JPS63160593A - Ｌ−グルタミンの製造法 - Google Patents
Ｌ−グルタミンの製造法Info
- Publication number
- JPS63160593A JPS63160593A JP30780186A JP30780186A JPS63160593A JP S63160593 A JPS63160593 A JP S63160593A JP 30780186 A JP30780186 A JP 30780186A JP 30780186 A JP30780186 A JP 30780186A JP S63160593 A JPS63160593 A JP S63160593A
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- Japan
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- glutamine
- oleic acid
- requirement
- medium
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明はＬ−グルタミンの製造法に関する。Ｌ−グルタ
ミンはアミノ酸製剤などの医薬品として有用である。
ミンはアミノ酸製剤などの医薬品として有用である。
従来の技術
従来、Ｌ−グルタミンを製造する方法としては、糖質を
基とした培養基中に窒素源を菌体増殖およびグルタミン
生産に必要以上に過剰量に加えた培地を用いる方法（特
公昭３９−７３９１号公報）、１０−１モル濃度以上の
亜鉛および／またはモリブデンを存在させた培地を用い
る方法（特公昭４２−７５９５号公報）、鉛、クロム、
ニッケル、アルミニウム、コバルトおよび水銀の１種ま
たは２種以上を培地１１あたり１０−７Ｍ以上存在させ
た培地を用いる方法（特公昭４３−６９９３号公報）、
コリネバクテリウム・グルタミクム又はミクロバクテリ
ウム・フラバムに属し、サルファ剤に耐性を有するＬ−
グルタミン生産菌を用いる方法（特公昭５１−４４１９
６号公報）等が知られている。
基とした培養基中に窒素源を菌体増殖およびグルタミン
生産に必要以上に過剰量に加えた培地を用いる方法（特
公昭３９−７３９１号公報）、１０−１モル濃度以上の
亜鉛および／またはモリブデンを存在させた培地を用い
る方法（特公昭４２−７５９５号公報）、鉛、クロム、
ニッケル、アルミニウム、コバルトおよび水銀の１種ま
たは２種以上を培地１１あたり１０−７Ｍ以上存在させ
た培地を用いる方法（特公昭４３−６９９３号公報）、
コリネバクテリウム・グルタミクム又はミクロバクテリ
ウム・フラバムに属し、サルファ剤に耐性を有するＬ−
グルタミン生産菌を用いる方法（特公昭５１−４４１９
６号公報）等が知られている。
オレイン酸に要求性を有する微生物を用いるアミノ酸の
製法として、し−スレオニンの製法が知られている（特
開昭５７−６８７９３号公報）。
製法として、し−スレオニンの製法が知られている（特
開昭５７−６８７９３号公報）。
発明が解決しようとする問題点
従来の方法では、培地中のビオチン濃度を制限すること
が必要であり、炭素源として廃糖蜜のようなビオチン含
量の多い原料は安価でも使用できず、高価な精製糖が用
いられている。
が必要であり、炭素源として廃糖蜜のようなビオチン含
量の多い原料は安価でも使用できず、高価な精製糖が用
いられている。
問題点を解決するための手段
本発明方法によると、コリネバクテリウム属に属し、Ｌ
