JPS63129985A - 遺伝子組み換えで造成された新規プロモ−タ−プロ−ブベクタ−および該ベクタ−を用いて得られる新規プロモ−タ− - Google Patents
遺伝子組み換えで造成された新規プロモ−タ−プロ−ブベクタ−および該ベクタ−を用いて得られる新規プロモ−タ−Info
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- JPS63129985A JPS63129985A JP61277379A JP27737986A JPS63129985A JP S63129985 A JPS63129985 A JP S63129985A JP 61277379 A JP61277379 A JP 61277379A JP 27737986 A JP27737986 A JP 27737986A JP S63129985 A JPS63129985 A JP S63129985A
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- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規プロモータープローブベクターおよび該ベ
クターを用いて得られるプロモーターに関する。
クターを用いて得られるプロモーターに関する。
さらに詳細には、エシェリキア・コリ（Ｅｓｃｈｅｒｉ
ｃｈｉａ Ｃｏ１１）起源のｙ−グルタミル−し−シス
ティン合成酵素（以下、Ｇ Ｓ Ｈ−Ｉと略称する）遺
伝子のサツカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
）属およびエシェリキア・コリでの発現を検出すること
により新規プロモーターのクローニングを行う方法およ
び得られるプロモーターに関する。
ｃｈｉａ Ｃｏ１１）起源のｙ−グルタミル−し−シス
ティン合成酵素（以下、Ｇ Ｓ Ｈ−Ｉと略称する）遺
伝子のサツカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
）属およびエシェリキア・コリでの発現を検出すること
により新規プロモーターのクローニングを行う方法およ
び得られるプロモーターに関する。
近年、遺伝子組み換えに関する研究、技術が発達し、そ
の産業への利用が行われている。その際、外来遺伝子に
コードされたポリペプチドの宿主内での生合成を如何に
効率よく進行させるかは重要な研究開発ａ＊ｇの一つで
ある。その；ｉｎに対し強情性プロモーターの利用は外
来遺伝子を効率よく発現させるために重要な手段であり
、従来より強情性プロモーターを得るために種々の工夫
がなされている。大腸菌におけるプロモータープローブ
ベクターＰ Ｍ Ｃ１４０３（Ｃａｓａｄａｂａｎ、
Ｍ、 Ｊ、 ｅｔ ａｎ 、、 Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌ、 。
の産業への利用が行われている。その際、外来遺伝子に
コードされたポリペプチドの宿主内での生合成を如何に
効率よく進行させるかは重要な研究開発ａ＊ｇの一つで
ある。その；ｉｎに対し強情性プロモーターの利用は外
来遺伝子を効率よく発現させるために重要な手段であり
、従来より強情性プロモーターを得るために種々の工夫
がなされている。大腸菌におけるプロモータープローブ
ベクターＰ Ｍ Ｃ１４０３（Ｃａｓａｄａｂａｎ、
Ｍ、 Ｊ、 ｅｔ ａｎ 、、 Ｊ、Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌ、 。
１４３、９７］（１９８０）］は開開発用されているも
のの一つである。酵母においてもＰ Ｍ Ｃ１５１８（
Ｃａｑａｄａｂａｎ、Ｍ、Ｊ、 ｅｔ ａＱ 、、Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、 １００．
２９３ （１９８３））が開発利用されているが、この
場合クローニングされたプロモーター断片と指標酵素で
あるβ−ガラクトシダーゼ遺伝子が融合してしまい、結
果として発現する融合指標酵素の強弱によりプロモータ
ーのクローニングを行うことの欠点を有している。
のの一つである。酵母においてもＰ Ｍ Ｃ１５１８（
Ｃａｑａｄａｂａｎ、Ｍ、Ｊ、 ｅｔ ａＱ 、、Ｍ
ｅｔｈｏｄｓ ｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、 １００．
２９３ （１９８３））が開発利用されているが、この
場合クローニングされたプロモーター断片と指標酵素で
あるβ−ガラクトシダーゼ遺伝子が融合してしまい、結
果として発現する融合指標酵素の強弱によりプロモータ
ーのクローニングを行うことの欠点を有している。
そのために、場合によっては強力な活性をもつプロモー
ターが検索されずに終ってしまうこともあった。この欠
点を補うためいろいろな対策が検討されているが、以下
に示すようなβ−ガラクトシダーゼ以外の指標酵素を用
いる。新たなプロモータープローブ系を開発して、より
広い観点からプロモーターを検索することも考慮されて
いる。
ターが検索されずに終ってしまうこともあった。この欠
点を補うためいろいろな対策が検討されているが、以下
に示すようなβ−ガラクトシダーゼ以外の指標酵素を用
いる。新たなプロモータープローブ系を開発して、より
広い観点からプロモーターを検索することも考慮されて
いる。
かかる現状に鑑み本発明者らは、鋭意、研究の結果、従
来のクローニング系では容易に得られなかった種類のプ
ロモーターのクローニングが可能となるよう、新たに指
標酵素としてＧＳＨ−Ｉを用いるクローニング系を開発
し本発明を完成するに至った。以下に本発明のベクター
の作製法、ベクターを使用したプロモーターのクローニ
ングおよび得られたプロモーターの有用性について実施
例をあげて詳細に説明する。
来のクローニング系では容易に得られなかった種類のプ
ロモーターのクローニングが可能となるよう、新たに指
標酵素としてＧＳＨ−Ｉを用いるクローニング系を開発
し本発明を完成するに至った。以下に本発明のベクター
の作製法、ベクターを使用したプロモーターのクローニ
ングおよび得られたプロモーターの有用性について実施
例をあげて詳細に説明する。
なお、実施例１において、エシェリキア・コリ起源のＧ
Ｓ Ｈ−１遺伝子をＹＥｐタイプのプラスミドに組み
込んでいるが、もちろんＹＲｐ。
Ｓ Ｈ−１遺伝子をＹＥｐタイプのプラスミドに組み
込んでいるが、もちろんＹＲｐ。
ＹＣｐ、ＹＩｐタイプなどのプラスミドベクターに組み
込んで使用することもできる。また、ＧＳＨ−１遺伝子
の起源としては特にエシェリキア・コリに限るものでは
なく、さらには合成リンターも例示にこだわるものでな
い。実施例２において、酵母染色体をサツカロミセス・
セレビシェ（Ｓａｅｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｃｅｒｅｖ
ｉｓｉａｅ） Ｙ Ｎ Ｎ ２７より調製しているが、
他のサツカロミセス属、あるいはキャンディダ（Ｃａｎ
ｄｉｄａ）属ハンゼヌラ（Ｈａｍｓｅｎｕｌａ）属など
の他の酵母起源の染色体を用いても差し支えない。さら
に、実施例３で有用物質製造の例としてグルタチオンの
製造法を述べているが、クローニングしたプロモーター
の下流にＧ Ｓ Ｈ−１以外のアミラーゼ、プロテアー
ゼあるいはインターフェロン等の生理活性物質の遺伝子
を接続し、それらの生産を行うことも可能なことは言う
までもない。
込んで使用することもできる。また、ＧＳＨ−１遺伝子
の起源としては特にエシェリキア・コリに限るものでは
なく、さらには合成リンターも例示にこだわるものでな
い。実施例２において、酵母染色体をサツカロミセス・
セレビシェ（Ｓａｅｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ Ｃｅｒｅｖ
ｉｓｉａｅ） Ｙ Ｎ Ｎ ２７より調製しているが、
他のサツカロミセス属、あるいはキャンディダ（Ｃａｎ
