JPS62501705A - 腫瘍性疾患の治療に用いるプログルミド含有医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 プログルミドおよび腫瘍性疾患の治療に用いるプログルミド含有医薬組成物 本発明は、Ｄ、Ｌ−４−ベンズアミド−Ｎ、Ｎ−ジプロピル−グルタミン酸（プ ロゲルミド）およびその医薬的に許容しうる塩類の新しい治療用途、更に詳しく は、ガストリフ（ｇａｓｔｒｉｎ）、コレシストキニン（ＣＣＫ）、他の生体活 性ペプチド類またはまだ十分には明瞭でない関連メカニズムによって間接的に異 常細胞増大が起る腫瘍性疾患の治療用途に関する。

本発明者らは、胃潰瘍の治療に既に幅広く使用されている上記薬〔たとえばメル ク・インデックス隘７６８０．１０版参照〕が事実、予期できないかつ極めて興 味ある治療活性、すなわち、化学的に誘発する膵臓癌、結腸癌または胃癌より生 じる潰瘍細胞の細胞増大を有意的に抑制する活性あるいはかかる細胞を破壊する 活性を有することを見出した。

本発明は、ちょうどホルモンＣＣＫが膵臓豚房に対し栄養作用を有するように、 ポリペプチドホルモンであるガストリンが消化上皮に対し栄養効果を有するとい う知見に基づくものである。このように、ガストリン（または生理学的ホルモン の生物学的活性部分であるペンタガスｌ−ＩＪン）のラットへの慢性投与によっ て、底粘膜および結腸粘膜の過形成が起る。最近、ガストリンはマウスにおいて 、化学薬品の誘導によって得られる移植可能な結腸腫瘍の成長を刺激することが わかっている〔ウィンセット（Ｗｉｎｓｅｔｔ　）らのサージカル・ホラム（Ｓ ｕｒｇｉｃａｌ　Ｆｏｒｕｍ　）　、　３３　、３Ｂ４頁、１９８２年参照〕。

また、セルレイン（ＣＣＫの合成類似体）によるラットの慢性治療によって、膵 臓豚房細胞の過形成が起ることもわかっている〔ソロモン（Ｓｏｌｏｍｏｎ　） 　ラ（７）　Ａｎ。

Ｊ、フィシオール（Ｐｈｙｓｉｏｌ　）　、　２３５　、Ｅ７１４−７１９．１ ９７８年参照〕。

これらの理論的な根拠に基づき、プロゲルミドが誘発胃腸腫瘍の成長に対し拮抗 剤として作用するかどうかを調べるため、またこの作用が動物の生存時間に影響 しつるかどうかを評価するための実験が望まれる。

すなわち、本発明の主題であるプロゲルミドの上記抗腫瘍活性を一連のインビト ロおよびインビボの薬理学的実験で示す。これらの実験は抗腫瘍活性および該活 性を証明するメカニズムの質的および量的面の両方を示すように整理されている 。

実験１ 正常および腫瘍結腸細胞のペンタガス）　ＩＪン誘発成長の速度に関するプロゲ ルミドの作用ニ一体重２０〜２５ｇの雄マウスの層中間部の皮下に、マウスから 取った結腸腺癌潰瘍細胞８　Ｘ　１０’の懸濁液を接種する。

マウス１２匹の４つのグループを用いる。すなわち、１つは対照マウスのグルー プ、２つ目は２００■／Ｋｆｉ、ｐ、用量のプロゲルミドで１日３回処置したマ ウスのグループ、３つ目は２００μｙ／−のペンタガストリンで８時間毎に処置 したマウスのグループ、そして４つ目はプロゲルミドおよびペンタガストリンで それぞれ上記と同様に処置したマウスのグループである。

２０日後にマウスを殺し、底粘膜および腫瘍を採取し、その重さを量り、抽出し てＤＮＡを測定する。得られる結果を表１に示す。

表１のデータから、ＰＥＧは底粘膜の重大な過形成並びに粘膜腫瘍の重さおよび ＤＮＡ量の重大な増大を共に引起すことが認められる。しかしながら、プロゲル ミドは使用用■において、ペンタガストリンの両栄養作用を有意的に抑制するこ とができる。

ペンタガストリンで刺激したおよび刺激しない、結腸潰瘍細胞のトリチウム含有 チミジンの混和速度に対するプロゲルミドの拮抗作用ニー 実験動物のグループおよび処置は実験１と同じ。７日目に、最終処置後２時間で マウスを殺し、発育した腫瘍を採取し、組織培養する。

小さな組織片を２μＣｉの（３−Ｈ）−チミジンと共に、ダルベア　コ（Ｄｕｌ ｂｅｃｃｏ　）変性イーグ／ｌ／　（Ｅａｇｌｅ　）型培地にて３７°で３０分 間培養する。チミジン担体を含む０．４Ｎ過塩素酸を加えて、反応を中断する。

試料を２−の０．２Ｎ過塩素酸と共に均質化し、通常の方法でＲＮＡおよびプロ ティンを除去する。

ジフェニルアミンを用いる比色法で、試料のＤＮＡ量を測定する〔ビオケム（Ｂ ｉｏｃｈｅｍ、　）　Ｊ、　６２　、　３１５〜３２３頁、１９５６年参照〕。

トリチウムをカウントするのに好適な条件下で、液体シンチレータ−中のｆ液の カップリングしたアリコートをカウントすることにより、ＤＮＡ中の（３−Ｈ） −チミジンの混和を測定する。

結果をＤＮＡの崩壊７分／μ２で表わす〇得られる結果を表２に示す。これらは 対照に対する変化率（トリチウム含有チミジンｄｐｍ　／　Ｄ　Ｎ　Ａ　ｍｃｇ 　）で記載する。

表　２ 潰瘍細胞インビトロの培養でのＤＮＡの合成におけるトリチウム含有チミジンの 混和に対するプロゲルミドおよびペンタガストリンの影響 表２のデータから、ペンタガストリンは結腸潰瘍細胞でのＤＮＡの複製を促進し 、事実、使用用量において、トリチウム含有チミジンの混和は対照に比べて約３ 倍まで増大することが明らかで、この増大は統計的な基準からみて極めて重要で あることが認められる。

プロゲルミド単独で混和を減少せしめるが、これは重要ではない。しかして、ペ ンタガストリンとプロゲルミドの併用処置に意味があり、これによって、プロゲ ルミドの拮□抗作用はペンタガストリンが標的組織に到達するのを妨止し、この ため、ペンタガストリン単独で処置したマウスグループと比較して、ＤＮＡにお けるトリチウム含有チミジンの混和が明らかに減少する（これは統計的に重要） 。

実験３ プロゲルミドが移植結腸腺癌を有する動物の生存時間に影響しうる可能性をチェ ックするため、下記の実験を行う。

体重２０〜２５ｙの雄マウスの層中間部の皮下に、マウスから取った結腸腺癌潰 瘍細胞１×１０５の懸濁液を接種する。マウス１２匹の４つのグループを用いる 。

すなわち、１つ（ま対照マウスのグループ、残りの３つはそれぞれ１００ｑ／ｈ 　ｉ、Ｐ、　、　２０　（１＋ｙ／Ｋｙ　ｉ−Ｐ、　オヨヒ４００　ｑ／Ｋｙ　 ｉ、Ｐ、用量のプロゲルミドで１日３回処置したマウスのグループである。

この処理を最後の対照マウスが死んだ３５日目まで続ける。各種グループの生存 時間の回帰直線を、マウスの死が起った最初の日から始めて、最小二乗法で計算 する。このようにして、Ｅ　Ｄ　ｓ　ｏ　（すなわちマウスのの生存時間を５０ ％増大しつる薬の１日１回用量）を計算することができる。

得られる結果を表３に示す。

表３の試験から、プロゲルミドによる処置は有意的にかつ用量に依存して、結腸 腺癌を接種したマウスの生存時間を増大することが認められる。この効果は、先 に説明した如く胃腸潰瘍細胞の成長の刺激効果を有する、内性ガストリンに対す るプロゲルミドの拮抗作用に関連すると思われる。また約３４０■／ＫｆのＥ　 Ｄ　５　。

値が計算されるが、これはマウスの生存時間が２倍となるのを可能ならしめる用 量である。

実験４ ＣＣＫ−８によって誘発した膵臓腺癌の成長の速度に関するプロゲルミドの抑制 作用ニー 雄ハムスターの頬のうに膵臓腺癌潰瘍細胞１×１０５の懸濁液を接種する。接種 から５日後に、ハムスターをランダムにそれぞれ１０匹の４グループに分ける。

