JPS625962A - デスモシン誘導体および人工抗原調製用試薬 - Google Patents

デスモシン誘導体および人工抗原調製用試薬

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JPS625962A
JPS625962A JP61064804A JP6480486A JPS625962A JP S625962 A JPS625962 A JP S625962A JP 61064804 A JP61064804 A JP 61064804A JP 6480486 A JP6480486 A JP 6480486A JP S625962 A JPS625962 A JP S625962A
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 この発明は、新規デスモシン銹導体および人工抗原調製
用試薬に関する。
〔従来の技術〕
肺内ではタンパク分解酵素の１つであるエラスターゼと
抗エラスターゼの均衡が保たれて込る。すなわち、肺の
弾性繊維のネットワークは、抗エラスターゼの作用で伸
展による障害から保護されていると言える。この均衡が
何らかの庫内で崩れた時に肺実質の主要成分であるエラ
ス・チン（弾性繊維）が無制御な分解を受け、肺胞が破
壊されて慢性閉塞性肺疾患（Ｃｈｒｏｎｉｃｏｂｓｔｒ
ｕｃｔＩｖｅ　ｐｕｌｍｏｎａｒｙ　ｄｌａｓａａｅ：
　Ｃ０ＰＤ　）と総称される病気を発生させると言われ
ている。生体内におけるエラスチン分解の様子を測定で
きる高感度な化学分析法があれば、肺等さまざまな組織
や器管の病態の変化を早期に検出するのに有効である。
エラスチンは分解されるとエラスチンにだけ見い出され
ているユニークなデスモシン等の架橋アミノ酸を含むペ
プチドとして尿中に排出される。従って、尿中のデスモ
シン排出量を分析することりでよって肺の病気の発生を
知ることができる。
最近、ハーレに（Ｈａｒｅｌ）ら〔アメリカン・レビュ
ー・レスノ平イラトリー・ディズイーズ（Ａｍ。
Ｒａｙ、　Ｒｅ５ｐｌｒ、　Ｄｉｓ、　）第１２２巻、
第７６９頁（１９８０）〕およびキング（Ｋｉｎｇ）ら
〔コネクティブ・ティシュ−柳リサーチ（Ｃｏｎｎｅｃ
ｔ、　Ｔｉ５ｓｕｅ　Ｒｅａ、）第７巻、第２６３頁（
１９８０）　］は、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ　、
放射免疫測定法）による尿中のデスモシンの分析法を発
表している。しかし、ＲＩＡによる方法は、放射性同位
元素を使用するため、人体に対する危険性のみならず、
環境汚染、廃棄物の問題、使用に伴う特別な施設の必要
性、半減期による使用期限の問題々ど一般的測定法とし
て多くの問題をかかえており、その急速な普及を阻害す
る一因となっていると考えられる。
さらに彼らの使用したデスモシン人工抗原はデスモシン
とタン／ｆりＷトラ１−　エチル−３−（３−ジメチル
アミノプロピル）カーがジイミド塩酸塩を用いて非選択
的にランダムに結合したものである。そのため抗体価の
極めて低い抗体しか得られておらず、彼らの分析法では
抗血清を２００〜２５０倍に稀釈するのが限界となって
いる。ここにもこの分析法を一般に普及させる上で大き
な問題がある。
そこで臨床化学検査の立場からＲＩＡＫ比較して人体に
対する危険もなく、環境汚染廃棄物の問題や使用に伴う
施設の必要性もなく、使用する試薬類も長期間安定した
状態で保存でき、一般に普及しやすｂエンデイムイムノ
アツセイ（ＥＩＡ　、酵素免疫測定法）によるデスモシ
ンの分析法開発が必要となっている。
〔発明が解決しようとする問題点〕
しかし、ＥＩＡは一般的に検出感度がＲＩＡ　ｒＣ比較
して１桁低いと言われている。−従ってＥＴＡに用いる
抗血清は竺体価の極めて高吟もの、が必要とされる。
したがって、この発明の目的は、抗体価の極めて高い抗
デスモシン抗血清を誘導することができる人工抗原を調
製するために用い、られる新規物質を提供することであ
る。
〔問題点を解決するための手段〕
上記問題点は、この発明によれば、一般式で示されるデ
スモシン誘導体を提供することによって解決される。た
だし、式（１）　において、θ Ｒは電子吸引性有機基、Ｘ　は陰イオン、およびｎは１
ないし６の整数である。
この発明のデスモシン誘導体は、式（Ｉ）で示されるよ
うに、ピリジニウム環の３位またＶｉ５位の倒錯に活性
ジスルフィド基が結合した化合物である。式（１）にお
いて、Ｒは電子吸引性有機基であればよいが、好ましく
け芳香族のものである。Ｒの具体例としては、ピリジル
基、アジドフェニル基およびフェニル基がある。
式（１）におりて、Ｘｏは、例えば酢酸イオン、ギ酸イ
オン、塩素イオン、臭素イオン、ヨウ素イオンなどの適
宜の陰イオンを意味する。この発明のデスモシン誘導体
を抗デスモシン抗体を誘導するための人工抗原の調製用
試薬として用いる場合に抗原決定基として作用するのは
陽イオンの部分であって、Ｘｏは何ら免疫応答反応に寄
与しないので、Ｘｏけ上記した例に限られるものではな
く、適尚ないずれの陰イオンであってよい。
式（１）において、ｎは１ないし６の整数であり、好ま
しくは２ないし４である。
この発明のデスモシン訪導体け、デスモシンまたはその
塩と式 ％式％（） （ここで、ｎは式（１）と同じ、Ａはエトキシ基、れる
活性化カルデン酸と反応させることによって製造できる
。
式（Ｉｔ）で示される活性化カルがン酸の具体例を挙げ
ると、エトキシカルがニル−３−（２−ピリジルジチオ
）プロピオネート、エトキシカルがニル−４−（２−ピ
リジルジチオ）ブチレート、エトキシカルボニル−５−
（２−ピリジルジチオ）バレレート、エトキシカルボニ
ル−６−（２−ピリジルジチオ）カプロネート、エトキ
シカルがニル−７−（２−ピリジルジチオ）カブリレー
ト、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ
）プロピオネート、Ｎ−スクシンイミジル−４−（２−
ビリジＰジオ）ブチレート、Ｎ−スクシンイミジル−５
−（２−ピリジルジチオ）バレレート、Ｎ−スクシンイ
ミジル−６−（２−ピリジルジチオ）カプロネート、Ｎ
−スクシンイミジル−７−（２−ピリジルジチオ）カブ
リレート、Ｎ−マレインイミジル−３−（２−ピリジル
ジチオ）プロピオネート、Ｎ−マレインイミジル−４−
（２−ピリジルジチオ）ブチレート、Ｎ−マレインイミ
ジル−５−（２−ピリジルジチオ）バレレート、Ｎ−マ
レインイミジに−６−（２−ピリジルジチオ）カプロネ
ート、Ｎ−マレインイミジル−７−（２−ピリジルジチ
オ）カブリレート、エトキシカルボニル−３−（４−ア
ジドフェニルジチオ）ゾロピオネ−）　、エトキシカル
がニル−４−（４−７ジドフエニルジチオ）ブチレート
、エトキシカルボニルー　５−　（４−７シトフエニル
ジチオ）バレレート、エトキシカルがニル−６−（４−
７ジドフエニルジチオ）カプロネート、エトキシカルが
ニル−７−（４−アシドフェニルジチオ）カブリレート
、Ｎ−スクシンイミジル−３−（４−アジドフェニルジ
チオ）プロピオネート、Ｎ−スクシンイミジル−４−（
４−アジドフェニルジチオ）ブチレート、Ｎ−スクシン
イずジル−５−（４−アジドフェニルジチオ）バレレー
ト、Ｎ−スクシンイミジル−６−（４−アジドフェニル
ジチオ）カプロネート、Ｎ−スクシンイミジル−７−（
４−アジドフェニルジチオ）カブリレート、Ｎ−マレイ
ンイミジル−３−（４−アジドフェニルジチオ）プロピ
オネート、Ｎ−マレインイミジル−４−（４−アジドフ
ェニルジチオ）ブチレート、Ｎ−マレインイミジル−５
−（４−アシドフェニルジチオ）バレレート、Ｎ−マレ
インイミジル−６−（４−アジドフェニルジチオ）カプ
ロネート、Ｎ−マレインイミジル−７−（４−アジドフ
ェニルジチオ）カブリレート等である。
デスモシンと活性化カルがン酸との反応は、これらをモ
ル比１：０５ないし１：１．５．好１しくは１：１．０
５の割合で用い、０℃ないし３０℃、好ましくは１５℃
ないし２０℃の温度でおこなう。反応時間は、通常、１
ないし５時間である。
この反応は、リン酸緩衝液中のＰＩ−１５，０〜６．５
の条件の下でおこ彦うことが重要である。この−条件の
下で反応をおこなうことによって、デーＩ〇− スモシンのピリジニウム環３位または５位側鎖のアミノ
基が選択的に活性化カルがン酸と反応してアミド結合を
形成する。反応生成物はカラムクロマトグラフィーによ
り単離できる。
この発明のデスモシン銹導体は、これをチオール基を有
する相体ポリマーと結合させることができる。デスモシ
ン誘導体と担体ポリマーとの反応はチオール−ジスルフ
ィド交換反応であり、デスモシン訪導体のデスモシン部
分け、この反応により、Ｒ−８Ｈの離脱をともなってジ
スルフィド結合により担体ポリマーに結合される。
