日目に全身
性アナフイラキシー反応の有無を調べ、12日目
には別のモルモツトから血清を分離し、凝集反
応によつて血清中の抗体価を調べた。その結
果、全身性アナフイラキシー反応では、YIT−
9018投与群モルモツトはすべて陰性であつた
が、対照の卵アルブミン投与群ではアナフイラ
キシー惹起によつて死亡した例
【表】
【表】
（３匹）、高度の呼吸困難、運動障害、けいれん
発作を起した例（２匹）がみられた。また凝集
反応では、YIT−9018を投与したいずれのモル
モツトの血清でも陰性であり、抗YIT−9018抗
体の産生は認められなかつた。 本発明は、以上のようなラクトバチルスカゼイ
YIT−9018に関する新規な知見に基き完成された
ものであつて、該乳酸菌の菌体そのものを有効成
分として含有する抗腫瘍剤の発明である。 上記菌体は生菌体、死菌体、いずれであつても
よい。 ラクトバチルスカゼイYIT−9018についてはこ
れを乳酸菌飲料の製造に用いた例が日本畜産学会
報第49巻第10号745〜752頁に記載されているが、
主な菌学的性状を示すと次のとおりである。 細胞形状 短桿状 グラム染色性 陽性 最適生育条件 PH 6.6〜7.0 温度 35〜39℃ 生育温度範囲 15〜42℃ メチルレツドテスト − Voges−Proskauer反応 − インドールテスト − 硫化水素の生成 − アンモニアの生成 − 硝酸塩の還元 − カタラーゼの生成 − ゼラチン及びカゼインの液化 − クエン酸の利用 − ミルク凝固性 ＋ リトマスの還元 ＋ アンモニウム塩及び尿素の利用 − グルコースからのガス生成 − 糖発酵性 アラビノース − キシロース − ラムノース − グルコース ＋ マンノース ＋ ガラクトース ＋ シユークロース ＋ マルトース ＋ ラクトース ＋ セロビオース ＋ トレハロース ＋ メリビオース − ラフイノース − メレジトース ＋ マンニトール ＋ ソルビトール ＋ サリシン ＋ アミグダリン ＋ 本発明の抗腫瘍剤を製造するにあたり、YIT−
9018は乳酸桿菌の培養にふつうに用いられる方法
で培養することができる。例えばラクトース、グ
ルコース、ペプトン、イーストエキス、リン酸一
カリウム、リン酸二カリウム、硫酸マグネシウム
等を含有する合成培地を用い、約37℃で静置培養
する。培養後18〜24時時目に生菌数は最高値に達
するからその時点で培養を抜ち切り、後、培養液
を遠心分離機にかけて集菌する。集められた菌体
は、蒸留水に懸濁して撹拌洗浄した後、遠心分離
機にかけて洗浄し、乾燥粉末化する。YIT−9018
の抗腫瘍作用や急性毒性等の副作用は凍結乾燥し
た生菌体であつても高温乾燥した死菌体であつて
も別段差がないから、菌体の乾燥条件は特に制限
されるものではない。また菌を生かしておくため
に、乾燥時に脱脂乳、グルタミン酸ソーダ、Ｌ−
アスコルビン酸等の保護剤を配合する必要もな
い。 乾燥して粉末化した菌体は、通常はそのまま抗
腫瘍剤として利用に供することができるが、必要
に応じて、保存性向上剤や他の薬剤を配合して製
剤化してもよい。アンプルやカプセルに封入する
などの外気と遮断した状態に置くならば、製剤化
後の保存には特別の条件を必要としない。 本発明による抗腫瘍剤を治療に用いるには、生
理的食塩水等を懸濁して静脈投与もしくは腹腔内
投与し、または経口投与する。 有効投与量は静脈投与で30〜100mg／Kg（好ま
しくは50mg／Kg）、腹腔内投与で５〜20mg／Kg
（好ましくは10mg／Kg）、経口投与で1000〜1500
mg／Kg程度であり、これを５〜10日間、１日１〜
３回に分けて投与すればよい。 本発明による抗腫瘍剤は以上のように抗腫瘍作
用の点ですぐれているばかりでなく、本来病原性
のない腸内細菌である乳酸菌を利用するものであ
ること、及び有効成分が死菌体であつてもよいこ
となどにより、製造上あるいは利用上の制約が少
なく、また比較的安価に製造できるなど、多くの
