JPS6271861A - 免疫反応成分測定法及び該方法を実施するための試薬 - Google Patents
免疫反応成分測定法及び該方法を実施するための試薬Info
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- JPS6271861A JPS6271861A JP61212867A JP21286786A JPS6271861A JP S6271861 A JPS6271861 A JP S6271861A JP 61212867 A JP61212867 A JP 61212867A JP 21286786 A JP21286786 A JP 21286786A JP S6271861 A JPS6271861 A JP S6271861A
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- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は温度１５〜４０℃で免役検定原理に従来技術
免疫測距法は広く行なわれている。この際、均一相での
反応も、不均一相での反応もある。
反応も、不均一相での反応もある。
不均一相での実施形において反応成分の１つは担体に結
合している。不均一相での免疫ｍｌｌ定の実施のために
は種々の方法、例えばサンドイツチ法、ｆｌｌｆｆｌ法
及び競合法が公知である。サンドイツチ法においては抗
体？！−担体に結合し、テスト溶液を添加し、この際テ
スト浴液中に含Ｍさ、ルる特別な抗原は抗体に結合する
。次いで抗原抗体複合体に関して又は該複合体の−Ｓに
関しては特異的な標識抗体ｒ添加し、該抗体が祷合体／
Ｃ結合する。択一で標識抗体を介して抗原の量を計二痒
することができる。１１１１接法においては抗原が担体
材料に結合している。テスト溶液をこれに加え、この際
テスト浴液に含有さｎている、吸着さ；ｊＬ７ｃ抗原に
関して時異的な抗体が抗原と反応する。標識され九抗グ
ロブリンの添加において尻グロブリンは抗原抗体競合体
に結合し、テスト血漿中の未知の抗体の量は標識抗グロ
ブリンを介してＮ−ｈび測定することができる。
合している。不均一相での免疫ｍｌｌ定の実施のために
は種々の方法、例えばサンドイツチ法、ｆｌｌｆｆｌ法
及び競合法が公知である。サンドイツチ法においては抗
体？！−担体に結合し、テスト溶液を添加し、この際テ
スト浴液中に含Ｍさ、ルる特別な抗原は抗体に結合する
。次いで抗原抗体複合体に関して又は該複合体の−Ｓに
関しては特異的な標識抗体ｒ添加し、該抗体が祷合体／
Ｃ結合する。択一で標識抗体を介して抗原の量を計二痒
することができる。１１１１接法においては抗原が担体
材料に結合している。テスト溶液をこれに加え、この際
テスト浴液に含有さｎている、吸着さ；ｊＬ７ｃ抗原に
関して時異的な抗体が抗原と反応する。標識され九抗グ
ロブリンの添加において尻グロブリンは抗原抗体競合体
に結合し、テスト血漿中の未知の抗体の量は標識抗グロ
ブリンを介してＮ−ｈび測定することができる。
競と法に２いては免疫反応の結合成分の１つが指体材料
に結合している。次いで、未！５］量の免疫７３１？応
の曲の成分で含有し、かつ免疫反応の標識さｎた他の成
分公知量を金石する溜液を加える。標識さｎた成分と非
標識の成分は指体に結合した免疫反応成分の結合位ｔ−
競合する。更に、第２の試料に泳鐵成分のみと′＠肩す
る標準浴液を加える。標準及び試料中の＃！繊酸成分測
定により、砂差から未知量反応成分を計算する。
に結合している。次いで、未！５］量の免疫７３１？応
の曲の成分で含有し、かつ免疫反応の標識さｎた他の成
分公知量を金石する溜液を加える。標識さｎた成分と非
標識の成分は指体に結合した免疫反応成分の結合位ｔ−
競合する。更に、第２の試料に泳鐵成分のみと′＠肩す
る標準浴液を加える。標準及び試料中の＃！繊酸成分測
定により、砂差から未知量反応成分を計算する。
測定のためのもう１つの可能性は抗体又は抗体フラグメ
ントであってよい６橿のレセプターを用いて少なくとも
２価の抗原において、碍らｎる。不均一相中の６Ｍ１．
のレセ・ブタ−での免疫検定の実施において、６８Ｉの
レセプターの１徳は常に不溶性であり、他の２梅に可溶
性であり、この際両方の可溶性のレセプターの１ ａｌ
は標識さｎており、他方はａ繊されていない。不溶性レ
セプターは非＃識可溶性しセゾターに向けられている。
ントであってよい６橿のレセプターを用いて少なくとも
２価の抗原において、碍らｎる。不均一相中の６Ｍ１．
のレセ・ブタ−での免疫検定の実施において、６８Ｉの
レセプターの１徳は常に不溶性であり、他の２梅に可溶
性であり、この際両方の可溶性のレセプターの１ ａｌ
は標識さｎており、他方はａ繊されていない。不溶性レ
セプターは非＃識可溶性しセゾターに向けられている。
測定の実施のためには種々の方法が可能であり、１工程
法でも、個々のレセプターの泳加七変えることができる
多工程であってもよい。
法でも、個々のレセプターの泳加七変えることができる
