JPH0362396B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH0362396B2 JPH0362396B2 JP24137984A JP24137984A JPH0362396B2 JP H0362396 B2 JPH0362396 B2 JP H0362396B2 JP 24137984 A JP24137984 A JP 24137984A JP 24137984 A JP24137984 A JP 24137984A JP H0362396 B2 JPH0362396 B2 JP H0362396B2
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- Japan
- Prior art keywords
- ornithine
- medium
- cultured
- culture
- producing
- Prior art date
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- Expired
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
産業上の利用分野
本発明は発酵法によるＬ−オルニチンの製造法
に関する。 従来の技術 従来、Ｌ−オルニチンの製造法としては、コリ
ネバクテリウム属のアルギニン又はシトルリン栄
養要求株を用いる方法（特公昭35−18439号公
報）、ブレビバクテリウム属のアルギニン又はシ
トルリン栄養要求株を用いる方法（特公昭43−
8712号公報）が知られている。 発明が解決しようとする問題点 従来の方法においては、Ｌ−オルニチンの収量
はまだ満足すべきものではない。常に優れたＬ−
オルニチンの製造法が求められている。 問題点を解決するための手段 本発明によると、コリネバクテリウム属に属
し、２−チアゾリールアラニン、サルフアグアニ
ジン又は２−フルオロピルビン酸に耐性を有する
微生物を用いることにより著量のＬ−オルニチン
を製造することができる。 本発明に使用する微生物としては、コリネバク
テリウム属に属し、２−チアゾリールアラニン、
サルフアグアジン又は２−フルオロピルビン酸に
耐性を有し、かつＬ−オルニチン生産能を有する
微生物であれば、紫外線照射もしくは化学薬剤処
理で誘導される変異株又は細胞融合法、遺伝子走
査法で誘導される組換え株等、いずれも用いられ
る。 具体的には、コリネバクテリウム・グルタミク
ム（Coryhnebacterium glutamicum）Ｈ−3795
（２−チアゾリールアラニン耐性）（微工研条寄第
656号）（以下、Ｈ−3795と称す）、コリネバクテ
リウム・ダルタミクムＨ−3796（サルフアグアニ
ジン耐性）（微工研条寄第657号）（以下、Ｈ−
3796と称す）、コリネバクテリウム・ダクタミク
ムＨ−3797（サルフアグアニジンおよび２−チア
ゾリールアラニン耐性）（微工研条寄第658号）
（以下、Ｈ−3797と称す）、コリネバクテリウム・
ダルタミクムＨ−3798（サルフアグアニジンおよ
び２−フルオロピルビン酸耐性）（微工研条寄第
659号）（以下、Ｈ−3798と称す）等があげられ
る。 次に、本発明の変異株の採取法と各種薬剤添加
培地での菌株の生育を説明する。 (1) 変異株の採取法 イーストブイヨンスラント（肉エキス0.5
ｇ／dl、酵母エキス0.5ｇ／dl、ペプトン１
ｇ／dl、食塩0.25ｇ／dl、寒天２ｇ／dl、PH
7.2）で30℃、一夜培養したコリネバクテリウ
ム・グルタミクムATCC13232（以下、
ATCC13232と称す）をトリスマレート緩衡液
（PH6.0）に菌体濃度108〜109／mlとなるように
懸濁した。ついで該懸濁液にＮ−メチル−
N′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを最終
濃度250μｇ／mlとなるよう添加後、30℃で20
分間放置した。その後、遠心分離して菌体を集
め緩衡液でトリスマレート（PH6.0）で洗浄し
た後、該菌体をサルフアグアニジン100μｇ／
mlを含む第１表に示す平板培地で30℃、５〜７
日間培養した。
に関する。 従来の技術 従来、Ｌ−オルニチンの製造法としては、コリ
ネバクテリウム属のアルギニン又はシトルリン栄
養要求株を用いる方法（特公昭35−18439号公
報）、ブレビバクテリウム属のアルギニン又はシ
トルリン栄養要求株を用いる方法（特公昭43−
8712号公報）が知られている。 発明が解決しようとする問題点 従来の方法においては、Ｌ−オルニチンの収量
はまだ満足すべきものではない。常に優れたＬ−
オルニチンの製造法が求められている。 問題点を解決するための手段 本発明によると、コリネバクテリウム属に属
し、２−チアゾリールアラニン、サルフアグアニ
ジン又は２−フルオロピルビン酸に耐性を有する
微生物を用いることにより著量のＬ−オルニチン
を製造することができる。 本発明に使用する微生物としては、コリネバク
テリウム属に属し、２−チアゾリールアラニン、
サルフアグアジン又は２−フルオロピルビン酸に
耐性を有し、かつＬ−オルニチン生産能を有する
微生物であれば、紫外線照射もしくは化学薬剤処
理で誘導される変異株又は細胞融合法、遺伝子走
査法で誘導される組換え株等、いずれも用いられ
る。 具体的には、コリネバクテリウム・グルタミク
ム（Coryhnebacterium glutamicum）Ｈ−3795
（２−チアゾリールアラニン耐性）（微工研条寄第
656号）（以下、Ｈ−3795と称す）、コリネバクテ
リウム・ダルタミクムＨ−3796（サルフアグアニ
ジン耐性）（微工研条寄第657号）（以下、Ｈ−
3796と称す）、コリネバクテリウム・ダクタミク
ムＨ−3797（サルフアグアニジンおよび２−チア
ゾリールアラニン耐性）（微工研条寄第658号）
（以下、Ｈ−3797と称す）、コリネバクテリウム・
ダルタミクムＨ−3798（サルフアグアニジンおよ
び２−フルオロピルビン酸耐性）（微工研条寄第
659号）（以下、Ｈ−3798と称す）等があげられ
る。 次に、本発明の変異株の採取法と各種薬剤添加
培地での菌株の生育を説明する。 (1) 変異株の採取法 イーストブイヨンスラント（肉エキス0.5
ｇ／dl、酵母エキス0.5ｇ／dl、ペプトン１
ｇ／dl、食塩0.25ｇ／dl、寒天２ｇ／dl、PH
7.2）で30℃、一夜培養したコリネバクテリウ
ム・グルタミクムATCC13232（以下、
ATCC13232と称す）をトリスマレート緩衡液
（PH6.0）に菌体濃度108〜109／mlとなるように
懸濁した。ついで該懸濁液にＮ−メチル−
N′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンを最終
濃度250μｇ／mlとなるよう添加後、30℃で20
分間放置した。その後、遠心分離して菌体を集
め緩衡液でトリスマレート（PH6.0）で洗浄し
た後、該菌体をサルフアグアニジン100μｇ／
mlを含む第１表に示す平板培地で30℃、５〜７
日間培養した。
【表】
出現した平板寒天上のコロニーからＬ−オル
ニチン生産性の向上した変異株、Ｈ−3796を得
た。 さらに、第２表に示す条件以外は上記の方法
と同様にしてＨ−3795、Ｈ−3797およびＨ−
3798を得た。
ニチン生産性の向上した変異株、Ｈ−3796を得
た。 さらに、第２表に示す条件以外は上記の方法
と同様にしてＨ−3795、Ｈ−3797およびＨ−
3798を得た。
【表】
(2) 薬剤耐性株の薬剤含有培地での生育
上記(1)の方法で取得したＨ−3795、Ｈ−
3796、Ｈ−3797、Ｈ−3798及びATCC13232を
イーストブイヨンスラントに接種し、30℃で24
時間培養した。ついで、該培養液を生理食塩水
に懸濁した。 該懸濁液を第３表に示した濃度のサルフアグ
アニジン、２−チアゾリールアラニン又は２−
フルオロピルビン酸を含んだ第１表に示す平板
培地に接種し（108個／plate）、30℃で48時間
培養した。その結果を第３表に示す。
3796、Ｈ−3797、Ｈ−3798及びATCC13232を
イーストブイヨンスラントに接種し、30℃で24
時間培養した。ついで、該培養液を生理食塩水
に懸濁した。 該懸濁液を第３表に示した濃度のサルフアグ
アニジン、２−チアゾリールアラニン又は２−
フルオロピルビン酸を含んだ第１表に示す平板
培地に接種し（108個／plate）、30℃で48時間
培養した。その結果を第３表に示す。
【表】
：非常に良好な生育 ＋：良好な生育
−：非生育
本発明で使用する培地としては、炭素源、窒素
源、無機物、その他生育促進物質を含むものであ
れば、天然培地又は人工培地のいずれでもよい。
炭素源としては、グルコース、フラクトース、シ
ユクロース、マルトース、デンプン加水分解液、
果汁、廃糖蜜、有機酸、アルコール等が使用され
る。 窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝
酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、水酸化アン
モニウム、尿素、酵母エキス、コーン・スチー
プ・リカー、ペプトン等が使用される。 無機物としては、リン酸−カリウム、リン酸二
カリウム、硫酸マグネシウム等、硫酸第一鉄、硫
酸マンガン、硫酸亜鉛等が使用される。 生育促進物質としては、アミノ酸やパントテン
酸、ニコチン酸、サイアミン塩酸塩等のビタミン
類が用いられる。 又、使用する微生物がＬ−シトルリン、又はＬ
−アルギニンの栄養要求性を有している場合には
Ｌ−アルギニンを培地中に100〜300mg／存在せ
しめれば良い。 培養は通気撹拌等の好気的条件下で行い、培養
温度は24〜40℃、PHは5.5〜8.5、培養日数は１〜
４日である。PHの調整には、尿素、炭酸カルシウ
ム、アンモニア水、アンモニアガス、リン酸マグ
ネシウム等が使用される。 発酵液からのＬ−オルニチンの採取は、常法、
例えばイオン交換樹脂法、濃縮法、有機溶媒添加
法等で行う。 実施例 １ 種菌として、Ｈ−3796を用いた。 該菌株をブイヨンスラント上で30℃、24時間培
養した。該培養物の１白金耳をグルコース70ｇ／
、硫酸アンモニウム30ｇ／、KH2PO4、0.5
ｇ／、MgSO40.125ｇ／、FeSO4・7H2O0.02
ｇ／、MnSO4・7H2O0.02ｇ／、ZnSO4・
7H2O0.01ｇ／、ビオチン100γ／、サイアミ
ン塩酸塩１mg／、コーン・スチープ・リカー10
ｇ／、尿素３ｇ／、Ｌ−アルキニン250mg／
、クエン酸ブチル３ml／、CaCO330ｇ／
の組成からなる倍地20mlを含有する250ml三角フ
ラスコに接種し、30℃で48時間培養した。培養液
中に蓄積されたＬ−オルニチンは30.6ｇ／（塩
酸塩換算）であつた。 次いで、培養液１から菌体を除去して、得ら
れた液をアンバーライト（H+型）（ロームアン
ドハウス社製）カラムに流し、水洗した。ついで
吸着物を５％アンモニア水で溶出した。Ｌ−ホル
ニチン区分を集めて減圧濃縮した。得られた残渣
にＬ−オルニチンと等モルの塩酸を加えた。生じ
た粗結晶を含水メタノールから再結晶することに
よりＬ−オルニチン塩酸塩27.5ｇを得た。 対象として、Ｈ−3796の代わりにATCC13232
を用いる以外は前記と同様にしてＬ−オルニチン
26.8ｇ／（塩酸塩換算）を得た。 実施例 ２ 実施例１において、種菌としてＨ−3796の代わ
りに第４表に示す菌株を用いる以外は実施例１と
同様に行つた。 その結果を第４表に示す。
−：非生育
本発明で使用する培地としては、炭素源、窒素
源、無機物、その他生育促進物質を含むものであ
れば、天然培地又は人工培地のいずれでもよい。
炭素源としては、グルコース、フラクトース、シ
ユクロース、マルトース、デンプン加水分解液、
果汁、廃糖蜜、有機酸、アルコール等が使用され
る。 窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウ
ム、硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝
酸アンモニウム、炭酸アンモニウム、水酸化アン
モニウム、尿素、酵母エキス、コーン・スチー
プ・リカー、ペプトン等が使用される。 無機物としては、リン酸−カリウム、リン酸二
カリウム、硫酸マグネシウム等、硫酸第一鉄、硫
酸マンガン、硫酸亜鉛等が使用される。 生育促進物質としては、アミノ酸やパントテン
酸、ニコチン酸、サイアミン塩酸塩等のビタミン
類が用いられる。 又、使用する微生物がＬ−シトルリン、又はＬ
−アルギニンの栄養要求性を有している場合には
Ｌ−アルギニンを培地中に100〜300mg／存在せ
しめれば良い。 培養は通気撹拌等の好気的条件下で行い、培養
温度は24〜40℃、PHは5.5〜8.5、培養日数は１〜
４日である。PHの調整には、尿素、炭酸カルシウ
ム、アンモニア水、アンモニアガス、リン酸マグ
ネシウム等が使用される。 発酵液からのＬ−オルニチンの採取は、常法、
例えばイオン交換樹脂法、濃縮法、有機溶媒添加
法等で行う。 実施例 １ 種菌として、Ｈ−3796を用いた。 該菌株をブイヨンスラント上で30℃、24時間培
養した。該培養物の１白金耳をグルコース70ｇ／
、硫酸アンモニウム30ｇ／、KH2PO4、0.5
ｇ／、MgSO40.125ｇ／、FeSO4・7H2O0.02
ｇ／、MnSO4・7H2O0.02ｇ／、ZnSO4・
7H2O0.01ｇ／、ビオチン100γ／、サイアミ
ン塩酸塩１mg／、コーン・スチープ・リカー10
ｇ／、尿素３ｇ／、Ｌ−アルキニン250mg／
、クエン酸ブチル３ml／、CaCO330ｇ／
の組成からなる倍地20mlを含有する250ml三角フ
ラスコに接種し、30℃で48時間培養した。培養液
中に蓄積されたＬ−オルニチンは30.6ｇ／（塩
酸塩換算）であつた。 次いで、培養液１から菌体を除去して、得ら
れた液をアンバーライト（H+型）（ロームアン
ドハウス社製）カラムに流し、水洗した。ついで
吸着物を５％アンモニア水で溶出した。Ｌ−ホル
ニチン区分を集めて減圧濃縮した。得られた残渣
にＬ−オルニチンと等モルの塩酸を加えた。生じ
た粗結晶を含水メタノールから再結晶することに
よりＬ−オルニチン塩酸塩27.5ｇを得た。 対象として、Ｈ−3796の代わりにATCC13232
を用いる以外は前記と同様にしてＬ−オルニチン
26.8ｇ／（塩酸塩換算）を得た。 実施例 ２ 実施例１において、種菌としてＨ−3796の代わ
りに第４表に示す菌株を用いる以外は実施例１と
同様に行つた。 その結果を第４表に示す。
【表】
実施例 ３
種菌として、Ｈ−3796を用いた。
該菌種をブイヨンスラント上で30℃、24時間培
養した。該培養物の１白金耳を廃糖蜜70ｇ／
（gluose換算）、硫酸アンモニウム30ｇ／、
KH2PO40.5／、MgSO40.125ｇ／、尿素３
ｇ／、コーン・スチープ・リカー10ｇ／、サ
イアミン塩酸塩150γ／、クエン酸ブチル３
ml／、Ｌ−アルギニン250mg／、CaCO330
ｇ／の組成からなる培地20mlを含有する250ml
三角フラスコに接種し、30℃で48時間培養した。
培養液中には27.5ｇ／（塩酸塩換算）のＬ−オ
ルニチンが蓄積された。 対照として、Ｈ−3796の代わりにATCC13232
を用いる以外は前記と同様にしてＬ−オルニチン
22.1ｇ／（塩酸塩換算）を得た。 発明の効果 本発明方法により著量のＬ−オルニチンを得る
ことができる。
養した。該培養物の１白金耳を廃糖蜜70ｇ／
（gluose換算）、硫酸アンモニウム30ｇ／、
KH2PO40.5／、MgSO40.125ｇ／、尿素３
ｇ／、コーン・スチープ・リカー10ｇ／、サ
イアミン塩酸塩150γ／、クエン酸ブチル３
ml／、Ｌ−アルギニン250mg／、CaCO330
ｇ／の組成からなる培地20mlを含有する250ml
三角フラスコに接種し、30℃で48時間培養した。
培養液中には27.5ｇ／（塩酸塩換算）のＬ−オ
ルニチンが蓄積された。 対照として、Ｈ−3796の代わりにATCC13232
を用いる以外は前記と同様にしてＬ−オルニチン
22.1ｇ／（塩酸塩換算）を得た。 発明の効果 本発明方法により著量のＬ−オルニチンを得る
ことができる。
Claims (1)
- １ コリネバクテリウム属に属し、２−チアゾリ
ールアラニン、サルフアグアニジン又は２−フル
オロピルビン酸に耐性を有し、かつＬ−オルニチ
ン生産能を有する微生物を培地に培養し、培養液
中にＬ−オルニチンを生成蓄積させ、生成蓄積し
たＬ−オルニチンを採取することを特徴とする発
酵法によるＬ−オルニチンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24137984A JPS61119194A (ja) | 1984-11-15 | 1984-11-15 | 発酵法によるｌ−オルニチンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP24137984A JPS61119194A (ja) | 1984-11-15 | 1984-11-15 | 発酵法によるｌ−オルニチンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61119194A JPS61119194A (ja) | 1986-06-06 |
| JPH0362396B2 true JPH0362396B2 (ja) | 1991-09-25 |
Family
ID=17073406
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP24137984A Granted JPS61119194A (ja) | 1984-11-15 | 1984-11-15 | 発酵法によるｌ−オルニチンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS61119194A (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101282721B (zh) | 2005-10-04 | 2013-05-01 | 协和发酵生化株式会社 | 改善疲劳自觉症状用组合物 |
| ATE508740T1 (de) | 2006-06-07 | 2011-05-15 | Kyowa Hakko Bio Co Ltd | Mittel zur verringerung von müdigkeit |
| DE102010003419B4 (de) | 2010-03-30 | 2019-09-12 | Evonik Degussa Gmbh | Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Ornithin |
| RU2496867C2 (ru) | 2011-04-25 | 2013-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | Способ получения l-аминокислоты семейства глутамата с использованием коринеформной бактерии |
| WO2013129642A1 (ja) | 2012-03-02 | 2013-09-06 | 協和発酵バイオ株式会社 | 摂食活動および／または消化管活動促進剤 |
-
1984
- 1984-11-15 JP JP24137984A patent/JPS61119194A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS61119194A (ja) | 1986-06-06 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |