JPS6312279A - 新規アルデヒドデヒドロゲナ−ゼ複合体およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野］ 本発明は４，５−ジヒドロ−４，５−ジオキソ−１Ｈ−
ピロロ［２，３−ｆｌキノリン−２，７，９−）リカル
ポンｍ（以下ＰＱＱと略す）を含有し、炭素数２以上の
アルデヒドを酸化することができ、広範囲のｐＨで安定
な新規アルデヒドデヒドロゲナーゼ複合体およびその製
造方法に関する。

［従来技術とその問題点］ アルデヒド、特にアセトアルデヒドは動物体内のエタノ
ール代謝の中間代謝産物として知られ、二日酔などの原
因物質として注目されているほか、各種醸造物の発酵中
にも発生する有毒物質である０本物質はアルデヒドデヒ
ドロゲナーゼを用いた酵素定驕法で比較的簡便に測定で
きるものの、反応の最適ｐＨが中性付近であることや、
高濃度の酢酸が共存すると反応が可逆的であるが故に、
大きな誤差を生ずるなどの点で酸性域に強い緩衝能を有
する醸造食品中や清酒発酵中のアルデヒドの定量には適
していない。

上述のアルデヒドデヒドロゲナーゼはニコチンアミドア
デニンジヌクレオチド（ＭＡＤ）もしくはニコチンアミ
ドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰ）を補酵素
とする酵素であるが、これとは異なる看しいタイプのア
ルデヒドデヒドロゲナーゼが近年酢酸菌（Ａｃｅｔｏｂ
ａｃｔｅｒ属およびＧｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ属）よ
り得られている（　Ａｇｒｉｃ。

Ｂｉｏ’１．　Ｃｈｅｍ、＊す、　５０３〜５１５　（
１９８０）；同４５．１８８９〜１８９０　（１９８１
））、この酵素は酸性域でのみ活性を示し、反応がアル
デヒドの酸化方向のみで共存する酸による阻害を受けな
いなど定量用酵素として多くの利点を有しているものの
、各ｐＨでの酵素の安定性に問題が残っている。＃にＰ
Ｈ３において５°Ｃ，４日放置後、残存活性は約３０％
まで低下する。その上、通常酵素が安定なｐＨ７におい
てさえもｐＨ３と同レベルにまで失活する。

本発明者らは上述のアルデヒドデヒドロゲナーゼが実際
の食酢醸造には用いられていない酢酸菌から得られてい
る事実に注目し、高濃度の酢酸存在下でも高い酢酸発酵
能を示す酢酸菌であるならば、従来の酵素よりもはるか
に耐酸性に優れたアルデヒドデヒドロゲナーゼを生産す
るものと考えた。そこで、強い酸性域でも活性を示すア
ルデヒドデヒドロゲナーゼの探索を目的として、比較的
高濃度の酢酸存在下でも良好な生育を示し、しかも高い
アルデヒド酸化活性を有する酢酸菌のアルデヒドデヒド
ロゲナーゼについて検討した。その結果、アセトバクタ
ー・アルトアセチゲネス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ａ
ｌｔｏａｃｅｔｉｇｅｎｅｓ）ＭＨ−２４（ＦＥＲＭＢ
Ｐ−４９１）に代表されるアセトバクター属に属する一
群の酢酸菌がｐＨ３のみならずアルカリ域においても安
定な新規なアルデヒドデヒドロゲナーゼを生成する事実
を見出した。

また、従来脱酵素を細胞質膜より可溶化すると失活し易
くなり、精製を行っても活性の回収率が低いという問題
があった０本発明者らは従来の酵素の可溶化が界面活性
剤を１種類のみ用いた例が多いことに着目し、２種以上
の界面活性剤を併用することによってアルデヒドデヒド
ロゲナーゼを細胞質膜より効率良く、かつ安定化した状
態で可溶化すべく検討した。

その結果、トリトンＸ−１００とＮ−ラウロイルサルコ
シン酸ナトリウムを併用することによって本発明のアル
デヒドデヒドロゲナーゼを効率良く、かつ安定化した状
態で可溶化できる事実を見出した０本発明はこれらの知
見に基いて完成されたものである。