特長を有するものである。 以下実施例を示す。 実施例 １ YIT9018を前記試験例の場合と同様の組成の培
地１に菌数が107／ml程度になるように接種
し、37℃で20時間静置培養した。生菌数は20時間
目でほぼ最高（2.5×109／ml）に達した。培養後
培養液から冷凍遠心機にて菌体を分離し、蒸留水
にて洗浄して生菌体20ｇ（乾燥菌体として５ｇ）
を得た。得られた菌体を蒸留水に懸濁して10mlの
アンプルに分注し、凍結乾燥後アンプルをを溶封
し、５℃で保存した。１ケ月後、この菌体粉末を
用いて試験例１と同様の方法で抗腫瘍性を調べた
ところ、阻止率は83.2％であつた。 実施例 ２ 実施例１と同じ条件でYIT−9018を培養し、分
離し、洗浄して菌体17ml（湿重量）を得た。この
菌体を121℃20分間加熱滅菌してから80℃熱風乾
燥し粉末化した。 得られた乾燥菌体をアンプルに分封（内容量
100mg）し、５℃で２ケ月保存した。 この保存菌体についてICR系マウスとザルコー
マ180を用いて試験例１および試験例２と同様に
して抗腫瘍効果とLD50を調べたところ、阻止率
は78.5％、LD50は腹腔内投与で雄620mg／Kg、雌
720mg／Kgであつた。 実施例 ３ YIT−9018のスターター300mlをロゴサ培地10
に接種し、37℃で20時間培養（生菌数2.3×
109／ml）した。 培養後培養液を取出して菌体を分離し、洗浄し
て湿生菌体165ｇを得、80℃で３時間熱風乾燥し
て菌体粉末約40ｇを調製した。これにコーンスタ
ーチ60ｇを添加した混合物にハイドロキシプロピ
ルセルロースのエタノール溶液（濃度10％）40ml
を加えて練合機で練合した後、24メツシユのオシ
レーター造粒機で造粒、次いで乾燥してYIT−
9018の菌体を含む顆粒を製造した。一方ICR系雄
マウスの皮下に１〜２×106個のザルコーマ180細
胞を移植し、10日後、上記顆粒マウス0.3ｇ／
Kg／日飼料に混じて10日間経口投与した。腫瘍移
植後３週間目に阻止率を調べたところ、68.2％で
あつた。
発作を起した例（２匹）がみられた。また凝集
反応では、YIT−9018を投与したいずれのモル
モツトの血清でも陰性であり、抗YIT−9018抗
体の産生は認められなかつた。 本発明は、以上のようなラクトバチルスカゼイ
YIT−9018に関する新規な知見に基き完成された
ものであつて、該乳酸菌の菌体そのものを有効成
分として含有する抗腫瘍剤の発明である。 上記菌体は生菌体、死菌体、いずれであつても
よい。 ラクトバチルスカゼイYIT−9018についてはこ
れを乳酸菌飲料の製造に用いた例が日本畜産学会
報第49巻第10号745〜752頁に記載されているが、
主な菌学的性状を示すと次のとおりである。 細胞形状 短桿状 グラム染色性 陽性 最適生育条件 PH 6.6〜7.0 温度 35〜39℃ 生育温度範囲 15〜42℃ メチルレツドテスト − Voges−Proskauer反応 − インドールテスト − 硫化水素の生成 − アンモニアの生成 − 硝酸塩の還元 − カタラーゼの生成 − ゼラチン及びカゼインの液化 − クエン酸の利用 − ミルク凝固性 ＋ リトマスの還元 ＋ アンモニウム塩及び尿素の利用 − グルコースからのガス生成 − 糖発酵性 アラビノース − キシロース − ラムノース − グルコース ＋ マンノース ＋ ガラクトース ＋ シユークロース ＋ マルトース ＋ ラクトース ＋ セロビオース ＋ トレハロース ＋ メリビオース − ラフイノース − メレジトース ＋ マンニトール ＋ ソルビトール ＋ サリシン ＋ アミグダリン ＋ 本発明の抗腫瘍剤を製造するにあたり、YIT−
9018は乳酸桿菌の培養にふつうに用いられる方法
で培養することができる。例えばラクトース、グ
ルコース、ペプトン、イーストエキス、リン酸一
カリウム、リン酸二カリウム、硫酸マグネシウム
等を含有する合成培地を用い、約37℃で静置培養