こうして、抗デスモシン抗体を誘導するための人工抗原
を得ることができる。チオール−ジスルフィド交換反応
は、デスモシン誘導体と担体ポリマーとをモル比１０：
１ないし２０：ｌの割合で用い、０℃ないし３０℃の温
度で１時間なＬｎｌ、５時間おこなう。
人工抗原の製造に用いられる相体ポリマーは分子内にチ
オール基を有し生体適合性があるものであれば、天然ま
たは合成のいずれのものでもよく、ポリペプチド（タン
ノ母り質を含む）およびそれ以外のポリマーが含まれる
。その具体例を挙けると、ウシガンマグロブリン（ＲＧ
Ｇ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）　、マウスガンマ
グロブリン（ＭＧＧ）　、マウス血清アルブミン（ＭＳ
Ａ）、マタニキーホールリンペットヘモシアニン（Ｋｅ
ｙｈｏｌｅ　Ｌｌｍｐｅｔ　Ｈｅｍｏｃｙａｎｉｎ）の
分子内ジスルフィド結合をジチオスレイトールで還元し
てチオール化したものである。このチオール化は例えば
「アナリティカル・バイオケミストリー」第９４巻、２
５３〜２５８頁（１９７９）　Ｋ記載の方法によってお
こなうことができる。
このようにしてこの発明のデスモシン！導体と相体ポリ
マーとを結合すると、式（１）で示される構造式から明
らかなように、デスモシンの構造、特にその特徴的なピ
リジニウム環に結合する他の３個のアミノ酸残基に何ら
の変化を与えず、さらに相体ポリマーとデス上シフ１分
子とを１個の架橋で結合することになり、デスモシンの
抗原決定基となるべき構造が完全に分子表面に露出した
人工抗原が得られる。従って、この人工抗原を用いると
、極めて抗体価の高騒抗デスモシン抗血清が得られる。
〔実施例〕
実施例１ デス上シン３９ダを５０−の三角コルベン中で２５−の
０．１　Ｍ　ＮａＣ１を含むリン酸バッファ（０，０５
Ｍ、ｐＨ５，９）に溶解した。別にＮ−サクシンイミジ
ルー３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート２３９
を３−のエタノールに溶解し、これを上記デスモシン溶
液にゆっくりと滴下しながら３時間室温でかきまぜた。
反応後、ロータリーエバポレーターで溶媒を除去した後
、セファデックスＧ−２５スー／ｆ−ファイン（ファル
マシア・ファイン・ケミカルズ社製商品名）のカラム（
直径１．５ｃＩＩＬ＋高さ９０ｃｍ　）に添加して酢酸
バッファ（０，１Ｍ　、　ｐ！（４，５）により流速０
．１　ｍ／／分で溶出し、３ゴずつ試験管に分取して反
応生成物を分離した。まず、未反応のデスモシン（２６
〜２９本目）、次にこの発明のデスモシン誘導体（３３
〜３５本目）、そｊ〜で最後に副反応生成物（３７〜４
０本目）のＨに溶出した。この発明のデスモシン誘導体
が含まれる画分からロータリーエバポレーターで溶媒を
除去した稜、バイオグルＰ−２（−４００メツシユ）（
バイオ・ランド・ラバラドリーズ社製商品名）のカラム
（直径２．５ｃＩｒＬ＋高さ９１儒）に添加し、０，１
Ｍ酢酸で溶出して脱塩を行なった。凍結乾燥後、淡黄色
固体１５．６１１＆（収率３０係）を得た。
得られた淡黄色固体を’ＨＮＭＲ（溶媒Ｄ２０．内部標
準ＤＳＳ　）　、質量スペクトル（ＭＳ）、紫外線吸収
スペクトル（ＵＶ　）で調べた結果、純度９７チ以上の
所望デスモシン誘導体であることが認められた。得られ
た分析データは次のとおシでである。
’ＨＮＭＲ（溶媒Ｄ２０．内部標準ｎｓｓ　）　（ｐｐ
ｍ）１．４０　（ｍ、］ＩＨ、１，４７（ｍ、　ＩＨ）
、　１．５９　（ｍ、　０１）。
１．６７　（ｍ、ＩＨ）、　１．８９　（ｍ、２Ｈ）、
　２．０６　（ｓ、３Ｈ）。
１．９６〜２．１　］　（ｍ、４）１）、　２．１７　
（ｍ、４Ｈ）、　２．７８（ｍ、２Ｔ（）。
２．９０　（ｍ、４／Ｈ）、　３．０２　（ｍ、２Ｈ）
、　３．１２　（ｔ、２Ｈ）。
３．７３（ｔ、ＩＨ）、　３．７９（ｍ、ＩＨ）、　３
．８８（ｍ、２Ｈ）。
４．４８　（ｔ、２Ｈ）、　７．３０　（ｔ、　ＩＨ）
、　７．８４　（ｍ、２Ｈ）。
８．３９　（ｄ、ＩＨ）、　８．４６　（ｓ、ＩＨ）、
　８．５２　（ｓ、　ＩＨ）ＭＳ　（ｍＨｚ　）　：　
７２３ を工Ｖ（溶媒０．１Ｎ酢酸）：λ（ｍａｘ）　：２３６
ｎｍ、２７６ｎｍ、（Ｍ、２７０ｎｍ）実施例２ デスモシンテトラアセテート塩３８１ｖ（６５μモル）
を５０−の三角コルベン中で２５−の０、　Ｉ　Ｍ　Ｎ
ｔｓＣｌを含むリン酸バッファ（０，０５Ｍ、ＰＨ５，
