JPS6287522A - 抗コクシジウム症剤及び飼料効率改善剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗コクシジウム症剤及び飼料効率改善剤に関す
るものである。

本発明者らは、新規な抗コクシジウム症剤及び飼料効率
改善活性質索を目的として多数の抗生物質を用いその抗
コクシジウム活性及び飼料効率改善活性を試暑し、非常
に低濃度にて活性を有する新規な抗コクシジウム症剤及
び飼料効率改善剤を見い出し本発明に至った。

コクシジウム症は、アイメリア屈の原生動物の感染によ
って起こる病気であり、家禽類に、下痢及び栄養障害を
起こさせて、ついには死に至らしめる伝染病である。

この原虫の一世代であるオーシストは、家禽類の糞と共
に排泄され、胞子形成を行い、次々と伝染する。これら
の感染を受けたものは、その経済的価値が極めて低下す
る。

従ってコクシジウム症を予防することは、産業」二極め
て重要なことである。

そのため、従来から多くの予防治療剤が提案されている
が、いずれもその効果は充分ではなく、またこれらに対
して、耐性を有する原虫が出現しており、新たな有効薬
剤の出現が待たれている。

そこで、本発明者らは、」二足の趣旨に鑑み、家禽類及
び豚のコクシジウム症に対して有効な薬剤につき鋭意開
発研究を行った結果、ノカルディオプシス属に属する微
生物を培養して得られる抗生物質６２７０物質が、家禽
類及び豚のコクシジウム症に対して有効であることを見
出し１本発明の抗コクシジウム剤を完成するに至った。

本発明の有効成分の抗生物質６２７０物質は。

本発明者らによってはじめて開発された抗生物質であり
、その製造法及び理化学的性質について以下に説明する
。

抗生物質６２７０物質は北海道網走型にて採取した土壌
より単離したノカルディオプシス属に属する微生物を適
宜の培地で培養すると、グラム陽性菌に高い抗菌力を示
す抗生物質が培地中に蓄積され、その理化学的性質及び
生物学的性質を検討したところ、新規な抗生物質である
ことを認め。

これを抗生物質６２７０物質と命名した（特願昭５９−
７２９１２号参照）。

抗生物質６２７０物質の製造に用いられる微生物として
は、抗生物質６２７０物質の産生能を有する限りすべて
の微生物を用いることができるが、例えば本発明者らが
新たに分離したノカルディオプシストエス　ピー　６２
７０号株（受託番号：微工研菌寄第７５６９号）が好ま
しい６本発明を実施するにあたっては、抗生物！ｆｆ６
２７０物質生産菌を公知の放ｍｉ’ｉの培養法により行
なうことができるが、工業的には通λ撹拌培養すること
が好適である。生産培地としては、放線菌の培養に用い
られる通常の原料が使用され、すなわち各種の炭素源、
窒素源及び有機又は無機塩類並びに場合により消泡剤な
どを適宜に組合せて用いることができる。一般には炭素
源としてはグルコース、ＭＪ粉、グリセリン、デキスト
リン、シュクロース、動植物油等、窒素源としては大豆
粉、コーンスチープリカー、小麦はい芽、アンモニア等
を使用することができる。その他必要に応じ、炭酸カル
シウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム。

リン酸塩等の無機塩を添加し、また菌の発育を助けて抗
生物質６２７０物質の生産を促進する作用を有する有機
又は無機塩を適宜に添加することもできる。

培養温度は一般に２５〜３５℃の範囲であるが３０℃付
近が好ましい、培養時間は種々の条件により異なるが通
常は７２〜１４８時間にて抗生物ｆｆ６２７０物質の産
生蓄積量は最大となる。

培養物から抗生物質６２７０物質を単離、晴製するため
には、本物質の理化学的性質を利用し、公知の手段１例
えば不純物との溶解度の差を利用する手段、イオン交換
樹脂又は各種吸着剤に対する吸着力の差を利用する手段
、水と混和しない有機溶媒による抽出手段、あるいは沈
殿、不純物の除去９透析、乾燥、再結晶などの手段を適
宜選択し組合わせて行うことができる。

培養物中に生産された抗生物質６２７０物質は、例えば
次のようにして採取することが好ましい。

培養液に濾過助剤１例えば珪藻土、ラジオライト７００
等を加えて培養液を濾過し、濾液及び菌体を夫々適当な
溶媒、例えば酢酸エチル、アセトン等で抽出する。次い
で、菌体抽出液と濾液抽出液を合わせ、この抽出液から
溶媒を留去すると抗生物質６２７０物質の粗結晶から抗
生物質６２７０物質を単離するためには１例えばクロマ
トグラフィーに付す。溶出液を減圧濃縮したのち、残渣
を適当な溶媒例えば、酢酸エチルにとかし、希塩酸溶液
で処理し、溶媒層を濃縮すると抗生物質６２７０物質が
遊離酸として結晶する。

ナトリウム塩として得るためには前記希塩酸溶液で処理
した溶媒層を次に希炭酸ナトリウム溶液で処理し、溶媒
層を濃縮すると抗生物質６２７゜物質がすｉ−リウム塩
として得られる。ここに得た遊離酸型及びナトリウム塩
型の抗生物質６２７０物質は適当な溶媒例えばｎ−ヘキ
サン−酢酸エチル等で再結晶することにより純粋な結晶
として得ることが出来る。こうして得られた遊離酸型の
抗生物質６２７０物質の性状は次のとおりである。

（１）無色針状結晶、酸性物質 （２）融点　１１５〜１１８℃ （３）元素分析値（実測値　％） Ｃ６２，７２％、８９．４９％。

０２７．７８ヅ。

（４）比旋光度　［α］＝−１１，５°　（Ｃ１、Ｏ，
メタノール） （５）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中で測定
すると、２１０ｎｍ以上に吸収極大を示さない。

（６）赤外線吸収スペクトル（臭化カリウム錠で測定）
における特性吸収（ａｍ−−１）：３４７０．２９８０
，２９４５，２８９０．１７３５、　１４６０．　１３
８０．　１３１５．　１１６５゜１１０２、　１０７５
．　９８７．　９８０（７）溶解性： メタノール、エタノール、酢酸エチル、クロロホルム、
エーテル、アセトン、ベンゼン等に可溶、水に不溶。

（８）呈色反応： バニリン−硫酸反応、ドラ−ゲンドルフ反応陽性。

ニンヒドリン反応に陰性。■２気体で着色。

（９）薄層クロマトグラフィー（メルク社製キー（１０
）’　Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ＴＭＳを内部標準として
、重クロロホルム中１００　Ｍ　Ｈ７，で測定した結果
、δｐｐｍ３．３９　（３Ｈ）　、３．４９　（６Ｈ）
に３個のメトキシル基の存在がみとめられる。

（１１）抗菌スペクトルを第１表に示す。

カナマイシン、グロラムフエニコール、　　　　　　　
　　　：テトラサイクリン自・土性）１ クレブシェラごユーモニエＰＣＩ６０２　　　　　　　
＞１００　　　　ａ表中の記号ａは栄養寒天培地、ｂは
グ リセリン栄養寒天培地、Ｃはばれいしょ一ショ糖寒天培
地を示す。

以上の理化学的及び生物学的性質から、本物質はポリエ
ーテル群と総称される抗生物質に属する。

本物質は１１１１−１−Ｎスペク１−ルから分子中に３
個のメ１−キシル埜をＧすることが推定されるが、ボリ
エ・−チル群抗生物質のうち分子中に３個のメト・キシ
ル基をηする既知の抗生物質どし、では（「２Ｏ−１２
（特開昭５８＝５３９１９号）、Ａ−２０４１３（ハニ
８ノドブ・ツク　オブ　マイクロバイオロジイ　　４１
０．Ｖａｔ、３．　　　ＣＲＣＰｒｅｓｓ）、Ｔ−４２
０８２（特開昭５１−７９７３０号）、Ｔ−４０５１７
（特開昭５０　１０５８１号）、３８２９５　（特開昭
５１−１２５７９．３号）、Ｎｏ、６０１６（特開昭５
４−８４５７ローシー）。

Ｘ−１４８６８Ｃ（特開昭５６−１２０６９６し）、Ｃ
Ｐ−４７４３３（特開昭５７−１５４１０８号）−４７
４３４，（特開昭５７　＝　１５４１８７号）、ＬＬ−
Ｃ２３０２４β（特開昭５８−７８５９８号）があげら
れる。

しかし６２７０物質は融点、比旋光度５元素分析値又は
赤外線吸収スペク１−・ルなどの性質が前記既知物質と
異なり、新規な抗生物質である。

さらに本発明は飼料効率改淳剤に関するものである。

従来、抗生物質を飼料に添加して家畜又は家禽の発育促
進や産卵率の向−トを図ることが広く行なわれているが
２人畜共通に用いられる抗生物質の動物への使用は耐性
菌の出現を招き、人体の医療に、恵影響が懸念されると
共に、畜産物を食用に供する際に動物体内に残留、蓄積
する該抗生物質を併せて摂取することによって好ましく
ない影響を受ける恐れがあるのが実状である。

本発明者は更に、前述の如き欠点のない飼料効率改存剤
について鋭意研究の結果、前記抗生物質６２７０物質が
家畜及び′４禽の発ｉ’Ｆを促進し、飼料の利用効率ヲ
向ヒさせるすぐれた薬剤となりうろことを実証してここ
に本発明を完成するに至った。

、／ ７・−′ 、／／ ７・−′ 参考例１　（製造法） グルコース６．０％、大豆粉２．０％、１〜ルライース
ト１．０％及び炭酸カルシウム０゜５％の組成を有する
培地（ｐＨ６，０）ＬＱにノカルディオプシス　ニス　
ピー　６２７０号株（受託番号：微工研菌寄第７５６９
号）を接種し、３０℃で４８時間培養する。この培養液
を前記と同じ組成の培地１００Ｑに接種し、３０℃で９
６時間、２００Ｑ容タンク中で通気撹拌培養する。通気
歌は１００Ｑ／分、ベラ回転数は２５Ｏｒｐｍどする。

この培養液に濾過助剤（商品名ニラジオライト７００）
を加えて濾過し、濾液と菌体とに９漕する。

次いで濾液は酢酸エチル４０Ｑで抽出し、菌体はアセト
ン３０Ｑで抽出する。菌体のアセトン抽出液は減圧濃縮
してアセトンを除去したのち、酢酸エチル２０Ｑ、で抽
出する。この抽出液と濾液からの抽出液を合併し、これ
を減圧濃縮し残渣をシリカゲル（商品名：ワコーゲル（
ニー２００）７５０ｇをクロロホルムで充填したカラム
に吸着させ、グロロホル１１−メタノール（１００：ｌ
）の混液を流す。活性区分を；威圧下に濃縮乾固すると
オイル状の残渣が得られる。次に、これを可及的ナルの
アセトンに溶解し、アセトンで充填したセファデックス
Ｌ　［（−２０のカラムに吸若させ、アセトンで展開溶
出を行ない、得られた活性フラクションを濃縮すると抗
生物質６２７０物質の粗結晶が得られる。これを酢酸エ
チルに溶解し、希塩酸と共に振とうしたのち、酢酸エチ
ル層を減圧下に濃縮する。生成した結晶をｎ−ヘキサン
−酢酸エチルより再結晶するど抗生物質６２７０物質の
遊離酸２３．４ｇが無色針状結晶どして得られる。こう
して得られた抗生物質６２７０物質遊離酸は前記の理化
学的性質及び生物学的性質を示す。

以下１本発明を実施例及び試験例によって示すが、本発
明はこれらに限定されるものではない。

実施例１　製剤 ６２７０物質　　　　　１％ コーンスターチ　　　９９％ 両物質を粉砕して均一に混合し、６２７０物質を１％含
有するプレミックスとする６ 試験例１　抗コクシジウム作用 供試架剤及び飼料： 抗生物質６２７０物質は供試濃度どなるようにオリエン
タル社製の幼雛用完全配合飼月に均等に混和し、オーシ
ス１への接種２目前から試験Ｒ”’（’　Ｂ（感染８日
後）まで投薬を続けた。給餌は自由給餌とした。

なお、比較薬剤は抗コクシジウム剤！−２で知られてい
るモネンシンを用いた。

供試ひな： 供試ひなは産卵鶏種シェーバースター・−クロスの雄ひ
なで、コクシジウムの感染を完全に防＋、、！−，シて
飼ａした７日令（感染時９日令）のものを一群５羽ずつ
使用した。

接種オーシス１−及び接種量： 農林水産省家畜衛生試験場で分離同定されたアイメリア
　テネラの感受性株を用いた。その接種量はひな１羽当
り成熟オーシスト３Ｘ１０’個でそれぞれ金属ゾンデで
経［コ的にそのう内に接種した。

効果の判定：　効果の判定は、ひなの相対増体率。

生存率、オーシスト値及び腸管の病変値より抗コクシジ
ウム指数（Ａ、Ｃ，１，）を計算し、指数値による判定
を行った。

抗コクシジウム指数（Ａ、Ｃ，１，）＝　（相対増体率
＋生存率）−（オーシスト値＋病変値）１２０以下は抗
コクシジウム剤として 不適当。

１６０以下は抗コクシジウム剤として 効力少い。

１６０〜１８０は抗コクシジウム剤と して中程度有効。

１８０以上は抗コクシジウム剤として 極めて有効。

ａ）体重測定 体重は試験終了時に各群毎の増俸量（実験終了時体重−
感染時体重）を求め、無感染無投薬対照群を１００とし
て相対増体率を求めた。

ｂ）オーシスト値 感染後８日［１に腸管ホモシネ−１−により盲腸内オー
シストを数え、またオーシス１−値は下記の如く定めた
。

〔腸管ホモジネートによる方法〕

腸管内オーシスト数　　　　オーシス１〜値０．０〜０
．ｌＸ１０’　　　　０ ０．１〜１．０Ｘ１０’　　　　　１ ２．０〜ｓ、ｏｘｔｏ’　　　　ｉ。

６．０〜ｔｏ、０ＸＩＯＧ　２０ ＞１１．０ＸＩＯ’　　４０ Ｃ）腸管病変度 ひなは試験終了時（感染後８日日）に殺して。

腸管を肉眼的に精査し、病変度を判定した。なお、病変
度は次の如く定めた。

（−）０：盲腸は全く正常。出血斑があれば十とする。

（＋）１：盲腸の形は正常。内容物はやや流動性を帯び
色も黄色がかる。盲腸は部分的に軽度の腫張があり、白
っぽくなる。

（＋＋）２：盲腸の形はほぼ正常。粘膜の腫張は全面に
みられる。内容に出血はなく、粘液は黄色みをおび退色
している。粘膜内には小数の白色点壊死巣や出血斑が見
られる。

（＋＋＋）　　３　：盲腸の萎縮、変形は明瞭で直腸よ
りもやや長い程度となる。正常な内容物は全くなく、凝
血又は灰白色チーズ状の変性物が充満していることが多
い。盲腸壁の肥厚は顕著でもろくなり、点状出血斑がま
だのこっていることもある。

病変は盲腸基部にまで達するが盲腸にまで達しない。

（＋＋＋＋）　４　：盲腸の萎縮、変形は顕著。一般に
ソーセージ状を呈し、その長さは直腸と同じかまたは短
かくなっている。病変は直腸の１７３〜１７４位の所に
まで達する。

第１〜３群はオーシスト接種２日前から所定の濃度の抗
生物質６２７０物質を含有する飼料で飼育し、第４群は
比較薬剤の抗生物質モネンシンを含有する飼料で飼育し
、第５群はオーシスト接種、供試薬剤を含まない基礎飼
料で飼育した感染無投薬対照区、第６群は無感染、無投
嬰対照区である。

この試験結果から抗生物質６２７０物質は優れた抗コク
シジウム作用を有することがわかる。

／′ ／′ ／゛′ 試験例２　豚の飼料効率試験 供試豚：　ランドレース種 基礎飼料： ａ）試験開始〜４週間 穀類（とうもろこし、小麦、大麦）６０％、大豆油粕１
５％、動物質性飼料（脱脂粉乳、魚粉）１５％、その他
（酵素、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、食塩など
）１０％ ｂ）４〜１２週間 穀類（とうもろこし、マイロ、小麦）７８％、大豆油粕
１３％、魚粉５％、その他（炭酸カルシウム、リン酸カ
ルシウム、食塩など）４％方法： 平均３５日令の子豚１５頭を平均体重がほぼ等しくなる
よう１群５頭ずつ３群にわけ、基礎飼料に抗生物質６２
７０物質を０．１２．５．２５ｐｐｍの割合で添加し、
１２週間給餌し、体重及び飼料摂取量を測定した。

また試験開始から４週間の期間中に下痢をおこした豚の
延日数を調べた。その結果を第３表に示す。

本抗生物質６２７０物質添加飼料の給与により、飼料の
要求率は５〜８％改善され、増俸量は５〜１１％の向」
二がみとめられた。また豚の下痢の発生が著しく減少す
ることも観察された。

試験例３　反すう動物の飼料効率試験 試験集：ホルスタイン種 濃厚飼料：穀類（とうもろこし、マイロ、大麦）７１．
５％、そうこう類（コーングルテンフィート、ふすま、
米ぬか油かす）１１．５％、植物性浦かす類（大σ油か
す、あまに油かす）５．５％、その他（アルファルファ
ミール、糖蜜、リン酸カルシウム、食塩）１１．５％ 方法： ８ケ月令の種去勢雄牛１５頭を平均体重がほぼ等しくな
るよう１群５頭ずつ３群に分け、基礎濃Ｊブ飼料に抗生
物質６２７０物質をＯ１７，５，１５ｐｐｍの割合で添
加し２４０日間給与した。なお、粗飼料として稲わらを
１頭あたり１ｋｇ給餌した。その結果を第４表に示す。

本抗生物質６２７０物質添加飼料の給り、により、濃厚
飼料の要求率は７〜１０％改善され、増俸量は９〜１１
％の向上がみとめられた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）下記の理化学的性質を有する抗生物質６２７０物質
   又はその塩を有効成分とする抗コクシジウム症剤。 （１）無色針状結晶、酸性物質。 （２）融点　１１５〜１１８℃ （３）元素分析値（実測値　％） Ｃ　６２．７２％、Ｈ　９．４９％、 Ｏ　２７．７８％ （４）比旋光度　〔α〕＾２＾０＿Ｄ＝−１１．５°（
   ｃ１．０、メタノール） （５）紫外線吸収スペクトル：メタノール溶液中で測定
   すると、２１０ｎｍ以上に吸収極大を示さない。 （６）赤外線吸収スペクトル（臭化カリウム錠で測定）
   における特性吸収（ｃｍ＾−＾１）：３４７０、２９８
   ０、２９４５、２８９０、１７３５、１４６０、１３８
   ０、１３１５、１１６５、１１０２、１０７５、９８７
   、９８０ （７）溶解性： メタノール、エタノール、酢酸エチル、クロロホルム、
   エーテル、アセトン、ベンゼン等に可溶、水に不溶。 （８）呈色反応： バニリン−硫酸反応、ドラ−ゲンドルフ反応陽性。 ニンヒドリン反応に陰性。Ｉ＿２気体で着色。 （９）薄層クロマトグラフィー（メルク社製キーセルゲ
   ルＧＦ＿２＿５＿４使用）： 　　　　　　溶媒系　　　　　　　　　　　Ｒｆ値 クロロホルム−メタノール（２０：１）　　０．４９ ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（１：１）　　　０．０８ ベンゼン−酢酸エチル（１：１）　　　　　０．０４ ベンゼン−アセトン（１：１）　　　　　　０．５３ クロロホルム−アセトン（２：１）　　　　０．３６ ｎ−ヘキサン−酢酸エチル（１：３）　　　０．１３ 酢酸エチル　　　　　　　　　　　　　　　０．２２ （１０）＾１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：ＴＭＳを内部標準
   として重クロロホルム中１００ＭＨｚで測定した結果、
   δｐｐｍ３．３９（３Ｈ）、３．４９（６Ｈ）に３個の
   メトキシル基の存在がみとめられる。 ２）抗生物質６２７０物質又はその塩を有効成分とする
   飼料効率改善剤。