する。培養後18〜24時時目に生菌数は最高値に達
するからその時点で培養を抜ち切り、後、培養液
を遠心分離機にかけて集菌する。集められた菌体
は、蒸留水に懸濁して撹拌洗浄した後、遠心分離
機にかけて洗浄し、乾燥粉末化する。YIT−9018
の抗腫瘍作用や急性毒性等の副作用は凍結乾燥し
た生菌体であつても高温乾燥した死菌体であつて
も別段差がないから、菌体の乾燥条件は特に制限
されるものではない。また菌を生かしておくため
に、乾燥時に脱脂乳、グルタミン酸ソーダ、Ｌ−
アスコルビン酸等の保護剤を配合する必要もな
い。 乾燥して粉末化した菌体は、通常はそのまま抗
腫瘍剤として利用に供することができるが、必要
に応じて、保存性向上剤や他の薬剤を配合して製
剤化してもよい。アンプルやカプセルに封入する
などの外気と遮断した状態に置くならば、製剤化
後の保存には特別の条件を必要としない。 本発明による抗腫瘍剤を治療に用いるには、生
理的食塩水等を懸濁して静脈投与もしくは腹腔内
投与し、または経口投与する。 有効投与量は静脈投与で30〜100mg／Kg（好ま
しくは50mg／Kg）、腹腔内投与で５〜20mg／Kg
（好ましくは10mg／Kg）、経口投与で1000〜1500
mg／Kg程度であり、これを５〜10日間、１日１〜
３回に分けて投与すればよい。 本発明による抗腫瘍剤は以上のように抗腫瘍作
用の点ですぐれているばかりでなく、本来病原性
のない腸内細菌である乳酸菌を利用するものであ
ること、及び有効成分が死菌体であつてもよいこ
となどにより、製造上あるいは利用上の制約が少
なく、また比較的安価に製造できるなど、多くの
特長を有するものである。 以下実施例を示す。 実施例 １ YIT9018を前記試験例の場合と同様の組成の培
地１に菌数が107／ml程度になるように接種
し、37℃で20時間静置培養した。生菌数は20時間
目でほぼ最高（2.5×109／ml）に達した。培養後
培養液から冷凍遠心機にて菌体を分離し、蒸留水
にて洗浄して生菌体20ｇ（乾燥菌体として５ｇ）
を得た。得られた菌体を蒸留水に懸濁して10mlの
アンプルに分注し、凍結乾燥後アンプルをを溶封
し、５℃で保存した。１ケ月後、この菌体粉末を
用いて試験例１と同様の方法で抗腫瘍性を調べた
ところ、阻止率は83.2％であつた。 実施例 ２ 実施例１と同じ条件でYIT−9018を培養し、分
離し、洗浄して菌体17ml（湿重量）を得た。この
菌体を121℃20分間加熱滅菌してから80℃熱風乾
燥し粉末化した。 得られた乾燥菌体をアンプルに分封（内容量
100mg）し、５℃で２ケ月保存した。 この保存菌体についてICR系マウスとザルコー
マ180を用いて試験例１および試験例２と同様に
して抗腫瘍効果とLD50を調べたところ、阻止率
は78.5％、LD50は腹腔内投与で雄620mg／Kg、雌
720mg／Kgであつた。 実施例 ３ YIT−9018のスターター300mlをロゴサ培地10
に接種し、37℃で20時間培養（生菌数2.3×
109／ml）した。 培養後培養液を取出して菌体を分離し、洗浄し
て湿生菌体165ｇを得、80℃で３時間熱風乾燥し
て菌体粉末約40ｇを調製した。これにコーンスタ
ーチ60ｇを添加した混合物にハイドロキシプロピ
ルセルロースのエタノール溶液（濃度10％）40ml
を加えて練合機で練合した後、24メツシユのオシ
レーター造粒機で造粒、次いで乾燥してYIT−
9018の菌体を含む顆粒を製造した。一方ICR系雄
マウスの皮下に１〜２×106個のザルコーマ180細
胞を移植し、10日後、上記顆粒マウス0.3ｇ／
Kg／日飼料に混じて10日間経口投与した。腫瘍移
植後３週間目に阻止率を調べたところ、68.2％で
あつた。
Claims (1)
- １ ラクトバチルスカゼイYIT−9018の菌体を有
効成分として含有する抗腫瘍剤。
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