JPS6281387A - 新規化合物ｏｍ−３２２３およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 童呈上鬼封世光団 本発明はアデノシンデアミネース阻害剤として有用な新
規化合物０Ｍ−３２２３およびその薬学的に許容し得る
塩ならびに上記化合物の製造法に関する。

従来の技術 アデノシンデアミネース阻害剤として、たとえば、コホ
ルマイシン（ジャーナル・オブ・アンチビオティクス、
シリーズ・ニー、２０巻、２２７−２３１真、１９６７
年）、デオキシコホルマイシン（コビダラビン、アナル
ズ・オブ・ザ・ニューヨーク・アカデミイ・オブ・サイ
エンス、２８４巻、２１−２９頁、１９７８年）、合成
剤であるエリスロー９−（２−ヒドロキシル−３−ノニ
ル）アデニン（ジャーナル・オン・メデイシナル・ケミ
ストリー、１７巻、６−８Ｌ　　１９７４年）などが知
られており、これらは抗急性リンパ性白面病、免疫抑制
効果およびアデノシン類縁薬剤との併用によりアデノシ
ン類縁薬剤の薬効を持続させ増大せしめる効果を有する
ことが知られている。

発Ｉが解決しようとする問題点 しかしながら、既知のアデノシンデアミネース阻害剤は
急性毒性が強く、医薬として用いるには問題があった。

そのため、より活性が強くかつ低毒性のアデノシンデア
ミネース阻害剤が要望されている。本発明者らは、土壌
から分離されたストレプトミセス属に属するある種の微
生物が強いアデノシンデアミネース阻害活性を有する新
規化合物を産生ずることを知った。

本発明は上記の知見に基いて完成されたものであって、
その発明の目的は、本発明者らによってＯＭ−３２２３
と命名された、アデノシンデアミネース阻害剤として有
用な新規化合物およびその薬学的に許容し得る塩ならび
に上記化合物の製造法を提供することにある。

問題点を解決するための　ｒ 本発明により、次式で示される新規化合物０Ｍ−３２２
３およびその薬学的に許容し得る塩が提供される。

Ｈ 本発明により提供される新規化合物ＯＭ−３２２３は、
ストレプトミセス属に属しかつ式（１）で示される０Ｍ
−３２２３生産能力を有する微生物を培地に培養し、培
養物中に０Ｍ−３２２３を生産蓄積させ、これを採取す
る方法によって製造される。

０Ｍ−３２２３の物理化学的性状は次の通りである。

（１）白色針状晶 （２）元素分析値 Ｃ＋　ｔ　ＨＩｂ　Ｎ　ａ　Ｏａ 計算値：Ｃ５１，４２；Ｈ５，７５； Ｎ１９．９９％ 実験値：Ｃ５０，７７；Ｈ５，６５； Ｎ１９．８７％ （３）分子量および分子式 ０Ｍ−３２２３物質のマススペクトル土工／ｚ２８０に
分子イオンピークが観測され、また高分子能マススペク
トルより分子式ＣＩｚ　Ｈ＋　ｂ　Ｎ４０４　（実測値
２８０．１１？、計算値２８０゜１１７）と決定した。

（４）比旋光度 〔α）Ｄ＝−３１，６°（Ｃ＝１．０１Ｈ２０） （５）紫外線吸収スペクトル 第１図の通り水中で２７９ｎｍに特徴的な吸収極大を示
す。

（６）赤外線吸収スペクトル ＫＢｒ錠剤法により測定した赤外線吸収スペクトルは第
２図の通りであり、３４００．１６４０．１３８０．１
２００．１１２０ｃｍ−’に主な吸収帯を示す。

（７）核磁気共鳴スペクトル パリアンＸＬ−４００，４００ＭＨｚ ＮＭＲスペクトロメーターを用いて重水溶液中で測定し
た’ＨＮＭＲスペクトルは第３図の通りである。

（８）呈色反応 硫酸　　　　　　　　　　陽性 過マンガン酸カリウム　　陽性 ニンヒドリン　　　　　　陰性 塩化第二鉄　　　　　　　陰性 式（１）に示した構造は、上記の物理化学的性状を公知
の類似化合物の物理化学的性状と比較した結果決定され
たものである。