［問題点を解決するための手段］ 本発明は、以下の性質を有する新規アルデヒドデヒドロ
ゲナーゼ複合体、 （１）　５ＯＳ−ポリアクリルアミド電気泳動法により
測定した分子量が約７５，０００および約２０，０００
の蛋白質を含む酵素複合体であり、 （２）　４．５−ジヒドロ−４，５−ジオキソ−１Ｈ−
ピロロ［２，３−ｆｌキノリン−２，７，９−トリカル
ボン酸を含有し、 （３）炭素数２以上のアルデヒドを基質として酸化し、 （４）界面活性剤により細胞質膜より可溶化され、（５
）　ｐ）１３からｐ）＋１０までの範囲において４℃、
１週間放置後も８０％以上の残存活性を示す。

を提供し、さらにアセトバクター属に属し、上記酵素複
合体を生産する能力を有する微生物を培養し、培養物か
ら該複合体を採取することを特徴とする上記酵素複合体
の製造法を提供するものである。

次に、本発明のアルデヒドデヒドロゲナーゼ複合体の性
質を示す。

（１）作用 本酵素は炭素数２以上のアルデヒドに作用して相当する
カルボン酸に酸化する。

（２）ノ＾質特異性 本酵素のノ、（質性異性の例を第１表に示す。本酵素は
直鎖の１級アルデヒド、すなわちアセトアルデヒド、プ
ロピオンアルデヒド、ｎ−ブチルアルデヒドなどを良好
な基質として作用する。しかし、グリセルアルデヒド、
グリオキサール、ベンズアルデヒドには作用せず、アル
コール類、糖類、有機酸類にも作用しない。

第　　１　　表 （３）至適ｐ。

本酵素の至適ｐＨはアセトアルデヒドを基質とした場合
、第１図に示すようにｐＨ７，０付近にある。

（４）安定ｐＨ範囲 第２図に示すように、本酵素はｐＨ３からＩＯで５℃、
４日間放置後、はとんどすべての活性を有している。５
℃、７日間放置後でもｐ）＋３から１０で８０％以上の
活性を有するきわめて安定な酵素である。なお、第２図
の安定ＰＨ曲線は各ＰＨに放置後の残存活性をｐｎｅ、
ｏで測定したものである。

既知の酵素の例としてはアセトバクター・アセチ（ト社
ｅｔｉ）　ＩＦＯ３２８４およびグルコノバクタ−９サ
ブオキシダンス（Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ　５ｕｂ
ｏｘｙｄａｎｓ）ＩＦＯ１２５２８から得られたアルデ
ヒドデヒドロゲナーゼを挙げることができるが（Ａｇｒ
ｉｃ、　Ｒｉａｌ。

Ｃｂｅｍ、、　４４．５０３〜５１５　（１９８０）；
同４５．１８８９〜１８９０（１９８１））　、　この
アルデヒドデヒドロゲナーゼはｐＨ３，０において５℃
、４日間放置後、残存活性は約３０％であり、中性下（
ｐＨ７，０）でも同様な結果が得られている。

したがって、本酵素はこれら従来の酢酸菌のアルデヒド
デヒドロゲナーゼよりもｐＨ安定性が顕著に優れている
。

（５）作用適温の範囲 第３図に示すように、作用温度範囲は２０〜８０℃であ
り、特に５５°Ｃ付近に最適温度を有する。

（６）　ｐＨ，温度による失活の条件 第４図に示すように、ｐＨ［ｉ、０で各温度１０分間処
理すると、６０°Ｃまで失活せず、６５℃で約５０％失
活する。

（７）阻害、活性化および安定化 １ａ＋Ｍ濃度の水銀、銅、カドミウムなどの重金属イオ
ンにより阻害される。一方、アジ化ナトリウム、亜ヒ酸
ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸によっては阻害さ
れない。

（８）分子量 ０．１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００存在下、七フアクリ
ルＳ−３００によるゲル濾過法から推定されるアルデヒ
ドデヒドロゲナーゼ複合体の分子量は約９５，０００で
ある。

（９）サブユニット 本市２打はディスクゲル電気泳動により単一バンドとな
る０本酵素はドデシル硫酸ナトリウム（以下、ＳＯＳと
略称する）処理によって２成分に分けられる。　５Ｏ９
−ポリアクリルアミド電気泳動法で分子量標準蛋白質と
してホスホリラーゼｂ（分子量９４．０００）　　、ア
ルブミン（分子量Ｅｉ７，０００）　　、オブアルブミ
ン（分子ｉ４３，０００）　　、カルボニックアンヒド
ラーゼ（分子１３０，０００）　　、　）リプシンイン
ヒビター（分子１４２０，１００）およびα−ラクトア
ルブミン（分子ｆｆ１１４．４００）を含むファルマシ
ア製のキャリブレーションキットを用いた場合に、本酵
素の２成分の分子量は約７５，０００および約２０，０
００であった。本酵素はチトクロームに特有な吸収スペ
クトルを示さないため、チトクロームは構成成分として
含まれていない。

上述したように、本発明のｔｆＩ素は分子量約７５　、
０００および約２０，０００の２種類のサブユニットか
ら構成されているため、本酵素は複合酵素と見なされる
。したがって、本酵素はアルデヒドデヒドロゲナーゼ複
合体と呼ぶのがふされしい。

既知の酵素の例としてはアセトバクター・アセチＩＦ０
３２Ｂ４およびグルコノバクタ−・サブオキシダンスＩ
ＦＯ１２５２８から得られたアルデヒドデヒドロゲナー
ゼを挙げることができるが（Ａｇｒｉｃ。

Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｔａ、、　４４．５０３〜５１５　
（１９８０）；同長。

１８８９〜１ＨＯ（＋９８０）、）、前者のアルデヒド
デヒドロゲナーゼは分子量７８，０００　、４５，００
０および１４，０００の３種のサブユニットから構成さ
れており、後者のアルデヒドデヒドロゲナーゼは分子Ｂ
ａ６．ｏｏｏおよび５５，０００の２種のサブユニット
から構成されている。以上の点から、本酵素は従来の酢
酸菌のアルデヒドデヒドロゲナーゼとは明らかに異なる
新規な酵素である。

（１０）色 本酵素溶液は薄いピンク色を呈する。

（１１）熱水抽出画分の蛍光スペクトル本酵素の熱水抽
出物の蛍光スペクトルを第５図に示す。本スペクトルお
よびバイオアッセイにより、熱水抽出物に４．５−ジヒ
ドロ−４，５−ジオキソ−１Ｈ−ピロロ［２，３−月キ
ノリンー２．７．９−トリカルボン＃　（ＰＱＱ）が含
まれていることが示された。

（１２）Ｋｍ値 本酵素の反応速度定数に厘はエタノールを基質とした場
合、約１．２　Ｘｌ０−２Ｍであった。

（１３）電子受容体 フェナジンメソサルフエイト（ＰＭＳ）　　、　２．Ｇ
−ジクロロフェノールインドフェノール（ＤＣＩＰ）　
、ニトロブルーテトラゾリウムクロライド（ＮＢＴ）　
　、フェリシアン化カリウムなどが本酵素の電子受容体
となりうるが、ＨＡ口、　ＮＡＤＰ　、分子状酸素は電
子受容体と成りえない。

以上の性質から、本発明のアルデヒドデヒドロゲナーゼ
複合体は今までに知られているいずれのアルデヒドデヒ
ドロゲナーゼとも異なる新規な酵素である。

（１５）精製方法 精製方法は製造方法に記載した。

次に、本酵素の製造方法について説明する。

本発明のアルデヒドデヒドロゲナーゼ複合体の製造に使
用する細菌は、本酵素を産生ずるものであればいずれで
もよく、例えばアセトバクター（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅ
ｒ）属細菌を挙げることができる。具体例としてアセト
バクター・アルトアセチゲネス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅ
ｒ　ａｌｔｏａｃｅｔｉｇｅｎｅｓ）　ＭＨ−２４（Ｆ
ＥＲＮ　ＢＰ−４９１）を挙げることができる。

本発明のアルデヒドデヒドロゲナーゼ複合体の製造に際
して使用する培地は前記の細菌が生育して、本酵素を生
産するものであればどのようなものでもよい。炭素源と
しては、例えばグルコース、グリセロール、フラクトー
ス、マンニトール、酢酸等を使用することができ、窒素
源としては、例えば酵ｆｆＪエキス、カゼイン加水分解
物。

