JPH0565158B2 - - Google Patents
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- JPH0565158B2 JPH0565158B2 JP30780186A JP30780186A JPH0565158B2 JP H0565158 B2 JPH0565158 B2 JP H0565158B2 JP 30780186 A JP30780186 A JP 30780186A JP 30780186 A JP30780186 A JP 30780186A JP H0565158 B2 JPH0565158 B2 JP H0565158B2
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
産業上の利用分野
本発明はＬ−グルタミンの製造法に関する。Ｌ
−グルタミンはアミノ酸製剤などの医薬品として
有用である。 従来の技術 従来、Ｌ−グルタミンを製造する方法として
は、糖質を基とした培養基中に窒素源を菌体増殖
およびグルタミン生産に必要以上に過剰量に加え
た培地を用いる方法（特公昭39−7391号公報）、
10-7モル濃度以上の亜鉛および／またはモリブデ
ンを存在させた培地を用いる方法（特公昭42−
7595号公報）、鉛、クロム、ニツケル、アルミニ
ウム、コバルトおよび水銀の１種または２種以上
を培地１あたり10-7Ｍ以上存在させた培地を用
いる方法（特公昭43−6993号公報）、コリネバク
テリウム・グルタミクム又はミクロバクテリウ
ム・フラバムに属し、サルフア剤に耐性を有する
Ｌ−グルタミン生産菌を用いる方法（特公昭51−
44196号公報）等が知られている。 オレイン酸に要求性を有する微生物を用いるア
ミノ酸の製法として、Ｌ−スレオニンの製法が知
られている（特開昭57−68793号公報）。 発明が解決しようとする問題点 従来の方法では、培地中のビオチン濃度を制限
することが必要であり、炭素源として廃糖蜜のよ
うなビオチン含量の多い原料は安価でも使用でき
ず、高価な精製糖が用いられている。 問題点を解決するための手段 本発明方法によると、コリネバクテリウム属に
属し、Ｌ−グルタミンを生産する能力を有し、か
つオレイン酸に要求性を有する微生物を培地に培
養することにより高い収率でＬ−グルタミンを得
ることができる。本発明方法は、過剰のビオチン
含有培地を用いてもビオチンによる抑制を受ける
ことなく高い収率でＬ−グルタミンを生産するこ
とができる特徴を有している。 本発明に用いる微生物としては、コリネバクテ
リウム属に属し、Ｌ−グルタミンを生産する能力
を有し、かつオレイン酸に要求性を有する微生物
であればいずれも用いられる。 一般には、コリネバクテリウム属に属し、Ｌ−
グルタミン又は、Ｌ−グルタミン酸生産能を有す
る菌株を親株とし、これを変異誘導処理して得ら
れた変異株からオレイン酸に要求性を有するもの
を選択し、これを用いる。変異誘導の方法として
は、紫外線照射、放射線照射、変異誘起剤処理等
の通常の方法が用いられる。変異誘導された変異
株からオレイン酸に要求性を有する菌株を選択す
るには親株が生育可能な濃度のビオチンを含有す
る培地で生育できなくて、この培地にオレイン酸
を添加した培地では親株と同様に生育できるもの
を選べばよい。 具体的な菌株としては、コリネバクテリウム・
グルタミクム（Corynebacterium glutamicum）
ATCC13032（以下、ATCC13032と称す）より変
異誘導されたコリネバクテリウム・グルタミクム
H2760（微工研菌寄第5697号）（以下、H2760と称
す）があげられる。該H2760は、特開昭57−
68793号公報に記載されており公知である。 オレイン酸添加量とATCC13032及びH2760の
生育度（培養液の濁度を測定し、オレイン酸ナト
リウム無添加量の場合のATCC13032の生育度に
対する相対生育量として表示）の関係を第１表に
示す。
−グルタミンはアミノ酸製剤などの医薬品として
有用である。 従来の技術 従来、Ｌ−グルタミンを製造する方法として
は、糖質を基とした培養基中に窒素源を菌体増殖
およびグルタミン生産に必要以上に過剰量に加え
た培地を用いる方法（特公昭39−7391号公報）、
10-7モル濃度以上の亜鉛および／またはモリブデ
ンを存在させた培地を用いる方法（特公昭42−
7595号公報）、鉛、クロム、ニツケル、アルミニ
ウム、コバルトおよび水銀の１種または２種以上
を培地１あたり10-7Ｍ以上存在させた培地を用
いる方法（特公昭43−6993号公報）、コリネバク
テリウム・グルタミクム又はミクロバクテリウ
ム・フラバムに属し、サルフア剤に耐性を有する
Ｌ−グルタミン生産菌を用いる方法（特公昭51−
44196号公報）等が知られている。 オレイン酸に要求性を有する微生物を用いるア
ミノ酸の製法として、Ｌ−スレオニンの製法が知
られている（特開昭57−68793号公報）。 発明が解決しようとする問題点 従来の方法では、培地中のビオチン濃度を制限
することが必要であり、炭素源として廃糖蜜のよ
うなビオチン含量の多い原料は安価でも使用でき
ず、高価な精製糖が用いられている。 問題点を解決するための手段 本発明方法によると、コリネバクテリウム属に
属し、Ｌ−グルタミンを生産する能力を有し、か
つオレイン酸に要求性を有する微生物を培地に培
養することにより高い収率でＬ−グルタミンを得
ることができる。本発明方法は、過剰のビオチン
含有培地を用いてもビオチンによる抑制を受ける
ことなく高い収率でＬ−グルタミンを生産するこ
とができる特徴を有している。 本発明に用いる微生物としては、コリネバクテ
リウム属に属し、Ｌ−グルタミンを生産する能力
を有し、かつオレイン酸に要求性を有する微生物
であればいずれも用いられる。 一般には、コリネバクテリウム属に属し、Ｌ−
グルタミン又は、Ｌ−グルタミン酸生産能を有す
る菌株を親株とし、これを変異誘導処理して得ら
れた変異株からオレイン酸に要求性を有するもの
を選択し、これを用いる。変異誘導の方法として
は、紫外線照射、放射線照射、変異誘起剤処理等
の通常の方法が用いられる。変異誘導された変異
株からオレイン酸に要求性を有する菌株を選択す
るには親株が生育可能な濃度のビオチンを含有す
る培地で生育できなくて、この培地にオレイン酸
を添加した培地では親株と同様に生育できるもの
を選べばよい。 具体的な菌株としては、コリネバクテリウム・
グルタミクム（Corynebacterium glutamicum）
ATCC13032（以下、ATCC13032と称す）より変
異誘導されたコリネバクテリウム・グルタミクム
H2760（微工研菌寄第5697号）（以下、H2760と称
す）があげられる。該H2760は、特開昭57−
68793号公報に記載されており公知である。 オレイン酸添加量とATCC13032及びH2760の
生育度（培養液の濁度を測定し、オレイン酸ナト
リウム無添加量の場合のATCC13032の生育度に
対する相対生育量として表示）の関係を第１表に
示す。
【表】
第１表の両菌株の生育は次のようにして測定し
た。グルコース10g／，KH2PO41g／，K2
HPO43g／，（NH4）2SO44g／，尿素2g／，
MgSO4・7H2Ｏ 0.4g／，FeSO4・7H2Ｏ 10
mg／，MnSO4・4H2O4mg／，ビオチン
30μg／，サイアミン塩酸塩200μg／および第
１表に示すオレイン酸ナトリウムを含有し、PHを
7.2に調整した培地10mlに培地（ペプトン10g／
、酵母エキス10g／，NaCl 3g／，オレイ
ン酸ナトリウム100mg／及び寒天20g／）で
24時間培養した菌を無菌水10mlに懸濁し、その懸
濁液をメスピペツトで数滴接種し、28℃で24時間
培養して、生育度を濁度で測定した。 本発明に用いる培地としては、炭素源、窒素
源、無機化合物、その他の栄養素などを適当に含
む培地ならば、天然培地又は合成培地のいずれも
使用できる。炭素源としては、蔗糖、グルコー
ス、廃糖蜜、澱粉糖化液などが、窒素源として
は、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモ
ニウム、硝酸アンモニウム、燐酸アンモニウム、
炭酸アンモニウム、クエン酸アンモニウム、尿素
などの有機無機窒素化合物、ペプトン、肉エキ
ス、コーンスチープリカーなどの天然栄養源など
が、無機化合物としては、燐酸第一カリウム、硫
酸カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫
酸マンガン、酢酸鉛、クロム酸カリウム、塩化ニ
ツケル、塩化コバルト硝酸亜鉛、モリブデン酸ア
ンモニウム、炭酸カルシウムなどが、その他の栄
養源としては、ビオチン、サイアミン塩酸塩、オ
レイン酸ナトリウムなどが用いられる。 培養液中のオレイン酸ナトリウムの添加量とし
ては、50〜1000mg／が適当である。 培養は振とう培養、通気攪拌培養などの好気的
条件で行い、培養温度は24〜37℃、好ましくは28
〜33℃の範囲である。培養中は適当な中和剤（例
えば、炭酸カルシウム、アンモニア水）を用いて
PHを６〜９に調整するのが好ましい。培養は１〜
３日間行えば、培養液中に著量のＬ−グルタミン
が生育蓄積する。培養液からのＬ−グルタミンの
採取は、菌体を除去した上清液から、イオン交換
樹脂による脱吸着法、等電点晶析法など、従来の
Ｌ−グルタミンの製造において常用される諸方法
を適宜使用して行うことができる。 以下に本発明の実施例を示す。 実施例 １ グルコース75g／，（NH4）2SO4 20g／、
KH2PO4 0.5g／，K2HPO4 0.5g／，
NgSO4・7H2Ｏ 0.5g／，FeSO4・7H2Ｏ ２
mg／，MnSO4・4H2Ｏ ２mg／，サイアミ
ン塩酸塩１mg／，CaCO3 20g／，ビオチン
3.5μg／あるいはビオチン100μg／およびオレ
イン酸ナトリウム300mg／の組成を有する培地
のPHを苛性ソーダ水溶液で7.2に調整した後、30
mlずつ300ml容のフラスコ（４本）に入れ、120℃
で15分間加熱殺菌した。この培地に第２表に示し
た菌株の一白金耳を接種し、30℃で40時間振とう
培養した。培養液中に蓄積したＬ−グルタミン量
は第２表に示す通りであつた。
た。グルコース10g／，KH2PO41g／，K2
HPO43g／，（NH4）2SO44g／，尿素2g／，
MgSO4・7H2Ｏ 0.4g／，FeSO4・7H2Ｏ 10
mg／，MnSO4・4H2O4mg／，ビオチン
30μg／，サイアミン塩酸塩200μg／および第
１表に示すオレイン酸ナトリウムを含有し、PHを
7.2に調整した培地10mlに培地（ペプトン10g／
、酵母エキス10g／，NaCl 3g／，オレイ
ン酸ナトリウム100mg／及び寒天20g／）で
24時間培養した菌を無菌水10mlに懸濁し、その懸
濁液をメスピペツトで数滴接種し、28℃で24時間
培養して、生育度を濁度で測定した。 本発明に用いる培地としては、炭素源、窒素
源、無機化合物、その他の栄養素などを適当に含
む培地ならば、天然培地又は合成培地のいずれも
使用できる。炭素源としては、蔗糖、グルコー
ス、廃糖蜜、澱粉糖化液などが、窒素源として
は、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモ
ニウム、硝酸アンモニウム、燐酸アンモニウム、
炭酸アンモニウム、クエン酸アンモニウム、尿素
などの有機無機窒素化合物、ペプトン、肉エキ
ス、コーンスチープリカーなどの天然栄養源など
が、無機化合物としては、燐酸第一カリウム、硫
酸カリウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫
酸マンガン、酢酸鉛、クロム酸カリウム、塩化ニ
ツケル、塩化コバルト硝酸亜鉛、モリブデン酸ア
ンモニウム、炭酸カルシウムなどが、その他の栄
養源としては、ビオチン、サイアミン塩酸塩、オ
レイン酸ナトリウムなどが用いられる。 培養液中のオレイン酸ナトリウムの添加量とし
ては、50〜1000mg／が適当である。 培養は振とう培養、通気攪拌培養などの好気的
条件で行い、培養温度は24〜37℃、好ましくは28
〜33℃の範囲である。培養中は適当な中和剤（例
えば、炭酸カルシウム、アンモニア水）を用いて
PHを６〜９に調整するのが好ましい。培養は１〜
３日間行えば、培養液中に著量のＬ−グルタミン
が生育蓄積する。培養液からのＬ−グルタミンの
採取は、菌体を除去した上清液から、イオン交換
樹脂による脱吸着法、等電点晶析法など、従来の
Ｌ−グルタミンの製造において常用される諸方法
を適宜使用して行うことができる。 以下に本発明の実施例を示す。 実施例 １ グルコース75g／，（NH4）2SO4 20g／、
KH2PO4 0.5g／，K2HPO4 0.5g／，
NgSO4・7H2Ｏ 0.5g／，FeSO4・7H2Ｏ ２
mg／，MnSO4・4H2Ｏ ２mg／，サイアミ
ン塩酸塩１mg／，CaCO3 20g／，ビオチン
3.5μg／あるいはビオチン100μg／およびオレ
イン酸ナトリウム300mg／の組成を有する培地
のPHを苛性ソーダ水溶液で7.2に調整した後、30
mlずつ300ml容のフラスコ（４本）に入れ、120℃
で15分間加熱殺菌した。この培地に第２表に示し
た菌株の一白金耳を接種し、30℃で40時間振とう
培養した。培養液中に蓄積したＬ−グルタミン量
は第２表に示す通りであつた。
【表】
H2760株を用いて得たＬ−グルタミン含有培養
液200mlを遠心分離（3000rpm，10分間）した。
得られた上澄液を強酸性イオン交換樹脂ダイヤイ
オンSK−1B（NH4型）（三菱化成社製）に通過さ
せ、水洗後、2N−NH4OHで溶出した。溶出液
を濃縮し、Ｌ−グルタミンの粗結晶1.8gを得た。 実施例 ２ 廃糖蜜100g／（糖換算），（NH4）2SO4
20g／，KH2PO4 0.5g／，MgSO4・7H2Ｏ
0.5g／，FeSO4・7H2Ｏ ２mg／，
MnSO4・4H2Ｏ ２mg／，サイアミン塩酸塩
１mg／、オレイン酸ナトリウム300mg／およ
びCaCO3 20g／の組成を有する培地のPHを苛
性ソーダ水溶液で7.2にした後、３ずつ５容
のジヤーフアーメンター（２本）に入れ120℃で
15分間加熱殺菌した。この培地に第３表に示した
菌株の一白金耳を接種し、30℃にて6000rpm，３
／minで40時間培養した。培養期間中アンモニ
ア水でPH6.5に維持した。 得られた培養液中に蓄積したＬ−グルタミン量
は第３表に示す通りであつた。
液200mlを遠心分離（3000rpm，10分間）した。
得られた上澄液を強酸性イオン交換樹脂ダイヤイ
オンSK−1B（NH4型）（三菱化成社製）に通過さ
せ、水洗後、2N−NH4OHで溶出した。溶出液
を濃縮し、Ｌ−グルタミンの粗結晶1.8gを得た。 実施例 ２ 廃糖蜜100g／（糖換算），（NH4）2SO4
20g／，KH2PO4 0.5g／，MgSO4・7H2Ｏ
0.5g／，FeSO4・7H2Ｏ ２mg／，
MnSO4・4H2Ｏ ２mg／，サイアミン塩酸塩
１mg／、オレイン酸ナトリウム300mg／およ
びCaCO3 20g／の組成を有する培地のPHを苛
性ソーダ水溶液で7.2にした後、３ずつ５容
のジヤーフアーメンター（２本）に入れ120℃で
15分間加熱殺菌した。この培地に第３表に示した
菌株の一白金耳を接種し、30℃にて6000rpm，３
／minで40時間培養した。培養期間中アンモニ
ア水でPH6.5に維持した。 得られた培養液中に蓄積したＬ−グルタミン量
は第３表に示す通りであつた。
【表】
H2760株を用いて得たＬ−グルタミン含有液１
を実施例１と同様に処理して、Ｌ−グルタミン
の粗結晶7gを得た。 発明の効果 本発明方法により炭素源としてビオチン含量の
少ない原料を用いてＬ−グルタミンを収率よく得
ることができることはもちろんのこと、ビオチン
含量の多い原料を用いても収率よくＬ−グルタミ
ンを得ることができる。
を実施例１と同様に処理して、Ｌ−グルタミン
の粗結晶7gを得た。 発明の効果 本発明方法により炭素源としてビオチン含量の
少ない原料を用いてＬ−グルタミンを収率よく得
ることができることはもちろんのこと、ビオチン
含量の多い原料を用いても収率よくＬ−グルタミ
ンを得ることができる。
Claims (1)
- １ コリネバクテリウム属に属し、Ｌ−グルタミ
ンを生産する能力を有し、かつオレイン酸に要求
性を有する微生物を培地に培養し、培養物中にＬ
−グルタミンを生成蓄積させ、該培養物から生成
蓄積したＬ−グルタミンを採取することを特徴と
するＬ−グルタミンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30780186A JPS63160593A (ja) | 1986-12-25 | 1986-12-25 | Ｌ−グルタミンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30780186A JPS63160593A (ja) | 1986-12-25 | 1986-12-25 | Ｌ−グルタミンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63160593A JPS63160593A (ja) | 1988-07-04 |
| JPH0565158B2 true JPH0565158B2 (ja) | 1993-09-17 |
Family
ID=17973390
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP30780186A Granted JPS63160593A (ja) | 1986-12-25 | 1986-12-25 | Ｌ−グルタミンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63160593A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USD538660S1 (en) | 2005-01-31 | 2007-03-20 | Ball Corporation | Container |
-
1986
- 1986-12-25 JP JP30780186A patent/JPS63160593A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| USD538660S1 (en) | 2005-01-31 | 2007-03-20 | Ball Corporation | Container |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63160593A (ja) | 1988-07-04 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |