JPS63122695A - 配糖体濃縮物の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ｔａ＋産業上の利用分野 本発明はゴマ種子に含まれる特定の配糖体を分画・濃縮
する方法に関するものである。

（ｂ）従来の技術 ゴマ種子には下式１．　　ＩＩ、　　ＩＩＩに示す物質
をアグリコンとする配糖体が含まれることは従来から知
られていたが、配糖体の化学構造等の詳細については明
らかでない。

ＯＣＲ。

ＯＣＨ。

しかし、式Ｉ、　　ｎ、　ＩＩ［に示す物質自体は抗酸
化性、抗変異原性、抗腫瘍性等の生理作用を有すること
が示唆されており、その効果、有用性について今後に期
待するところには大きなものがある。

一方、Ｉ、　　ＩＩ、　　ＩＩＩは脂溶性であり、また
生理活性に大きく関与すると考えられる水酸基が遊離の
状態であること等から溶解性、安定性、生体（細胞）と
の相互作用において難点があることが予想される。

この様な理由からＩ、　　ＩＩ、　　Ｉを配糖体の形で
使用することにより、安定性及び親水性が増し、生体と
の相互作用が向上することが期待されている。

ところが、ゴマ種子に存在する上記の配糖体は、種子１
ｇ中数ｍｇにすぎず、挙動の類似した多量の配糖体と共
存するため、これを濃縮するうえで大きな障害となって
いた。

本発明者らはこのような課題を解決すべく先に溶剤分別
およびシリカゲル処理によって上記の配糖体を濃縮する
方法を発明した（特願昭６ｌ−８２６５９）。この方法
により配糖体の効果的な濃縮が可能となった。

（Ｃ）発明が解決しようとする問題点 しかし乍らかかる方法によっても前記の式Ｉ。

Ｉｆ、　　Ｉ［［の配糖体相互の分画を行うことはでき
ない。

然るにこれらＩ、　　Ｉ［、ＩＩＩの配糖体を別々に濃
縮することは生理活性をより有効に利用するためには不
可欠な要件であり、効果的な分画・濃縮法の開発が強く
望まれている。

従って本発明の目的は、他の配糖体が混入することなく
、式！、ｎ、ＩＩＩをアグリコンとする配糖体を相互に
分画し、各々を別々に高濃度に濃縮する方法を提供する
ことにある。

（ｄ１問題点を解決するための手段 上記の目的を達成すべく、本発明者らは、この配糖体の
挙動を詳細に調べたところ、溶剤分別、シリカゲルおよ
びＯＤＳによる処理を組み合わせることにより、効果的
に分画・濃縮できることを見出した。

本発明はかかる知見に基づいて完成されたもので、脱脂
したゴマ種子の極性溶剤による抽出物を有機溶剤で分画
して配糖体含有区分を得たのちシリカゲルおよびＯＤＳ
により分画することを特徴とする、下式１．　　ｎ、　
ＤＩに示す物質をアグリコンとする配糖体濃縮物の製造
方法である。

ＣＲ５ ０ＣＨ。

以下にその各工程を詳述する。

Ａ、原料からの抽出 原料のゴマ種子は種類、産地などはいずれでもよく、後
の作業上、予め脱脂し、１００メツシユ以下に粉砕した
ものが望ましい。これを５〜２０倍量の極性溶剤に漬浸
し、３０〜８０℃に加温しつつ数時間攪拌して配糖体を
抽出する。極性溶剤としては、アルコール、含水アルコ
ール、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、クロロホルム
がよくアルコールとしてはメタノール、エタノール、正
−プロパノール、イソブタノールがよく、水を混合して
用いる場合の含水率は１０〜９９％が効果的である。抽
出後、濾過により不溶性残渣を除き、さらに大部分の溶
剤を留去して、粗配糖体を得る。

Ｂ、溶剤分画 粗配糖体を約１０倍量のクロロホルムに投入し、完全に
溶解してのち、同量の水を加えて激しく攪拌する。静置
後、クロロホルム相を他の容器に移し、新たにクロロホ
ルム相の半量の水を加えて攪拌する。静置後、クロロホ
ルム相をとり、脱溶剤してクロロホルム可溶分を得る。

この工程では、糖類、蛋白質及び水溶性の配糖体が除去
される。

次にクロロホルム可溶分に十分量のアセトンを加え、攪
拌機により激しく攪拌してアセトンと十分に接触させる
。攪拌を止めて数時間放置後、上澄液を除き、モチ状の
沈殿物を得る。沈殿は減圧下で３０〜５０℃に加温して
残留するアセトンを除き、粉末状のアセトン不溶分を得
る。この工程では■、■、■およびステロール等の油溶
性物質が除去される。

Ｃ，シリカゲルカラム分画 シリカゲル分画として、ここではシリカゲルカラムによ
る方法を述べるが、本発明はこれに限定されない。

内径と高さの比が１／１０〜１／３０の円筒に３０〜２
００メツシユのシリカゲルを円筒の高さの約８０％にな
るように充填して、シリカゲルカラムを調製する。使用
するシリカゲルは孔径３０〜１００オングストロームの
ものであればいずれでもよく、活性化処理をせずに用い
る。このときシリカゲルは予め十分量のクロロホルム／
アセト７＝１０／２〜２／１混合液に漬浸しておき、液
相が十分シリカゲルに浸潤したのち、円筒の上部より流
入する。シリカゲルの沈降が終了し、液面がシリカゲル
面にほぼ等しくなるまで余剰の液を除く。

次いでカラム調製に用いたクロロホルム／アセトン混合
液をなるべく少量用いてアセトン不溶部を溶解し、カラ
ム上部より静かに流入する。このとき、カラムに供する
アセトン不溶部は使用したシリカゲルカラムの重量の５
％以下が望ましく、これをこえると目的物質の損失が次
第に増加する。

液面を下げた後、カラム調製に用いたクロロホルム／ア
セトン混液を円筒の容積の０．８５〜１．５倍流す。続
いてアセトン／メタノール＝２０／１〜５／１を円筒容
積の０．８〜１．５倍流し、溶出液を集める。溶離液の
最適組成はシリカゲルの活性度、円筒の形、付加量など
により異なるが、通常の場合、アセトン／メタノール＝
１０／１が適当である。この区分を脱溶剤して粉末状の
粗濃縮物を得る。

Ｄ、ＯＤＳカラム分画 ＯＤＳとは、オクタデシル基を化学的に結合したシリカ
ゲルを指す。

ＯＤＳ分画として、ここではＯＤＳカラム分画による方
法をのべるが、本発明はこれに限定されない。

内径と高さの比が１７１０〜１／２０の円筒に６０〜２
００メツシユのＯＤＳを円筒の高さの約８０％になるよ
うに充填して、ＯＤＳカラムを調製する。

ＯＤＳは予め十分量の水／アルコール（メタノールがよ
い）＝２／１〜１／１混合液に浸漬しておき、液相が十
分にＯＤＳに浸潤するよう、６０〜７０℃に加熱した後
に、減圧下にさらして脱気する。これを円筒のカラムに
充填し、上部から流入してカラムを作り、水／メタノー
ル＝２／１を流し、完全に置換する。

前記Ｃで得た粗濃縮物を水／メタノール＝２７１に懸濁
（或いは溶解）して、カラムに供する。

この時、ＯＤＳカラムに供する粗濃縮物はＯＤＳカラム
充填剤の重量の１．５％以下が望ましく、これをこえる
と目的物質の損失が次第に増加する。

液面を下げた後、水／メタノール−２／１混液を円筒の
容積の１．０〜１．５倍流し、高極性物質を除去する。

溶離液の最適組成は円筒の形、負荷量などにより異なる
が、通常の場合、メタノールが適当であり、容積の１．
５〜２倍流す。この区分に目的とする配糖体が含まれる
が、この処理をすることにより、混在している脂肪酸エ
ステル等が除去できる。

さらに、先のメタノール溶出区分を脱溶剤した濃縮物を
再度水／メタノール＝２／１に懸濁させ、ＯＤＳを充填
した円筒に供する。ここでも、濃縮物はＯＤＳカラムの
重量の１．５％以下が望ましい。液面を下げた後、水／
メタノール＝２７１〜０／１０を円筒容積の１．５〜２
．０倍流し、溶出液を集める。溶離液の最適組成は、円
筒の形、負荷量等により異なるが、通常の場合、水／メ
タノール＝２／ｌ、６／４．５１５．４／６の４種類の
混液を円筒容積の１．５〜２．０倍流すのが適当である
。これら各区分を脱溶剤して、粉末状の目的とする濃縮
物を得る。

この時、水／メタノール＝６／４と４／６には夫々異な
った配糖体が含まれており、５１５には両者の混合物が
含まれる。これらを脱溶剤し、目的とする配糖体濃縮物
を得る。

本発明により得られた濃縮物の評価方法として、配糖体
である目的物の含量を直接測定する方法は現在まで知ら
れていない。そこで本発明者らは目的物を無機酸のメタ
ノール溶液を用いて分解し、生成するＩ、ｎ、ｌｌｌ０
量から濃縮度合を評価することとした。無機酸としては
、ＨＣｌ、ＨＮＯｉ　。

Ｈ３Ｐ０ａ　、ＨｓＢＯａ等があり、特にＨ，３ＰＯ。

がよい。また、遊離の状態で存在するＩ、　　ＩＩ、　
Ｉ［Ｉについては、分解前後のこれらの物質の量の差に
よって配糖体に由来する１、ｎ、ｍの量とした。

次にＩ、ｎ、ｎ［の分析法について述べると、試料５０
〜２００ｍｇを小型試験管に正確に測り取り、５％リン
酸、メタノール５ｍｊ２を加えて溶解又は分散させる。

密栓して１５０℃湯浴にて３〜６時間加熱した後冷却し
、酢酸エチル’１ｍｌおよび飽和食塩水５ｍＡを加え栓
をして激しく振とうする。放置後、上層を水素炎イオン
化検出器を装備したガスクロマトグラフに供する。標準
物質としてコレステロールの一定濃度の溶液を注入し、
ピーク面積比から１．　　ｎ、　ＩＩＩの全含有量を算
出する。同時に５％リン酸メタノールの代わりにメタノ
ールを用いた空試験を行い、配糖体に由来しないＩ、ｎ
、ｍの量を求め、その差を配糖体に由来する量とする。

（ｅ）実施例 実施例１ 中国産ゴマを脱脂したゴマ油粕１ｋｇを１００メツシユ
以下に粉砕し、２（ｌ抽出槽にとる。エタノール／水＝
８５／１５を１５／加え５０℃に保ちつつ３時間攪拌す
る。冷却後、減圧濾過により不溶性残渣を除き、抽出液
１２．５Ａを得た。抽出液の全量をロータリーエバポレ
ーターに供し、大部分の溶剤を留去し、粗配糖体４５ｇ
を得た。

粗配糖体をクロロホルム４５３ｍＡに溶解して分液ロー
トに移し、水４５０　ｍ　ｌを加え、激しく振とうする
。１時間放置後、下層を別の容器に移し、さらにしたら
しいクロロホルム２５０ｍｊ２を加え再度激しく振とう
する。下層は先の下層と合わせ、溶剤を留去し、クロロ
ホルム可溶部１１ｇを得る。

つづいてアセトン２００ｍｊ！を加え、電動式攪拌機で
激しく攪拌し、クロロホルム可溶分を完全に分散させる
。３時間放置後、上澄液を除き、沈殿物は減圧下で３０
〜３５℃に２時間保ち、残留するアセトンを除いてアセ
トン不溶部５．３ｇを得た。

次に内径３．Ｏｃｍ、高さ４５ｃｍのガラス製カラムに
シリカゲル（和光純薬■製　ワコーゲルＣ−１００）　
　１００　ｇをクロロホルム／アセトン＝４／１を用い
て流入し、シリカゲルカラムを調製する。同じ液２Ｑｍ
ｌｌを用いてアセトン不溶分を全量を溶解し、上部より
流入し、シリカゲルに吸着させる。同じ液を１２０ｍ１
流したのち、アセトン／メタノール＝９／２　１２０ｍ
７！を流し、この時の溶出液を集め、脱溶剤して粉末状
の粗濃縮物０．４１ｇを得た。

その後、同じサイズのガラス製カラムに０ＤＳ（山村科
学■製　００５　６０／２００メツシユ’）　’４０　
ｇを含水メタノールを用いて流入し、ＯＤＳカラムを調
製する。同じ液２０ｍＩｔを用いて上記アセトン／メタ
ノール−９／２溶出区分の粉末状濃縮物１ｇを溶解し、
上部より注入した。液面が下がった後、４０　Ｑｒｒｌ
の含水メタノールを流し、次にメタノールのみを４００
ｍｌ流し、この時の溶出液を集め、脱溶剤して、粉末状
の濃縮物０．６８ｇを得た。

さらに同じサイズのガラス製カラムにＯＤＳ　（上記と
同様）１８０ｇを含水メタノール（３０％（ｖ／ν）メ
タノール）溶液を用いて注入し、ＯＤＳカラムを調製す
る。同じ液Ｉ　Ｑｍｆｆを用いて上記粉末状濃縮物０．
６８ｇを溶解し、上部より注入した。液面が下がった後
、５０９ｍｌの含水メタノール（順に３０％Ｃｖ／ｖ）
　、　　４０％（ｖ／ｖ）　、　　５０％（ｖ／ｖ）　
、　　７０％（ｖ／ｖ）　）を流し、各区分を脱溶剤し
て、粉末状濃縮物をそれぞれ０．０４　ｇ、　　０．０
３　ｇ。

０．２０　ｇ、　　０．２２　ｇ得た。なお、本実施例
における濃縮配糖体に含まれる目的物由来のＩ、　　Ｉ
Ｉ、　　Ｉの配糖体は表−１の様になった。

表−１ また、本濃縮物の組成比は■の配糖体２９％。

■の配糖体１８％、■の配糖体５８％で配糖体に由来し
ないＩ、　　ＩＩ、　Ｉ［［は検出されなかった。

実施例２ ゴマ油粕１ｋｇを１００メツシユ以下に粉砕し、２０１
抽出槽にとる。クロロホルム１５１を加え、常に攪拌し
つつ一夜抽出をつづける。微圧下濾過により不溶性残渣
を除き、抽出液１２．Ｈ！を得る。

ロータリーエバポレーターを用いて約０．５１に濃縮後
、水５００ｍｌを加えて激しく振とうする。

以下実施例１と同様に操作してアセトン不溶部を４．８
ｇを得た。その１．０ｇを実施例１と同様の条件でシリ
カゲルカラムおよびＯＤＳカラムに供し、目的の濃縮物
０．０９ｇを得た。本配糖体濃縮物の含量を表−２に示
した。

表−２ また配糖体の組成比は実施例１とほぼ同一であった。配
糖体に由来しないＩ、ｎ、ＩＩＩはいずれも検出されな
かった。

（ｆ）発明の効果 本発明によれば、ゴマ種子中に微量しか存在せず、しか
も挙動の類似する多量の他の配糖体と共存するために濃
縮が困難であった目的の配糖体を相互に分画し、各々を
高濃度に濃縮することができる。

これらは、抗酸化性、抗変異原性および抗腫瘍性等の有
用な生理的作用が期待される。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. （１）脱脂したゴマ種子の極性溶剤による抽出物を有機
   溶剤で分画して配糖体含有区分を得たのち、シリカゲル
   およびＯＤＳにより分画することを特徴とする、下式
   I 、II、IIIに示す物質をアグリコンとする配糖体濃縮
   物の製造方法。 I ▲数式、化学式、表等があります▼ II▲数式、化学式、表等があります▼ III▲数式、化学式、表等があります▼