多工程であってもよい。
もう１つの方法は試料中の測定すべき抗原を第１の工程
で可溶性で非標識のレセプター及び可溶性標識レセプタ
ーと同時に溶液で混合１−１次いで生じた可溶性サンド
イッチ錯体？Ｗ：、２の工程で不溶性レセプターに結合
させることにより不溶性にすることよりなる。
で可溶性で非標識のレセプター及び可溶性標識レセプタ
ーと同時に溶液で混合１−１次いで生じた可溶性サンド
イッチ錯体？Ｗ：、２の工程で不溶性レセプターに結合
させることにより不溶性にすることよりなる。
唖応成分の標識のためには種々の可能性が公知である。
こうして反応成分の１つを放射性に標識することができ
、この際測定した放射能は測定すべき反応成分の計算を
可能とする。更に、酵素で標識する。こともできる。免
疫測定の通常の工程の実施後、標識として使用した酵素
のための基質を添加し、次いでこの反応を介して測定す
べき反応成分の一度全計算する。もう１つの円節性は螢
光物質での標識であり、この際螢光を直接測定すること
ができるか、又は色素と共に行なうが、この際評価はス
ペクトル分析又は光度測定によジ行なわれる。
、この際測定した放射能は測定すべき反応成分の計算を
可能とする。更に、酵素で標識する。こともできる。免
疫測定の通常の工程の実施後、標識として使用した酵素
のための基質を添加し、次いでこの反応を介して測定す
べき反応成分の一度全計算する。もう１つの円節性は螢
光物質での標識であり、この際螢光を直接測定すること
ができるか、又は色素と共に行なうが、この際評価はス
ペクトル分析又は光度測定によジ行なわれる。
免疫検定は非常に感度が高く、かつこの方法により物質
はピコグラムの範囲まで検出されるので重要性が増して
いる。しかしながら、不均一相での・免疫測定は異なる
程度に分析に特異的でない干渉、いわゆる非特異的妨害
により誤差を生じ、これはすでに１マトリツクス効果１
″′パツクグラウンド“及び１非特異的結合１と呼ばれ
ている。測定すべき物質の検出は血清試料におけるより
血漿試料において明らかに低いということが妨害の関与
を明らかにしている。
はピコグラムの範囲まで検出されるので重要性が増して
いる。しかしながら、不均一相での・免疫測定は異なる
程度に分析に特異的でない干渉、いわゆる非特異的妨害
により誤差を生じ、これはすでに１マトリツクス効果１
″′パツクグラウンド“及び１非特異的結合１と呼ばれ
ている。測定すべき物質の検出は血清試料におけるより
血漿試料において明らかに低いということが妨害の関与
を明らかにしている。
この非特異的な妨害は一部未卸の試料成分に起因する。
同様に、免疫測定の感度は使用した免疫試薬との又は分
析試薬との妨害ファクターの非特異的相互作用により悪
くなる。血清中での弁疫測定においてより血漿中での免
疫測定において非特異的妨害は強く現われるということ
ｔ５１認することができ九。従って、測定における検出
は血清においてより血漿において著しく低く、他方競合
テストにおいては血漿中での検出は高すぎる。従って、
この妨害の原因は血漿中にはなお存在するが、血清中に
はもはや存在し々い凝固タンパク質に起因する。凝固タ
ンパク質唸担体材料の表面上に付着し、こうして抗原抗
体反応もしくは抗原接合体反応を妨害する。
析試薬との妨害ファクターの非特異的相互作用により悪
くなる。血清中での弁疫測定においてより血漿中での免
疫測定において非特異的妨害は強く現われるということ
ｔ５１認することができ九。従って、測定における検出
は血清においてより血漿において著しく低く、他方競合
テストにおいては血漿中での検出は高すぎる。従って、
この妨害の原因は血漿中にはなお存在するが、血清中に
はもはや存在し々い凝固タンパク質に起因する。凝固タ
ンパク質唸担体材料の表面上に付着し、こうして抗原抗
体反応もしくは抗原接合体反応を妨害する。
非特異性の相互作用を減少さゼるために、免疫測定にお
いて恒温保持媒体に一定の界面活性剤を添加することは
従来公知である。しかしながら、この方法の欠点は所望
の、すなわち分析特異性抗原抗体反応にその場度におい
て影響を与え、こむにより再たび感度の減少音引き起こ
すということである。更に、界面活性剤の公知適用にお
いては、固体相免疫検定において界面活性剤が吸着的に
結合している分子を固体表面から押しのけるという問題
も生じ次。免疫検定の９能はこれにより著しく妨害され
る。
いて恒温保持媒体に一定の界面活性剤を添加することは
従来公知である。しかしながら、この方法の欠点は所望
の、すなわち分析特異性抗原抗体反応にその場度におい
て影響を与え、こむにより再たび感度の減少音引き起こ
すということである。更に、界面活性剤の公知適用にお
いては、固体相免疫検定において界面活性剤が吸着的に
結合している分子を固体表面から押しのけるという問題
も生じ次。免疫検定の９能はこれにより著しく妨害され
る。
ツウイーン２０のような界面活性剤が恒温保持緩衝剤中
でプラスマ通用性（Ｍ＆ｇｍａ ｇｉＬｎｇｉｇｋｅｉ
ｔ）をつくることは公知である。しかしながら、この１
の界面活性剤は、これが０．０１ ％より高い漬度にお
