JPS6314717A - リポソ−ム製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は新しい形体のリポソーム製剤に関し、さらに詳
しくは、粒子内及び／又は膜中に磁性酸化鉄と化学療法
剤とを含有させて成るリポソーム製剤に関し、かかる製
剤は、外部より磁場をコントロールすることで化学療法
剤を患部へ選択的に移送し、局所における化学療法剤の
濃度を高く保たせるのに有効である。

〔従来技術〕

一般に、各種疾病等に対して用いられる化学療法剤は患
部と正常部位との間の選択性を有さず、激しい副作用の
発現が避けられない。

また、これを解決するためのモノクローナル抗体を用い
たターゲツティング療法が考案されている。（特開昭５
８−１３４０３２号公報参照）。

しかしながら、モノクローナル抗体は同一種の抗原にし
か使用できず、それぞれの抗原に対してそれぞれ異なる
モノクローナル抗体を用意しなければならないし、モノ
クローナル抗体の作製は非常に手間と時間がかかる。ま
た、ヒトに対して安全性の高いヒト−ヒトハイブリドー
マによるモノクローナル抗体の作製も現在の技術では非
常に難しいものとされている。

〔発明が解決しようとする問題点〕

前記した事情に鑑み、本発明者らは、化学療法剤を患部
に選択的に発揮させるべく鋭意研究を重ねた結果、磁性
酸化鉄と化学療法剤とが粒子内および／または膜中に含
有されるリポソーム製剤が前記目的を達成することを見
い出し、本発明を完成したものである。

〔問題点を解決するための手段〕

即ち本発明は、粒子内及び／または膜中に磁性酸化鉄と
化学療法剤とを含有さゼて成るリポソーム製剤である。

かかる製剤は、外部より磁場をコントロールすることで
化学療法剤を患部へ選択的に移送し、局所における化学
療法剤の濃度を高く保つことが可能である。

本発明でいう化学療法剤としては例えば、制ガン剤とし
てシクロホスファミＩ゛、ブスルファン、アクチノマイ
シンＤ１ダウノマイシン、アドリアマイシン、マイトマ
イシンＣ１ブレオマイシン、７オカルチノスタチン、ビ
ンクリスチン等、酵素としてウレアーゼ、アスパラキナ
ーゼ、カタラーゼ、アミログルコシダーゼ、カルボニソ
クアンヒＩラーゼ、ノイラミニダーゼ等、補酵素として
コエンザイムＡ１ビタミンＢ１２、ユビキノン、ビオチ
ン等、酵素阻害剤としてクロペプチン、チオールスタチ
ンＤ１ぺブスクチンへ０１０イペブチン、キモスフチン
、ロイペプチン、ノーデオキシリシリマイシン等、抗炎
消削としてステロイド系消炎剤としてはデキサメタシン
フォスフェート、酢酸デキサメタシン、コルチソン等、
非ステロイ１°系消炎剤としてメフェナム酸、インドメ
タシン、メリルキセーＩ等、免疫抑制剤としてグリココ
ルチコイド、６−メルカプトプリン、イムラン、シクロ
フォスフアミ１゛、アドリアマイシン等があげられる。

リポソームは複合脂質よりなるラメラ相により形成され
た小胞体であり、水溶性物質及び脂溶性物質のいずれで
も含有（包埋）することができる。

すなわち、水溶性物質はリポソーム内の水相中に、脂溶
性物質はリポソームを形成するラメラ相中に含有される
。その他、これらの物質はラメラ相表面に化学的および
物理的に吸着されることもあり、本発明では上記３通り
の場合を併せ「含有−１と称する。

リポソームの調整法としてはポルチクスイング法（Ａ、
Ｄ、Ｂａｎｇｈａｍ、Ｊ、Ｍｏ１．Ｂｉｏｌ、、１３，
２３８　（１９６５）　）、ソニケーション法（Ｃ，Ｉ
ｌｕａｎｇ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　、８．３４４　（＋
９６９））、プレヘシクル法（Ｉｌ、Ｔｒａｕｂｌｅ、
Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、Ｒｅｓ、Ｐｒｏｇ、Ｂｕｌｌ、、９
，２７３．　（１９７１）　）　、エタノール注入法（
Ｓ、Ｂａｔｚｒｉ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ
、Ａｃｔａ＋　２９８＋　１０１５（１９７３）　）　
、フレンチプレス押出法（Ｙ、Ｂａｒｅｎｈｏｌｚ、Ｆ
ＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、、９９，２１０　　（１９７９）　
）　、コール酸除去法（Ｔ、Ｋａｇａｗａ、Ｊ、Ｂｉｏ
ｌ、Ｃｈｅｍ、、２４６．５４７７　（１９７１）　）
、トリトンＸ−１００ハツチ法（Ｗ、Ｊ、Ｇｅｒｒｉ　
ｔｓｅｎ、　Ｆ！ｕｒ。

Ｊ、Ｂｊｏｃｈｅｍ、、８５，２５５　　（１９７８）
　）　、Ｃａ２融合法（Ｏ９Ｐａｐａｇａｄｊｏｐｏｕ
ｌｏｓ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、八ｃｔａ、
３９４，４８３（１９７５）　）　、エーテル注入法（
Ｄ　、　Ｄｅａｍｅｒ　、　Ｂ　ｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏ
ｐｈｙｓ、＾ｅｔａ、４４３，６２９　　（１９７６）
　）　、アニーリング法（Ｒ，Ｌａｗａｃｚｅｃｋ、Ｂ
ｉｏｃｈｅｍ、旧ｏｐｈｙｓ、Ａｃｔａ、４４３，３１
３　（１９７６＞　）　、凍結融解融合法（Ｍ、Ｋａｓ
ａｈａｒａ、Ｊ、Ｂｉｏｌ、ｃｈｅｍ、、２５２．７３
８４　　（１９７７）　　）　　、　Ｗ／　Ｏ／　Ｗエ
マルジョン法（Ｓ、Ｍａｔｓｕｍｏｔｏ、Ｊ、Ｇｏｌｉ
ｏｉｄ、ＩｎｔｅｒｆａｃｅＳｃｉ、、６２，１４９　
　（１９７７）　）　、逆相蒸発法（Ｆ、５ｚｏｋａ。

Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、八ｃａｄ、Ｓｃｉ’、ｌｌ５Ａ、
７５．４＋９４　（１９７Ｂ）　）なと゛多くの方法が
知られているが、本発明による磁性酸化鉄および化学療
法剤の含有にはいずれの調整法を用いてもよく、これら
に限定されるものではない。

本発明でいう複合脂質としては、例えばレシチン、ケフ
ァリン、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、
プラスマロゲン等の天然リン脂質、シミリストイルレシ
チン、ジパルミトイルレシチン、ジステアロイルレシチ
ン、ジセチルホスフェ−１・、ステアリルアミン等の合
成リン脂質、ジガラクトシルジグリセリド、６−スルホ
キツボシルジグリセリド、ガラクトシルセラミド、グル
コシルセラミド等の天然糖脂質、グルコシルジパルミト
イルグリセロール、セルビオシルジパルミトイルグリセ
ロール、マルトシルシバルミＦイル糖の合成糖脂質、又
は天然由来のレシチンの不飽和炭素鎖を水素により飽和
とした水添レシチン糖が挙げられる。これらのなかから
任意の１種又は２種以−にが選ばれて用いられる。

リポソームの分散安定性を高めるために複合脂質ラメラ
相に電荷を持たせることが望まれる。この場合、負電荷
を持たせるときはホスファチジル七リン、ジセチルホス
フェー１などの負電荷を持つ脂質を、正電荷を持たせる
ときはステアリルアミンなどの正電荷を持つ脂質をもち
いればよい。

本発明のりソポーム製剤の安定化のために、さらにステ
ロールを配合することができる。かかるステロールとし
ては例えばコレステロール、β−シトステロール、スチ
グマステロール、カンペステロールまたは植物材料から
抽出されるステロールの混合物が挙げられる。

本発明に係るリポソーム製剤中の配合成分の配合量とし
て、磁性酸化鉄および化学療法剤ともに特に限定はない
が、好ましくはリポソームを形成し得る複合リン脂質１
に対し、両者ともにそれぞれｏ、ｏｏｔ〜０．７（重量
比）の配合比である。これを超える配合比では、含有し
きれない配合成分が分散媒中に存在することになる。

また、磁性酸化鉄の形状、大きさについても特に限定は
ないが、好ましくは１００人〜０．１μｍのものが良い
。これを超える大きさのものは、本発明に係るリポソー
ム製剤そのものの安定性が悪くなったり、　１００人よ
り小さくなると、磁場への応答が弱くなったり、リポソ
ーム製剤の向磁力も弱くなるので好ましくない。

かかる磁性酸化鉄としては以下のようなものが特に好ま
しい。即ち、一般に走磁性微生物と呼ばれるもの、たと
えばＳｐｒｉｌｌｕｍ　ｖｏｌｕｔａｎｓ　ＡＴＣＣ１
９５５４を常法に従って培養したのち菌体よりマグネト
リーム（ｍａｇｎｅｔｏｓｏｍｅ　）を分離する・この
ものをさらに常法によりＩＩ製して用いてもよい。用い
る走磁性微生物は特に限定はなく、桿菌、球菌、らせん
菌等、細胞内にマグネトリームをもつものならいずれで
もよい。マグネトリームをそのまま本発明に係るリポソ
ーム製剤に含有させてももちろんよい。

本発明のリポソーム製剤はリポソームの形態を破壊しな
い成分であれば、通常の医薬品、化粧品成分をも配合で
きる。

〔発明の効果〕

化学療法剤および磁性酸化鉄を含有してなる本発明のリ
ポソーム製剤は、外部より磁場コントロールすることに
より、患部に集めることができ、化学療法剤を特異的に
集中的に作用させることが可能である。

〔実施例〕

実施例１ 磁性酸化鉄は次のようにして得た。すなわち、Ｓｐｉｒ
ｉｌｌｕｍ　ｖｏｌｕｔａｎｓ　ＡＴＴＣ１９５５４を
、３Ｏ７！ジャーファーメンタ−にて以下の組成の培地
にて培養した。

ＭｇＳＯ４・７１ｆ２０．　　　　２０　　ｇＭｎＳＯ
４・Ｎ２０　　　　　４０　　ｇＰｅＣＩ３・６　Ｎ２
０　　　　　１８０　　ｍｇ（ＮＨ４）　２　ＳＯ４２
０ｇ Ｓｕｃｃｉｎｉｃ　ａｃｉｄ　　　　　　　３３．６ｇ
Ｐｅｐｔｏｎｅ　　　　　　　　　　１００　　ｇ水　
　　　　　　　　　　　　　　　　２０　　β培養は、
培養温度３Ｏ℃、５％の０２ガスを含むＮ２ガスを吹き
こみながら５日間培養した。得られた培養液より菌体を
集菌し、　０．２％リゾチーム溶液で３７℃、１時間反
応させ細胞壁を溶かし、さらに５　Ｍ　ＮａＯＨで１２
時間処理し磁気微粒子を単離した。

次に、５０１ｐナス型フラスコ中でジパルミトイルレシ
チン０．１ｇおよびセチルホスフェート４■をクロロホ
ルム３　ｍｅに熔解した後、アクチノマイシンＤ（以下
、ＡＤという）５００μｇを加えロータリーエバポレー
ターを用いてクロロホルムを留去し、フラスコ底壁に複
合脂質膜を得た。これを真空デシケータ中で２時間乾燥
しクロロホルムを完全に留去した。これに磁性酸化鉄の
微粒子０．１重量％水溶液１０ｍＱを加えて室温で１０
分間攪拌した後、ポルテックスミキサーにより激しく振
とうすることによりリポソームを形成させ、リポソーム
分散液とした。

次に未含有のアクチノマイシンＤおよび磁性酸化鉄の微
粒子を除くため濃度勾配（０〜２０％）デキストランを
用いてリポソームを単離した。これを適度に希釈しリポ
ソーム製剤（Ｆｅ−ＬｉＰ　−ＡＤ）を得た。

〔試験例１〕 Ｃ３Ｈ／　ｌｌｅマウス（雄、４週令）腹腔に５Ｘ１０
”個のＥｈｒｌｉｃｈ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ腫瘍細胞を
移植した。２４時間後、実施例１に係るリポソームを５
０ＰＩ！静注投与し、マウスの腹腔部周辺に本発明に係
るリポソームが集まるよう小型の磁石をテープでマウス
腹部に貼りつけ、制ガン効果を調べた。

比較のために、ＡＤをそのまま、磁性酸化鉄のみを含有
したリポソーム（Ｆｅ−Ｌｉｐ　）　、Ａ　Ｄのみを含
有した（Ｌｉｐ−ＡＤ）をそれぞれ静注投与し、ガンに
対する影響を調べた。小型磁石は、あらかじめ磁性酸化
鉄の微粒子と引き合う面を確認した上でマウスに貼りつ
けた。上記製剤の腫瘍に対する治療効果を調べた結果は
表１のとおりである。

なお、比較用の各リポソームは実施例１に準して調整し
た。

表から明らかなように本発明に係るリポソーム製剤は優
れた治療効果を有する。

（以下余白） ＊　治癒マウスはいずれも１００日以上生存した。

（以下余白） 実施例２ ５０−ナス型フラスコ中で卵黄レシチン７０■、コレス
テロール３Ｏ■およびジセチルホスフェート４■をジエ
チルエーテル３−に溶解した後、実施例１と同様にして
得られた磁性酸化鉄の微粒子０．１重量％を含むデキサ
メタシンフォスフエート５％生理食塩水溶液１−を加え
た後、超音波を照射することによりＷ１０エマルジョン
を得た。これをロータリーエバポレーターを用いてジエ
チルエーテルを留去してゲル化させ、軽く振とうした後
、残ったジエチルエーテルを完全に留去して濃厚なリポ
ソーム分散液を得た。リポソームに未含有のデキサメタ
シンフォスフェートを常法に従いセファロース４Ｂカラ
ムを用いて除去した後、適度に希釈してリポソーム製剤
を得た。

〔試験例２〕 実施例２で得たリポソーム製剤の抗炎症活性を評価した
。すなわち、実施例２リポソーム製剤およびデキサメタ
ゾンフォスフェーＩ・の生理食塩水溶液を、ウィスター
系ラット（雄、一群５匹、体重役１８０ｇ）にそれぞれ
薬剤量３■／　ｋｇとなるよう静脈内投与し、後肢足踏
下に小型磁石をはりつけた。１８時間後に１％カラゲニ
ン生理食塩水溶液０、］ｍｅ＠後肢瞭下に投与すること
によりカラゲニン浮腫を発症せしめた。投与後−・定時
間後にそれぞれ足跡体積を測定し、足跡容量の増加率（
Ｖ、）を求めた。対象群として生理食塩水のみを静脈内
投与したラットに同様にカラゲニンを投与した際の足跡
容量の増加率（Ｖｏ　）を測定し、（Ｖｏ　　Ｖ＋　）
　／　Ｖｏ　Ｘ　　１００の計算ｔｌ車によりカラゲニ
ン浮腫抑制率（％）を算出した。この値が大きい程、抗
炎症活性が高いことを示す。カラゲニン投与後５時間目
の測定値を表２に示す。

表２ 表２から明らかなように本発明に係るリポソーム製剤は
優れた治療効果を有する。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. （１）粒子内及び／または膜中に化学療法剤と磁性酸化
   鉄（ｍａｇｎｅｔｉｔｅ；Ｆｅ＿３Ｏ＿４）と含有させ
   たリポソーム製剤。
2. （２）化学療法剤が制ガン剤、酵素、補酵素、酵素阻害
   剤、抗炎症剤又は免疫抑制剤である特許請求の範囲第１
   項記載のリポソーム製剤。
3. （３）磁性酸化鉄が走磁性微生物より分離し精製された
   磁性酸化鉄又は走磁性微生物より分離されたマグネトソ
   ーム（ｍａｇｎｅｔｏｓｏｍｅ）である特許請求の範囲
   第１項記載のリポソーム製剤。