ｄｉｄａ）属ハンゼヌラ（Ｈａｍｓｅｎｕｌａ）属など
の他の酵母起源の染色体を用いても差し支えない。さら
に、実施例３で有用物質製造の例としてグルタチオンの
製造法を述べているが、クローニングしたプロモーター
の下流にＧ Ｓ Ｈ−１以外のアミラーゼ、プロテアー
ゼあるいはインターフェロン等の生理活性物質の遺伝子
を接続し、それらの生産を行うことも可能なことは言う
までもない。
実施例１
プロモータープローブベクターの作製手順を以下に示す
。
。
以下の説明中組み換えＤＮＡの基本動作は、その分野に
おける常法１例えばモレキュラークローニング（Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ Ｌａｂｏｒａ−ｔ
ｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａ−ｔｏｒｙ、 １９８
２）記載の方法に準拠した。
おける常法１例えばモレキュラークローニング（Ｍｏｌ
ｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ、Ａ Ｌａｂｏｒａ−ｔ
ｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ
Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａ−ｔｏｒｙ、 １９８
２）記載の方法に準拠した。
まずプラスミドｐＧＳＲ−１００（にＪａｔａｎａｂｅ
。
。
ｅｔ ａｌ、 、 Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄ Ｒｅ５
ｅａｒｃｈ Ｖｏｌ、 １４゜４３９３ （１９８６）
］を制限酵素５ｃａｌで切断、さらにＨｐａ Ｉで部
分切断し、Ｇ Ｓ Ｈ−１遺伝子を完全に含むＤＮＡ断
片を得た後１両端にＢａ■ＨＩリンカ−を付与した。次
にこのＤＮＡ断片をｐＭＣ−１５８５からβ−ガラクト
シダーゼ遺伝子を除いたプラスミドｐ Ｇ Ｓ Ｒ−１
のＢａｍＨＩ切断部位に挿入しＰＧＳＲ−１５０を作製
した。このＰＧＳＲ−１５０上のＧＳＨ−１遺伝子下流
側のＢａｗＨＩ切断部位をＴ４ポリメラーゼを用いてフ
ィルインにより除いたプラスミドｐＧＳＲ−１５１の上
流側のＢａｍＨＩ部位に、酵母中でプロモーター活性を
発現するＤＮＡ断片（Ｐ−８）を挿入した。さらに酵母
中での強いＧＳＩ−Ｉ−Ｉ活性の発現のために、ｐＧＳ
Ｒ−１５１８上のＰ−８プロモ一ター断片上流側のＢａ
ｍＨＩ部位をフィルインにより除いたＰＧＳＲ−２５１
８を作製し、残った１ケ所のＢａｍＨＩ切断部位よりエ
キソヌクレアーゼＢａ１３１による部分分解を、３０℃
、６０分間行い切断末端にＸｈｏｌリンカ−を付与した
。次いでＴ４リガーゼで自己閉環させて、酵母中でＧＳ
Ｈ−Ｉ活性が発現するプラスミドＰＧＳＲ−２５１８−
４を作製した。第１図にこの作成手順を示す。
ｅａｒｃｈ Ｖｏｌ、 １４゜４３９３ （１９８６）
］を制限酵素５ｃａｌで切断、さらにＨｐａ Ｉで部
分切断し、Ｇ Ｓ Ｈ−１遺伝子を完全に含むＤＮＡ断
片を得た後１両端にＢａ■ＨＩリンカ−を付与した。次
にこのＤＮＡ断片をｐＭＣ−１５８５からβ−ガラクト
シダーゼ遺伝子を除いたプラスミドｐ Ｇ Ｓ Ｒ−１
のＢａｍＨＩ切断部位に挿入しＰＧＳＲ−１５０を作製
した。このＰＧＳＲ−１５０上のＧＳＨ−１遺伝子下流
側のＢａｗＨＩ切断部位をＴ４ポリメラーゼを用いてフ
ィルインにより除いたプラスミドｐＧＳＲ−１５１の上
流側のＢａｍＨＩ部位に、酵母中でプロモーター活性を
発現するＤＮＡ断片（Ｐ−８）を挿入した。さらに酵母
中での強いＧＳＩ−Ｉ−Ｉ活性の発現のために、ｐＧＳ
Ｒ−１５１８上のＰ−８プロモ一ター断片上流側のＢａ
ｍＨＩ部位をフィルインにより除いたＰＧＳＲ−２５１
８を作製し、残った１ケ所のＢａｍＨＩ切断部位よりエ
キソヌクレアーゼＢａ１３１による部分分解を、３０℃
、６０分間行い切断末端にＸｈｏｌリンカ−を付与した
。次いでＴ４リガーゼで自己閉環させて、酵母中でＧＳ
Ｈ−Ｉ活性が発現するプラスミドＰＧＳＲ−２５１８−
４を作製した。第１図にこの作成手順を示す。
このｐ ＧＳ Ｒ−２５１８−４から酵母中でプロモー
ター活性を発現するＰ−８部分を除去するために、ｐＧ
ＳＲ−２５１８−４のＰ−８とＧ Ｓ Ｈ−Ｉ遺伝子接
続部分を含むＳａｃＩ−ＢｇｌＩＩ断片をｐＧＳＲ−１
５１８の同じくＳａｃ Ｉ−Ｂｇｌ Ｈ切断部位に挿入
し、ＰＧＳＲ−１５１８−４を作製した。以上をまとめ
て第１図に示す。この後、ｐＧＳＲ−１５１８−４から
酵母中でプロモーター活性を持つＰ−８部分を除去する
ため、および新たなりローニング部位としてＸｈｏ Ｉ
切断部位を付与するため、ｐＧＳＲ−１５１８−４をま
ずＢａａＨＩで切断した。その切断末端をＤＮＡポリメ
ラーゼ■クレノウ断片により平滑化、Ｔ４ＤＮＡリガー
ゼによりＸｈｏＩリンカ−ｄ（ｐＣ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−
Ａ−Ｇ−Ｇ）を平滑末端に付与、つづいてＸｈｏＩで切
断後、Ｔ４’ ＤＮＡリガーゼで自己閉環させ、目的
とした新規プロモータープローブベクターｐＰＧ−１０
０を作製した。第２図にその作製手順を図示する。
ター活性を発現するＰ−８部分を除去するために、ｐＧ
ＳＲ−２５１８−４のＰ−８とＧ Ｓ Ｈ−Ｉ遺伝子接
続部分を含むＳａｃＩ−ＢｇｌＩＩ断片をｐＧＳＲ−１
５１８の同じくＳａｃ Ｉ−Ｂｇｌ Ｈ切断部位に挿入
し、ＰＧＳＲ−１５１８−４を作製した。以上をまとめ
て第１図に示す。この後、ｐＧＳＲ−１５１８−４から
酵母中でプロモーター活性を持つＰ−８部分を除去する
ため、および新たなりローニング部位としてＸｈｏ Ｉ
切断部位を付与するため、ｐＧＳＲ−１５１８−４をま
ずＢａａＨＩで切断した。その切断末端をＤＮＡポリメ
ラーゼ■クレノウ断片により平滑化、Ｔ４ＤＮＡリガー
ゼによりＸｈｏＩリンカ−ｄ（ｐＣ−Ｃ−Ｔ−Ｃ−Ｇ−
Ａ−Ｇ−Ｇ）を平滑末端に付与、つづいてＸｈｏＩで切
断後、Ｔ４’ ＤＮＡリガーゼで自己閉環させ、目的
とした新規プロモータープローブベクターｐＰＧ−１０
０を作製した。第２図にその作製手順を図示する。
実施例２
酵母染色体からのプロモーターのクローニングはまずサ
ツカロミセス属酵母ＹＮＮ２７の染色体１） Ｎ Ａを
通常の方法、例えばクライヤーらの方法（Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ ｉｎ Ｃｅ１ｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ。
ツカロミセス属酵母ＹＮＮ２７の染色体１） Ｎ Ａを
通常の方法、例えばクライヤーらの方法（Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ ｉｎ Ｃｅ１ｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ。
Ｖｏｌ、 １２． ｐ３４． Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７５） ）で抽出し
、次いで適当な制限酵母、例えばＸｈｏＩで切断した後
、その断片を実施例１で作製したプロモータープローブ
ベクターのＸｈｏＩ切断部位へＴ４ ＤＮＡリガーゼ
を用いて挿入した。このプラスミドを用い、サツカロミ
セス属酵母ＹＮＮ２７の形質転換はネイチャ（Ｎａｔｕ
ｒｅ、 ２７５，１０４（１，９７８））記載の方法に
より行った６得られた形質転換株からのＧＳＨ−Ｉ活性
強発現株の選択は、まず形質転換株が生育しているプレ
ートに２％ニトロプルジッド（５％トリクロル酢酸含有
）水溶液を約１０ｍＱ加え室温にて３分間静置後、ニト
ロプルジッド溶液を捨て、次に濃アンモニヤ水を３〜５
薦Ωシヤーレに注いで赤く発色する株を選んだ。これら
の株の中の２株からプラスミドを抽出し、プロモーター
プローブベクターに挿入されていた酵母由来ＤＮＡ断片
の長さをアガロースゲル電気泳動で調べた結果、それぞ
れ２．５Ｋｂρと１．９Ｋｂｐであった。
ｅｓｓ、 Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（１９７５） ）で抽出し
、次いで適当な制限酵母、例えばＸｈｏＩで切断した後
、その断片を実施例１で作製したプロモータープローブ
ベクターのＸｈｏＩ切断部位へＴ４ ＤＮＡリガーゼ
を用いて挿入した。このプラスミドを用い、サツカロミ
セス属酵母ＹＮＮ２７の形質転換はネイチャ（Ｎａｔｕ
ｒｅ、 ２７５，１０４（１，９７８））記載の方法に
より行った６得られた形質転換株からのＧＳＨ−Ｉ活性
強発現株の選択は、まず形質転換株が生育しているプレ
ートに２％ニトロプルジッド（５％トリクロル酢酸含有
）水溶液を約１０ｍＱ加え室温にて３分間静置後、ニト
ロプルジッド溶液を捨て、次に濃アンモニヤ水を３〜５
薦Ωシヤーレに注いで赤く発色する株を選んだ。これら
の株の中の２株からプラスミドを抽出し、プロモーター
プローブベクターに挿入されていた酵母由来ＤＮＡ断片
の長さをアガロースゲル電気泳動で調べた結果、それぞ
れ２．５Ｋｂρと１．９Ｋｂｐであった。
実施例３
実施例２で選択した２、５Ｋｂｐの酵母由来の染色体を
挿入したプラスミド（以下、ｐＰＧ−２００と略称する
）を保持する形質転換株を１００■ＱのＳＤ培地グルコ
ース２％、イーストナイトロジェンベース０．６７％、
アデニン硫酸 ・塩０．００２％、トリプトファン０．
００２％）に１白金耳葉桜種、３０℃２４時間振どう培
養後、遠心分離により集菌、ガラスピーズで菌体を粉砕
して抽出液を得た。この抽出液を粗酵素液としてジャー
ナルオブジェネラルマイクロバイオロジー（Ｊ 、Ｇｅ
ｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、１２８゜１０
４７（１９８２） ）記載の方法でＧ Ｓ Ｈ−Ｉ活性
を測定した結果、コントロールであるＹＥＰ−２４を保
持するＹＮＮ２７の活性が１０ｎ ｍｏｌ／ｍｇρｒｏ
ｔｅｉｎ／ｈｒ以下であるのに対し、本形質転換株の場
合は１３０ｎ ｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ／ｈｒの
活性を示した。さらに、この抽出液中のグルタチオン含
量をアナリチカル・バイオケミストリー（Ａｎａｌ、Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、＊ ２７，５０２（１９６９））の方法
で測定した。結果はＰＰＧ−２００を保持するＹＮＮ２
７株は０．９％（ｗ／ｗ）とＹＥｐ−２４を保持するコ
ントロールのＹＮＮ２７の０．５％（％ｉ／ｗ）に比ベ
グルタチオン含址が約２倍に増大していた。
挿入したプラスミド（以下、ｐＰＧ−２００と略称する
）を保持する形質転換株を１００■ＱのＳＤ培地グルコ
ース２％、イーストナイトロジェンベース０．６７％、
アデニン硫酸 ・塩０．００２％、トリプトファン０．
００２％）に１白金耳葉桜種、３０℃２４時間振どう培
養後、遠心分離により集菌、ガラスピーズで菌体を粉砕
して抽出液を得た。この抽出液を粗酵素液としてジャー
ナルオブジェネラルマイクロバイオロジー（Ｊ 、Ｇｅ
ｎｅｒａｌ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、１２８゜１０
４７（１９８２） ）記載の方法でＧ Ｓ Ｈ−Ｉ活性
を測定した結果、コントロールであるＹＥＰ−２４を保
持するＹＮＮ２７の活性が１０ｎ ｍｏｌ／ｍｇρｒｏ
ｔｅｉｎ／ｈｒ以下であるのに対し、本形質転換株の場
合は１３０ｎ ｍｏｌ／ｍｇ ｐｒｏｔｅｉｎ／ｈｒの
活性を示した。さらに、この抽出液中のグルタチオン含
量をアナリチカル・バイオケミストリー（Ａｎａｌ、Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、＊ ２７，５０２（１９６９））の方法
で測定した。結果はＰＰＧ−２００を保持するＹＮＮ２
７株は０．９％（ｗ／ｗ）とＹＥｐ−２４を保持するコ
ントロールのＹＮＮ２７の０．５％（％ｉ／ｗ）に比ベ
グルタチオン含址が約２倍に増大していた。
第１図はプラスミドｐＧＳＲ−１５１８−４の作製手順
を示す説明図、第２図はプロモータープローブベクター
ｐＰＧ−１００の作製手順を示す説明図である。 第１図 第２図 手んＶ宇市正書 昭和６１年１２月２４日 特許庁長官 黒 １） 明 雄 殿 １、 事件の表示 昭和６１年特許願第２７７３７９号 ２、 発明の名称 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 → べ 東京都千代田区麹町４丁目５番地（〒１０２）言 ６、補正の内容 （１）明細書第２頁末行ｒ １５１８Ｊの記載をｒ１５
８５Ｊと補正する。 （２） 同書第４頁第１２行「リンター」の記載を「
リンカ−」と補正する。 （３） 同書第５頁第１２〜１４行「まずプラスミド
・・・（中略）・・・制限酵素」の記載を ［まず、ｐ Ｇ Ｓ １００ ［Ｋ、 ｌ１ａｔａｎａ
ｂｅ、 ｅｔ ａｌ、 。 Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、Ｖｏｌ
、１４，４３９３（１９８６）］を制限酵素Ｐｓｔ Ｉ
で切断し、ＧＳＩ（−１遺伝子を含むＤＮＡ断片をｐＢ
Ｒ３２７（Ｘ、 ５ｏｂｅｒｏｎ ｅｔ ａｌ、 。 Ｇｅｎｅ、Ｖｏｌ、９，２８７（１９８０）］のＰｓｔ
Ｉ部位に挿入してプラスミドｐＧｓＲ１００を作製し
た。次に、このｐＧＳＲ−１００を制限酵素」と補正す
る。 （４） 同書同頁下から３行「次に」の記載を「次い
で、」と補正する。 （５） 同書第７頁第２行「ρＧＳＲ−２５１８−４
のｐ−８」の記載を「まずｐＧＳＲ−２５１８−４のｐ
−８の一部」と補正する。 （６） 同書同頁第９行「除去するため、および新た
な」の記載を「除去し、同時に新たな」と補正する。 （７）同書第９頁第９行「グルコース２％」の記載を「
（グルコース２％」と補正する。
を示す説明図、第２図はプロモータープローブベクター
ｐＰＧ−１００の作製手順を示す説明図である。 第１図 第２図 手んＶ宇市正書 昭和６１年１２月２４日 特許庁長官 黒 １） 明 雄 殿 １、 事件の表示 昭和６１年特許願第２７７３７９号 ２、 発明の名称 ３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 → べ 東京都千代田区麹町４丁目５番地（〒１０２）言 ６、補正の内容 （１）明細書第２頁末行ｒ １５１８Ｊの記載をｒ１５
８５Ｊと補正する。 （２） 同書第４頁第１２行「リンター」の記載を「
リンカ−」と補正する。 （３） 同書第５頁第１２〜１４行「まずプラスミド
・・・（中略）・・・制限酵素」の記載を ［まず、ｐ Ｇ Ｓ １００ ［Ｋ、 ｌ１ａｔａｎａ
ｂｅ、 ｅｔ ａｌ、 。 Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃ１ｄ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、Ｖｏｌ
、１４，４３９３（１９８６）］を制限酵素Ｐｓｔ Ｉ
で切断し、ＧＳＩ（−１遺伝子を含むＤＮＡ断片をｐＢ
Ｒ３２７（Ｘ、 ５ｏｂｅｒｏｎ ｅｔ ａｌ、 。 Ｇｅｎｅ、Ｖｏｌ、９，２８７（１９８０）］のＰｓｔ
Ｉ部位に挿入してプラスミドｐＧｓＲ１００を作製し
た。次に、このｐＧＳＲ−１００を制限酵素」と補正す
る。 （４） 同書同頁下から３行「次に」の記載を「次い
で、」と補正する。 （５） 同書第７頁第２行「ρＧＳＲ−２５１８−４
のｐ−８」の記載を「まずｐＧＳＲ−２５１８−４のｐ
−８の一部」と補正する。 （６） 同書同頁第９行「除去するため、および新た
な」の記載を「除去し、同時に新たな」と補正する。 （７）同書第９頁第９行「グルコース２％」の記載を「
（グルコース２％」と補正する。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、グルタチオン合成に関与する酵素、γ−グルタミル
−Ｌ−システイン合成酵素の遺伝子を利用したプロモー
タープローブベクター。 ２、プロモーター部分を欠失させたν−グルタミル−Ｌ
−システイン合成酵素遺伝子を、サッカロミセス（Ｓａ
ｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属酵母および大腸菌において
複製可能なベクターに組み込んだプロモータープローブ
ベクター。 ３、特許請求の範囲第１項または第２項記載のプロモー
タープローブベクターを用いて得られるプロモーター。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61277379A JPS63129985A (ja) | 1986-11-19 | 1986-11-19 | 遺伝子組み換えで造成された新規プロモ−タ−プロ−ブベクタ−および該ベクタ−を用いて得られる新規プロモ−タ− |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP61277379A JPS63129985A (ja) | 1986-11-19 | 1986-11-19 | 遺伝子組み換えで造成された新規プロモ−タ−プロ−ブベクタ−および該ベクタ−を用いて得られる新規プロモ−タ− |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63129985A true JPS63129985A (ja) | 1988-06-02 |
Family
ID=17582705
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61277379A Pending JPS63129985A (ja) | 1986-11-19 | 1986-11-19 | 遺伝子組み換えで造成された新規プロモ−タ−プロ−ブベクタ−および該ベクタ−を用いて得られる新規プロモ−タ− |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63129985A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6374980B1 (en) | 1999-02-24 | 2002-04-23 | Kabushiki Kaisha Nippon Conclux | Coin sorting method and device |
| WO2010116833A1 (en) | 2009-04-08 | 2010-10-14 | Ajinomoto Co., Inc. | Novel yeast having increased content of sulfur-containing compound, screening method thereof, and culturing method thereof |
-
1986
- 1986-11-19 JP JP61277379A patent/JPS63129985A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6374980B1 (en) | 1999-02-24 | 2002-04-23 | Kabushiki Kaisha Nippon Conclux | Coin sorting method and device |
| WO2010116833A1 (en) | 2009-04-08 | 2010-10-14 | Ajinomoto Co., Inc. | Novel yeast having increased content of sulfur-containing compound, screening method thereof, and culturing method thereof |
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