Ｉ＾て担体材料に結合している反応成分１分離させ、こ
のことは再たび免疫測定にマイナスの影響を与えるとい
う欠点上層している。
でプラスマ通用性（Ｍ＆ｇｍａ ｇｉＬｎｇｉｇｋｅｉ
ｔ）をつくることは公知である。しかしながら、この１
の界面活性剤は、これが０．０１ ％より高い漬度にお
Ｉ＾て担体材料に結合している反応成分１分離させ、こ
のことは再たび免疫測定にマイナスの影響を与えるとい
う欠点上層している。
発明が解決しようとする問題点
本発明の目的は、不均一相における免疫測定において非
分析特異的、したがって不所望な非特異的妨害が押さえ
られている方法を見い出すことであった。更に、抗体及
び抗原／ハシテンの間の反ｉｆ妨害せず、かつ吸着的に
結合した反応成分を担体から脱着させず、かつａ脆化剤
として酵素ａ識免疫試薬で使用する時、酵素活性を減少
させない方法を見い出すことが本発明の目的であつ九。
分析特異的、したがって不所望な非特異的妨害が押さえ
られている方法を見い出すことであった。更に、抗体及
び抗原／ハシテンの間の反ｉｆ妨害せず、かつ吸着的に
結合した反応成分を担体から脱着させず、かつａ脆化剤
として酵素ａ識免疫試薬で使用する時、酵素活性を減少
させない方法を見い出すことが本発明の目的であつ九。
本発明のもう１つの目的は免疫反工６の促進であり、こ
れによる分析時間の短縮でもある。
れによる分析時間の短縮でもある。
問題点を解決するための手段
これらの目的を達成するために、本発明は反応成分の１
つが固相である免疫反応の成分を温度１５〜４０°０で
免疫険定原理により、測定するために、２０より大きい
１（ＬＢ値ｔ−Ｗする界面活性剤を添加することを特命
とする免疫反応成分測定法を提案している。
つが固相である免疫反応の成分を温度１５〜４０°０で
免疫険定原理により、測定するために、２０より大きい
１（ＬＢ値ｔ−Ｗする界面活性剤を添加することを特命
とする免疫反応成分測定法を提案している。
２０より大きいＨＬＢ ［ｉ ！する界面活性剤は免疫
測定において不所望な反応を抑圧することができ、同時
に抗体と抗原もしくはハシテンとの閾の反応金妨げるこ
とも、吸着的に結合した反応成分の脱着に作用すること
もないといりことが確認されたことは意外であった。酵
素活性の妨害も昭められなかった。更に、本発明による
薬剤の添加は免疫反応の促進に導ひく。
測定において不所望な反応を抑圧することができ、同時
に抗体と抗原もしくはハシテンとの閾の反応金妨げるこ
とも、吸着的に結合した反応成分の脱着に作用すること
もないといりことが確認されたことは意外であった。酵
素活性の妨害も昭められなかった。更に、本発明による
薬剤の添加は免疫反応の促進に導ひく。
２０ｔ−越えるＨＴ、＋Ｂ値を有する界面活性剤として
、場合により中心分子（Ｚｅｎｔｒａ１ｍｏ’１ｅｋｉ
ｉｌ ）として炭素原子数２〜４のアルキレンジアミン
を有していてよい、炭素原子数２〜４のアルキレンオキ
シドをペースとする非イオン性プ四ツク：！ポリマー界
面活性剤を使用するのが有利である。
、場合により中心分子（Ｚｅｎｔｒａ１ｍｏ’１ｅｋｉ
ｉｌ ）として炭素原子数２〜４のアルキレンジアミン
を有していてよい、炭素原子数２〜４のアルキレンオキ
シドをペースとする非イオン性プ四ツク：！ポリマー界
面活性剤を使用するのが有利である。
有利なブロックコポリマーは一般式Ｉ
ＨＯ（ＯＨＯＨ２０）、（ＯＨＯＨ２０）ｂ（ＯＨ２Ｃ
Ｈ＊ＯＪ＆Ｈ−Ｈ３ 〔式中、ａは３０〜１５０、特に有利（（６０〜ＩＵＯ
の間のグであってよく、かつ１）Ｕｌ ５〜６０、特に
有利に２５〜４０の間の値であってよいコの化合物であ
る。これらの化合物はポロキサマー（Ｉ’ｏｌｏｘａｍ
ｅｒ ）と呼ばれる。商品名は例えばゾル四ニック（Ｐ
ｌｕｒｏｎｉｏ＠）である。
Ｈ＊ＯＪ＆Ｈ−Ｈ３ 〔式中、ａは３０〜１５０、特に有利（（６０〜ＩＵＯ
の間のグであってよく、かつ１）Ｕｌ ５〜６０、特に
有利に２５〜４０の間の値であってよいコの化合物であ
る。これらの化合物はポロキサマー（Ｉ’ｏｌｏｘａｍ
ｅｒ ）と呼ばれる。商品名は例えばゾル四ニック（Ｐ
ｌｕｒｏｎｉｏ＠）である。
ポロキサマーの基において、全分子中の親水性ポリオキ
シエチレンの部分が６０〜９０チである化合物が特に好
適である。
シエチレンの部分が６０〜９０チである化合物が特に好
適である。
更に、有利であるのは一般式■
−ロＨ３αＨ３
〔式中、Ｘは１０〜５０．特に有利に１５〜３０の値で
あってよく、ｙは５０〜１５０、％に有利に４０〜１２
０の値であってよい〕のブロックコポリマーであり、こ
れはポロキサマー（Ｐｏ１ｏｘａｕｉｎθ）と呼ばれる
。このようなボロキサミンの市販名は、例えばテトロニ
ツク（Ｔｅｔｒｏｎｉａ＠ ）である。前記の界面活性
剤のうちで、ＨＩ、Ｅ［が２４〜３０のものが最も有利
である。
あってよく、ｙは５０〜１５０、％に有利に４０〜１２
０の値であってよい〕のブロックコポリマーであり、こ
れはポロキサマー（Ｐｏ１ｏｘａｕｉｎθ）と呼ばれる
。このようなボロキサミンの市販名は、例えばテトロニ