本発明の抗生物質０Ｍ−３２２３物質を生産するために
使用される菌株は、１例として、本発明者らによって東
京都井の頭公園の土壌から新たに分離されたストレプト
ミセス・エスピー・０Ｍ−３２２３株が挙げられる。

本菌株の菌学的性状を示すと次の通りである。

（１）形態的性質 栄養菌糸は各種寒天培地上でよく発達し、分断は観察さ
れない。気菌糸はイースト、麦芽寒天、スターチ、無機
塩寒天等で豊富に着生し、ビロード状を呈する。顕微鏡
下の観察では、気菌糸は直線状を呈し、２０ケ以上の胞
子の連鎖が認められる。胞子の大きさは０．５Ｘ０．８
μｍで円筒形である。胞子の表面は平滑である。菌核、
胞子のうおよび遊走子は見出されない。

（Ｉ　Ｉ）各種培地上での性状 イー・ビー・シャーリング（Ｅ、Ｂ、Ｓｈｉ−ｒｌｉｎ
ｇ　）　　とデー・ゴツトリーブ（Ｄ、Ｇｏｔｔｌｆｅ
ｂ　）の方法（インターナショナル・ジャーナル・オブ
・システィマチイック・バクテリオロン−。１６巻、３
１３４　１９６６年）によって調べた本生産菌の培養性
状を次表に示す。色調は標準色として、カラー・ハーモ
ニー・マニュアル第４版（コンテナー・コーポレーショ
ン・オブ・アメリカ・シカゴ、１９５８年）を用いて決
定し、色票基とともに括弧内にそのコードを併せて記し
た。以下は特記しない限り、２７°Ｃ１２週間目の各培
地における観察の結果である。

培養性状 （目■）生理学的諸性質 （１）メラニン色素の生成 （イ）チロシン寒天　　　　　　陰性 （ロ）ペプトン・イースト 鉄寒天　　　　　　　　　陰性 （ハ）グルコース・ペプトン ・ゼラチン培地（２１ 一２３’Ｃ）　　　　　　　陰性 （ニ）トリプトン・イー スト液　　　　　　　　　陰性 （２）チロシナーゼ反応　　　　陰性 （３）硫化水素の生産　　　　　陰性 （４）硝酸塩の還元　　　　　　陰性 （５）ゼラチンの液化（２１ −２３＠Ｃ） （グルコース・ペプトン・ ゼラチン培地）　　　　　陽性 （６）スターチの加水分解　　　陽性 （７）生育温度範囲　　１３−３４’Ｃ（８）炭素源の
利用性　　利用する：Ｄ−グル（プリーダム・ゴ　　ス
、Ｄ−キジローストリーブ寒天倍　　、ｉ−イノシトー
ル地） やや利用する：Ｌ− アラビノース、ラフ ィノース、Ｄ−フル クトース、シュータ ロース 利用しない：メリビ オース、Ｄ−マンニ トール、Ｌ−ラムノ ス （９）セルロースの分解　　　　　縦隔性（ＩＶ　’）
細胞壁組成 細胞壁のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。

以上、本菌の菌学的性状を要約すると次の通りである。

細胞壁中のジアミノピメリン酸はＬＬ型である。気菌糸
の形態は直線状で、長い胞子鎖を形成する。胞子の表面
は平滑である。栄養菌糸はゴールドあるいはアイポリ−
の色調を呈し、気菌糸はグレーあるいはピンク系の色調
を呈する。可溶性色素は生産しない。

これらの結果から、本菌株はストレプトミセス属に属す
る菌種であり、プリドハムとトレスナーの分類（バーシ
ス・マニュアル・オン・デターミネーテイプ・バクテリ
オロジー、第８版、７４８−８２９１　１９７４年）に
よりグレイあるいはレッドシリーズに属する菌種である
と考えられるなお、本菌株はストレプトミセス・エスピ
ー・ＯＭ　−３２２３（ＳｔｒｅｐＬｏｍｙｃｅｓ　ｓ
ｐ、　０Ｍ−３２２３）として、通産省工業技術院微生
物工業技術研究所に寄託されている（徽工研菌寄第８４
４７号）。また本菌株は既知アデノシンデアミネース阻
害剤コホルマイシンをも同時に生産する。

