JPS6281394A - 混合酸型重合性リン脂質誘導体およびその製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、混合酸型重合性リン脂質誘導体、さらに詳し
くは光重合可能なジエン基を官能基として有するホスホ
リルコリン型すン脂買紡導体およびその製造方法に関す
る。

〔従来の技術〕

両親媒性物質の自己組織能を生かし、単分子層膜、二分
子層膜、積層膜およびベシクルなど全形成させ、応用す
る分子組織工学の研究が盛んである。この両親媒性物質
の中で、最も代表的なリン脂質は生体膜の主要な構成成
分であり、天然物からの抽出が容易であることから広く
一般に用いられている。

リン脂質を水浴液に懸濁させると、内部に水島金有する
脂質二重層膜から成る閉鎖小胞であるリポソームを形成
する。このリポソームは形態的に優れた生体膜モデルと
して、生体反応のシュミレーションに用いられるばかり
でなく、薬剤、酵素、遺伝子など全封入可能な運搬体（
キャリヤー）として、さらには特定標識分子導入リポソ
ームによる標的細胞へのターゲツティングや、センサー
への応用などリポソームに特定の機能全付与した積極的
な利用がされつつある。

また、リン脂質の二分子膜形成能を利用したカプセル膜
へのコーティングによるマイクロカプセルへの応用や、
単分子層膜や積層膜の形態でのバイオセンサーや医用材
料への応用、さらには分子エレクトロニクス等におよぶ
生化学、医学、薬学、工学など幅広い分野での応用がな
されつつある。

しかしながら、両親媒性物質から形成される組織化され
た分子集合体は、その構造全疎水的な凝集力だけで維持
しているため、不安定であるという困難な問題を抱えて
いる。

そこで前述した種々の分野により広く応用する次めには
、リン脂質の組織化された分子集合体の不安定性を改善
することが不可欠であり、そのための技術が強く要望さ
れているのが現状である。

この要望にこたえるものとして、リン脂質分子へ光重合
性官能基ｔ−導入し、分子組織化した後、光照射によシ
共有結合で重合高分子化することによりその構造全安定
化させる方法が注目されており、特に医用リポソーム等
への応用では、生体適合性の良好な天然リン脂質に近い
構造ならびに組成をもつ重合性リン脂質誘導体に関する
要請が著しく高い。

リン脂質の中で通常利用されているものは、疎水性基と
親水性基のバランスのとれたシリンダー型分子であり、
単独でも二分子膜構造をとシ得るジアシル−３−グリセ
ロホスホリルコリン（以下レシチンと略す）型のリン脂
質である。このレシチン型リン脂質に光重合性官能基金
導入した例としては、現在、メタクリル基、スチレン基
、ジアセチレン基およびツエン基等をそれぞれ導入した
ものが知られている。

この中で、メタクリル基金導入した例：（例えば、　Ｊ
、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、Ｓｏｃ、、　１０４．７９１（１９
８２）　）、スチレン基を導入した例：（例えばｔｐ５
開昭６０−１１６６８９号公報、特開昭６０−１１６１
３９０号公報）では、いずれもそれぞれの重合性官能基
を疎水性アルキル基の末端にしか導入することができず
、二分子膜固有の性質であるグルー液晶相転移熱量を大
きく減少させてしまう欠点がある。さらにそれらの分子
構造が天然の脂質とはかけ離れたものとなってしまい、
又、生体への適用では毒性が問題となる。

又、ジアセチレン基を導入した例；（例えは米国特許４
３４８３２９号）もあるが、このジアセチレン訪導体を
用いた重合性リポソームは重合性官能基がアルキル基の
中央部分に導入されておシ、しかも、共役不飽和結合を
生ずるため、剛直なコンフォメーションをとり、相転移
温度（以下Ｔｃと略す）が、観測されない。さらにＴｃ
以下でのみ重合可能なトポケミカルな反応であり、しか
も不飽和結合が多数残存してしまう欠点を有している。

ツエン基を導入した例：　（Ａｎｇｓ＋ｗ、Ｃｈａｍ、
Ｉｎｔ、Ｅｄ。

Ｅｎｇｌ、、　２０．９０　（１９８１））では、この
ジエン誘導体からなる重合性リポソームは、重合性官能
基が疎水性アルキル鎖の根元、即ち、最も親水基側に導
入されており、上記ジアセチレン誘導体に比べ、アルキ
ル鎖の動きに対する制限をより少なくした柔軟な構造全
もち、Ｔｃ以下のグル状態でもＴｅ以上の敵晶状態でも
重合可能であり、しかも残存する不飽和結合もよシ少な
いという長所金もつ。しかしながら、重合性官能基全脂
質の２本のアルキル鎖の両方に導入しているため、重合
後、アルキル鎖の動きがかなり制限され、ｒルー液晶相
転移熱量も減少する（参考例２参照）。一方、長鎖脂肪
酸残基からなる混合酸型の１．２−ノアシル−Ｌ＝３−
グリセロホスホリルコリン類の製法も知られているが、
該脂肪酸残基はリノール酸、リルン酸、アラキドン酸な
どの残基であって長鎖ジエンカルゲン酸残基については
、全く記載されていない（例えば特公昭５９−４０８３
９号公報）。

〔発明が解決しようとする問題点〕

かかる現状に鑑み、本発明者らは、天然リン脂質に近い
構造および組成さらには固有の性質を併せ持つ重合性リ
ン脂質誘導体金得るべく鋭意研究を行った結果、レシチ
ン型リン脂質の１つのアルキル鎖にジエン基金光重合性
官能基として導入したリン脂質誘導体が前述の要望され
る条件全通も良く満足する化合物であり、しかもこの化
合物を合成レシチンや天然レシチンから容易に得ること
のできるモノアシル−Ｌ−３−グリセロホスホリルコリ
ンより高純度、高収ぷで完全り体として合成できること
を見出し、本発明全完成するに至った。即ち、本発明の
目的は天然リン脂質に最も近い構造および組成をもつ光
重合性リン脂質誘導体を提供し、かつ、これを収率良く
、経済的に製造しうる方法を提供するものである。

〔問題を解決するだめの手段〕

本発明では、一般式 ％式％（２ 〔式中、Ｒ１とＲ２とは互いに異なり、その一方が飽和
または不飽和のＣ４゜〜Ｃ２２脂肪族残基全示し、池方
がＲ０ＣＨ＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＣＯ（ここでＦＬＯはＣ５
〜Ｃ４７のアルキル基）のアシル基を示す〕で表わされ
る混合酸Ｗ重合性リン脂質誘導体を提供する。前述のよ
うに、レシチン型リン脂質の２本のアルキル鎖の両方に
光重合性官能基であるジエン基を導入しり１．２−ビス
（２，４−アルカジエノイル）　−Ｄ、Ｌ　−３−グリ
セロホスホリルコリン（以下ジジエンと略す）は公知で
ある。しかしながら、レシチンの一方のアルキル鎖にの
みジエン基を導入した化合物（以下モノジエンと略す）
例はなく、さらにこのモノツエンレシチンが分子ｍ織化
（例えばす／ソーム化）させた後、光照射によって重合
が進行し、高分子化し、安定化することは、全く知られ
ていない。

具体的には、長鎖ツエンカルビン酸をアシル化剤として
用い、イミダゾールナトリウム触媒の存在下、遊離型の
モノアシル−Ｌ−３−グリセロホスホリルコリン全灰石
させることによシ、容易に目的とするモノジエンレシチ
ンを得ることができる。この反応は、０℃ないし３０℃
の温度で、通常は室温で、攪拌しながら行うことが好ま
しい。

又、モノアシル−Ｌ−３−グリセロホスホリルコリンと
アシル化剤とのモル比は１：１．２〜１：１．５が望ま
しい。

出発物質であるモノアシル−Ｌ−３−グリセロホスホリ
ルコリンには％１−モノアシル体と２−モノアシル体が
オシ、いずれも本発明に適用可能である。

この１−モノアシル−Ｌ−３−グリセロホスホリルコリ
ンは、通常、合成レシチンまたは、天然レシチンを適当
な爵媒、例えばクロロホルムやエチルエーテルなど、中
で一約７の適当な緩衝液、例えば０．２Ｍ）リス塩酸緩
衝液（ｐＨ７，４）など、および賦活剤、例えば塩化カ
ルシウムｍ液、の存在下、蛇毒、例えばナジャ・ナジャ
（Ｎａｊａ　ｎａｊｌＬ）などの毒、から得られるホス
ホリパーゼＡ２またはその類縁酵素を用いて、常温にて
、アシル転Ｓｔ−起こさぬよう注意深く加水分解を行う
ことにより得られる。

また、２−モノアシル−Ｌ−３−グリセロホスホリルコ
リンは、各種バクテリア、例えば工・シエリチア・コリ
（Ｅ、Ｃｏ１１　）　、ミコバクテリウム・フレイ（Ｍ
ｙｃｏｂａｃｔａｒｉｕｔｎ　ｐｈｅｒｔ）　、バチル
ス・スプチリス（Ｂ、ｓｕｂｔｉｌｌｍ　）、から得ら
れるホスホリパ−ゼＡ、または類縁酵素音用いて、同様
に、合成レシチンまたは天然レシチンを加水分解するこ
とにより得られる。

さらに、得られたモノアシル−Ｌ−３−グリセロホスホ
リルコリンに水素添加処理を行い、アルキル鎖中の不飽
和結合をなくした飽和型の完全水添モノアシル−Ｌ−３
−グリセロホスホリルコリンの形にしても本発明に供す
ることができる。

本発明に用いる長鎖ノエンカルデン酸はＲＣＨ＝Ｃ）Ｉ
ＣＨ＝ＣＨＣＯＯＨ（ＲはＣ５〜Ｃ１７のアルキル基）
で表わされるα、β、γ、δ−不飽和カルデン酸である
。このようなジエンカルダン酸の例として、２．４−デ
カジエン酸、２．４−ウンデカジエン酸、２．４−ドデ
カジエン酸、２．４−トリデカツエン酸、２．４−テト
ラデカツエン酸、２，４−ペンタデカジエン酸、２．４
−ヘキサデカジエン酸、２．４−ヘプタデカジエン酸、
２．４−オクタデカジエン酸、２゜４−ノナデカジエン
酸、２，４−エイコサジエン酸、２．４−ヘンエイコサ
ツエン酸および２．４−トコサシエン酸等の全ての光重
合性を有する幾何異性体を挙げることができる。このよ
うな長鎖ジエンカル？ン酸は１例えば特開昭６０−１３
７３７号公報等の方法によって得ることができる。

本発明において用いる触媒としては、イミダゾールナト
リウムが好ましい。

本発明の製造方法ｔ−１−アシルイミダゾールを用いる
場合金側にとり、詳細に説明する。まず、Ｎ、Ｎ’−力
ル？ニルジイミダ！−ルを無水クロロホルムに懸濁し、
これに長鎖ノエンカ）ｖ、ｙン酸ヲ加え、この混合物を
窒累気流中、遮光下で室温にて約１時間反応させ、１−
アシルイミダゾールを得る。この化合物は単離した後、
または単離することなく、反応液のまま、次の反応に供
することができる。これとは別に、合成レシチンまたは
天然レシチン、例えば卵黄レシチン、大豆レシチンなど
、全クロロホルムまたはエチルエーテルｍ濠中で一約７
の緩衝液および賦活剤の存在下、ホスホリパーゼＡ２ヲ
用いて室温にてアシル転移を起こさぬように注意深く加
水分解を行って１−アシル−Ｌ−３−グリセロホスホリ
ルコリンを得る。このようにして得られた１−アシル−
Ｌ−３−グリセロホスホリルコリン全触媒としてｌｍＮ
ａ　−ＤＭＳＯ俗液及び無水ピリジンと共に前記の１−
アシルイミダゾール反応液に加え、室温で数時間攪拌す
れば反応は終了する。

反応混合物から目的物を単離するには、まず反応液を塩
酸−メタノールで中和し、減圧濃縮する。

ツイテこの濃縮液をクロロホルム−メタノールに爵解し
、さらに水を入れた後１分散し、その下層をさらに減圧
濃縮する。得られた濃縮液にクロロホルム−メタノール
−水、続いてエタノール金加えて［アンバーライ）ＭＢ
−３型」樹脂カラムに通し、同ｍ媒で洗い、その通導液
および洗ｉｔ−合わせて減圧濃縮する。この濃縮物を常
法に従って到えばシリカゲルカラムクロマトグラフ法に
て処理精製すれば目的物が得られる。

〔実施例〕

以下に実施例によシ本発明金さらに具体的に詳しく説明
するが、本発明はこれらに限定されるものではない。

実施例１ １−バルミトイル−２−（２Ｅ、４ｇ−オクタデカジェ
ノイル）−Ｌ−３−グリセロホスホリルコリンの合成 （ａ）　１−ノ臂ルミトイルーＬ−３−グリセロホスホ
リルコリンの調製 １．２−’）ＡルミトイルーＬ−３−グリセロホスホジ
ルコ９フ３ これに、ナノヤ・ナジャの毒から得られたホスホリ／＃
−セＡ２　３　０　Ｔｎ９ｆｔＱ、２Ｍ）リス塩酸緩衝
ｉｙ．＜ｓ７、　４　）　６−にｍ解した液およびＩＭ
塩化カルシウム＠ｇｏ．ｔｉ’６加えて室温にて約２０
時間攪拌した。

この反応液にエタノールを加えて減圧濃縮乾固し、乾固
物を少量のクロロホルムにｍかし、同ｍ媒で活性化した
シリカダル（４０ｇ）カラムにかケ、クロロホルム６０
０ｆｌｔ，クロロホルム−メタ／−ルー水（　６　５　
：　２　５　：　４　）　１．５　１テＰＦ１次ｍ出さ
せた。得られ九爵出分画金薄層クロマトグラフィー（以
下ＴＬＣと略す）ｔ−用いて目的画分を集め、減圧濃縮
後，五酸化リン上、約２０時間減圧乾燥し、１−バルミ
トイル−Ｌ−３−グリセロホスホリルコリン１．８．９
（収率：　８　７．　８％）ｔ−得た。

（ｂ）１−バルミトイル−２　−　（　２Ｅ．４Ｅ−オ
クタデカジェノイル）−Ｌ−３−グリセロホスホリルコ
リンの合成 ２Ｅ，４ｇ−オクタデカツエン酸３．５　＃　（　１　
２．５ミリモル）とＮ，Ｎ’−力ル？ニルジイミダゾー
ル２、４．！ｉ＋（１５ミリモル）に乾燥クロロホルム
５〇−を入れて窒素気流中、遮光下、室温にて約１時間
反応させた。ついで、この反応液に実施例１−（ｍｌで
得た１−）やルミトイルーＬ−３−グリセロホスホリル
コリン５．ＩＪ（１０ミリモル）′ｆ．入れ、さらに水
冷下で触媒として、水素化す）　ＩＪウム５　０　ａｍ
９（　５　０％）とイミダゾール（以下ＩｍＨと略ス）
１．！ｉ’とを乾燥ジメチルスルホキシド（以下ＤＭＳ
Ｏと略す）２０ｄ中、約１時間反応させて調製したイミ
ダゾールナトリウム（以下ｌｍＮａと略す）−　ＤＭＳ
Ｏ　ｇ液２０ｆＩｔおよび無水ピリジン１−全加えた後
、室温にて２時間攪拌した。

灰石終了後、反応液をＩＮ塩酸−メタノールで中和し、
減圧濃縮する。得られた濃縮物全クロロホルム−メタノ
ール（２：１）６００ｍｌにｍ解し、ついで水１２０ｄ
′ｌｔ入れて分液ロートにて分液し、下層を分取して減
圧濃縮する。

得られた残渣にクロロホルム−メタノール−水（６５：
２５：４）２００ｍｇ、エタノール１０〇−を加えて塵
解し、次いで「アンバーライ）ＭＢ−３１４８０ｍｇ’
ｉ加えて約２時間攪拌した後、樹脂を戸別し、前記ｍ媒
系で洗浄し、得られたＦ液と洗ｉｔ合わせて減圧濃縮し
た。

この濃縮液金適社の９５％エタノールに爵解し、あらか
じめ９５チエタノールで活性化したアルミナ（　４０．
９　）カラムにかけ、同爵媒２４０−で爵出し、この弓
出液を減圧濃縮した。

この濃縮物を少量のクロロホルムに爵解し、あらかじめ
同醇媒で活性化したシリカゲル（１５０１ｉ’）カラム
ＶＣかｋｊ、ｌクロホルム１１、クロロホルム−メタノ
ール−水（６５：２５：２）４．Ｏｌで頴次ｍ出させた
。得られたｍ出画分からＴＬＣによって目的画分を集め
、減圧濃縮乾燥して、１−バルミトイル−２−（２Ｅ．
４Ｅ−オクタデカツエン酸／ｌ／）−Ｌ−３−グリセロ
ホスホリルコ１Ｊ７４．７Ｍ（収率：６０．６チ）を得
た。

本物質はＴＬＣ分析（メルクシリカデルプレート。

展開電媒：クロロホルム−メタノール−水（６５：２５
：４））？行ったところ、紫外線およびリンモリブデン
酸による検出で、単一のスポットを与え、その８４値は
ジパルミトイル−Ｌ−α−グリセロホスホリルコリン（
シグマ）とほぼ一致した。なお、旋光度は次のようであ
った。

〔α］Ｄ＝＋６．４９　　　＜ｃＨｃｔ，、Ｃ＝１＞又
、本物質の元素分析値、核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクト
ル、赤外線（ＩＲ）吸収スペクトル及び紫外線（　ｔｒ
ｖ　）吸収スペクトルの測定結果を示した。

元素分析値（Ｃ４□Ｈ８ｏＯ８ＮＰ−Ｈ２０分子ｆｉ１
７７６、１として）計算値（チ）：Ｃ：６５．ＯＯ．Ｈ
：１０．６５，Ｎ：１．８０５実測値（％）：Ｃ：６４
．６，　　Ｈ：１０．７．　　Ｎ：２．２１５Ｃ−ＮＭ
Ｒスペクトル　δ値（　ｃＤｃｔ，、　ｐｐｍ　）１２
３　　　　　４　　　　　　　５６７ＢＣＨ５ＣＨ２Ｃ
Ｈ２（ＣＨ２）　１。ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２ＣＨ２’　Ｈ
−ＮＭＲスペクトルδ値（ＣＤＣＡ、　、δ（ｐｐｍ）
　、　ＴＭＳ　）ＦＴ−ＩＲスペクトル（ｃｒｎ−１）
：第１図参照（ＫＢｒｆ佼り）　　　　　　　　　、□
、６（、。＝。）１６４５、１６２４　（νＣＴＣ） １２４６（シ、＝。） １１４４（シｐ−ｏ−ｃ） １０９０（シＰ−Ｏｅ） １０５７　（δＰ−０−Ｃ） ９９７（δＣ−Ｈ） ＵＶｘベクトル（エタノール中）：λ　　＝２６２．５
　（ｎｍ）ａｘ ｇ　＝　２４７００（Ａ”ｍｏｌ−’ｚ’）実施例２ 卵黄由来の１−アシル−２−（２Ｂ、４Ｅ−オクタデカ
ジェノイル）−Ｌ、−３−グリセロホスホリルコリンの
合成 （！Ｌｌ　卵黄由来の１−アシ／Ｌ／−Ｌ−３−グリセ
ロホスホリルコリンの調製 卵黄由来の１．２−ジアシル−Ｌ−３−グリセロホスホ
リルコリン９ｇをエチルエーテル２０〇−とクロロホル
ム３０ｆｎｔＫ／ｉ解し、これにナジャ・ナジャの毒か
ら得られたホスホリノヤーゼＡ２３０Ｑ’ｉ　０．２　
Ｍ　）リス塩酸緩衝１（ｐＨ７，４）８１ｎ１．に弓解
した液及びＩＭ塩化カルシウム俗［Ｑ、１ｄ’ｉ加えて
室温で約１６時間攪拌した。

反応終了後、エチルエーテル層を除去し、残渣にエーテ
ルを加えて減圧濃縮乾固した。この乾固物を少址のクロ
ロホルムに爵解し、実施例１−（ａ）と同様の方法で処
理し、卵黄由来の１−アシル−Ｌ−３−グリセロホスホ
リルコリン５．４＃（収率：９１％）を得た。

（ｂ）卵黄由来の１−アシル−２−（２Ｅ、４Ｅ−オク
タデカジェノイル）−Ｌ　−３−グリセロホスホリルコ
リンの合成 ２Ｅ、４Ｅ−オクタデカジエン酸３．ＦＭ’（１２，５
ミリモル）とＮ、Ｎ’−力ル？ニルジイミダゾール２．
４．９（１５ミリモル）に乾燥クロロホルム６０ｄｔ−
入れて実施例１−（ｂ）と同一の条件下にて灰石させた
。次いでこの反応液に実施例２−（ａ）で得た卵黄由来
の１−アシル−Ｌ−グリセロホスホリルコリン５．１１
９（１０ミリモル）を加えて、さらに水冷下、実施例１
−（ｂｌと同様にして調製した触媒ｌｍＮａ　−ＤＭＳ
ＯＦｊ液２〇−及び無水ピリジン２−を加えた後、室温
にて３時間攪拌した。

反応終了後、実施例１−（ｂｌと同様の方法にて処理し
、目的とする卵黄由来の１−アシル−２−（２Ｅ、４ｇ
−オクタデカジェノイル）−Ｌ−３−グリセロホスホリ
ルコリア４．５ｇ（収率：５８％）を得た。

本物質のＴＬＣ分析を実施例１と同様にして行ったとこ
ろ、単一スポットを示し、卵黄レシチンのそれと一致し
た。又、旋光度は次のようであった。

〔α］”＝＋５．６９　　（ＣＨＣ２，、Ｃ＝１）さら
に実施例１と同様の分析方法の結果から純物質であるこ
とを確認した。

１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルδ値（ＣＤＣＬ、、　ｐｐｍ
　）１４．１．２２．７，２５．０，２８．８，２９．
７，３２．０３３．２　、３４．２　、５４．４　、５
９．３　、６３．１　、６６．４７１．０　、１１８．
７．１２８．４．１４５．９．１６６．７．１７３．８
ＦＴ−ＩＲスペクトル（淵−１）：第２図参照（ＫＢｒ
ディ３り）　　　　　　１７１８（ν。−８）１６４５
．１６２４（νｃ＝ｃ　） １２４７　（１／Ｐ＝ｏ） １１４５（シｐ−ｏ−ｃ） １０９２（シアー０Ｏ） １０６８（δｐ−ｏ−ｃ） ９９８（δＣ−Ｈ） ＵＶスペクトル（エタノール中）：λｒｌｌｌＬＸ　＝
２６２−１　（ｎｍ　）ｇ＝２３６００（ｌ−（２）１
−１・α−１）実施例３ 大豆由来の１−アシル−２−（２Ｅ、４Ｅ−オクタデカ
ジェノイル）−Ｌ−３−グリセロホスホリルコリンの合
成 （＆）　大豆由来の１−アシル−Ｌ−３−グリセロホス
ホリルコリンの調製 大豆由来の１．２−ジアシル−Ｌ−３−グリセロホスホ
リルコリン７ｇ’（エチルエーテル１５〇−にｍ解し、
これにナノヤ・ナジャの毒から得られたホスホリ・２−
ゼＡ２１０ｍ９を０．２Ｍ）リス塩酸緩衝１（ｐＨ７，
４）４ｔｒｔにＭ解しだ液およびＩＭ塩塩化カルシウム
液液０１ｄ’ｉ−加えて、室温にて約１６時間攪拌した
。

反応終了後、エチルエーテル層を除去し、残渣゛にエタ
ノールを加えて減圧濃縮乾固した。

この乾固物を少量のクロロホルムにｍ解し、実施例１−
（ａｌと同様の方法で処理し、大豆由来の１−アシル−
Ｌ−３−グリセロホスホリルコリン４、ＩＪ（収率８６
．６％）を得た。

（ｂ）大豆由来の１−アシル−２−（２１，４Ｅ−オク
タデカジェノイル）−Ｌ−３−グリセロホスホリルコリ
ンの合成 ２Ｅ、４Ｅ−オクタデカツエン酸０．７．９　（２，５
ミ１）　モ＃　）　、！：　Ｎ、Ｎ’−力ルゴニルジイ
ミグゾール０．４８Ｊ　（３ミリモル）に乾燥クロロホ
ルム１０−を加えて、実施例１−（ｂ）と同一条件下に
て反応させた。

次いでこの反応液に実施例３−　（ａ）で得た大豆由来
の１−アシル−Ｌ−３−グリセロホスホリルコリン１．
０８　ｆＩＣ，２ミＩＪモル）を加えて、さらに水冷下
で触媒として、水素化ナトリウム１５０〜（５０％）と
ＩｍＨ３００ｍ９に乾燥ＤＭＳＯ６−中に約１時間反応
させて調製したＩ　ｍＮａ−ＤＭＳＯＤ液３ｒ！Ｌ１．
および無水ピリジン０．５ｔｎｔｔ−入れた後、室温に
て約２時間攪拌した。

反応終了後、実施例ｉ　−（ｂ）と同様の方法にて処理
し、目的とする大豆由来の１−アシル−２−（２Ｅ、４
ｇ−オクタデカジェノイル）−Ｌ−３−グリセロホスホ
リルコリン０．７１（収率：４４％）を得た◎ 本物質のＴＬＣ分析結果は実施例１，２と同様に単一ス
ポットを示し、大豆レシチンのそれと一致した。又、旋
光度は次のようであった。

１８゜ 〔α）Ｄ＝＋６．９９　　（ＣＨＣＬ３．Ｃ＝１）さら
に次に示すような実施例１．２と同様の分析結果から、
本物質が純物質であることを確認した。

”Ｃ−ＮＭＲスペクトル　δ値（ＣＤＣＬ、、　ｐｐｍ
　）１４．Ｌ、２２．８，２５．０．２７．３，２９．
８，３２．０，３３．２゜３４．２，５４．４．５９．
２．６３．１．６６．４，７０．７，１１８．７゜１２
８．５　、１３０．２　、１４６．０　、１６６．７　
、１７９．８ＦＴ−ＩＲスペクトル（ｃＩｎ−’）：第
３図参照（ＮａＣ１ｆ’４Ｘり）　　　　１７１８（ν
ｃ＝ｏ）１６４１　、１６１８（ν。＝ｃ） １２４２（ν、ヨ。） １１３８　（ｖ、−ｏ−ｃ） １０９０（シＰ−０”） １０６３（δ、−８−Ｃ） ９９９（δＣ−１１） ｔｒｖスペクトル（エタノール中）二　−１Ｌ！−２６
２，１（ｎｔｎ）ε＝２１８００（Ｊ・ｍｏｌ−１・ｃ
ｍ″）実施例４ 大豆由来（水添）の１−アシル−２−（２Ｆ、、４Ｅ−
オクタデカジェノイル）−Ｌ−３−グリセロホスホリル
コリンの合成 （ａ）大豆（水添）の１−アシル−Ｌ−３−グリセロホ
スホリルコリンの調製 実施例３−（ｍｌで得られた大豆由来の１−アシル−Ｌ
−３−グリセロホスホリルコリン１０．９ｉエメノール
２００−に爵解し、これに二酸化白金２００■を加えて
室温で水素ガス雰囲気にて約２０時間攪拌した。

反応終了後、二酸化白金をろ別し、得られたろ液を減圧
濃縮乾固し、五酸化リン上、約２０時間減圧乾燥し」大
豆由来（水添）の１−アシル−Ｌ−３−グリセロホスホ
リルコリン９．８Ｎ（収率：９８％）を得た。

（ｂ）大豆由来（水添）の１−アシル−２−（２に、４
Ｅ−オクタデカジェノイル）−Ｌ−３−グリセロホスホ
リルコリンの合成 ２Ｅ、４Ｅ−オクタデカジエン酸３．５１！（１２，５
ミリモル）とＮ、Ｎ’−力ルボニルジイミダゾール２．
４１１（１５ミリモル）に乾燥クロロホルム６０ｔａｎ
加え、実施例１−　（ｂ）と同一条件下にて反応させた
。次いで、この反応液に実施例４−（ａ）で得た大豆由
来（水添）の１−アシ＆　−Ｌ　−３−グリセロホスホ
リルコリン５．３４．９（１０ミリモル）ヲ加えた後、
室温にて１時間攪拌した。

反応終了後、実施例１−（ｂ）と同様の方法にて処理し
、目的とする大豆由来（水添）の１−アシル−２−（２
に、４Ｅ−オクタデカジェノイル）−Ｌ−３−グリセロ
ホスホリルコリン３．９ｇ（収率：４９チ）を得た。

本物質のＴＬＣ分析結果は、実施例１．２および３の場
合と同様に単一スポラトラ示し、大豆し７チンのそれと
一致した。又、旋光度は次のようになった。

〔α）２９’＝　＋　６．４６　　（ＣＨＣＬ３．　Ｃ
＝　１．０８　）さらに次に示すような実施例１，２お
よび３と同様の分析結果から本物質が純物質であること
を確認した。

１３Ｃ−ＮＭＢスペクトル　δ値　（ｃｎｃｚ、、　ｐ
ｐｍ　）１４．２，２２．８．２５．Ｏ，＝２９．３２
．０，３３．１．３４．２４゜５４．５３．５９．４．
６３．１．６３．６．６６．５．７０．８，１１８．６
゜１２８．３　、１４５．７　、１４６．１　、１６６
．５　、１７３．６ＦＴ−ＩＲスペクトル（ｃｒｎ）：
第４図参照（ＮａＣｔディスク）　　　　　１７１６（
’ｃ＝ｏ）１６４１　、１６１６　（シ、＝０） １２４６（シＰ−０） １１４０（シアー０−Ｃ） １０９０（シル−０θ） １０６５（δｐ−ｏ−ｃ） １００１（δ、−ＩＫ） Ｗスペクトル（エタノ−紳）：　　λ−、−２６２．６
（ｎｍ）ε−２４３００（ｌ−ｍｏｌ　　−ｃｍ　　）
参考例１ 実施例１，２及び３で得られたリン脂買誘導体をそれぞ
れの濃度が１０ｍＭになるように、常法に従って多重層
リポソーム水浴液を調製した。さらにこのＧ液から超音
波法により、小さな一枚膜リポソームを調製した。以下
、これをモノメリックリポソームと呼ぶ。

又、このリポソームρ液に高圧水銀ランｆ（理工科学産
業（株）製）を用いて窒素雰囲気下、紫外線照射を行い
、紫外部の特性吸収スペクトルの経時変化を測定したと
ころ、λｒｒｌｌＬｘが２６２（ｎｍ）付近の吸収ピー
クが減少してゆき、約１時間後には完全に消失し、逆に
１９３ｎｍ付近の吸収が増加した。このことから、重合
が完了したことを確認した。以下、これをポリメリック
リポソームと呼ぶ。

酢酸ウラニル全円いたネガティブ染色法による透過型電
顕観察では、モノメリックリポソームと、ｄ　リンリッ
クリポソームにおける形態的変化はほとんどないことが
認められた。この事は、グル濾過パターンの比較によっ
ても確認された。さらに室温状態における濁度変化も、
モノメリックに比べ、ポリメリックリポソームの方がは
るかに小さく、保存安定性に優れていることがわかった
。

参考例２ 実施例２で得た卵黄由来のモノツエンレシチンからなる
モノメリックおよびポリメリックリポソームとジノエン
レシチンからなる同様のり？ンームとに関して、示差走
査熱緻計による測定を行った。その結果、ジノエンレシ
チンよシなるリポソームでは、モノメリックにおいて観
察された熱量吸収ピーク（２２℃付近）がポリメリック
リポソームになると、はぼ完全に消失した（ΔＨ（ｋｃ
ａｌ／ｍｏｌ）が５．９０から１．１８に減少）。これ
に対し、モノジエンレシチンよりなるリポソームでは、
ポリメリックリポソームにおいても、モノメリックリポ
ソームに存在した熱量吸収ピーク（２９℃付近）が完全
には消失せず、残存することが確認された。

参考例３ 実施例１，２．３及び４から得たリン脂質誘導体より調
製したリポソームに関して、グルコースと５（６）−カ
ルゼキシフルオレッセインを封入マーカーとして用い、
マーカーの保持能力、放出挙動等を検討した。その結果
、それぞれの脂質について、モノメリックリポソームに
比べ、ポリメリックリポソームの方が、放出速度が小さ
く、保持能力が向上した。又、熱、有機爵媒（例えばエ
タノール）および界面活性剤（例えばＴｒｉｔｏｎＸ−
１００ｒＳＤＳ　）に対する安定性が向上した。

さらに、ジノエンレシチンにおいてほとんど観察されな
かった室温におけるモノメリックＩＪ　、Ｎソ−ムのマ
ーカー保持能がモノジエンレシチンモノメリックリポソ
ームにおいて認められた。

〔発明の効果〕

前述の説明から明らかなように、本発明によれば、目的
とする重合性リン脂質誘導体を合成レシチンや天然レシ
チンから容易に調製可能なりゾレシチンと長鎖ジエンカ
ルデン酸から一段階の反応工程で高純度のものが、高収
率で合成でき、工業的規模で経済性よく、製造すること
ができる。

さらに本発明のモノジエンレシチンは、完全り体として
得ることができ、しかもその構造、組成はジノエンレシ
チンと比べ、天然レシチンに最も近いものとなっており
、より安全な、生体適合性に優れた、単独でも二分子膜
構造をとることができる疎水性基と親水性基のバランス
のとれたシリンダー型分子であるレシチン型光重合性リ
ン脂質である。

このリン脂質は、Ｔｃ以下でもＴｃ以上でも紫外線照射
によシすみやかに、短時間で、温和な条件下で重合可能
である（参考例１参照）。重合した二分子膜は、安定性
、封入物の保持能力が向上すると共に界面活性剤や有機
俗媒さらには温度変化に対する耐性も向上する（参考例
３参照）。又、重合後も脂質膜固有の性質でちるグルー
液晶相転移が消失することなく（参考例２参照）、柔軟
な膜形成に適するという特徴を有している。

従って生体適合性や生体膜との種々の親和性を配慮しな
ければならない医用リポソーム等の応用分野には適した
光重合性リン脂質誘導体であり、その他バイオセンサー
、マイクロカプセルさらには生医学用材料、化粧品への
応用等、二分子膜ベシクルの形態に限らず、単分子層膜
、積ｊ−膜の形態での利用を含めた生化学・医薬・薬学
・工学など幅広い分野において利用が予想され、その工
業的価値は大きい。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図、第３図および第４図はそれぞれ実施例
１．２．３および４で得た重合性リン脂質誘導体のＦＴ
−Ｉ　Ｒスペクトルの測定結果を示す。 Ｌ）０００　　　　３２００　　　　　２ｑｏｏ　　　
　　　ＩＧＯＯｔｏ。 ↓丸　数−（ｃｙ一つ 第１図 １＋ＯＯ０３２００２４００１ｃＯＯ９６０一度　Ｌ　
　＜ｃ党−１） 第２図 ’＋０００　　　　３２００　　　　　２→００　　　
　　１ＧＯＯｔｏ。 ’ＪＬ　　数−（Ｃ包−１） 第３図 Ｌｉ４）Ｇｏ　　　　　’３２００　　　　　２４００
　　　　１ＧＯＯ９００農改　（け−リ 第４図

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＾１とＲ＾２とは互いに異なり、その一方が
   飽和または不飽和のＣ＿１＿０〜Ｃ＿２＿２脂肪酸残基
   を示し、他方がＲ＾０ＣＨ＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＣＯ（ここ
   でＲ＾０はＣ＿５〜Ｃ＿１＿７のアルキル基）のアシル
   基を示す〕で表わされる混合酸型重合性リン脂質誘導体
   。
2. （２）該脂肪酸残基が卵黄リン脂質又は大豆リン脂質由
   来のアシル基から選ばれる特許請求の範囲第（１）項記
   載の混合酸型重合性リン脂質誘導体。
3. （３）混合酸型重合性リン脂質誘導体が、１−アシル−
   ２−（２，４−アルカジエノイル）−Ｌ−３−グリセロ
   ホスホリルコリンである特許請求の範囲第（１）項又は
   第（２）項記載の混合酸型重合性リン脂質誘導体。
4. （４）混合酸型重合性リン脂質誘導体が、１−（２，４
   −アルカジエノイル）−２−アシル−Ｌ−３−グリセロ
   ホスホリルコリンである特許請求の範囲第（１）項又は
   第（２）項記載の混合酸型重合性リン脂質誘導体。
5. （５）Ｒ＾０ＣＨ＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＣＯＯＨ（ここでＲ
   ＾０はＣ＿５〜Ｃ＿１＿７のアルキル基）で表わされる
   ジエンカルボン酸とＮ，Ｎ′−ジカルボニルジイミダゾ
   ールとを反応させて得られる１−アシルイミダゾールに
   、触媒としてイミダゾールナトリウムの存在下、１−又
   は２−モノアシル−Ｌ−３−グリセロホスホリルコリン
   を反応させることを特徴とする一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＾１とＲ＾２とは互いに異なり、その一方が
   飽和または不飽和のＣ＿１＿０〜Ｃ＿２＿２脂肪酸残基
   を示し、他方がＲ＾０ＣＨ＝ＣＨＣＨ＝ＣＨＣＯ（ここ
   でＲ＾０はＣ＿５〜Ｃ＿１＿７のアルキル基）のアシル
   基を示す。〕で表わされる混合酸型重合性リン脂質誘導
   体の製造方法。
6. （６）該モノアシル−Ｌ−３−グリセロホスホリルコリ
   ンが、合成又は天然ジアシル−Ｌ−３−グリセロホスホ
   リルコリンをホスホリパーゼＡ＿１又はＡ＿２で加水分
   解して得たものである特許請求の範囲第（５）項記載の
   製造方法。