JPS62174099A - 新規グリコペプチド系抗生物質ｐａ−４２８６７−ａおよびｐａ−４２８６７−ｂとその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 イ、産業上の利用分野 本発明は式１； （式中、ＸがＣＨ，およびＹがＮＨｔを表わすか、また
はＸがＨおよびＹがＯＨを表わす。〉 で表わされる抗生物質ＰＡ−４２８６７−ＡおよびＰＡ
−４２８６７−Ｂとそれらの製薬上許容される塩、その
製造方法、ならびにＰＡ−４２８６７−ＡおよびＰＡ−
４２８６７−Ｂ産生微生物に関する。

口、従来の技術 最近の抗生物質の汎用に伴い、多剤耐性菌特にメチシリ
ン耐性菌の出現が問題となってきている。メチシリン耐
性菌とは、単にメチシリンに対して耐性を示すだけでは
なく、アミノグリコシド系抗生物質、テトラサイクリン
系抗生物質、セフェム系抗生物質、ペニシリン系抗生物
質、カルバペナム系抗生物質、マクロライド系抗生物質
など多くの抗生物質に対して耐性である。

このメチシリン耐性菌に対してグリコペプチド系抗生物
質特にバンコマイシン系抗生物質が活性を示すことが注
目されている（アンチマイクロバイアル・エージェント
書アンド・ケモセラピー（ＡＮＴＩＭＩＣＲＯＢＩＡＬ
　ＡＧＥＮｒ　ＡＮＤ　ＣＨＥＭＯＴ）ＩＥＲＡＰＹ）
　２８．６６０−６６２　（１９８５））。バンコマイ
シンは古くから知られている抗生物質（特公昭３３−８
４５０）であり、また、新たなバンコマイシン類縁体も
発見されてきた（アンチマイクロバイアル・エージェン
ト・アンド・ケモセラピ−（ＡＮｒＩＭＩＣＲＯＢＩＡ
Ｌ　ＡＧＥＮ’ｌ　ＡＮＤ　ＣＨＥＭＯＴＨＥＲＡＰＹ
）　２８．６６０−６６２　（１９８５）、ザ・ジャー
ナル・才ブ・アンチバイオティクスｆｌ）［ＥＪＯＵＲ
ＮＡＬ　ＯＦ　ＡＮＴＩＢＩＯＴＩＣ５）　３７．４４
６−４５３　（１９８４）、邦、　１−８　（１９８５
）、赴、　５１−５７　（１９８５）、特開昭６０−１
３９６２３．６０−１９９３９７．６０−２３１６９８
．６０−２３７０９９、など）。しかし、本発明の抗生
物質ＰＡ−４２８６７−ＡおよびＰＡ−４２８６７−Ｂ
は以上の化合物とは一致しない、全く新規な構造を有す
るバンコマイシン系抗生物質である。

ハ１発明が解決しようとする問題点 現在市販のバンコマイシンは経口用であり純度が低く、
そのまま注射剤として用いることは困難である。また、
従来のバンコマイシン系抗生物質よりもきらにメチシリ
ン耐性菌に対して強い活性を有する抗生物質が待望きれ
ていた。

二０問題点を解決するための手段 本発明者らは、ノカルディア属に属する菌株が式■： （以下余白） （式中、ＸがＣＨｓおよびＹがＮＨ２を表わすか、また
はＸがＨおよびＹがＯＨを表わす。） で表わされる、メチシリン耐性菌に対して強い活性を有
する化合物を産生ずることを見出し、弐■中ＸがＣＨ３
およびＹがＮＨｔテある化合物をＰＡ−４２８６７−Ａ
、ＸがＨおよびＹがＯＨである化合物をＰＡ−４２８６
７−Ｂと命名した。本発明はこれらの化合物だけでなく
、その製薬上許容される塩も包含する。

