JPS6237015B2

JPS6237015B2 -

Info

Publication number: JPS6237015B2
Application number: JP58162084A
Authority: JP
Inventors: Chokichi Iizuka; Hiroaki Maeda
Original assignee: NODA SHOKUKIN KOGYO KK
Current assignee: NODA SHOKUKIN KOGYO KK
Priority date: 1983-09-05
Filing date: 1983-09-05
Publication date: 1987-08-10
Also published as: JPS6054324A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、甘蔗廃糖蜜を担子菌類によつて処理
する抗ウイルス剤の製造方法に関する。ウイルスが濾過性病原体であること、リケツチ
アより小さく20〜60ミリミクロンでウイルス以外
の生物に寄生し、生細胞内でのみ増殖することは
よく知られているところであり、またこれが病原
体となるものは動物において日本脳炎、インフル
エンザ、肝炎等があり、また植物においてはタバ
コモザイクウイルス（TMV）、キユウリモザイク
ウイルス（CMV）等が典型である。ところで、本発明者らは先にバガス等の固体培
地または液体培地に椎菌などの担子菌を植菌し、
これら菌糸体と培地との混合物（菌糸体培養物）
から得られる多糖及びサイトカイニン系の活性物
質を有効成分とする抗ウイルス剤を開発した（例
えば特開昭55−157517号参照）。また、本発明者らは菌糸体の代謝産物や培地成
分の部分分解物に注目し、さらに研究、実験を行
なつた結果、バガス等の植物細胞壁成分それ自体
にも抗ウイルス効果があることを見出し、抗ウイ
ルス剤を開発した（例えば特開昭57−106624号参
照）。すなわち、植物細胞壁のヘミセルロースを
構成するキシログルカンやアラビノキシラン等の
ヘテログリカンが抗ウイルス活性を有するものと
考えられる。そして、本発明者らはより容易に入手でき、か
つ安価な抗ウイルス剤を開発するため、鋭意研究
した結果、驚くべきことに甘蔗廃糖蜜が優れた抗
ウイルス活性を有することを見出し、これを農園
芸作物のウイルス病抑制方法として本出願と同時
に別途特許出願した。本発明は上記の発明をさらに追求した結果、完
成されたものである。すなわち、本発明は甘蔗廃糖蜜を主成分とする
培地に担子菌類に属する食用茸の菌糸体を接種し
て深部培養するようにした抗ウイルス剤の製造方
法である。甘蔗廃糖蜜は、砂糖きびを原料として砂糖を製
造する過程において、経済的な見地から砂糖の回
収をすることができない最後に残つた暗黒色、粘
稠な糖蜜である。この甘蔗廃糖蜜は、極めて安価
に得られ、従来よりアルコール発酵、グルタミン
酸発酵などの培地成分として一般的に使用されて
いる。しかしながら、かかる従来技術において
は、甘蔗廃糖蜜を単に微生物の栄養源として使用
しているにすぎず、甘蔗廃糖蜜自体の有する特殊
な活性に着目して使用した例はない。前述したように、バガス等の植物細胞壁ヘミセ
ルロースの構成成分であるキシログルカン、アラ
ビノキシラン等のヘテログリカンは抗ウイルス活
性を有することが確認されている。ところで、砂
糖の製造過程において砂糖きびを圧搾して搾汁を
得る際にこれらのヘテログリカンが搾汁中に混入
し、甘蔗廃糖蜜中に残存している。したがつて、
甘蔗廃糖蜜中には多量のヘテログリカンが含まれ
ており、これらの成分が抗ウイルス活性の発現に
寄与しているものと考えられる。本発明は、甘蔗廃糖蜜を担子菌類で処理するこ
とによつて、甘蔗廃糖蜜の有する抗ウイルス活性
をより高めるようにしたものである。すなわち、
甘蔗廃糖蜜を主成分とする培地に担子菌類に属す
る食用茸の菌糸体を接種して深部培養すると、菌
糸体より菌体外酵素としてセルラーゼ、α−グル
クシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ等多くのカル
ボハイドラーゼが産生され、これらの菌体外酵素
により、甘蔗廃糖蜜中に含まれるヘテログリカン
が部分分解される。その結果、ヘテログリカンが
有する活性基がより多く露出し、抗ウイルス活性
がより高められるものと考えられる。本発明において使用する培地としては、甘蔗廃
糖蜜を水等で希釈した液体培地が好ましい。この
液体培地には、菌糸体の増殖を助けるため、ペプ
トン、イースト等の他の成分を補助的に添加して
もよい。また、甘蔗廃糖蜜の使用に際し、蒸気吹
込み等を行なつて膠質物質や金属類を沈澱除去す
る等の前処理を行なうことが好ましい。調整した
液体培地は、オートクレーブ等に入れて滅菌処理
する。本発明において使用する担子菌類に属する食用
茸としては、例えば椎茸、ヒラタケ、エノキタ
ケ、なめこ、しめじ等が挙げられるが、培養の容
易さ及び抗ウイルス活性の点から椎茸を使用する
のが最も好ましい。次にこれらの食用茸の菌糸体を前記の液体培地
に接種して深部培養する。この場合、菌糸体はあ
らかじめ前培養してから接種してもよい。培養
は、振盪培養あるいは通気培養により、15〜30℃
の温度条件下で10日間前後行なうのが適当であ
る。これによつて、菌糸体は充分に増殖し、多種
類の菌糸外酵素を産生して培地成分を資化させ
る。すなわち、多種類のカルボハイドラーゼによ
つて甘蔗廃糖蜜中に含まれるヘテログリカンを部
分分解し、活性基を露出させる。培養終了後、培養物を濾過あるいは遠心分離し
て、菌糸体と培養液とを分離する。菌糸体を除去
した培養液はエバポレータ、濾過膜等によつて適
宜濃度に濃縮し、除菌フイルター等を通して液状
の抗ウイルス剤とすることができる。あるいは、
菌糸体を除去した培養液を適宜濃度に濃縮し、凍
結乾燥などして粉末状の抗ウイルス剤を製造する
こともできる。なお、本発明において、菌糸体を除去した培養
液をセフアデツクス、DEAEセルローズ等にかけ
て、さらに有効な成分を分離精製するようにして
もよい。また、本発明は、甘蔗廃糖蜜の有する抗
ウイルス活性に着目して成されたものではある
が、食用茸の菌糸体自体が有する抗ウイルス活性
も期待され、場合によつては菌糸体をホモジナイ
ズあるいは自己消化させ、菌糸体成分をも含有す
る抗ウイルス剤を製造するようにしてもよい。以下、本発明の実施例を説明する。実施例１蒸気吹込みを行なつた甘蔗廃糖蜜を水によつて
希釈し培養液とした。この培養液をオートクレー
ブに入れて常法に従つて滅菌し、椎茸の菌糸体を
接種し、25℃の恒温室にて通気培養を行なつた。
10日間培養した後、培養物を濾過して菌糸体を除
去し、培養濾液をエバポレータにて濃縮した後、
凍結乾燥して褐色粉末を得た。この褐色粉末のラ
ツト経口投与によるLD₅₀は18.5ｇ／Kgであつた。次にこの褐色粉末を用いて抗ウイルス活性の試
験を行なつた。 (1) タバコモザイクウイルス（TMV）検定植物としてニコチアナ・グルチノーサ
（N.glutinosa）を使用した。上記褐色粉末を
種々の濃度に希釈し、この希釈液にTMVの
2000倍希釈液を混合し、半葉に接種した。ま
た、対照半葉にTMVの希釈液のみを接種し
た。そして、試験区と対照区の局部病斑数を測
定し、試験区の対照区に対する局部病斑形成阻
止率を求めた。結果を第１表に示す。