コーンステイープリカー、ペプトンなどの天然物やアン
モニウム塩などが使用できる。必要に応じて無機塩や各
種の有機物、ビタミン類、核酸関連化合物等を添加する
ことができる。好ましくは培地にさらにエタノールを添
加して酢酸発酵を行わせしめれば、酵素の含量が増大し
、容易に大量の酵素を得ることができる。

１８養に当っては固体培地を使用することもできるが、
多ら２の菌体を得るには液体培地を用いて通気攪拌培養
または振どう培養を行うのが好ましい、液体培養に当っ
ては添加したエタノールが消費しつくされないようにコ
ントロールすること、１ｌｉ１ｉ素の供給を上方に行う
ことが本酵素を効率よく；）′：枯するのに効果的な場
合がある。培養においては、はじめから本培養を行うこ
ともできるが、大量培養を行う場合には、まず小規模な
前培養を行い、得られた培養物を本培地に接種するのが
好ましい、培養温度、培養期間、培地の液性等は本発明
の酵素の生産量が最大になるように適当に選択、調節す
ればよいが、通常は好気的条件下で２５〜３５℃におい
て１〜３日培養するのが好ましい。

本発明のアルデヒドデヒドロゲナーゼ複合体は細菌菌体
内に蓄積されるため、本酵素の回収、精製のためにはま
ず菌体を集めて破砕する。本酵素は細胞質膜両分に局在
するため、適当濃度の界面活性剤１例えば非イオン性界
面活性剤を加えることにより可溶化する。好ましくはト
リトン（Ｔｒ　１ｔｏｎ）Ｘ−１００とＮ−ラウロイル
サルコシン酸ナトリウム（Ｓｏｄｉｕｍ　Ｎ−Ｌａｕｒ
ｏｙｌ　５ａｒｃｏｓｉｎａｔｅ）を併用する。この併
用により本酵素を効率良く安定化して可溶化することが
できる。可溶化された本酵素は界面活性剤存在下でジエ
チルアミノエチル−セファロース（以下、ＤＥＡＥ−セ
ファロースと云う、）などの各種イオン交換剤によるク
ロマトグラフィー、ハイドロキシアパタイト等の吸着ク
ロマトグラフィーあるいはセファデックスなどを用いた
ゲル濾過法に代表される通常の酵素精製手段を単独もし
くは適宜組合せて適用し、任意に精製された本発明の酵
素を得ることができる。

次に、本発明の酵素の酵素活性測定方法について説明す
る。

本酵素の活性の測定は、前記の電子受容体のいずれを用
いても可能であるが、以下にそのうちの１例を示す、　
０．１　Ｍのフェリシアン化カリウム溶液０．１ｒａｌ
！、　ＮｃＩｌマａｉｎｅ氏緩衝液（ＰＨ８，０）０．
７ｍｊ７および適当量の本酵素を加え、水で０．９ｔｊ
）とする。さらに、１Ｍアセトアルデヒド溶液を０．１
閣！加えて反応を開始させ３０’Ｃにて５〜１５分後、
Ｆｅｒｒｉｃ　５ｕｌｆａｔｅ−Ｄｕｐａｎｏｌ試薬（
Ｗ、Ａ、Ｗｏｏｄ他。

”Ｍｅｔｈｏｄ　ｉｎ　ｅｎｚｙｓｏ１ｏｇｙ″Ｖａ１
．Ｖ、２８７（１９ｆｔ２）参照）　０．５ｍＡ＋を加
え反応を停止させた後、直ちに水を加えて５ｔａｌとす
る。３７℃、３０分放置後、８８０ｎｍの吸光度を測定
する。基質であるアセトアルデヒドを加えないで上記と
同様に反応せしめたサンプルとの吸光度の差が酵素の活
性を意味する。ｌＪＬｍｏｌｅのアセトアルデヒドを１
分間に酸化する酵素州を１屯位とする。

［実施例］ 次に、本発明を実施例により詳しく説明する。

実施例１ グルコース３％、酵母エキス０．５％およびポリペプト
ン０．２％の液体培地を５００＋ｓＩ！容の振どうフラ
スコに１００ｍｆずつ分注し、オートクレーブ中で１２
０℃、　１５分間殺菌した。冷却後、エタノールと酢酸
をエタノールは５％、酢酸は６％になるように添加した
。この培地にアセトバクター・アルトアセチゲネスＭＨ
−２４（ＦＥＲＮ　ＢＰ−４９１）を５白金耳接種し、
往復振とう機上で３０°Ｃにて４日間培養した。同じ組
成の培地２０５を３０βのジャーファーメンタ−で作製
し、前記の培養液２Ｉ２を接種して２Ｏｆ！／分で通気
し、攪拌しながら３０℃にて２日間培養した。培養終了
後、培養液を５℃にて遠心分離することにより湿重量約
２ｇの菌体を得た。

この菌体を０．０１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６，
０）に懸濁し、２０，０００ｐｓｉ　でフレンチプレス
を通し菌体を破砕した後、８８，０ＯＯＸ　ｇで６０分
間超遠心分離し、膜画分を沈殿として得た。この沈殿を
０．０１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６，０）に懸濁
した後、２０％丁ｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００およびｌＯ％
Ｎ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウムを最終濃度が各
々１．５％および１％になるように加え、３時間攪拌し
た。この液を再度６８，０ＯＯＸ　ｇで６０分間遠心分
離を行い、本酵素が可溶化された上清を得た。この上清
に硫酸アンモニウムを６０％飽和になるように加え完全
に溶解後、１０，０ＯＯＸ　ｇで１０分間遠心分離を行
った。得られた沈殿に０．６％丁ｒｉｔｏｎＸ−１００
．２０ｍＭベンズアルデヒド、０．１％セチルピリジニ
ウムクロライドを含む０．０１Ｍリン酸カリウム緩衝液
（ｐ）＋６）を加え溶解後、同じ緩衝液に対して透析し
た。この透析液をｅａ、ｏｏｏｘ　ｇで６０分間超遠心
分離を行い、不溶性物質を沈殿として除去した。

可溶化された本酵素を含む上清は０．６％Ｔｒｉｔｏｎ
　Ｘ−１００を含む０．０１Ｍリン酸カリウム緩衝液（
ｐＨ６ンで平衡化したｌ１ＥＡＥ−セファロースＣＬ−
６Ｂを充てんしたカラムに注入し、本酵素を吸着後、０
．０１Ｍから０．１Ｍまでのリン酸カリウム緩衝液で傾
斜溶出した。　０．０５Ｍ付近のリン酸カリウム緩衝液
で溶出する活性画分を集め、０．１％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ
−１００を含む０．０１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ
６）に対して透析した。この透析液を０．２％Ｔｒｉｔ
ｏｎ　Ｘ−１００、５ｍＭベンズアルデヒドを含む０．
０１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６）で平衡化した／
＼イドロキシアパタイトを充てんしたカラムに注入し１
本酵素を吸着させた０次いで、０．ＯＩＭから０．１Ｍ
までのリン酸カリウム緩衝液で傾斜溶出した。０．０５
Ｍ付近の活性画分を集めてｅｍｌ、、本酵素の精製標品
１．２ｓｇを収率５０％で得た。なお、木精製酵素標品
の力価は８００単位／ｍｇ蛋白質であった。また、本酵
素は前記性質を有していた。

実施例２ 実施例１と同様の条件でアセトバクター・アルトアセチ
ゲネスＭＨ−２４（ＦＥＲＮ　ＢＰ−４９１）を培養し
て湿重量約２ｇの菌体を得た。この菌体を実施例１と同
様にして破砕、超遠心分離し、膜画分を得た。膜画分を
０．０１Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６，０）に懸濁
した後、２０％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００を最終ｅ度が
１．５％になるように加え３時間攪拌した。

この液を再度ｅｅ、ｏｏｏｘ　ｇで６０分間超遠心分離
を行い本発明の酵素が可溶化された上清を得た。

０．６％Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００，２０ｍＭベンズア
ルデヒド。

０．１％セチルピリジニウムクロライドを含む０．０１
Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６）で平衡化したＤＥＡ
Ｅ−セファロースＣＬ−８Ｂを充てんしたカラムに、上
記の上清を注入し、本酵素を吸着せしめた。以下、実施
例１と同様な操作で本酵素を精製し、精製酵素標品Ｑ、
１５ｍｇを収率７％で得た。なお、木精製酵素標品の力
価は７５０屯位／ｍｇ蛋白質であった。また、本酵素は
前記性質を有していた。

〔発明の効果〕

本発明のアルデヒドデヒドロゲナーゼ複合体はｐＨ３か
らｐＨ１０までの広範囲の望域で活性を安定に保持でき
る点で従来のアルデヒドデヒドロゲナーゼより優れてお
り、臨床診断用試薬としてより優位に用いられる。また
、安定性の高いものが強く要求される酵素センサーにも
従来のアルデヒドデヒドロゲナーゼよりも優位に使用す
ることができる。さらに、細胞質膜より酵素を可溶化す
るにあたり、界面活性剤としてＴｒｉｔｏｎ　Ｘ−１０
０およびＮ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウムを併用
することにより、本酵素を効率良く、かつ安定化して可
溶化できる。この方法はＴｒｉｔｏｎ　Ｘ−１００を単
独で使用した場合よりも精製酵素標品の活性回収率が顕
著に高く、本酵素の精製においてきわめて優れた方法で
ある。

【図面の簡単な説明】

第１図は反応ＰＨと本発明酵素の相対活性との関係を示
すグラフであり、第２図は本発明酵素のｐＨ安定性を示
すグラフであり、第３図は反応温度と本発明酵素の相対
活性との関係を示すグラフであり、第４図は本発明酵素
の温度安定性を示すグラフであり、第５図は本発明酵素
の熱水抽出物の蛍光スペクトルを示す図である。 第１図 ｐＨ 第２図 ｐＨ 第３図 第４図 堪−ｒ／’Ｃノ 第５図 ２υ　　　　　Ｘυ　　　　　４ｏｏ５ｏｏ　　　　　
　αυｊｌ　長　　（ｎｍ）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、以下の性質を有する新規アルデヒドデヒドロゲナー
   ゼ複合体。 （１）ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動法により測
   定した分子量が約７５，０００および約２０，０００の
   蛋白質を含む酵素複合体であり、 （２）４，５−ジヒドロ−４，５−ジオキソ−１Ｈ−ピ
   ロロ［２，３−ｆ］キノリン−２，７，９−トリカルボ
   ン酸を含有し、 （３）炭素数２以上のアルデヒドを基質として酸化し、 （４）界面活性剤により細胞質膜より可溶化され、 （５）ｐＨ３からｐＨ１０までの範囲において４℃、１
   週間放置後も８０％以上の残存活性を示す。 ２、アセトバクター属に属し、以下の性質を有する新規
   アルデヒドデヒドロゲナーゼ複合体、（１）ＳＤＳ−ポ
   リアクリルアミド電気泳動法により測定した分子量が約
   ７５，０００および約２０，０００の蛋白質を含む酵素
   複合体であり、 （２）４，５−ジヒドロ−４，５−ジオキソ−１Ｈ−ピ
   ロロ［２，３−ｆ］キノリン−２，７，９−トリカルボ
   ン酸を含有し、 （３）炭素数２以上のアルデヒドを基質として酸化し、 （４）界面活性剤により細胞質膜より可溶化され、 （５）ｐＨ３からｐＨ１０までの範囲において４℃、１
   週間放置後も８０％以上の残存活性を示す、を生産する
   能力を有する微生物を培養し、培養物から該複合体を採
   取することを特徴とする新規アルテヒドデヒドロゲナー
   ゼ複合体の製造法。 ３、アセトバクター属に属する新規アルデヒドデヒドロ
   ゲナーゼ複合体生産菌がアセトバクター・アルトアセチ
   ゲネスＭＨ−２４（ＦＥＲＭＢＰ−４９１）である特許
   請求の範囲第２項記載の方法。 ４、培養物からの新規アルデヒドデヒドロゲナーゼ複合
   体の採取を、培養物から分離した菌体を破砕し、界面活
   性剤を加えて可溶化したのち通常の酵素精製手段を適用
   して行う特許請求の範囲第２項記載の方法。 ５、界面活性剤がトリトンＸ−１００およびＮ−ラウロ
   イルサルコシン酸ナトリウムの組合せである特許請求の
   範囲第４項記載の方法。