ツク（Ｔｅｔｒｏｎｉａ＠ ）である。前記の界面活性
剤のうちで、ＨＩ、Ｅ［が２４〜３０のものが最も有利
である。
弁面活性物質′Ｖ文応配合物の１贋に対して］、４〜５
（ＣＩテｆ Ｑｆル。
（ＣＩテｆ Ｑｆル。
本発明の方法に訃いて、親水性ポリオキシエチレン３１
の部分が５０〜９０チを有するポロキサミンを使用する
のが特に有利である。
の部分が５０〜９０チを有するポロキサミンを使用する
のが特に有利である。
本発琥によ、？８界面活性剤の添加は、血漿への添２７
［においても、血清への添加においても有利である。両
方の場合において、反心の促進丁バ現われ、非特異的妨
害の阻止、このために特に血漿中での峙に敏感な測定が
達せられる。
［においても、血清への添加においても有利である。両
方の場合において、反心の促進丁バ現われ、非特異的妨
害の阻止、このために特に血漿中での峙に敏感な測定が
達せられる。
本発明方法はすべての種類の血漿に関して適用可能であ
る。こうして安定化のためにＥＤＴΔと混合した血漿に
も、ヘパリン又はクエ：／辰と混合した血漿にも使用す
ることができる。
る。こうして安定化のためにＥＤＴΔと混合した血漿に
も、ヘパリン又はクエ：／辰と混合した血漿にも使用す
ることができる。
界面活性剤の添加は測定に使用した溶液すべてにおいて
行なうことができるウニ工程法においては、両方の緩衝
剤に、すなわち画工１のそれぞれにおいて、界面活性剤
を添加する時特にを含有する第１の恒温保持溶液で先ず
処理する。
行なうことができるウニ工程法においては、両方の緩衝
剤に、すなわち画工１のそれぞれにおいて、界面活性剤
を添加する時特にを含有する第１の恒温保持溶液で先ず
処理する。
その後、洗浄し、引き続き第２の工程で接合体溶液を添
加し、新たに恒温保持する。
加し、新たに恒温保持する。
接合体溶液は接合体及び緩衝剤並びに場合によりその他
の常用の添加物を含有している。該接合体は測定すべき
物質のｔめの又に固相成分のための免疫学的反応成分か
ら成り、例えば標識され九状態の測定すべき抗原に対す
る抗体からなる。この際試料溶液を恒温保持緩衝液に中
に加えるのが有利である。良好な結果は、界面活性物質
を恒温保持溶液に、又は接合体溶液に添加する場合に達
せられる。
の常用の添加物を含有している。該接合体は測定すべき
物質のｔめの又に固相成分のための免疫学的反応成分か
ら成り、例えば標識され九状態の測定すべき抗原に対す
る抗体からなる。この際試料溶液を恒温保持緩衝液に中
に加えるのが有利である。良好な結果は、界面活性物質
を恒温保持溶液に、又は接合体溶液に添加する場合に達
せられる。
界面活性剤を試料済液自体に添加することはあまり有利
ではない。完成した恒温保持溶液中には十分に高い温度
が界面活性剤が存在しなければならない。ところが、非
常に僅かな量で使用される試料溶液を介して界面活性剤
を添加する場合、この界面活性剤の濃度は非常に高くな
けｉばならない。しかしながら、この非常に高い濃度に
おいては不所望な作用が現われることがある。
ではない。完成した恒温保持溶液中には十分に高い温度
が界面活性剤が存在しなければならない。ところが、非
常に僅かな量で使用される試料溶液を介して界面活性剤
を添加する場合、この界面活性剤の濃度は非常に高くな
けｉばならない。しかしながら、この非常に高い濃度に
おいては不所望な作用が現われることがある。
本発明による方法を実施するために、免疫反応の司動性
及び非内勤性成分を含有し、かつ２０より大きいＨｌ、
Ｂ値を１する界面活性剤を含Ｍすることを特徴とする試
薬を使用する。該試薬は更に常用の内容物全含有してい
てよい。有利には緩衝物質、例えば燐酸塩緩衝液、クエ
ン酸を緩衝液、−酸塩緩衝液等及び／又に牛血清アルブ
ミン又は、／及び保存剤金含壱′するのが有利である。
及び非内勤性成分を含有し、かつ２０より大きいＨｌ、
Ｂ値を１する界面活性剤を含Ｍすることを特徴とする試
薬を使用する。該試薬は更に常用の内容物全含有してい
てよい。有利には緩衝物質、例えば燐酸塩緩衝液、クエ
ン酸を緩衝液、−酸塩緩衝液等及び／又に牛血清アルブ
ミン又は、／及び保存剤金含壱′するのが有利である。
免疫反応における標識化剤として酵素上用いる場合、該
試薬は更に酵素活性全検出するだめのシステムを含有す
る。
試薬は更に酵素活性全検出するだめのシステムを含有す
る。
該試薬が界面活性剤として、炭素原子数２〜４めアルキ
レンジアミンを中心分子として有していてもよい炭素原
子数２〜４のアルキレンジアミンをペーヌとする非イオ
ン系ブロックコポリマー七含有しているのが有利である
。界面活性剤としてａ、ｂ、ｘ及びｙが前記のものであ
る一般式！又は璽の化合物を含有しているのが特に有利
である。ＨＬＢ値が２６〜６０の界面活性剤を使用する
のが有利である。界面活性剤は試薬中に０．１〜５％の
濃度で含有されている。
レンジアミンを中心分子として有していてもよい炭素原
子数２〜４のアルキレンジアミンをペーヌとする非イオ
ン系ブロックコポリマー七含有しているのが有利である
。界面活性剤としてａ、ｂ、ｘ及びｙが前記のものであ