以下に本発明の化合物の物理化学的性状を示す。

物理化学的性質 ■ＰＡ−４２８６７−Ａ 紫外吸収スペクトル 入０°０１ＮＨｃ１ｎｍ（Ｅ　＋：Ｉｎ）　’　２８１
．８　（４１，１５）ｍａｘ 入”ｌＮＮ８０Ｈ”ｑｎｍ（Ｅ’　）：　３０２．６　
（４３，１４＞ｍａｘ　　　　　　　　１ｃｍ 比旋光度 ［αコ２５°：　　−８８，８±３．１°　（ｃ＝０．
４１、　水）赤外吸収スペクトル（第１図参照） Ｉ　Ｒ（ＫＢｒ）：３３９６．１６５４．１５８８（ｓ
ｈ）、　１５０５．１４２０．１３９６．１２２３．１
１３１．１０６４．１０１０１０（ｓｈ）”質量分析（
第２図参照） Ｍ　Ｓ　ｍ／ｚ：　１５５７　（Ｍ＋Ｈ）”元素分析 Ｃｙ　ｓｒｓ　ｓｏｗ　ｓＮ＋。Ｃ１・３にＨｌｏとし
て理論値くに）’Ｃ；５４．０８．　Ｈ：５．９７．　
Ｎｉ８．６４．　Ｃ１１２，１９実験値（％）’Ｃ；５
４．０３．　Ｎｉ６．１４．　Ｎ；８．６０．　Ｃ１１
２，１９核磁気共鳴スペクトル ’Ｈ−ＮＭＲ：　４００ＭＨｚ、　ｄｓ−ＤＭＳＯ＋１
ｄｒｏｐＤ、Ｏ中、内部標準ＴＭＳ、　１００℃（第３
図参照） δｐｐｍ：　０．８８８（ｄ、６．５．３１）、０．９
１７（ｄ、６゜０．３）１）、１．０９３（ｄ、６．０
．３１（＞、１．１５６（ｓ、３Ｈ）、１．１６７（ｄ
、６．２．３Ｈ）、１．２０２（ｓ、３Ｈ）、１．４２
５近辺（ｍ、ＩＨ）、１５２５近辺（ｍ、ＩＨ）、１．
６３０（ｄｄ、１３．６．４．３、ＩＨ）、　　１．６
４０（ｄｄ、１３６．４．３、ＩＨ）、１．７６６（ｍ
、ＩＨ）、１．８６６（ｄ様、１３．６、ＩＨ）、１．
９１５（ｄ様、　１３．６、ＩＨ）、２、１７５（ｄｄ
、１６．０．７．５．１）１）、２．３１５（ｓ　、３
Ｈ）、２．５６０（ｄｄ、１６．０．５．０、ＩＨ）、
２．８９２（ｄ、９．５、ＩＨ）、２．９４７（ｄ、９
．６．１１（）、３，０３近辺（溶媒中の水分に重なる
、ＩＨ）、３．３１近辺（ｍ、２Ｈ）、３．４２８（を
様、８．７近辺、ＩＨ）、　　３．５４０（ｄｄ、１１
．６．４．８、ＬＨ＞、　　３．６０９（ｑｄ、６．２
．９．５、ＩＨ）、３．６８８（ｄｄ、７．２．８．７
．ＩＨ）、３．７３０（ｄｄ、１１．６．２．１、ＩＨ
）、４．１４１（ｑｄ、６．０．９．６．１１（）、４
．２３３（ｂｒｏａｄ　ｓ様、ＩＨ）、４．３２８（ｄ
ｄ、５．０．７，５、ＬＭ）、４．４８５　（ｓ様、Ｉ
Ｈ）、４．５１６（ｓ、ＩＨ）、４．６７４（ｄ様、４
．３近辺、ＩＨ）、４．６９９（ｄ、４０、ＩＨ）、５
．１５２（ｄ様、４．０近辺、ＩＨ）、５．１８８（ｂ
ｒｏａｄ　ｓ様、ＩＨ）、５．１９０（ｓ様、ＩＨ）、
５．３０５（ｄ様、４．３近辺、ＩＨ）、５．６０３（
ｄ、７．２、ＬＨ＞、５．６３８（ｂｒ。

ａｄ　ｓ様、ＩＨ）、５．７６２（ｂｒｏａｄ　ｓ様、
ＩＨ）、６、３７５（ｄ、２３、ＩＨ）、６．３８８（
ｄ、２．３．１）１）、６、７１２（ｄ、８．３．１）
り、６．７９３（ｄｄ、８，３．２．２、ＬＨ）、７．
０８７（ｄｄ、８．５．２．２、ＩＨ）、７．１２０（
ｄｄ、８．３．２．２、［）、７．１４８（ｄ、２．２
．１１（＞、７゜２１５（ｄ、８．４、ＩＨ）、７．２
８６（ｂｒｏａｄ　ｄｄ様、８゜３近辺、２．１近辺、
ＩＨ）、７．３２７（ｄｄ、８．４．２゜０．１）１）
、７．５８６（ｂｒｏａｄ　ｄｄ様、８．５近辺、２近
辺、ＩＨ）、７．８６３（ｄ、２．０、ＩＨ）”Ｃ−Ｎ
ＭＲ’　５０ＭＨｚ、　ＤｔＯ中、外部標準Ｃ）ｌｓｃ
Ｎｌ、　７ｐｐｍとして、６０℃（第４図参照） δｐｐｍ：　１７８．９．１７７．８．１７４．８．１
７２．１゜１７１．９．１７１．７．１７０．３．１６
７．８．１５８．０゜１５６．３．　１５５．９．　１
５５．８５．　１５５．８５゜１５３．８５，１５１，
１３８．８，１３７，１３６．８５゜１３６．７，１３
４．９．　１３３．９．　１３１．　１３０゜１２８．
８．　１２８．４．　１２７．８．　１２７．１゜１２
６．２．　１２４．６．　１２４．２．　１２３．９．
　１２２．８１１９．４．　１１８．６．　１０７．４
．　１０７．３．　１０４．９１０４、　１０２．３．
　９９．２．　９４．　８０．７．　７７．５７７．５
．　７６．９．　７６．８．　７５．２．　７２．５゜
７０．４．　６７．４．　６７．２．　６３．４．　６
３．４゜６１．７．　６０．５．　５９．９．　５６．
１．　５５．５゜５５．５．　５４．９．　５２．７．
　４２．　４１．４．　３９．８５゜３７．６．　３４
．９．　２５．２．　２３．３．　２２．５゜２０．６
．　１９．９．　１８．４．　１８．１薄層クロマトグ
ラフィー メルクプリコーテッドＩＬＣプレート　シリカゲル６０
Ｆ２５４ 展開溶媒 クロロホルム：メタノール：濃アンモニア水：二級ブタ
ノール：水（５：１０：５：５：２）Ｒｆ＝０．２８ 高速液体クロマトグラフィー（高滓ＬＣ−６Ａ）カラム
：ケムコバック　ヌクレオシル５Ｃ１８φ４．６　ｘ　
１５０　ｍｍ　（ケムコ社）検出：　ＵＶ　２２０　ｎ
ｍ　　　流速：　１　ｍｌ／ｍｉｎ。

動用：８にアセトニトリル−０，０５Ｍリン酸バッファ
ー（ｐＨ３，５） 保持時間：　８．８　ｍｉｎ。

：９ｚアセトニトリルー０．０５Ｍリン酸バッファー（
ｐＨ３，５＞ 保持時間：　５．６　ｍｉｎ。

呈色反応：ニンヒドリン陽性 溶解性；水、ジメチルスルホキシドに可溶、アルコール
に難溶、エーテル、ベンゼン、りＩコロホルム、酢酸エ
チルに不溶 性質二両性物質、白色非結晶粉末 ■ＰＡ−４２８６７−Ｂ 紫外吸収スペクトル λ０．ＯＩＮＨＣ１ｎｍ（Ｅｊ：ＩＴｌ）、　２８１．
６　（４４，２２）ｍａｘ λ”ＩＮ”ＯＨ”ｑｎｍ（Ｅ’　）：　３０１　（４５
，９４）ｍａｘ　　　　　　　　　　　　　ＩＣｍ比旋
光度 ［α］２”：　−９７，３±３．３”　　（ｃ＝０．４
１、水）赤外吸収スペクトル（第５図参照） Ｉ　Ｒ（ＫＢｒ）：３３６０．１６５６．１５８７（ｓ
ｈ）、　１５０５．１４２１．１３９３．１２３０．１
１２９．１０６２．１１０１３（ｓｈ）Ｃ”質量分析（
第６図参照） Ｍ　Ｓ　ｍ／ｚ：　１５４４　（Ｍ＋）Ｉ）”元素分析 Ｃｔ　Ｊ＊　１０２　？ＮＩＣ１・１にＨ，Ｏとして理
論値く％）：Ｃ；５５．０１．　Ｈ；５．７１．　Ｎ：
８．０２．　Ｃ１；２．２６実験値Ｃ％＞：Ｃ：５４．
８３．　Ｈ；５．８１．　Ｎ；８．４６．　Ｃ１；２．
１３核磁気共鳴スペクトル ’Ｈ−ＮＭＲ：　４００Ｍ）ｌｚ、　ｄｓ−ＤＭＳＯ＋
１ｄｒｏｐＤｔＯ中、内部標準ＩＭＳ、１００°Ｃ〈第
７図参照） Ｓｐｐｍ：　０．８９１（ｄ、６６．３Ｈ）、０．９１
９（ｄ、６゜−１ｌ＝ ５．３Ｈ）、　　１．０８０（ｄ、６．２．３Ｈ）、　
　１．１５９（ｓ、３Ｈ）、１．１７３（ｄ、６．０．
３Ｈ）、１４２８近辺（ｍ、ＩＨ）、Ｌ　４６９（ｍ、
ＬＨ）、１．５２５近辺（ｍ、ＩＨ）、１、６４７（ｄ
ｄ、１３．７．４．４、ＬＨ）、１．７６７（ｍ、ＬＨ
）、１．９２０（ｄ様、、１３．７．１）１）、２．０
４２（ｄｄ様、１３０近辺、５．３近辺、ＩＨ）、２．
１８２（ｄｄ、１６．０．７．５、ＩＨ）、２．３１４
（ｓ、３Ｈ）、２．５６５（ｄｄ、１６．０．４．８．
１）１）、２．８１７（を様、９．１近辺、ＩＨ）、２
．８９５（ｄ、９．７、ＬＨ）、３．０３近辺（溶媒中
の水分に重なる、ＩＨ）、３．３３近辺（ｍ、２Ｈ）、
３．４９７（を様、８，５近辺、ＩＨ）、３．５４７（
ｄｄ、１１．６．４，９、ＩＨ）、　　３．６３６（ｑ
ｄ、６．０．９．７、ＬＨ）、３．６６８（ｄｄ、７．
２．８５、ＩＨ）、３．６８５近辺（ｍ、１）１）、３
．７３３（ｄｄ、１１．６．２．３．ＬＨ）、４．０９
２（ｑｄ、６゜２．９．３、ＩＨ）、４．２３４（ｂｒ
ｄ、１．５近辺、ＩＨ）、４．３３０（ｄｄ、４．８．
７．５．ＬＨ）、４．４８９（ｓ様、ＩＨ）、４．５１
６（ｓ、ＩＨ）、４゜６８６（ｄ様、４．４近辺、ＩＨ
）、４．６９２（ｄ、３．９．ＩＨ〉、５．１５６（ｄ
様、３．９近辺、ＩＨ）、５．１９２Ｃｂｒｏａｄ　ｓ
