JPS63106560A

JPS63106560A - 抗原又は抗体含有微細多孔性フイルム

Info

Publication number: JPS63106560A
Application number: JP25263686A
Authority: JP
Inventors: Etsuko Kakizaki; 柿崎　悦子
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1986-10-23
Filing date: 1986-10-23
Publication date: 1988-05-11

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（１）産業上の利用分野本発明は、抗原又は抗体を含有した微細多孔性フィルム
に関する。本発明の微細多孔性フィルムは、免疫反応測
定用多孔性フィルムとして優れたものである。

（２）従来の技術従来、微量抗体又は抗原を検出する方法としてマイクロ
プレートを用いたＥＬ　Ｉ　ＳＡ法が知られている。

（３）発明が解決しようとする問題点従来の微量抗体又は抗原を検出する方法は、特殊な器具
や装置を必要とするばかりでなく、操作が繁雑で長時間
を要する。

本発明者は、前記欠点を解消すべく鋭意検討した結果、
本発明を完成した。

（４）発明の構成本発明は検出対象物質と特異的に反応する抗原又は抗体
を含有した微細多孔性フィルムに関する。微細多孔性フ
ィルムは抗体又は抗原が浸透し得るものなら特に限定さ
れず、ニトロセルロース膜、アセチルセルロース膜、ア
ガロースゲル膜、又は多孔性テフロン膜等の合成樹脂膜
が利用できる。本発明の抗体又は抗原を含有した微細多
孔性フィルムを製するには以下のようにする。

任意濃度の抗体又は抗原を溶解した液、望ましくは０．
０５Ｍリン酸塩化ナトリウム水溶液に任意の微細多孔性
フィルム、望ましくはニトロセルロース膜を５分以上浸
した後洗浄し、室温以下望ましくは、２〜８℃にて乾燥
させて製する。

非特異的吸着を防ぐには、更に製した多孔性フィルムを
反応系と異なる動物血清に５分以上浸し、洗浄後室温以
下、望ましくは２〜８℃にて乾燥させて製する。

含有させる抗体又は抗原の溶解液には、任意の防腐剤１
例えば０．１％窒化ソーダをあらかじめ加えて置く。

（５）発明の効果本発明の多孔性フィルムに一定微塁の被検試料１例えば
、１０μＱの血清を加えた時、血清中の抗原又は抗体は
、多孔性フィルム中でクロマトグラフィーを展開し、速
やかに含有する対応抗体又は抗原との間で抗原抗体反応
を起こす。この免疫反応は、測定対象抗原又は抗体の濃
度に応じた沈降面積及び移動距離を生じる。（図１）又
、本発明の多孔性フィルムの面積を限定すれば測定対象
抗原又は抗体の濃度に応じた沈降濃度を生ずる。（図２
）免疫反応の確認には従来の免疫反応検出法のいずれで
もよく、酵素。

発酵物質、アイソトープ、蛍光物質又は色素で標識した
抗体又は、抗原と反応させる。

酵素標識抗体を用いた場合、その基質を加えて反応させ
、微細多孔性フィルム中に沈着した色を見ることができ
る。

又、ガンマ−カウンターや蛍光光度計で、又、透明の多
孔性フィルムを用いれば分光光度計で、より精値を読む
ことも可能である。

未発明の微細多孔性フィルムは、測定対象物質に制限が
少なく、被検試料は微量でよく、測定時間は短く簡便な
操作で、血中微量成分の免疫的検出に有効である。

以下、本発明を更に実施例で説明するが本発明はこれら
により限定される乙のではない。

実施例１抗サイロキシン抗体を含有する微細多孔性フィルムを作
成した。抗サイロキシン抗体（ヤギ由来）を３００μｇ
／ｍＱの濃度になるようリン酸塩化ナトリウム水溶液（
リン酸ｌ水素カリウム４　ｍｇ／ｍＱ、リン酸２水素ナ
トリウムＯ，’８ｍｇ／ｍｆ２．塩化ナトリウム９　ｍ
ｇ／ｍ（りに溶解する。この液に微細多孔性フィルムの
ニトロセルロース膜を５分浸した後、４〜８℃で乾燥す
る。続いて、このニトロセルロース膜を生理食塩水（塩
化ナトリウム０．９％）で洗浄後、正常家兎血清に５分
間浸し、４〜８℃で乾燥する。これを生理食塩水で洗浄
し、再度４〜８℃で乾燥し、製する。

実施例２競合的ラジオイムノアッセイを用い、本発明の多孔性フ
ィルムの定量性を検討した。

（図１参照）被検試料として、サイロキシン１５０ｎｇ／ｍσ及び、
３００ｎｇ／ｍ１２を含有するリン酸塩化ナトリウム水
溶液を２５μσづつ用意する。トレーサーとしてサイロ
キシン（１！５ｒ）を１００μρづつ加え、混和後、各
々ｌＯμＱ採取する。これに実施例１で用いた多孔性フ
ィルムの一端を浸す。又、別のフィルムの真中には直接
添加する。その後、ガンマ−カウンターで計測するとト
レーサーの結合率は、Ｂ／Ｔ％＝サイロキシン３００ｎ
ｇ／ｍ１２１６％、　１５０ｎｇ／ｍ（２５％と、競合
反応なので、濃度に逆比例した。

又、カウントされた面積及び距離はサイロキシン濃度に
比例し、２：ｌであった。

なお、同様の方法で測定しバセドウ氏病患者血清は、上
記被検試料を標準とした時、Ｂ／Ｔ％＝２１％、移動距
離１．６で、サイロキシン濃度２３０ｎｇ／ｍＱと判定
した。

実施例３１７−　ＯＨＰ　（Ｐ　ｒｅｃｕｒｓｏｒｓ−１７ａ　
−ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ）の定量を
行った。（図２）第２抗体（家兎ＩｇＧヤギ抗体）を含
有するポリプロピレン膜を直径５ｍｍの円状にし、プラ
スチックフィルムに貼る。

プラスチックフィルムは、ポリプロピレン膜を貼る部分
に穴を空けても、空けなくても同じ測定結果を得た。又
、プラスチックフィルムには一穴毎に土手（盛り上り）
をつけ、被検試料間の混合を予防した。

各穴に、被検血清（未知検体及び標準濃度ｌ：２：４）
５μｇを加え、次いで第１抗体（１７−ＯＨＰ家兎抗血
清）１０μＱ、ペルオキシダーゼ標識１７−０ＨＰ　　
５μａを加える。

室温で１時間放置後、生理食塩水で洗浄し、発色液Ｐ　
Ｐ　Ｄ　（Ｐ−ｐｈｅｎｙｌｅｎｄｉａｍｉｎｅ）を加
え、５分後の色調を比較する。この結果、未知検体では
１７−０ＨＰが検出されなかった。

実施例４タイプ■コラーゲンを含有した微細多孔性フィルムとこ
れを用いた血中抗タイプ■抗体の測定を示す。（図１）
　　　　　　　　　　４、タイプ■コラーゲン（１０ｎ
ｇ／ｍ＆）を溶解したリン酸塩化ナトリウム水溶液（ｐ
Ｈ７，４）に、微細多孔性のテフロン膜（２ｃｍＸ　７
　ｃｍ、厚さ０．２〜０．８μｍ）を４〜８℃下、２時
間浸した後、４〜８℃で乾燥する。続いて、このフィル
ムを家兎血清中に４〜８℃下、２時間浸した後、４〜８
℃で乾燥させ、タイプ■コラーゲンを含有した微細多孔
性フィルムとする。既知濃度（１：２）のＴｙｐｅＩＩ
コラーゲン抗体を含む血清を被検試料として、各１０μ
Ｑにフィルムの一端を浸し、吸収させる。

更に、ペルオキシダーゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体ｌμＩ２
／ｍＱを溶解した生理食塩水に１０分間浸す。この後、
ＰＰＤ溶液（Ｐ−ｐｈｅｎｙ　ｌｅｎｄｉａｍｉｎｅ　
ｌ　ｍｇ／ｍＱ、　０．１５Ｍ塩化ナトリウム。

０．１％ＨｔＯ３，０，１Ｍクエン酸）に５分間浸した
後、色調を比較する。６度２の被検試料は、濃度ｌに比
し、２倍の濃青色を示した。

【図面の簡単な説明】

第１図は、移動距離１面積測定の実施例第２図は、濃度
測定の実施例

Claims

【特許請求の範囲】

（１）抗原又は抗体を含有する微細多孔性フィルム
（２）特許請求範囲第１項記載の微細多孔性フィルムを
構成試薬とする免疫測定用試薬
（３）動物血清又はそのイムノグロブリン分画を追加含
有する特許請求の範囲第１項記載の微細多孔性フィルム
を構成試薬とする免疫測定用試薬
（４）測定対象抗体又は抗原の濃度を沈降面積及び移動
距離又は、沈降濃度で判定する特許請求範囲第１項記載
の微細多孔性フィルムを用いた免疫測定法