９）に溶解した。別にＮ−サクシンイミジル−３−（４
−アジドフェニルジチオ）プロピオネ−）　器＝＝＝ｉ
ｍ　！を３−のジメチルホルムアミドに溶解し、これを
上記デスモシン溶液にゆっくりと滴下しながら３時間室
温でかきま、ぜた。反応後、ロータリーエバポレーター
で溶媒を除去した後、バイオダルＰ−２（−４００メツ
シユ）のカラム（直径２．５　（ｊｍ　＋高さ９１鋼）
に添加し、０．１　Ｍ酢酸で１０−ずつ分取し、分離お
よび脱塩をおこなった。２３〜２５本目を凍結乾燥後、
所望のデスモシン誘導体を淡黄色固体として得た。収量
２５■。
分析結果； ＵＶ（溶媒０．ＩＮ酢酸）：λｍａｘ　：２２６　ｎｍ
　＊　２６９　ｎｍ　＊ （屑、２３８ｎｍ、２７６ｎｍ） 実施例３ 「アナリティカル・バイオケミストリー」第９４巻２５
３〜２５８頁（１９７９）に記載の方法によりウシガン
マグロブリン（ＢＧＧ）の分子内ジスルフィド結合をジ
チオスレイトールで還元してチオール化した。このチオ
ール化ＢＧＧ２０ｑを０、１　Ｍ　Ｎ＊Ｃ１及び６Ｍ尿
素を含むリン酸バッファ（ｐＨ７，５、０，１Ｍ　）　
１０−に溶解し、これに実施例１のデスモシン誘導体４
．６７Ｗｖを加えて室温で４５分間かきまぜ反応させた
。この反応溶液に１５−の１０係トリクロル酢酸を加え
、３０００ｒｐｍ　、　１０分間遠心分離をおこなった
。上清を除き、この白色沈殿に１−の水を加えて遠心分
離して洗浄した。得られた白色沈殿は凍結乾燥し、１７
■の白色粉末を得た。このデスモシン人工抗原のデスモ
シンとＢＧＧとの結合比を、上記反応溶液の３４３　ｎ
ｍにおける紫外吸光度を測定してチオール−ジスルフィ
ド交換反応により遊離したピリジン−２−チオンを定量
し、チオール化ＢＧＧの分子量を１５００００として計
算で求めた結果、デスモシン／　ＢＧＧ　（モル比）Ｈ
ＩＯであった。
実施例４ 実施例３で得られたデスモシン人工抗原１．４５■に０
．３−の８Ｍ尿素を加え溶解し、さらに０５−の生理食
塩水（０，９％）を加えて混合し、これを当量のフロイ
ントの完全アジュバントと良く混合して乳化させ、ウサ
ギにュージーランドホワイト種雄、体重３．５　ｋｇ）
の指掌部６カ所に注射した。２回目の免疫化は、デスモ
シン人工抗原１．５３　Ｗに０．１−の８Ｍ尿素を加え
て完全に溶解させ、さらに０，６−の生理食塩水（０，
９１）を加えて混合し、これを等量のフロイントの不完
全アジュバントと良く混合して乳化させ、背部皮下１０
カ所に注射することによって、９日後におこなった。以
後追加免疫は２週間ごとに本化合物０．１りを１００μ
！の生理食塩水に乳化したものを耳の静脈に注射するこ
とによって計５回おこなった。免疫に用いた３羽のウサ
ギ金側に抗体価の上昇を認め、用量曲線も描かれ、本発
明のデスモシン誘導体から調製された人工抗原によって
得られた抗体がデスモシンに特異的なものであることが
証明された。全採血は最終注射後１１日目（初回免疫後
９１日目）に前日から絶食させたウサギのケイ動脈から
おこなった。
実施例５ 実施例４で得られた抗デスモシン抗血清を用いて、デス
モシンを酵素免疫測定した。
常法によりカーがジイミド法で調製したデスモシンとキ
ーホールリンペットヘモシアニンの複合体一定量を９６
穴のＥＴＡ用マイクロプレートのウェルにコーティング
し、デスモシンをウェル壁に結合させた。さらに、その
ウェルに分析対象試料として各種濃度のデスモシン（遊
離型）の溶液を加え、さらに上記方法で得られた抗血清
を最終的に３００００倍の稀釈となるように加えて抗原
抗体反応をおこなわせた。反応後、遊離型デスモシンを
分離して結合型デスモシンと反応した抗デスモシン抗体
とアルカリフォスファターゼ標識ヤギ（抗ウサギＴｇＧ
　）抗体とを結合させ、その酵素活性を測定した。この
方法では、抗デスモシン抗体と結合型デスモシンとの抗
原抗体反応に対する遊離型デスモシンの拮抗阻害を測定
することにより遊離型デスモシンの濃度を測定している
。この結果、添付の図に示すように３００００倍に稀釈
した血清を用いて１０′″’１１７ｍ１の微量のデスモ
シンの測定が可能であった。なお、図中の「結合型デス
モシンと抗デスモシン抗体の反応の阻害率（係）」は、
次のようにして求められる。
（ただし、Ａはデスモシンを含んでいない試料による対
照の酵素活性を示し、Ｂはデスモシンを含んでいる試料
による酵素活性を示す）この実験結果から、この発明の
デスモシン誘導体を結合した人工抗原によって誘導され
た抗デスモシン抗血清は、従来技術の抗血清と比較して
さらに１００倍以上に稀釈して分析に用いることができ
、極めて抗体価の高いものであることがわかる。
〔発明の効果〕
この発明は以上述べた通りの新規デスモシン誘導体を提
供するものであり、とのデスモシン誘導体は酵素免疫測
定法によるデスモシンの分析に有用な抗体価の高い抗デ
スモシン抗体を誘導する人工抗原を調製するだめの試薬
として優れている。
【図面の簡単な説明】
図はこの発明のデスモシン誘導体を結合した人工抗原を
用いて誘導した抗デスモシン抗血清を用いておこなった
デスモシンの酵素免疫測定の結果を示すグラフ図。 特許′出願人、　　日本たばこ産業株式会社０１１　　
　　　　　Ｔｏ　　　　　　１００　　　　　１１００
０（ｎ７ｍり

Claims (6)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （ここで、Ｒは電子吸引性有機基、Ｘ＾■は陰イオン、
    およびｎは１ないし６の整数） で示されるデスモシン誘導体。
  2. （２）Ｒがピリジル基であり、ｎが２である特許請求の
    範囲第１項記載のデスモシン誘導体。
  3. （３）Ｒがアジドフェニル基であり、ｎが２である特許
    請求の範囲第１項記載のデスモシン誘導体。
  4. （４）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （ここで、Ｒは電子吸引性有機基、Ｘ＾■は陰イオン、
    およびｎは１ないし６の整数） で示されるデスモシン誘導体からなる、抗デスモシン抗
    体を誘導するための人工抗原調製用試薬。
  5. （５）Ｒがピリジル基であり、ｎが２である特許請求の
    範囲第４項記載の試薬。
  6. （６）Ｒがアジドフェニル基であり、ｎが２である特許
    請求の範囲第４項記載の試薬。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008265094A (ja) * 2007-04-18 2008-11-06 Daiichi Insatsu:Kk 糊綴じ冊子、糊綴じ冊子の製造方法、並びに糊綴じ冊子の製造装置
JPWO2014119479A1 (ja) * 2013-02-01 2017-01-26 学校法人上智学院 デスモシン、イソデスモシン、およびその誘導体の製造方法
JP2019167301A (ja) * 2018-03-22 2019-10-03 学校法人上智学院 複合体

Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4841055A (en) * 1985-03-25 1989-06-20 Japan Tobacco Inc. Desmosine derivatives and reagent for preparing artificial antigens
DE3809986A1 (de) * 1988-03-24 1989-10-05 Boehringer Mannheim Gmbh Verbindungen zur einfuehrung einer sh-gruppe in tyrosin
US7879840B2 (en) * 2005-08-25 2011-02-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors
US7312044B2 (en) 2003-03-07 2007-12-25 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Type 1 ryanodine receptor-based methods
US20040229781A1 (en) * 2000-05-10 2004-11-18 Marks Andrew Robert Compounds and methods for treating and preventing exercise-induced cardiac arrhythmias
US6489125B1 (en) * 2000-05-10 2002-12-03 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for identifying chemical compounds that inhibit dissociation of FKBP12.6 binding protein from type 2 ryanodine receptor