様、ＩＨ〉、５．２００（ｓ様、ＩＨ）、５３３４（ｄ
様、３５近辺、ＩＨ）、５．６０４（ｄ、７２、ＩＨ）
、５．６４１（ｂｒｏａｄ　ｓ様、ＩＨ）、５．７７１
（ｂｒｏａｄＳ様、ＩＨ）、６．３８８（ｓ様、２Ｈ）
、６．７１９（ｄ、８．５．１）１）、６．８００（ｄ
ｄ、８．５．２．３．１）１）、７．１０７（ｄｄ、８
．４．２４、ＩＨ）、７．１４７（ｄ、２３、ＬＨ＞、
７、１７０（ｄｄ、８．４．２．４．１）１）、７．２
３７（ｄ、８．４、ＬＨ）、７．２９６（ｂｒｏａｄ　
ｄｄ、８４近辺、２．０近辺、ＩＨ）、７゜３３１（ｄ
ｄ、８．４．２．０．１８）、７，５９０（ｂｒｏａｄ
　ｄｄ、８．４．２．２近辺、ＩＨ〉、７．８５７（ｄ
、２．０．１１（＞ 目Ｃ−ＮＭＲ’　５０ＭＨｚ、ＤｔＯ中、外部標準ｃｌ
（ｓｃＮｌ、　７ｐｐ＋ｎとして、６０°Ｃ（第８図参
照） δｐｐｍ：　１７７、９．１７７、８．１７４．８．１
７２．２゜１７２、Ｌ　１７１．７．１７０．３．１６
７．８．１５７．６゜１５６．１．１５６．１５５．８
．１５５．５．１５３．９゜１５１．２．１３９．１３
７．１３６．７．１３６．７゜１３５、１３４．２．１
３１．４．１３０．９．１２８．８゜１２８．４．１２
７．９．１２７．１．１２６．４．１２４．５゜１２４
．３．１２４．１１２２．６．１１９．３．１１８．６
゜１０９．３．１０７．２．１０４．６．１０４．１０
２．９゜９９．３．　９３．７．　７９．４．　７８．
１．　７７．９゜７６．７．　７６．１．　７５．２．
　７２．５．　７０．２゜６９．６．　６８．７．　６
７．３．　６３．１．　６３．１゜６１．７．　６０．
４．　５９．９．　５７．１．　５５．５゜５５．５．
　５３．　４１．５．　４０．２．　３９．３．　３７
．７゜３４、Ｌ　　２５．１．　２３．３．　２２．５
．　１９．３゜１８．３．　１７．８ 薄層クロマトグラフィー メルク　ブリコーテッドＴＬＣプレート　シリカゲル６
０Ｆ２５４ 展開溶媒 クロロホルム：メタノール；濃アンモニア水：二級ブタ
ノール：水（５：１０：５：５：２）Ｒｆ＝０．２２ 高速液体クロマトグラフィー（高滓ＬＣ−６Ａ）カラム
：ヌクレオシル５Ｃ１８φ４．６　ｘ　１５０　ｍｍ検
出：　ＵＶ　２２０　ｎｍ　　　流速：　１　ｍｌ／ｍ
ｉｎ。

動用：９ｚアセトニトリルー０．０５Ｍリン酸バッファ
ー（ｐＨ３，５） 保持時間：　９．４　ｍ１ｎ１ ．１０＠Ａアセトニトリル−０，０５Ｍリン酸７へッフ
ァ−（ｐＨ３，５） 保持時間：　６．９　ｍｉｎ。

ロロホルム、酢酸エチルに不溶 ＰＡ−４２８６７−Ｂは、次式； （式中、ＸがＣＨ３およびＹがＮＨ２を表わすか、また
はＸがＨおよびＹがＯＨを表わす。） で表わされる立体構造を有すると推定される。

以上のようにＰＡ−４２８６７−ＡおよびＰＡ−４２８
６７−Ｂは公知のグリコペプチド系抗生物質とは異なる
性状を有しており、新規グリコペプチド系抗生物質であ
ると判断される。

ＰＡ−４２８６７−ＡおよびＰＡ−４２８６７−Ｂの産
生菌としては、−土壌試料から分離きれたＰＡ−４２８
６７株が挙げられる。本菌株は分類学的検討結果からノ
カルディア・オリエンタリス（Ｎｏｃａｒｄｉａ　ｏｒ
ｉｅｎｔａｌｉｓ）と同種であると同定きれ、微生物工
業技術研究所にノカルディア・オリエンタリスＰＡ−４
２８６７（Ｎｏ−ｃａｒｄｉａ　ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ
　ＰＡ−４２８６７）　、微工研菌寄第８６０１号とし
て寄託している。

本菌株の菌学的性状は次に示す通りである。

（１）形態学的性状 気菌糸はイースト麦芽寒天、チロシン寒天、ペンネット
寒天培地等で良好に着生し、胞子形成も豊富である。分
枝は単純分枝で輪生枝は見られない。気菌糸は比較的長
く伸長し、その先端は直状ないし波状である。電子顕微
鏡による観察の結果、胞子は長円筒形でその太ききは巾
０．３〜０．５μｍ、長き１．２〜１．７μｍであり、
その表面構造は平滑（Ｓｍｏｏｔｈ　ｔｙｐｅ）である
。胞子のう、鞭毛胞子、菌核はいずれも認められない。

（以下余白） （２）培養上の諸性状（２８℃、１４日間培養）色名の
表示は１色の標準」（日本色彩研究新版）による。

生育温度（ペンネット寒天培地、各温度で１４日間培養
） １０°Ｃ：かなり良く生育はするが気中菌糸は形成せず ２８°Ｃ：生育、気中菌糸形成、胞子形成いずれも良好
。

３７℃：成育せず ４５℃：生育せず （３）生理学的諸性状（２８°Ｃ１１４日間培養）メラ
ノイド色素産生能　　　　陰性 チロシナーゼ反応　　　　　　陰性 ミルクの凝固　　　　　　　　陰性 ミルクのペプトン化　　　　　陽性 ゼラチンの液化能　　　　　　陽性 澱粉の氷解能　　　　　　　　陰性 （以下余白） （４）炭素源の利用能 （５）細胞壁の組成 ジアミノピメリン酸の種類はメゾ−（ｍｅｓｏ−）型で
ある。

以上の諸性状により本菌株はノカルディア属に属する株
であると判断きれる。ワックスマン著、ジ・アクチノミ
セテス（Ｔｈｅ　Ａｅｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ　）第２
　巻（１９６１年）、シャーリングおよびボラトリ−ブ
のＩ　、　Ｓ　、　Ｐ　、　（Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎ
ａｌ　ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓＰｒｏ　ｊｅｃｔ　）
報告［インターナショナル・ジャーナル・オプ・システ
マテインク・バクテリオロジー（Ｉｎｔａｒｎａｔｉｏ
ｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
１３ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ　）第１８巻（１９６８年
）、同第１９巻（１９６９年）、同第２２巻（１９７２
年）］およびバーシーズ・マニュアル・オプ・デターミ
ネイティブ・バク、テリオロジ−（Ｂａｒｇｅｙ’ｓ　
Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａ−ｔｉｖｅ　
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版（１９７４年）なら
びに、その他の放線菌の新種発表文献の中から本菌株の
近縁株を検索すると、ノカルディア・オリエンタリス（
Ｎｏｃａｒｄｉａ　ｏｒｉａｎｔａｌｉｓ、以下に示す
文献ではＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃａｓ　ｏｒｉｅｎｔａｌ
ｉｓとして記載されている）　［Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏ
ｎａｌ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ第１８巻、１５４〜１５７頁
（１９６８年）、Ｔｈｅ　Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｔｅｓ
、第２巻、２５４〜２５５頁（１９６１年）］が最も近
縁な種として挙げられる。ノカルディア・オリエンタリ
スとＰＡ−４２８６７株の性状を比較した結果、アラビ
ノースとラムノースの利用能に差が認められたが、その
他の主要な諸性状は良く一致した。従って、ＰＡ−４２
８６７株はノカルディア・オリエンタリスと同種である
と同定され、ノカルディア・オリエンタリスＰＡ−４２
８６７（Ｎｏｃａｒｄｉａｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ　ＰＡ
−４２８６７）と命名きれた。

本発明においては、上記のＰＡ−４２８６７株ならびに
その天然および人工変異株は勿論のこと、ノカルディア
属に属し、ＰＡ−４２８６７−Ａおよび／または−Ｂを
産生ずる菌株はすべて使用でき、本発明の範囲内とする
。

ＰＡ−４２８６７−Ａおよび／または−Ｂの生産はＰＡ
−４２８６７−Ａおよび／または−Ｂ産生株を栄養培地
に好気的条件下に培養し、培養終了後培養物からＰＡ−
４２８６７−Ａおよび／または−Ｂを分離採取すること
により行なう。以下にＰＡ−４２８６７−Ａおよび／ま
たは−Ｂの一般的製造方法を記載する。