【表】

【表】（＊局部病斑数）
上表から明らかなように、褐色粉末は低濃度
で優れた抗ウイルス活性を有する。 (2) インフルエンザウイルス豚の腎臓細胞を宿主細胞として増殖したイン
フルエンザA₂型を、各種濃度の褐色粉末を添
加した培地に接種し、２日間、37℃にて細胞培
養した後、ニワトリ赤血球凝集価を調べた。結
果を第２表に示す。

【表】上表より明らかなように、褐色粉末はインフ
ルエンザウイルスに対しても低濃度で優れた抗
ウイルス活性を有する。 (3) Ｂ型肝炎ウイルス肝生検の結果、活動型慢性Ｂ型肝炎と診断さ
れた34才の男性について１日６ｇの褐色粉末の
経口投与を行なつた。その結果、投与前の
GOT値は779、GPT値は838であつたが、投与
を始めて二週間目より急に低下し、１ケ月目に
はGOT値７、GPT値22と正常になつた。ま
た、投与前のHBe抗原は5.6、HBe抗体は6.0で
あつたが、投与を始めて１ケ月目に血清転換
（seroconversion）を起こし、２ケ月目には
HBe抗原0.4、HBe抗体73となつた。実施例２エノキタケの菌糸体を用いて実施例１と同様に
褐色粉末を作製した。この褐色粉末のラツト経口
投与によるLD₅₀は17.4ｇ／Kgであつた。この褐色粉末を用いて抗ウイルス活性の試験を
行なつた。 (1) タバコモザイクウイルス（TMV）検定植物としてニコチアナ・グルチノーサ
（N.glutinosa）を使用した。上記褐色粉末を
種々の濃度に希釈し、この希釈液にTMVの
2000倍希釈液を混合し、半葉に接種した。ま
た、対照半葉にTMVの希釈液のみを接種し
た。そして、試験区と対照区の局部病斑数を測
定し、試験区の対照区に対する局部病斑形成阻
止率を求めた。結果を第３表に示す。

【表】上表から抗ウイルス活性は明らかである。
(2) インフルエンザウイルス豚の腎臓細胞を宿主細胞として増殖したイン
フルエンザA₂型を、各種濃度の褐色粉末を添
加した培地に接種し、２日間、37℃にて細胞培
養した後、ニワトリ赤血球凝集価を調べた。結
果を第４表に示す。

【表】上表から抗ウイルス活性は明らかである。
以上説明したように、本発明によれば甘蔗廃糖
蜜という極めて入手し易く、かつ、安価な原料を
用いて、高い活性を有する抗ウイルス剤を製造す
ることができる。また、液体培地を用いることが
できるので、培養後、菌糸体を除去して容易に抗
ウイルス活性を有する培養液を得ることができ、
有効成分の抽出等の操作が大幅に簡略化され、工
業的規模での製造に適している。さらに、甘蔗廃
糖蜜は極めて安全な物質であり、かつ、この甘蔗
廃糖蜜に作用させる食用茸の菌糸体も毒性がまつ
たくないものであるため、得られた抗ウイルス剤
は毒性、副作用の点で全く問題が生じない。

Claims

【特許請求の範囲】

１甘蔗廃糖蜜を主成分とする培地に担子菌類に
属する食用茸の菌糸体を接種して深部培養するこ
とを特徴とする抗ウイルス剤の製造方法。