US7718644B2 (en) * 2004-01-22 2010-05-18 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Anti-arrhythmic and heart failure drugs that target the leak in the ryanodine receptor (RyR2) and uses thereof
US8022058B2 (en) 2000-05-10 2011-09-20 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors
US7393652B2 (en) * 2000-05-10 2008-07-01 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Methods for identifying a chemical compound that directly enhances binding of FKBP12.6 to PKA-phosphorylated type 2 ryanodine receptor (RyR2)
US20040048780A1 (en) * 2000-05-10 2004-03-11 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for treating and preventing cardiac arrhythmia
US20060293266A1 (en) * 2000-05-10 2006-12-28 The Trustees Of Columbia Phosphodiesterase 4D in the ryanodine receptor complex protects against heart failure
US7544678B2 (en) * 2002-11-05 2009-06-09 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Anti-arrythmic and heart failure drugs that target the leak in the ryanodine receptor (RyR2)
US8710045B2 (en) * 2004-01-22 2014-04-29 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the ryanodine receptors
US7704990B2 (en) * 2005-08-25 2010-04-27 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Agents for preventing and treating disorders involving modulation of the RyR receptors
US20130273580A1 (en) * 2012-04-17 2013-10-17 Barry C. Starcher Elisa assay kit, elisa for determining desmosine levels from urine samples and diagnostic urine assays for aneurysms

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008265094A (ja) * 2007-04-18 2008-11-06 Daiichi Insatsu:Kk 糊綴じ冊子、糊綴じ冊子の製造方法、並びに糊綴じ冊子の製造装置
JPWO2014119479A1 (ja) * 2013-02-01 2017-01-26 学校法人上智学院 デスモシン、イソデスモシン、およびその誘導体の製造方法
JP2019167301A (ja) * 2018-03-22 2019-10-03 学校法人上智学院 複合体

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