JPS6254405B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、精製された血漿に関するもので、そ
の目的とするところは、病原性大腸菌に対して抗
菌力ならびに抗体を示し、新生動物の大腸菌症の
防止に有効な豚血液由来の精製血漿を提供するに
ある、さらには、これを添加加工した人工乳を提
供するにある。 一般に、新生動物においては、たとえば子豚は
生後２〜３周令頃通常の環境において病原菌の感
染をうけやすく、その結果、下痢が多発すること
が知られている。下痢の原因菌としては、特に病
原性大腸菌であることが知られていて、従来は下
痢（遅発性大腸菌症および早発性大腸菌症）の治
療に対してサルフア剤や抗生物質が使用されてい
たが、早発性大腸菌症では、症状が発現してから
の治療方法が皆無であり、遅発性大腸菌症では、
症状が現われてからアナフイラキシー性下痢に移
行するため、薬剤による治療が不充分であつた。 これらの問題を解決するため、抗体を人工的に
子豚に与えることが試みられている。しかし、か
かる抗体製品は、馬、牛、豚、山羊、羊などの健
康な家畜動物に各種病原体を大量に接種して、充
分な抗体力価が得られるようになつてから採血
し、血清または免疫グロブリンを抽出して得られ
るもので、そのため多額の経費を要したり、多量
に使用することには制限があつた。また、抗体製
品として、牛の初乳の乾燥粉末が新生子豚の下痢
症に有効であることも知られているが、原料の初
乳が大量に供給されないという問題があつた。 本発明者は、従来のような家畜動物の血液およ
び牛の初乳から、特殊な抗体またはγ−グロブリ
ンを得る方法とは異なる効率的な方法を研究した
結果、新生子豚の下痢の原因菌に有効な精製血漿
とその製法を見出し、ここに本発明を完成した。
すなわち、豚の新鮮な血液を原料とし、空気接触
を回避しつつ、低温の条件下で血漿画分を採取
し、透析法にて低分子成分を除去して得られる濃
縮液を緩和な条件にて乾燥して粉末状血漿を得た
が、かかる製品は、大腸菌に対し優れた抗菌力を
示し、さらに豚または牛由来の病原性大腸菌に対
する抗体価を示すことを見出した。また、本製品
は通常グラム陰性細菌に有効な抗生物質として知
られるコリスチンとの共存のもとに、強い大腸菌
生育抑制作用を発揮する現象も認め、したがつ
て、本製品およびコリスチンの併用は、各々単独
で使用する場合の有効濃度よりも低濃度で使用で
きる利点を見出した。 本発明の方法をさらに詳しく説明すると、まず
精製血漿を得るための原料である血液は、家畜の
種類に限定されないで、一般に屠場にて大量に入
手可能な血液、たとえば豚由来の血液が用いられ
る。しかし、従来の血液は、空気接触が避けられ
ず、雑菌や他成分等の混入もあり、新鮮な血液を
採取することが非常に困難であつた。そこで、本
発明においては、動物体内から空気接触を回避し
た直接採血法を採用し、これによつて得られる新
鮮な血液を用いるものである。 次に、かかる血液を微生物の増殖が起きない温
度以下（たとえば４〜５℃程度）に速やかに冷却
することが必要である。従来は、血液が冷却され
ないため、汚染菌の増殖により腐敗したり、蛋白
質等の変性現象が生じ使用不能となることから、
血液の冷却は重要である。 次に、冷却した血液は、回転数5000rpm以下で
遠心分離して上清画分を得るが、必要に応じて血
液の凝固を防止する目的でクエン酸塩を適当量添
加したり、または析出するフイブリン等の不溶物
を適宜除去して透明な液を得る。 このようにして得た上清液は、低温に保持しつ
つ、分画分子量6000〜13000の過膜を使用した
限外過法により、血漿成分の精製を行なうこと
が必要である。かかる工程において除去される異
物としては、無機塩、低分子量蛋白質、糖類があ
り、これらの異物は、最終製品の純度を下げるの
みでなく、乾燥工程において悪影響を及ぼし、均
質な乾燥製品が得られなかつたり、抗菌力の低い
製品となることから、異物の除去は重要である。 異物の除去に用いる過膜は、チユーブ型また
は平膜型でもよいが、分画分子量6000未満では異
物の除去が充分でなく、分画分子量13000を越え
る場合は過性が低下して操作が困難となるため
適当でない。異物の除去率は、塩類濃度の減少を
指標として、大体70〜90％が好ましい。 以上のごとき限外過処理によつて、同時に濃
縮が可能であり、アルブミンおよび各種グロブリ
ン（α，β，γ−グロブリンなど）を主成分とす
る高分子蛋白質の濃縮液が得られる。かかる濃縮
液の固型分濃度は約15〜20％に達する。 次に、得られた濃縮液を凍結乾燥法か、もしく
は苛酷条件を避けた噴霧乾燥法にて乾燥粉末化す
る。製品の総蛋白質中、アルブミンが40〜50に対
し、全グロブリンが50〜60の割合で含まれる精製
血漿が得られる。 以下本発明の実施例および応用例を挙げて説明
する。 実施例 一般飼育の成豚50頭から採取した新鮮血液約
150を約４℃まで冷却しつつ、クエン酸ナトリ
ウムを0.2〜0.5％添加した。次に、回転数
3000rpmの条件で遠心分離して上清液を集めた。
得られた上清液、分画分子量6000の限外過膜を
用い、無機塩、糖類および低分子量蛋白質を透析
除去した後、液量約30まで濃縮した。濃縮液中
の固型分は約19％であつた。かかる濃縮液を送風
温度130℃、排出口温度70〜75℃の条件で噴霧乾
燥して、本発明の精製血漿5.15Kgを得た。 得られた製品につき、大腸菌（E.coli 0111
Stoke）に対する抗菌作用を調べた。また同時に
比較対照として、市販の豚血液由来の血清乾燥粉
末についても大腸菌に対する抗菌作用を測定し
た。その結果を第１表に示す。 測定条件：肉汁液体培地に、各乾燥粉末を水に
溶解した無菌溶液を所定量添加して、大
腸菌を接種後、37℃、１夜培養した。

【表】 (注) ：生育良好 −：生育せず
このように、本発明品は、市販品よりも強力な
抗菌力をもつ精製血漿であることが認められる。 次に、本発明品と市販の血清乾燥品について、
各種の病原性大腸菌抗体を検定した。その結果、
第２表に示すとおり、本精製血漿は豚および牛由
来の大腸菌抗原の２種以上に有効であることがわ
かる。 測定方法：各粉末を生理食塩水にて５％濃度に
溶解した液を作成し、各大腸菌の死菌と
の凝集反応により、陽性は＋、陰性は−
と表示した。

【表】 (注) ※ 豚由来病原性大腸菌、※※ 牛由来
病原性大腸菌
さらに、本発明における精製血漿は、抗生物質
コリスチンと併用するとき、大腸菌に対する抗菌
力が相剰的に増すことが次の第３表から認められ
る。 測定条件：肉汁液体培地に、各添加物を水に溶
解し除菌した溶液を、所定量添加して、
大腸菌を接種後、37℃、１夜培養した。

【表】 (注) ：生育良好、−：生育せず
このことから、精製血漿およびコリスチンが共
存する時、各々単独に添加した時の有効濃度より
も非常に低い濃度において大腸菌の生育を抑制す
ることが可能である。 応用例 実施例１において得られた精製血漿５部、子豚
用人工乳95部（主成分：粗蛋白質22.0部、粗脂肪
3.0部、粗繊維2.0部、粗灰分3.5部、カルシウム
0.7部、リン0.6部）を混合したところの精製血漿
５％添加人工乳、および実施例１において得られ
た精製血漿３部、子豚用人工乳97部（主成分：上
記の同じ）、ならびに抗生物質コリスチンが
20ppmとなるよう混合して、精製血漿３％−コ
リスチン20ppm添加人工乳を調整した。 次に、これら精製血漿添加人工乳を病原性大腸
菌感染動物に給餌して、感染菌に対する効果を調
べた。 試験方法としては、LWH種の６日令豚を用
い、試験開始当日に健康状態が良好で、かつ体重
が1.35〜2.40Kgの子豚を選び、各区の体重分布が
ほゞ等しくなるように各群４頭ずつ区分けし、２
群は精製血漿添加試験区および精製血漿とコリス
チンの併用添加試験区、他の群は精製血漿を添加
しない対照試験区として実施した。 一方、実験動物への病原性大腸菌の感染は、給
餌開始24時間に各区へ１頭あたり1.5×10⁹個の
Escherichia coil（Ｏ−101，Ｋ−99）を経口投与
して行なつた。飼育期間中は、毎日各子豚の糞便
の性状を観察し、体重は試験開始時と７日後に測
定した。さらに病原性大腸菌の経口感染後、７日
目の直腸内容物中のEscherichia coli（Ｏ−101，
Ｋ−99）数を検査することによつて、本精製血漿
の病原性大腸菌に対する効果を判定した。試験結
果は第４表のとおりである。 なお、表中の記載事項についての説明は以下の
とおりである。 (1) 体重増加率＝試験終了時の平均体重−試験開始時の平均体重／試開始時の平均体重×100 (2) 体重増加率比＝試験区の体重増加率／対照試験区
の体重増加率 (3) 感染菌検出率：人工的経口感染７日目の直腸
内容物より分離された大腸菌コロニー
100個中に占める感染菌E.coli（Ｏ−
101，Ｋ−99）の割合で、大腸菌のＯ−
群、Ｋ−群標準抗血清と検出菌との細胞
凝集反応を行なわせて測定した。

【表】 上記の成績から明らかなように、本発明にかか
る精製血漿は、病原性大腸菌に対して有効であ
り、コリスチンとの併用においても効果が認めら
れる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 豚血液より分離した血漿を分画分子量6000〜
   13000の限外過膜により処理し、塩類、低分子
   量蛋白質および糖類等を除去して得られる高分子
   蛋白質を主成分とする精製された血漿。 ２ 精製された血漿が大腸菌に対し4000ppm以
   上の濃度で抗菌作用を示すものである特許請求の
   範囲第１項記載の血漿。 ３ 精製された血漿が豚もしくは牛由来の病原性
   大腸菌のうち２種以上の大腸菌に対して抗体価を
   示すものである特許請求の範囲第１項記載の血
   漿。