上記菌株の変異株も０Ｍ−３２２３生産能を有する限り
本発明の方法に使用することができる。

その他の０Ｍ−３２２３生産能力を有するストレプトミ
セス属に属する菌株も使用することができる。

培地としては、通常の放線菌の培地に適する炭素源、窒
素源および無機物、さらに必要に応じてその他の栄養物
を程良く含有する合成培地または天然培地を使用するこ
とができる。

培地に使用されている炭素源および窒素源は、使用菌株
の利用可能なものならいずれの種類でもよい。すなわち
炭素源としては、たとえばグルコース、グリセロール、
フラクトース、マルトース、マンニット、キシロース、
ガラクトース、リボース、澱粉またはその加水分解物等
の種々の炭水化物が使用できる。その濃度は通常、培地
に対して０．１−５％が好ましい。またグルコン酸、ピ
ルビン酸、乳糖、酢酸等の各種有機酸、グリシン、グル
タミン酸、アラニン等の各種アミノ酸、さらにはメタノ
ール、エタノール等のアルコール類やノルマルパラフィ
ン等各種の非９．香族系炭化水素、あるいは植物性もし
くは動物性の各種油脂等も使用可能である。

窒素源としては、たとえばアンモニア、塩化アンモニウ
ム、燐酸アンモニウム、硫酸アンモニウム、硝酸アンモ
ニウム等の各種の無機酸あるいは有機酸のアンモニウム
塩類、ペプトン、ＮＺ−７ミン、肉エキス、酵母エキス
、乾燥酵母、コーンスチープリカー、カゼイン加水分解
物、フィツシュミールあるいはその消火物、大豆粉ある
いはその消火物、脱脂大豆あるいはその消火物、加水分
解物等の含窒素有機物質、さらにはグリシン、グルタミ
ン酸、アラニン等の各種アミノ酸が使用可能である。攪
拌速度、通気けなどの培養条件は使用する菌株の種類や
外部の条件などに応じて適宜調節、選択される。液体培
養においても発泡があるときは、たとえばシリコン脂、
植物脂、界面活性剤などの消泡剤が適宜使用される。

このようにして得られた培養物中に蓄積された零〇Ｍ−
３２２３は、通常は培養濾液中に生成される。しかし菌
体中に生成量の約１０％程度生成されることもある。

培養濾液から０Ｍ−３２２３を採取するには、通常微生
物の培養物から代謝物を採取するのに用いられる手段が
単独あるいは任意の順序に組み合わせて、または反復し
て用いられる。すなわち例えば、ろ過、遠心分離、透析
、濃縮、乾燥、凍結乾燥、吸着、脱着、各種溶媒に対す
る溶解度の差を利用する方法（例えば、沈澱、結晶化、
再結晶、転溶、向流分配）、クロマトグラフィーなどの
手段が用いられる。

ＯＭ−３２２３は主として培養濾液に生成蓄積されるの
で、本化合物を分離採取するには、培養液から菌体を除
去した培養ろ液から採取するのがよい。例えばクロマト
グラフィーとしてはカチオン交換樹脂、セファデックス
イオン交換体、イオン交換セルロース等）、ゲル濾過材
、活性炭、ハイポーラスポリマー（例えばアンバーライ
トＸＡＤ−２，ローム・アンド・ハース社製）やダイヤ
イオンＨＰ−１０（三菱化成工業社製）、アルミナ、フ
ロリジル、シリカゲル、セルロース等ヲ用いるクロマト
グラフィーが有効に用いられる。

本化合物の薬学的に許容し得る塩たとえば塩酸塩、硫酸
塩、硝酸塩、燐酸塩、炭酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩お
よびコハク酸塩等を常法によって製造することができる
。この種の製法は周知であるから説明を省略する。

発明の効果 アデノシンデアミ不−ス阻害活性 牛腸前粘膜由来のアデノシンデアミネース（シグマ化学
製、Ａ−１１５５）を用い、メイヤーコンサイエンスの
方法（アナリテイカル・バイオケミストリー１０５巻、
３３４頁、１９８０年）に準じてアデノシンデアミネー
ス阻害作用をＩＣ５゜値として測定した結果、０Ｍ−３
２２３のＩＣ３゜値は１．６Ｘ１０−’Ｍであった。

豊作 マウスを供試動物とした急性前試験で０Ｍ−３２２３を
静脈内に投与した場合、１００ｍｇ／ｋｇ投与において
も致死するに至らなかった。投与後ｌＯ日日間観察およ
び剖検においても特に異状は認められなかった。

既知アデノシンデアミネース阻害剤コホルマイシンおよ
びデオキシコホルマイシンについても同様の投与実験を
行った結果、コホルマイシンでは１２．５ｍｇ／ｋｇ投
与でマウスを致死に至らしめた。またデオキシコホルマ
イシンでは２５ｍｇ／ｋｇ投与で体重の減少が認められ
た。

したがって、本物質は既知アデノシンデアミネース阻害
剤と比して低毒性であるということができる。

上記したよに、本発明物’ｆｆ０Ｍ−３２２３はアデノ
シンデアミネースの阻害活性を有することから、これを
ヒトに投与することにより急性リンパ性白血病を寛解へ
導くことも可能である。また公知の免疫抑制剤およびア
デノシン類縁薬剤の薬効を著しく持続せしめる併用剤と
して用いることも可能である。

実施例 以下に本発明を実施例により具体的に説明するが、これ
により本発明は限定されない。

実施例。

５００ｍ＃容フラスコに、グルコース２．０％、ペプト
ン０．５％、酵母エキス０．１％、肉エキス０．５％、
塩化ナトリウム０．５％、炭酸カルシウム０．３％を含
む液体培地（ｐＨ７，０）１００ｍｌを分注し、１２１
°Ｃで１５分間蒸気滅菌した。これらに寒天プレート上
に生育させた０Ｍ−３２２３の菌体を白金耳にて接種し
、３０″Ｃで３日間振優培養し種母を得た。

３ＯＮ容ジヤー・ノアメンタ−１基にグルコース２．０
％、ペプトン０．５％、酵母エキス０゜１％、肉エキス
０．５％、塩化ナトリウム０．　５％、炭酸カルシウム
０．３％を含む液体培地（ｐＨ７，０）２０Ａを仕込み
、１２１°Ｃで１５分間蒸気滅菌した。これに上記の種
母６本分を移植し、攪拌速度２００ｒ、ｐ、ｍ、通気量
１５β／分の条件下で３０°Ｃで２８時間通気攪拌培養
した。培養液をシャープレス型遠心機で遠心分離（１０
，００Ｏｒ、ｐ、ｍ、）　して菌体と培養液上清に分別
した。

得られた培養液上清約２０ｊ２を濾過補助剤としてセラ
イトを用い濾過した後、活性炭カラム（１、Ｏ４）に通
塔吸着させ、水（１０／）にて洗浄後、７％アセトン水
（７１）と５０％アセトン水（１０ｌ）で溶出させた。

得られた溶出液を減圧下５００　ｍ　７！まで濃縮した
後エタノール（２１）中へ攪拌滴下し濾過後、濾液を減
圧上濃縮乾固し８．０ｇの粉末を得た。これを少量の水
に溶解した後弱陽イオン交換樹脂アンバーライトＩＲＣ
（Ｈ型；ローム・アンド・ハース社製：ｌｏｏｍｌ）の
カラムに通塔吸着させ、水（３００ｍＪ）にて洗浄後、
０．ＩＮアンモニア水（５００ｍｊりにて溶出した。得
られた活性部分を凍結乾燥し、４．１ｇの粉末を得た。

次に、これを数回に分けて逆相シリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（メルク社製、Ａｒｔ、９３０２．２０ｇ
）により水にて展開し活性部分を濃縮し１９ｍｇの無色
針状晶の０Ｍ−３２２３物質を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明による新規化合物ＯＭ−３２２３の水で
測定した紫外線吸収スペクトル、第２図はＫＢｒＢｒ法
による該化合物の赤外線吸収スペクトル、第３図は該化
合物の重水で測定したプロトン核磁気共鳴スペクトルを
示す。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） で示される化合物ＯＭ−３２２３またはその薬学的に許
   容し得る塩。
2. （２）ストレプトミセス属に属し、式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） で示される化合物ＯＭ−３２２３を生産する能力を有す
   る微生物を培地に培養し、培養物中に該化合物ＯＭ−３
   ２２３を生成蓄積させ、該培養物から化合物ＯＭ−３２
   ２３を採取することを特徴とする化合物ＯＭ−３２２３
   またはその薬学的に許容し得る塩の製造法。