すなわち、１つは対照グループ、２つ目は１０μｙ／に７ｉ、ｐ、のＣＣＫ−８ で１日３回処置したハムスターのグループ、３つ目は２５０　＃／に、；、ｐ、 のプロゲルミドで１日３回処置したハムスターのグループ、そして４つ目はプロ ゲルミドおよびＣＣＫ−８でそれぞれ上記と同様に処置したグループである。

この処置の１５日後にハムスターを殺し、正常膵臓および頬のうに移入した膵臓 腫瘍を採取し、その重さを量る。ＤＮＡを抽出し、通常の方法で測定する。

得られる結果を表４に示す。結果は平均値±Ｓ、Ｅ。

で表わす。

表４のデータから、ホルモンコレシストキニン（ＣＣＫ−３はその生物学的活性 成分）は正常な膵臓細することが認められる。プロゲルミドはＣＣＫに対し特有 の拮抗剤であって、ＣＣＫ−８のこれらの同作用を極めて重要な程度に拮抗する 。

以上の実験データによれば、下記の理論が十分にサポートされているように思わ れる。すなわち、プロゲルミドの使用が腫瘍形成全般、更に詳しくは、内性生体 活性ポリペプチド類（たとえばガストリンおよびＣＣＫ）によって確実に持続す る、たとえば胃腸および膵臓の腫瘍形成の処置に特に好都合であるという理論で ある。

この処置は事実、これらの潰瘍細胞の増殖速度がガストリンやコレシストキニン などのポリペプチド類によって刺激および持続されることが明らかであり、この ためプロゲルミドが標的細胞、すなわち胃細胞、結腸細胞および膵臓線屑におい て特有の拮抗剤である点で、極めて有用である。このようにプロゲルミドはこれ らのホルモンを選択的に拮抗することにより、これらの腫瘍形成の無差別な発現 をブロックしたり、あるいはそれらの後退をも起したりするのに有利に作用する 。この拮抗作用はインビボおよびインビトロの両方の種々の方法によって、ＤＮ Ａにおけるトリチウム含有チミジンの混和に関する研究によって示され、該混和 は細胞サイクルのＳ相、すなわちポリペプチドホルモンがその栄養作用を働かす と思われる相で起る。

また、プロゲルミドは、結腸腺癌を移植し、プロゲルミドで処置した動物の生存 時間の増大によって示される如く、これらのホルモンの内性成分に対しても効果 的作用を有することが認められる。腫瘍形成疾患の治療に用いるためプロゲルミ ドを含む医薬剤形は便宜的なタイプのものである。これらの剤形は、医薬的に許 容しうる不活性成分、たとえば結合剤、賦形剤、分散剤、保存剤、湿潤剤および 染料を、必要に応じて抗有糸分裂作用を有する薬と組合せて含有してもよい。

国際調査報告 ｌｍｅｌ□＋、。、ｌａｌ　Ａ。ａｌｌ（Ｉｂ。、。　Ｐσ／ＥＰ　８５１００ ６７３

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. １．生体活性ポリペプチド類または類するメカニズムが必要とされる腫瘍性疾患 の治療に用いるプログルミドまたはその医薬的に許容しうる塩。
2. ２．ガストリンおよびコレシストキニンなどの生体活性ポリペプチド類によって 持続する胃腸および膵臓の腫瘍疾患の治療に用いるプログルミドまたはその医薬 的に許容しうる塩。
3. ３．抗有糸分裂薬と組合せて投与する請求の範囲第１項または第２項記載のプロ グルミドまたはその医薬的に許容しうる塩。
4. ４．請求の範囲第１項または第２項に記載の腫瘍治療に用いる、活性成分として プログルミドまたはそめ医薬的に許容しうる塩を含有する医薬組成物。
5. ５．抗有糸分裂作用を有する薬を更に含有する請求の範囲第４項記載の医薬組成 物。
6. ６．賦形剤、結合剤、分散剤、保存剤、湿潤剤、着色剤およびこれらの混合物か らなる群から選ばれた医薬的に許容しうる不活性成分を更に含有する請求の範囲 第４項または第５項記載の医薬組成物。
7. ７．腫瘍性疾患の治療用薬の製剤に用いるプログルミドおよび／またはその医薬 的に許容しうる塩。
8. ８．腫瘍性疾患に苦しむヒトに対し有効量のプログルミドまたはその医薬的に許 容しうる塩を投与することから成るヒトの腫瘍性疾患の治療方法。