る一般式！又は璽の化合物を含有しているのが特に有利
である。ＨＬＢ値が２６〜６０の界面活性剤を使用する
のが有利である。界面活性剤は試薬中に０．１〜５％の
濃度で含有されている。
本発明による方法及び試薬を用いて、不均一相中の免疫
測定において検出が改良された。更に、本発明により使
用し良薬剤の添加により免疫反応は促進される。更に、
結合反応成分の脱離を強めることなく、特に固体への筬
合体の非特異的付加のような不所望な副反応を抑制する
。
測定において検出が改良された。更に、本発明により使
用し良薬剤の添加により免疫反応は促進される。更に、
結合反応成分の脱離を強めることなく、特に固体への筬
合体の非特異的付加のような不所望な副反応を抑制する
。
実施例
例１
プラス°チック小管をクロラミン−Ｔ−法により１２５
工で標識化したＴＢＨに対する抗体で４ Ｑ ｍ ｍｏ
ｌ ／）の燐酸塩緩衝液中テＦｋ１７．４テ被覆した。
工で標識化したＴＢＨに対する抗体で４ Ｑ ｍ ｍｏ
ｌ ／）の燐酸塩緩衝液中テＦｋ１７．４テ被覆した。
濃度は２μｇ／ｄであった。０．９％塩化ナトリウム及
び０．３チ牛血清アルブミン、■型からなる溶液で後被
覆を行なった。被覆容積は１．５ｍｊであつ九。被覆の
ための恒温保持時間は２２時間であった。その後、後被
覆−ｉｔ′ｒＬ１．８ｄと共に÷時間、後被覆を行なっ
た。該小管金管開口部を上にむけて２４時間乾燥した。
び０．３チ牛血清アルブミン、■型からなる溶液で後被
覆を行なった。被覆容積は１．５ｍｊであつ九。被覆の
ための恒温保持時間は２２時間であった。その後、後被
覆−ｉｔ′ｒＬ１．８ｄと共に÷時間、後被覆を行なっ
た。該小管金管開口部を上にむけて２４時間乾燥した。
次いで、該菅を界面活性剤で処理した。この小管により
抗原もしくは抗５味−抗体−複合体の脱着を測定し友。
抗原もしくは抗５味−抗体−複合体の脱着を測定し友。
結果を次の＄１表に記載した。
第１表
比較−比較例； ＨＬＢ ＜ ２０の界面活性剤例−Ｈ
ＬＢ ＞ ２０の本発明による界面活性剤例２ 糧々の界面活性剤を用シ島てＴ３Ｈ−テストにおける検
出を調べ友。この際、ｉＴＡを用いて、ヘパリン全周い
て、もしくはクエンｔｇ璃を用いて安定化した血漿を使
用した。同時に血清を用いてＴ日Ｈ−テストヲ＋施し九
〇このテストにおいて検出は１００％であった。種々の
界面活性剤に関して得られた値七次の表に記載する。
ＬＢ ＞ ２０の本発明による界面活性剤例２ 糧々の界面活性剤を用シ島てＴ３Ｈ−テストにおける検
出を調べ友。この際、ｉＴＡを用いて、ヘパリン全周い
て、もしくはクエンｔｇ璃を用いて安定化した血漿を使
用した。同時に血清を用いてＴ日Ｈ−テストヲ＋施し九
〇このテストにおいて検出は１００％であった。種々の
界面活性剤に関して得られた値七次の表に記載する。
類似の実験′Ｉ！：ＣＦ！Ａ−テストで実施した。結果
はＴＳＨ−テストの結果と同様であった。界面活性剤の
濃度が上昇するにつｎて血漿中での検出が上昇するだけ
でなく、ゼロ標準の吸光が下がるということが確聞され
友。これは、非％異的な接合体結合が界面活性剤の添加
により減少したことを示す。
はＴＳＨ−テストの結果と同様であった。界面活性剤の
濃度が上昇するにつｎて血漿中での検出が上昇するだけ
でなく、ゼロ標準の吸光が下がるということが確聞され
友。これは、非％異的な接合体結合が界面活性剤の添加
により減少したことを示す。
例３
接合体の非特異的な結合に対する種々の界面活性剤の影
響を調べるために、ｌ々の界面活性剤を試験した。結果
ｔ−第３弄にあげ念。
響を調べるために、ｌ々の界面活性剤を試験した。結果
ｔ−第３弄にあげ念。
例４
本発明により使用した界面活性剤が、Ｏ−ａ準の吸光を
高めることなく、ＴＳＨ−テス）ｔ＝どの程度促進する
ことができるかを試験した。このために種々の界面活性
剤を試験した。結果を添付図面に記載した。
高めることなく、ＴＳＨ−テス）ｔ＝どの程度促進する
ことができるかを試験した。このために種々の界面活性
剤を試験した。結果を添付図面に記載した。
曲線１は接合体緩衝液中に添加物のない場合、曲線２は
窄合体緩衝液中にテトロニック９０９０．５俤、 開議３は接合体緩衝液中にテトロニック９０９１．０チ
、 曲線４は接合体緩衝液中にテトロニック９０９ｉ、ｏ＊
＋テトロニック７０７ １．０％、曲線５は接合体緩衝
液中にテトロニック９０９２．０チ、 曲線６は接合体緩衝液中にテトロニック７０７１．０盪
＋テトロニツク９０８ ４．０チｔそｎぞれ添加した
場合である。
窄合体緩衝液中にテトロニック９０９０．５俤、 開議３は接合体緩衝液中にテトロニック９０９１．０チ
、 曲線４は接合体緩衝液中にテトロニック９０９ｉ、ｏ＊
＋テトロニック７０７ １．０％、曲線５は接合体緩衝
液中にテトロニック９０９２．０チ、 曲線６は接合体緩衝液中にテトロニック７０７１．０盪
＋テトロニツク９０８ ４．０チｔそｎぞれ添加した
場合である。
例５
多くのＴＳＨ−テストを実施した。この際、本発明によ
り使用し、た薬剤で達成することのできる促進ｔ Ｖ、
準に対して決定した。第４辰に記載した僅が種々の界面
活性剤′七尾いて得らｎた。
り使用し、た薬剤で達成することのできる促進ｔ Ｖ、
準に対して決定した。第４辰に記載した僅が種々の界面
活性剤′七尾いて得らｎた。
１ｉｉＡ表
添付図面は実施例４の結果を示すグラフ図であり、縦軸
は吸光度上表わし、横軸はＴＳＨの量を示す。 曲ａ１ 凄合体緩（ＩＪ液液中添加物なし。 曲線２ 接合体緩衝液中にテトロニック９０９０．５％
、 血球３ 接合体緩衝液中にテトロニック９０９１．０％
、 曲線４ 接合体緩衝液中にテトロニック９０９１．０俤
＋テトロニツク７０７ １．０チ、曲線５ 接合体緩
衝液中にテトロニック９０９２．０％、 曲線６ 接合体緩衝液中にテトロニック７０７１．０チ
＋テトロニツク９０８ ４．０チ。
は吸光度上表わし、横軸はＴＳＨの量を示す。 曲ａ１ 凄合体緩（ＩＪ液液中添加物なし。 曲線２ 接合体緩衝液中にテトロニック９０９０．５％
、 血球３ 接合体緩衝液中にテトロニック９０９１．０％
、 曲線４ 接合体緩衝液中にテトロニック９０９１．０俤
＋テトロニツク７０７ １．０チ、曲線５ 接合体緩
衝液中にテトロニック９０９２．０％、 曲線６ 接合体緩衝液中にテトロニック７０７１．０チ
＋テトロニツク９０８ ４．０チ。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、反応成分の１つが固相に存在する免疫反応の成分を
、温度１５〜４０℃で免疫検定原理により測定するため
の方法において、２０より大きいＨＬＢ値を有する界面
活性剤を添加することを特徴とする免疫反応成分測定法
。 ２、測定を血漿試料中で実施する特許請求の範囲第１項
記載の方法。 ３、界面活性剤として、炭素原子数２〜４のアルキレン
ジアミンを中心分子として有していてよい、炭素原子数
２〜４のアルキレンオキシドをベースとする非イオン系
ブロックコポリマーを使用する特許請求の範囲第１項又
は第２項記載の方法。 ４、ＨＬＢ値２４〜３０の界面活性剤を使用する特許請
求の範囲第１項から第３項までのいずれか１項記載の方
法。 ５、界面活性剤として、一般式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、ａは３０〜１５０の間の値であつてよく、ｂは
１５〜６０の間の値であつてよい〕の化合物を使用する
特許請求の範囲第１項から第４項までのいずれか１項記
載の方法。 ６、式中、ａが６０〜１００の間の値であり、ｂが２５
〜４０の間の値であるブロックコポリマーを使用する特
許請求の範囲第５項記載の方法。 ７、親水性ポリオキシエチレン基の部分が６０％〜９０
％を示すブロックコポリマーを使用する特許請求の範囲
第４項から第６項までのいずれか１項記載の方法。 ８、界面活性剤として式II： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、ｘは１０〜５０の間の値を有していてよく、ｙ
は５０〜１５０の間の値を有していてよい〕の化合物を
使用する特許請求の範囲第１項から第４項までのいずれ
か１項記載の方法。 ９、式中、ｘが１５〜３０の間の値を有し、ｙが４０〜
１２０の間の値を有するブロックコポリマーを使用する
特許請求の範囲第８項記載の方法。 １０、ポリオキシエチレン基の部分が５０〜９０％であ
る特許請求の範囲第８項又は第９項記載の方法。 １１、界面活性剤を恒温保持溶液と共に添加する特許請
求の範囲第１項から第１０項までのいずれか１項記載の
方法。 １２、界面活性剤を全溶液に対して０．１〜５％の濃度
で添加する特許請求の範囲第１項から第１１項記載の方
法。 １３、反応成分の１つが固相に存在する免疫反応の成分
を、温度１５〜４０℃で免疫検定原理により測定するた
めの、可動化及び非可動化免疫反応成分を含有する試薬
において、 ２０より大きなＨＬＢ値を有する界面活性剤を含有する
ことを特徴とする免疫反応の成分測定試薬。 １４、界面活性剤として、炭素原子数２〜４のアルキレ
ンジアミンを中心分子として有していてよい、炭素原子
数２〜４のアルキレンオキシドをベースとする非イオン
糸ブロックコポリマーを含有する特許請求の範囲第１３
項記載の試薬。 １５、界面活性剤が２４〜３０の間のＨＬＢ−値を有す
る特許請求の範囲第１３項又は第１４項の試薬。 １６、界面活性剤が、一般式 I ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、ａは３０〜１５０、有利には６０〜１００の間
の値であり、ｂは１５〜６０、有利には２５〜４０の間
の値である〕の化合物である特許請求の範囲第１３項か
ら第１５項までのいずれか１項記載の試薬。 １７、化合物が６０〜９０％のポリオキシエチレン基部
分を有する特許請求の範囲第１６項記載の試薬。 １８、界面活性剤が一般式II ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、ｘは１０〜５０、有利に１５〜３０の間の値で
あり、ｙは３０〜１５０、有利に４０〜１２０の間の値
である〕の化合物である特許請求の範囲第１３項から第
１５項までのいずれか１項記載の試薬。 １９、該化合物が５０〜９０％のポリオキシエチレン基
部分を有する特許請求の範囲第１８項記載の試薬。 ２０、標識化剤として使用した酵素活性を検出するため
のシステムを含有する特許請求の範囲第１３項から第１
９項までのいずれか１項記載の試薬。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19853532626 DE3532626A1 (de) | 1985-09-12 | 1985-09-12 | Verfahren zur bestimmung eines partners einer immunreaktion |
| DE3532626.3 | 1985-09-12 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6271861A true JPS6271861A (ja) | 1987-04-02 |
Family
ID=6280820
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61212867A Pending JPS6271861A (ja) | 1985-09-12 | 1986-09-11 | 免疫反応成分測定法及び該方法を実施するための試薬 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0215457B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6271861A (ja) |
| KR (1) | KR890002941B1 (ja) |
| AT (1) | ATE64465T1 (ja) |
| DD (1) | DD249768A5 (ja) |
| DE (2) | DE3532626A1 (ja) |
| ES (1) | ES2007023A6 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| JPH02103466A (ja) * | 1988-10-13 | 1990-04-16 | Shoichi Shudo | 免疫学的活性物質の測定方法及びそのための試薬 |
| JPH02287257A (ja) * | 1989-04-11 | 1990-11-27 | Kirin Amgen Inc | ヒトｇ―ｃｓｆの測定方法 |
| WO1991005257A1 (en) * | 1989-10-02 | 1991-04-18 | Teijin Limited | Kit for immunoassay of human tissue plasminogen activator/human plasminogen activator inhibitor complex and method of immunoassay |
| WO1991006857A1 (en) * | 1989-11-02 | 1991-05-16 | Teijin Limited | Immunoassay of human thrombomodulin, and reagent and kit therefor |
| JPH04232858A (ja) * | 1990-07-25 | 1992-08-21 | Boehringer Mannheim Gmbh | イムノアッセイ原理による免疫反応における成分を測定する方法及び試薬 |
| JP2010508513A (ja) * | 2006-11-01 | 2010-03-18 | ベックマン コールター， インコーポレイテッド | 親和性アッセイのための結合表面 |
| JP2021534393A (ja) * | 2018-08-13 | 2021-12-09 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | 疑似インビボ条件での治療用タンパク質の選択 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| DE3807478A1 (de) * | 1988-03-08 | 1989-09-21 | Behringwerke Ag | Mittel fuer immunchemische tests enthaltend aminoxide |
| US5516703A (en) * | 1993-08-20 | 1996-05-14 | The University Of Utah | Coating of hydrophobic surfaces to render them protein resistant while permitting covalent attachment of specific ligands |
| US6284503B1 (en) | 1993-08-20 | 2001-09-04 | University Of Utah Research Foundation | Composition and method for regulating the adhesion of cells and biomolecules to hydrophobic surfaces |
| CN112014555B (zh) * | 2020-08-31 | 2023-08-08 | 武汉生之源生物科技股份有限公司 | 一种酶标抗体缓冲液、试剂r1和肌酸激酶同工酶测定试剂盒 |
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| JPS58187862A (ja) * | 1982-04-27 | 1983-11-02 | Sanyo Chem Ind Ltd | 免疫測定改良剤および改良方法 |
| JPS5943362A (ja) * | 1982-09-06 | 1984-03-10 | Kainosu:Kk | 免疫学的測定試薬 |
| JPS5997057A (ja) * | 1982-11-26 | 1984-06-04 | Kainosu:Kk | 抗血清試薬 |
| JPS6036964A (ja) * | 1983-06-30 | 1985-02-26 | アイキユー・（バイオ）・リミテツド | 生化学的検出法および使用キツト |
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| JPS6153568A (ja) * | 1984-08-06 | 1986-03-17 | テクニコン、インストルメンツ、コーポレーシヨン | リポソーム適合性界面活性剤 |
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| JPS5443572B2 (ja) * | 1974-07-08 | 1979-12-20 | ||
| IL48804A (en) * | 1975-01-29 | 1979-05-31 | Baxter Travenol Lab | Imminological reagent comprising a mixture of polyethyleneglycol and a nonionic surfactant |
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-
1985
- 1985-09-12 DE DE19853532626 patent/DE3532626A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-09-05 ES ES8601652A patent/ES2007023A6/es not_active Expired
- 1986-09-10 DD DD86294303A patent/DD249768A5/de not_active IP Right Cessation
- 1986-09-10 KR KR1019860007582A patent/KR890002941B1/ko not_active Expired
- 1986-09-11 JP JP61212867A patent/JPS6271861A/ja active Pending
- 1986-09-12 AT AT86112667T patent/ATE64465T1/de not_active IP Right Cessation
- 1986-09-12 EP EP86112667A patent/EP0215457B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-09-12 DE DE8686112667T patent/DE3679749D1/de not_active Expired - Lifetime
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Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR870003387A (ko) | 1987-04-17 |
| KR890002941B1 (ko) | 1989-08-12 |
| EP0215457A2 (de) | 1987-03-25 |
| DE3532626A1 (de) | 1987-03-19 |
| ES2007023A6 (es) | 1989-06-01 |
| ATE64465T1 (de) | 1991-06-15 |
| DD249768A5 (de) | 1987-09-16 |
| DE3679749D1 (de) | 1991-07-18 |
| EP0215457B1 (de) | 1991-06-12 |
| EP0215457A3 (en) | 1987-09-09 |
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