−グルタミンを生産する能力を有し、かつオレイン酸に
要求性を有する微生物を培地に培養することにより高い
収率でＬ−グルタミンを得ることができる。本発明方法
は、過剰のビオチン含有培地を用いてもビオチンによる
抑制を受けることなく高い収率でＬ−グルタミンを生産
することができる特徴を有している。
−グルタミンを生産する能力を有し、かつオレイン酸に
要求性を有する微生物を培地に培養することにより高い
収率でＬ−グルタミンを得ることができる。本発明方法
は、過剰のビオチン含有培地を用いてもビオチンによる
抑制を受けることなく高い収率でＬ−グルタミンを生産
することができる特徴を有している。
本発明に用いる微生物としては、コリネバクテリウム属
に属し、Ｌ−グルタミンを生産する能力を有し、かつオ
レイン酸に要求性を有する微生物であればいずれも用い
られる。
に属し、Ｌ−グルタミンを生産する能力を有し、かつオ
レイン酸に要求性を有する微生物であればいずれも用い
られる。
一般には、コリネバクテリウム属に属し、Ｌ−グルタミ
ン又は、Ｌ−グルタミン酸生産能を有する菌株を親株と
し、これを変異誘導処理して得られた変異株からオレイ
ン酸に要求性を有するものを選択し、これを用いる。変
異誘導の方法としては、紫外腺照射、放射線照射、変異
誘起剤処理等の通常の方法が用いられる。変異誘導され
た変異株からオレイン酸に要求性を有する菌株を選択す
るには親株が生育可能な濃度のビオチンを含有する培地
で生育できなくて、この培地にオレイン酸を添加した培
地では親株と同様に生育できるものを選べばよい。
ン又は、Ｌ−グルタミン酸生産能を有する菌株を親株と
し、これを変異誘導処理して得られた変異株からオレイ
ン酸に要求性を有するものを選択し、これを用いる。変
異誘導の方法としては、紫外腺照射、放射線照射、変異
誘起剤処理等の通常の方法が用いられる。変異誘導され
た変異株からオレイン酸に要求性を有する菌株を選択す
るには親株が生育可能な濃度のビオチンを含有する培地
で生育できなくて、この培地にオレイン酸を添加した培
地では親株と同様に生育できるものを選べばよい。
具体的な菌株としては、コリネバクテリウム・グルタミ
クム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍ
ｉｃｕｍ）ＡＴＣＣ１３０３２（以下、ＡＴＣＣ１３０
３２と称す）より変異誘導されたコリネバクテリウム・
グルタミクムＨ２７６０（微工研菌寄第５６９７号）（
以下、Ｈ２７６０と称す）があげられる。
クム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍ
ｉｃｕｍ）ＡＴＣＣ１３０３２（以下、ＡＴＣＣ１３０
３２と称す）より変異誘導されたコリネバクテリウム・
グルタミクムＨ２７６０（微工研菌寄第５６９７号）（
以下、Ｈ２７６０と称す）があげられる。
該８２７６（ｌは、特開昭５７−６８７９３号公報に記
載されており公知である。
載されており公知である。
オレイン酸添加量とＡＴＣＣ１３０３２及びＨ２７６０
の生育度（培養液の濁度を測定し、オレイン酸ナトリウ
ム無添加量の場合のＡＴＣＣ１３０３２の生育度に対す
る相対生育量として表示）の関係を第１表に示す。
の生育度（培養液の濁度を測定し、オレイン酸ナトリウ
ム無添加量の場合のＡＴＣＣ１３０３２の生育度に対す
る相対生育量として表示）の関係を第１表に示す。
第 １ 表
第１表の両菌株の生育は次のようにして測定した。グル
コース１０ｇ＃！、ＫＨｚＰＯ＜ １ｇ／ｌ。
コース１０ｇ＃！、ＫＨｚＰＯ＜ １ｇ／ｌ。
Ｋ２ＨＰＯ４３ｇ／ｌ、 （ＮＨ４）２ＳＯ４４ｇ／
ｌ。
ｌ。
尿素２ｇ／Ｒ，Ｍｇ５Ｏ＜・７８２０ ０．４ｇ／β。
ＦｅＳ○４’７Ｈ２０１０ｒｎｇ／１． Ｍｎ５Ｏｓ
・４Ｈ２０４ｍｇ／β、ビオチン３０■／ｌ、サイアミ
ン塩酸塩２００ｇ＃！ および第１表に示すオレイン
酸ナトリウムを含有し、ｐＨを７．２に調整した培地１
０ｍ１に培地くペプトンｌＯｇ／Ｃ酵母エキス１０ｇ／
ＬＮａＣｅ、 ３ｇ／ｌ、 オレイン酸ナトリウム１０
０ｎ＋ｇ／ｌ及び寒天２０ｇ＃りで２４時間培養した菌
を無閑水１０ｍ１に懸濁し、その懸濁液をメスピペット
で数滴接種し、２８℃で２４時間培養して、生育度を濁
度で測定した。
・４Ｈ２０４ｍｇ／β、ビオチン３０■／ｌ、サイアミ
ン塩酸塩２００ｇ＃！ および第１表に示すオレイン
酸ナトリウムを含有し、ｐＨを７．２に調整した培地１
０ｍ１に培地くペプトンｌＯｇ／Ｃ酵母エキス１０ｇ／
ＬＮａＣｅ、 ３ｇ／ｌ、 オレイン酸ナトリウム１０
０ｎ＋ｇ／ｌ及び寒天２０ｇ＃りで２４時間培養した菌
を無閑水１０ｍ１に懸濁し、その懸濁液をメスピペット
で数滴接種し、２８℃で２４時間培養して、生育度を濁
度で測定した。
本発明に用いる培地としては、炭素源、窒素源。
無機化合物、その他の栄養素などを適当に含む培地なら
ば、天然培地又は合成培地のいずれも使用できる。炭素
源としては、蔗糖、グルコース、廃糖蜜、澱粉糖化液な
どが、窒素源としては、アンモニア、硫酸アンモニウム
、塩化アンモニウム。
ば、天然培地又は合成培地のいずれも使用できる。炭素
源としては、蔗糖、グルコース、廃糖蜜、澱粉糖化液な
どが、窒素源としては、アンモニア、硫酸アンモニウム
、塩化アンモニウム。
硝酸アンモニウム、燐酸アンモニウム、炭酸アンモニウ
ム、クエン酸アンモニウム、尿素などの有機無機窒素化
合物、ペプトン、肉エキス、コーンスチープリカーなど
の天然栄養源などが、無機化合物としては、燐酸第一カ
リウム、硫酸カリウム。
ム、クエン酸アンモニウム、尿素などの有機無機窒素化
合物、ペプトン、肉エキス、コーンスチープリカーなど
の天然栄養源などが、無機化合物としては、燐酸第一カ
リウム、硫酸カリウム。
硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン。
酢酸鉛、クロム酸カリウム、塩化ニッケル、塩化コバル
ト硫酸亜鉛、モリブデン酸アンモニウム。
ト硫酸亜鉛、モリブデン酸アンモニウム。
炭酸カルシウムなどが、その他の栄養素としては、ビオ
チン、サイアミン塩酸塩、オレイン酸ナトリウムなどが
用いられる。
チン、サイアミン塩酸塩、オレイン酸ナトリウムなどが
用いられる。
培養液中のオレイン酸ナトリウムの添加１としては、５
−０〜１０００ｍｇ／ｊ！が適当である。
−０〜１０００ｍｇ／ｊ！が適当である。
培養は振とう培養２通気撹拌培養などの好気的条件で行
い、培養温度は２４〜３７℃、好ましくは２８〜３３℃
の範囲である。培養中は適当な中和剤（例えば、炭酸力
ルンウム、アンモニア水）を用いてｐＨを６〜９に調整
するのが好ましい。
い、培養温度は２４〜３７℃、好ましくは２８〜３３℃
の範囲である。培養中は適当な中和剤（例えば、炭酸力
ルンウム、アンモニア水）を用いてｐＨを６〜９に調整
するのが好ましい。
培養は１〜３日間行えば、培養液中に著量のＬ−グルタ
ミンが生成Ｍ積する。培養液からのＬ−グルタミンの採
取は、菌体を除去した上清液から、イオン交換樹脂によ
る脱吸着法１等電点晶析法など、従来のＬ−グルタミン
の製造に右いて常用される諸方法を適宜使用して行うこ
とができる。
ミンが生成Ｍ積する。培養液からのＬ−グルタミンの採
取は、菌体を除去した上清液から、イオン交換樹脂によ
る脱吸着法１等電点晶析法など、従来のＬ−グルタミン
の製造に右いて常用される諸方法を適宜使用して行うこ
とができる。
以下に本発明の実施例を示す。
実施例１゜
グルコース７５ｇ／Ｉｌ、（ＮＨ，）２３０．２０ｇ／
ＬＫＨ２ＰＯ４０，５ｇ／ｊ！、 Ｋ２ＨＰＯ４０，５
ｇ／ｌ。
ＬＫＨ２ＰＯ４０，５ｇ／ｊ！、 Ｋ２ＨＰＯ４０，５
ｇ／ｌ。
Ｍｇ５Ｏ＜・７ＨｚＯ０，５ｇ／ＣＦｅ５０＊・７Ｈ７
Ｈ２Ｏ２／ｌ、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２０２ｍｇ／Ｌ サイ
アミン塩酸塩１ｍｇ／ｊ！、 ＣａＣＯ５２０ｇ／ｊ
２． ビオチン３．５■／ｐあるいはビオチン１００
■／ｌおよびオレイン酸ナトリウム３００ ｍｇ／β
の組成を有する培地のｐＨを苛性ソーダ水溶液で７，２
に調整した後、３０ｍ１ずつ３０３ｍｌ容のフラスコ
（４本）に入れ、１２０℃で１５分間加熱殺菌した。こ
の培地に第２表に示した菌株の一白金耳を接種し、３０
℃で４０時間振とう培養した。培養液中に蓄積したＬ−
グルタミン１は第２表に示す通りであった。
Ｈ２Ｏ２／ｌ、ＭｎＳＯ４・４Ｈ２０２ｍｇ／Ｌ サイ
アミン塩酸塩１ｍｇ／ｊ！、 ＣａＣＯ５２０ｇ／ｊ
２． ビオチン３．５■／ｐあるいはビオチン１００
■／ｌおよびオレイン酸ナトリウム３００ ｍｇ／β
の組成を有する培地のｐＨを苛性ソーダ水溶液で７，２
に調整した後、３０ｍ１ずつ３０３ｍｌ容のフラスコ
（４本）に入れ、１２０℃で１５分間加熱殺菌した。こ
の培地に第２表に示した菌株の一白金耳を接種し、３０
℃で４０時間振とう培養した。培養液中に蓄積したＬ−
グルタミン１は第２表に示す通りであった。
第 ２ 表
ＡＴＣＣ１３０３２１４微量
）１２７６０ 微量 １４
Ｈ２７６０株を用いて得たＬ−グルタミン含有培養液２
００ｍｌを遠心分離＜３０００ｒｌｌ１ｍ、 １０分間
）した。得られた上澄液を強酸性イオン交換樹脂ダイヤ
イオン５Ｋ−ＩＢ （ＮＨ，型）（三菱化成社製）に通
過させ、水洗後、２ Ｎ −Ｎ ８４０Ｈで溶出した。
００ｍｌを遠心分離＜３０００ｒｌｌ１ｍ、 １０分間
）した。得られた上澄液を強酸性イオン交換樹脂ダイヤ
イオン５Ｋ−ＩＢ （ＮＨ，型）（三菱化成社製）に通
過させ、水洗後、２ Ｎ −Ｎ ８４０Ｈで溶出した。
溶出液を濃縮し、Ｌ−グルタミンの粗結晶１．８ｇを得
た。
た。
実施例２゜
廃糖蜜１００ｇ＃！（糖換算）、（ＮＨ，）２Ｓ０゜２
０ｇ／β、ＫＨ２ＰＯ４０，５ｇ＃！、Ｍｇ５ＣＬ・７
Ｈ２００，５ｇ／Ｌ Ｆｅ５Ｏ１・７Ｈ２０２ｍｇ／
！ｌ 。
０ｇ／β、ＫＨ２ＰＯ４０，５ｇ＃！、Ｍｇ５ＣＬ・７
Ｈ２００，５ｇ／Ｌ Ｆｅ５Ｏ１・７Ｈ２０２ｍｇ／
！ｌ 。
Ｍ ｎ Ｓ ０４ ・４ Ｈ２Ｃ２ｍｇ／ ｎ 、
サイアミン塩酸塩Ｉ ｌｌ１ｇ／ １ 、 オレイン
酸ナトリウム３００ｍｇ／ｊ！およびＣａ ＣＯ３２０
ｇ／βの組成を有する培地のｐＨを苛性ソーダ水溶液で
７．２にした後、３１ずつ５ｐ容のジャーファーメンタ
−（２本）に入れ１２０℃で１５分間加熱殺菌した。こ
の培地に第３表に示した菌株の一白金耳を接種し、３０
℃にて６０００ｒｐｍ 、 ３１２ ／ｍｉｎで４０
時間培養した。
サイアミン塩酸塩Ｉ ｌｌ１ｇ／ １ 、 オレイン
酸ナトリウム３００ｍｇ／ｊ！およびＣａ ＣＯ３２０
ｇ／βの組成を有する培地のｐＨを苛性ソーダ水溶液で
７．２にした後、３１ずつ５ｐ容のジャーファーメンタ
−（２本）に入れ１２０℃で１５分間加熱殺菌した。こ
の培地に第３表に示した菌株の一白金耳を接種し、３０
℃にて６０００ｒｐｍ 、 ３１２ ／ｍｉｎで４０
時間培養した。
培養期間中アンモニア水で［） ８６．５に維持した。
得られた培養液中に蓄積したＬ−グルタミン量は第３表
に示す通りであった。
に示す通りであった。
第３表
ＡＴＣＣ１３０３２′Ｒ１最
Ｈ２７６０１５
Ｈ２７６０株を用いて得たＬ−グルタミン含有液１！を
実施例１と同様に処理して、Ｌ−グルタミンの粗結晶７
ｇを得た。
実施例１と同様に処理して、Ｌ−グルタミンの粗結晶７
ｇを得た。
発明の効果
本発明方法により炭素源としてビオチン含↑の少ない原
料を用いてＬ−グルタミンを収率よく得ることができる
ことはもちろんのこと、ビオチン含量の多い原料を用い
ても収率よくＬ−グルタミンを得ることができる。
料を用いてＬ−グルタミンを収率よく得ることができる
ことはもちろんのこと、ビオチン含量の多い原料を用い
ても収率よくＬ−グルタミンを得ることができる。
Claims (1)
- コリネバクテリウム属に属し、Ｌ−グルタミンを生産す
る能力を有し、かつオレイン酸に要求性を有する微生物
を培地に培養し、培養物中にＬ−グルタミンを生成蓄積
させ、該培養物から生成蓄積したＬ−グルタミンを採取
することを特徴とするＬ−グルタミンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30780186A JPS63160593A (ja) | 1986-12-25 | 1986-12-25 | Ｌ−グルタミンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30780186A JPS63160593A (ja) | 1986-12-25 | 1986-12-25 | Ｌ−グルタミンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63160593A true JPS63160593A (ja) | 1988-07-04 |
| JPH0565158B2 JPH0565158B2 (ja) | 1993-09-17 |
Family
ID=17973390
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30780186A Granted JPS63160593A (ja) | 1986-12-25 | 1986-12-25 | Ｌ−グルタミンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63160593A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USD538660S1 (en) | 2005-01-31 | 2007-03-20 | Ball Corporation | Container |
-
1986
- 1986-12-25 JP JP30780186A patent/JPS63160593A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0565158B2 (ja) | 1993-09-17 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |