JPS5835080B2 - 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は発酵法によりＬ−インロイシンを製造する方法
に関するものでありより詳しくはプロテウス（Ｐｒｏｔ
ｅｕｓ ）属に属しＬ−インロイシン生産能を有する菌
株を栄養培地中で培養してＬ−インロイシンを生産蓄積
せしめついでこの培養物からＬ−インロイシンを採取す
る方法に関するものである。

Ｌ−インロイシンは必須アミノ酸として人及び動物の栄
養に重要なアミノ酸であり、従って、食品工業や飼料工
業にとってきわめて有用なものである。

従来微生物によるＬ−インロイシンの製造法に関しては
Ｌ−インロイシンの前駆物質であるα−アミノ酪酸、α
−ケト酪酸、Ｄ−スレオニンなどを培地中へ添加してＬ
−イソロイシンに変換する方法（例えば特公昭３９−１
５２４８）があるがこれらの前駆物質は高価であり有利
な製造方法とは云えない。

また直接発酵法としてはミクロコツカス・グルタミクス
（Ｍｉｃｒｏｃｏｃｃｕｓ ” ｇｌｕｔａｍｉｃｕｓ
） 。

セラチア・マルセスセンス（５ｅｒａｔｉａ″ｍａｒｃ
ｅｓｃｅｎｓ ） ｓブレビバクテリウム・フラバム（
Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ″ｆｌａｖｕｍ ）な
どの各種変異株による発酵が知られている。

また特公昭４６−２９７８９号公報にはプロテウス属に
属する菌株を用いてα−ケト−β−メチルバレリアン酸
からＬ−インロイシンをつくル方法が記載されているが
本発明の如くプロテウス属に属する菌株が通常の培地中
でＬ−イソロイシンを直接に生産した事実は未だ知られ
ていない。

本発明者らはプロテウス属細菌を研究中プロテウス・レ
トゲリに属する菌株が炭素源、窒素源、無機物、及び該
微生物の必要とする栄養素を含む培地に培養した場合、
その培養液中にＬ−インロイシンを生成、分泌すること
を見出し本発明を完成した。

本発明で使用される微生物はプロテウス属に属し、Ｌ−
イソロイシンを通常の培地中で直接生産する能力を有す
る細菌ならばいずれでもよい。

このようなＬ−インロイシン生産菌の代表的なものとし
てはプロテウス属に属する細菌に紫外線照射、γ線照射
、薬剤処理などの変異処理をして得た変異株をあげるこ
とができる。

本発明で使用される微生物の１種、プロテウス・レトゲ
リ（Ｐｒｏｔｅｕｓ ｒｅｔｔｇｅｒｉ ） ＮＫ
Ｉ−１３５（微工研菌寄第３７８９号）はプロテウス・
レトゲリをＮ−メチル−Ｎ−ニトロ−Ｎ−二トロングア
ニジン処理して得た変異株であってメチオニン要求性を
もち、Ｌ−インロイシンを生産する点で親株と異なるも
のである。

本発明で使用される培地の炭素源としてはグルコース、
フラクトース、シュークロース、マルトースなどが好適
であり窒素源としては硫安、塩安等の無機のアンモニウ
ム塩、尿素、アンモニア、有機のアンモニウム塩等が使
用できる。

無機物としてはナトリウム、カリウム、カルシウム、マ
グネシウム、燐酸などの塩類が使用できる。

前記の菌株を培養する場合、簡単な合成培地で十分可能
であるがコーンスチープリカー、ペプトン、肉エキス、
酵母エキス、大豆加水分解物などは発酵促進物質として
賞用される。

微生物の発酵培地での培養はＬ−インロイシンの生産を
効率的に行わしめるため、振盪培養、通気攪拌培養など
好気的条件下に行い培養中のｐＨを５〜８に保つのが良
い。

培養温度は２５〜３７°Ｃの範囲が好適である。

培養は通常７２〜９６時間以内が適当であるが培養条件
によってはこれは任意に増減するのが良い。

培養終了液中にはＬ−インロイシンが蓄積するが培養終
了液中よりのＬ−イソロイシンの採取は公知の方法を組
合せることにより行うことができる。

その−例としては培養液を除菌しｐＨを２附近に調節し
てイオン交換樹脂により濃縮し晶析、再結晶を行うこと
により高純度のＬ−インロイシンを採取することができ
る。

次に実施例により本発明を具体的に説明する。

実施例 １ グルコース２宏ペフトン１％、肉エキス０．５饅、食塩
０．５％、コーンスチープリカ−０，２５％（ｐＨ７，
０）よりなる種培養培地１００−を入れた５００ｆ１１
！、容三角フラスコを１２０’Ｃ，１５分間殺菌後、プ
ロテウス・レトゲリＮＫＩ−１３５（微工研菌寄第３７
８９号）のスラント培養物より一白金耳を取り、これを
接種し３０’Ｃで１６時間、振盪培養し種培養物とする
。

次にグルコース１０％、硫安１．５％、燐酸二カリウム
０．０５％、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％、炭
酸カルシウム２％、コーンスチーフリカ−１％（ｐＨ６
，８、殺菌前）からなる発酵培地を１１０℃で１０分間
殺菌した。

この培地３０−を入れた５ ００ｔｎｌ容三角フラスコ
に前記の種培養物を１．５ＣＣ，加え３０’Ｃで７２時
間振盪培養した。

培養終了時フラスコ中に平均３．５ｆ／ｌのＬ−インロ
イシンが蓄積した。

培養終了液を集めて１１とし遠心分離により菌体及び不
溶の炭酸カルシウムを除去したのち、塩酸でｐＨを２．
０に調節する。

これをＤ ｏｗｅｘ■５０Ｘ−８（Ｈ型）に吸着せしめ
、水洗したのちＩＮアンモニア水で溶出し、ニンヒドリ
ン反応陽性区分を集め減圧下に濃縮し、濃縮物にエタノ
ールを添加してＬ−インロイシンの粗結晶２．５２を得
た。

実施例 ２ 次のような発酵培地を使用したほかは実施例１と全く同
様に培養を行った。

発酵培地ニゲルコース１２斧、硫安２％、燐酸二カリウ
ム０．０５優、硫酸マグネシウム７水和物０．０５％、
コーンスチープリカ−０，５％、酵母エキスＱ、１φ（
ｐＨ６，８、殺菌前）。

培養４白目のＬ−インロイシンの蓄積量は４．６ｆｆ／
ｌであった。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ プロテウス（Ｐｒｏｔｅｕｓ ）属に属しＬ−イソ
   ロイシン生産能を有する菌株を栄養培地中で培養してＬ
   −インロイシンを生産蓄積せしめ、ついでこの培養物か
   らＬ−インロイシンを採取することを特徴とするＬ−イ
   ンロイシンの製造法。