培地組成、培地条件などは抗生物質の生産に一般に用い
られているものを用いるとよい。培地は原則として、炭
素源、窒素源、無機塩などを含む。必要に応じて、ビタ
ミン類、先駆物資などを加えてもよい。炭素源としては
、例えば、グルコース、澱粉、デキストリン、グリセリ
ン、糖蜜、有機酸などが単独でまたは混合物として用い
られる。窒素源としては、例えば、大豆粉、コーンスチ
ーブリカー、肉エキス、酵母エキス、綿実粉、ペプトン
、小麦胚芽、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなと
が単独または、混合物として用いられる。無機塩として
は、例えば、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カ
リウム、硫酸マグネシウム、硫酸鋼、塩化マンガン、硫
酸亜鉛、塩化コバルト、各種リン酸塩などがあげられ、
必要に応じて培地に添加する。

培養は一般に抗生物質の製造に用いられる方法に準じて
行なえばよく、好ましくは液体培養が、大量生産を行な
う場合は、深部通気培養がよい。

培地のｐＨが変動しうる場合には、培地に炭酸カルシウ
ムなどの緩衝剤を加えてもよい。培養は約２０〜４０℃
で行なうとよく、特に２８〜３２℃が好ましい。培養時
間は発酵の規模に大きく左右されるが、約６０〜１００
時間が大量生産を行なう場合に要する培養時間である。

培養中に激しい発−２；ｌ− 泡が起こる場合には、培養前または培養中に例えば、植
物油、ラード、ポリプロピレングリコールなどの消泡剤
を適宜添加するとよい。

培養終了後、培養物からＰＡ−４２８６７−Ａおよび／
または−Ｂを分離採取するには、通常の発酵生産物を分
離採取する方法を適宜用いる。例えば濾過、遠心分離、
各種イオン交換樹脂やその他の活性吸着剤による吸脱着
やクロマトグラフィー、各種有機溶媒による抽出などを
適当に組み合わせるとよい。　ＰＡ−４２８６７−Ａお
よび−Ｂは分離操作のため、また医薬、動物薬として使
用する便宜上、塩とするのが望ましいことがある。ＰＡ
−４２８６７−Ａおよび−Ｂと塩を形成しうる塩基とし
てはカリウム、ナトリウムなどのアルカリ金属、アルミ
ニウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属、また酸
としては塩酸、硫酸、硝酸などの無機酸および酢酸、フ
マル酸などの有機酸が挙げられる。

ＰＡ−４２８６７−Ａおよび−Ｂおよびその製薬上許容
される塩は抗菌剤の活性成分として経口的にまたは非経
口的にヒトまたは動物に投与できる。汎用される賦形剤
、安定化剤、保存剤、湿潤剤、界面活性剤などを用いて
、錠剤、カプセル剤、粉剤として経口投与することがで
き、注射剤、塗布剤、坐剤として非経口的に投与するこ
ともできる。その投与量は治療目的、患者の年齢、症状
などによって異なるが、静脈注射する場合には成人に対
して１日おおよそ０．１〜１０ｇである。

二０作用 本発明の化合物ＰＡ−４２８６７−Ａおよび−Ｂはダラ
ム陽性菌特にメチシリン耐性菌に対して強い抗菌活性を
示し、ヒトまたは動物のための医薬として有用である。

また、高純度で採集可能であるので、経口剤としてはも
ちろんのこと、注射剤として用いるのに適している。

ホ、実施例 以下に実施例によって本発明を詳述するが、本発明を何
ら限定するものではない。

（ａ）発酵工程： 可溶性澱粉０．５％、グルコース０．５％、ポリペプト
ン０．５％、牛肉エキス０．５％、酵母エキス０．２５
％、食塩０．２５％、脱イオン水（ｐ　Ｈ７、０、殺菌
前）よりなる培地８００ｍ１を含む２！容三角フラスコ
にノカルディア・エスピーＰＡ−４２８６７（微工研菌
寄第８６０１号〉の種培養スラントを接種し、毎分１８
０回転で、２８°Ｃ５４８時間振盪培養を行なう。この
培養液８００ｍ１を、上記と等しい成分からなる培地２
０１２を含む３０１２容ジ〜−ファーメンクーに植菌し
、通気量２ｆｌ／分、内圧０　、５　ｋｇ／ｃｍ”Ｇ、
攪拌回転数２０　Ｏｒｐｍで、２８℃、２４時間培養す
る。

次いでこの培養液１０ρを、トマトペースト２゜４％、
デキストリン２．４％、乾燥酵母（ビースト、岩城製薬
製）１．２％、塩化コバルト・６水和物０．０００６％
、消泡剤Ｐ−２０００（犬日本インキ製＞Ｏ，ＯＳ％、
水道水（ｐＨ７，０、殺菌前）よりなる培地１４ＣＢを
含む２５０！発酵タンクに植菌し、通気量１５０ρ／分
、内圧５％１、攪拌回転数３２５　ｒｐｍで、２８℃、
６４時間培養する。

（ｂ）分離工程： 上記工程で得られた培養液は１０％水酸化ナトリウムに
てｐＨ１０，５に調整し、遠心分離によって上清液１４
５！を得る。この上清液をｐＨ４，０に調整後、１３ρ
のダウエックス５０Ｘ２（Ｎａ１型）（ダウケミカル社
製）のカラムに流し、水７０！で洗浄後、１％トリエチ
ルアミンを含む３０％アセトン水４０ρで溶出する。枯
草菌を用いたパルプディスク拡散法で活性を示すフラク
ション２２りを集め、ｐＨ５に調整する。これを減圧濃
縮しアセトンを留去する。次いで、ＨＰ−２０（三菱化
成社製）２りのカラムに流す。水２０りで洗浄後、５０
％アセトン水で溶出する。活性フラクション６１２を集
める。これを減圧濃縮し、凍結乾燥するとＰＡ−４２８
６７の粗粉末３５．６ｇを得る。

（ｃ）精製工程： 上記粗粉末１２ｇを用いて０．０１Ｎ塩酸１５０ｍ１溶
液とし、Ｍ’ＩＣＧＥＬ　ＣＨＰ−２０Ｐ（三菱化成社
製）１００ｍｌでクロマトする。）ＩＰＬｃで含有程度
をチェックしながら０．０ＩＮ塩酸で溶出し、ＰＡ−４
２８６７＝２７− −ＡＸＢを含む分画をｐＨ７，０とし、再度ＣＨＰ−２
０Ｆでクロマトする。ＰＡ−４２８６７−Ａ、　Ｂ含有
液をアプライした後、１５％メタノール水で充分洗浄し
、１５％メタノール−０，００５Ｎ塩酸で溶出し、ＰＡ
−４２８６７−Ａ含有分画およびＰＡ−４２８６７−Ｂ
含有分画に分ける。ＰＡ−４２８６７−Ｂ含有分画をｐ
Ｈ７，０に調整後濃縮凍結乾燥し、残渣６Ｂ３ｍｇを得
た。ＰＡ−４２８６７−Ａ含有分画はｐＨ７，０に調整
後濃縮し、脱色目的でＣＨＰ−２０Ｆ　１０　ｍｌでり
０７トし、希塩酸（ｐＨ５，０）水溶液で溶出し、ＰＡ
−４２８６７−Ａを含む分画を集め、濃縮後凍結乾燥し
て、残渣５７１ｍｇ（純度７０％）を得る。この５７１
ｍｇを水に溶解した後希塩酸を加えｐＨ５，０に調整し
、ＣＵＰ−２０Ｐ１０ｎ＋１のカラムに付し、水で溶出
し、ＰＡ−４２８６７−Ａ含有分画を集めｐＨ７，０に
調整し、濃縮後再度脱塩目的でＣＨＰ−２０Ｐ　１０　
ｍｌ（０、０５Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ７，０＞で安定
化）のカラムに付し、０．０５　Ｍ　ｌ）ン酸塩緩衝液
（ｐＨ７，０）で洗浄、水洗後５０％メタノール水で溶
出、ＰＡ−４２８６７−Ａ含有分画を集め、濃縮後凍結
乾燥しＰＡ−４２８６７−Ａ２５６　ｍｇ（純度９５％
〉を得る。ＰＡ−４２８６７−Ｂ含有残渣６８３ｍｇは
水に溶解後金塩酸を加えｐＨ４，０に調整し脱色目的で
Ｃ）ＩＦ−２０Ｐ　５　ｍｌのカラムに付し、希塩酸水
溶液（ｐＨ４，０）で溶出し、ＰＡ−４２８６７−Ｂ含
有分画を集めｐＨ７゜０に調整し濃縮した後、バツクド
カラムＲＱ−２（富士ゲル販売株式会社）に付す。ＨＰ
ＬＣで純度をチェックしながら７％アセトニトリル−０
，０５Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ４，９＞、次いで８％ア
セトニトリル−０，０５Ｍリン酸塩緩衝液（ｐＨ４，９
）で溶出、９５％純度以上の分画を集めｐＨ７，０に調
整し、濃縮後脱塩のためσＦ−２０Ｐ１０　ｍｌ（０、
０５Ｍリン酸塩緩衝液（ｐ　Ｈ７，０）で安定化）のカ
ラムに付す。水洗後、５０％メタノール−水で溶出しＰ
Ａ−４２８６７−Ｂ含有分画を集め、濃縮、凍結乾燥し
、ＰＡ−４２８６７−Ｂ　１０２　ｍｇ（純度９８％）
を得る。

へ０発明の効果 ＰＡ−４２８６７−ＡおよびＰＡ”４２８６７−Ｂのｉ
ｎ　ｖｉｔｒｏでの抗菌力を日本化学療法学会所定の方
法に準じ、以下の条件下で測定した。

■　菌体懸濁液の調製 斜面培地上の被検菌株１白金耳を成育培地（トリプトソ
イブロス、栄研化学（株））ｔｍｌに接種し、３７℃で
１８〜２０時間培養する。培養物の１００倍希釈物を接
種用菌体懸濁液として使用する。

■　サンプル溶液 サンプルを９−１０ｍｇ正確に秤量し、蒸留水に２　ｍ
ｇ／ｍｌとなるように溶解する。

■　寒天平板 サンプル溶液を滅菌水で段陽倍数希釈する（２０００〜
０．２５μｇ／ｍｌ　）。希釈サンプル溶液それぞれの
０．５ｍｌを滅菌プラスチックペトリ皿（直径９ｃｍ）
に移し、そこへ９．５ｍｌの寒天培地（感受性試験培地
、栄研化学（株））を注ぎ、緩やかに攪拌した後、凝固
させる。

■　ＭＩＣ値の測定接種用懸濁液を１白金耳（０，５−
１μｍ）を上記方法で調整した様々な濃度のサンプルを
含む寒天平板の表面に移す。３７°Ｃで１８−２０時間
培養した後、寒天表面での菌の成育を観察する。菌の成
育が完全に阻止されたと観察される最低濃度をＭＩＣと
しμｇ／ｍｌで表わす。

■　特殊培地における馬血清の添加 ストレプトコッカスに対するＭＩＣを測定するための寒
天培地は、注入前に０．５％（Ｖ／Ｖ＞馬血清を添加す
る。

結果を、表１に示す。

（以下余白） 次に、ｉｎ　ｖｉｖｏでのＰＡ−４２８６７−Ａの抗菌
活性を表２に示す。

試験方法；　５ｌｃ−ＩＣＲ雌マウマウス群８匹）に被
検菌を腹腔内接様し、１時間後と５時 間後の計２回ＰＡ−４２８６７−Ａ（倍数希釈〉を皮下
投与する。

結果＝７日後のマウスの生存率から５０％有効量（ＥＤ
、。）を算出する。

（以下余白）

【図面の簡単な説明】

第１図はＰＡ−４２８６７−Ａの赤外線吸収スペクトラ
ム、第２図はＰＡ−４２８６７−Ａの質量分析スペクト
ラム、第３図はＰＡ−４２８６７−Ａの’）ｌ−ＮＭＲ
１第４図はＰＡ−４２８６７−Ａの”　Ｃ−ＮＭＲを示
す。第５図はＰＡ−４２８６７−Ｂの赤外線吸収スペク
トラム、第６図はＰＡ−４２８６７−Ｂの質量分析スペ
クトラム、第７図はＰＡ−４２８６７−ＢのＩｎ−ＮＭ
Ｒ，第８図はＰＡ−４２８６７−Ｂの”Ｃ−ＮＭＲを示
す。

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）式 I ： ▲数式、化学式、表等があります▼ I （式中、ＸがＣＨ＿３およびＹがＮＨ＿２を表わすか、
   またはＸがＨおよびＹがＯＨを表わす。） で表わされる抗生物質ＰＡ−４２８６７−ＡまたはＰＡ
   −４２８６７−Ｂとその製薬上許容される塩。
2. （２）式 I においてＸがＣＨ＿３およびＹがＮＨ＿２
   である特許請求の範囲第１項に記載のＰＡ−４２８６７
   −Ａ。
3. （３）式 I においてＸがＨおよびＹがＯＨである特許
   請求の範囲第１項に記載のＰＡ−４２８６７−Ｂ。
4. （４）ノカルディア属に属するＰＡ−４２８６７−Ａお
   よび／またはＰＡ−４２８６７−Ｂ産生菌を培地に培養
   し、培養物からＰＡ−４２８６７−Ａおよび／またはＰ
   Ａ−４２８６７−Ｂを分離採取することを特徴とするＰ
   Ａ−４２８６７−Ａおよび／またはＰＡ−４２８６７−
   Ｂの製造法。
5. （５）該ＰＡ−４２８６７−Ａおよび／またはＰＡ−４
   ２８６７−Ｂ産生菌がノカルディア・オリエンタリス種
   に属する菌である特許請求の範囲第４項に記載の製造法
   。
6. （６）該ＰＡ−４２８６７−Ａおよび／またはＰＡ−４
   ２８６７−Ｂ産生菌がノカルディア・オリエンタリスＰ
   Ａ−４２８６７である特許請求の範囲第４項に記載の製
   造法。
7. （７）ノカルディア属に属するＰＡ−４２８６７−Ａお
   よび／またはＰＡ−４２８６７−Ｂ産生菌。
8. （８）ノカルディア・オリエンタリス種に属する特許請
   求の範囲第７項に記載のＰＡ−４２８６７−Ａおよび／
   またはＰＡ−４２８６７−Ｂ産生菌。
9. （９）ノカルディア・オリエンタリスＰＡ−４２８６７
   である特許請求の範囲第８項に記載のＰＡ−４２８６７
   −Ａおよび／またはＰＡ−４２８６７−Ｂ産生菌。