JPS6318959B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、アミド窒素上に置換基として分枝し
た有機基を有する、一定のＬ−アスパルチル−Ｄ
−アラニンアミド類およびＬ−アスパルチル−Ｄ
−セリンアミド類の製造、単離および精製方法に
関する。すべての場合に、これらの方法は、芳香
族スルホン酸との酸付加塩としての上記アミド類
の結晶化を包含する。無水または水和された形の
これらの塩自体もまた本発明に包含される。 先述のアミド類は有力な合成甘味料である。Ｄ
−アラニンアミド誘導体は、製法および実用性に
関しては、1981年９月２日に発行されたヨーロツ
パ特許文書第34876号に十分に示されている。同
じ方法によつて製造され、試験されたＤ−セリン
アミド誘導体は、ブレナン（Brennan）およびヘ
ンドリツク（Hendrick）に対する「ブランチ
ド・アミズ・オブ・Ｌ−アスパルチル−Ｄ−アミ
ド アシド ジペプチズ（“Branched Amides
of Ｌ−Aspartyl−Ｄ−Amino Acid
Dipeptides”」として1981年６月26日に提出され
た未決の米国特許出願通し番号第276243号中に記
載されている。これらの特許文書は両方とも、一
般的に、薬学的に許容し得る酸付加塩に関連して
いるけれども、スルホン酸塩については述べてい
ない。 Ｄ−アラニンおよびＤ−セリン系列の両方にお
いては、先に好適とされた合成方法のうちの二つ
は、一般にアミンおよび／またはカルボキシル基
の保護とそれに続く脱保護を必要とする、多段階
の順序を包含する。今回の結晶化方法は、これら
の以前からの好適法の一つによつて製造されたと
きの上記ジペプチド甘味料の有利な精製法を提供
する。 本発明のさらに特別のそして驚くべき利点は、
Ｄ−アラニンおよびＤ−セリン系列の両方におけ
る第三の好適方法として先に与えられた「一段
階」合成中に存する。この後者の工程では、Ｌ−
アスパルチルＮ−チオカルボン酸無水物を、適当
に置換されたＤ−アラニンアミドまたはＤ−セリ
ンアミドと反応させて、直接所望のジペプチドア
ミドを得る。この後者の工程の不利な点は、一般
に除去することが困難な痕跡量の、悪臭を放つ硫
黄化合物（比較、ビニツク（Vinick）、1980年12
月米国特許第4238392号、ここでは、Ｌ−アスパ
ルチルＮ−チオカルボン酸無水物の使用によつて
製造されたＬ−アスパルチル−Ｌ−フエニルアラ
ニンアルキルエステルを除臭するためにアルカリ
金属過沃素酸塩が用いられている）と同様に、異
性体のＤ−アスパルチル−Ｄ−アミノ酸アミドと
トリペプチド（Ｌ−アスパルチル−Ｌ−アスパル
チル−Ｄ−アミノ酸アミド）が同時に生成される
傾向があることである。驚くべきことに、今回の
結晶化工程は、トリペプチドおよびジアステレオ
マーのＤ−アスパルチル−Ｄ−アミノ酸アミド
（この後者が高濃度で、例えば10％、存在すると
きでさえ）を追い出す。その上、臭い硫黄化合物
は、その水準を下げられるかまたは除去される。
このように本発明は以前の「第三の好適方法」を
今や特に好適な方法とする。 本発明は、また、本発明の化合物の合成に対し
て新規である。もう一つの特に好適な「一段階」
法をも包含する。無水Ｌ−アスパラギン酸の酸付
加塩は、同じ適当に置換されたＤ−アラニンアミ
ドまたはＤ−セリンアミドと結合させられる。こ
の方法では、上に記したような臭いの問題はな
い；しかしながら、この方法では、多少のトリペ
プチド（Ｌ−アスパルチル−Ｌ−アスパルチル−
Ｄ−アラニンアミドまたは−セリンアミド）と同
様に大量（通常、所望生成物の量の約半分に等し
い量）のベータ−Ｌ−アスパルチル異性体が形成
される。驚ろくべきことに、ベーター異性体およ
びトリペプチドは両方とも本発明の結晶化工程に
よつて除去される。 アリヨシ（Ariyoshi）外〔Bull.Chem.Soc.
Japan，46、第1893−1895ページ（1975）〕は無
水Ｌ−アスパラギン酸塩酸塩およびＬ−フエニル
アラニンメチルエステル塩酸塩からのアスパルタ
ム（aspartame）（Ｌ−アスパルチル−Ｌ−フエ
ニルアラニンメチルエステル）の製法を記載し
た。部分精製は、塩酸付加塩の結晶化によつて行
なわれたが、しかし、所望生成物の最終的な精製
には、下に述べたようにアスパルタムには適用で
きない、本発明の選択的結晶化ではなく、カラム
クロマトグラフイーが用いられた。 アスパルタムとそのベーター−Ｌ−アスパルチ
ル異性体から分離するためにある芳香族カルボン
酸塩が使用されたけれども〔アリヨシ
（Ariyoshi）およびサトー（Sato）、米国特許第
3673026号、1972年７月〕、本発明の結果は、(1)ア
スパルタムはｐ−トルエンスルホン酸の存在にお
いてはすなわち本発明の条件下では、水から結晶
しないおよび(2)アリヨシ（Ariyoshi）およびサ
トー（Sato）の芳香族カルボン酸塩は、本発明
のジペプチドアミド甘味料とは作用しない；とい
う事実から見て、なお一層驚くべきことである。 本発明は、式 〔式中、Ａは水素またはヒドロキシ基であり、
Ｒは、 (a) 次式の２，２，４，４−テトラメチル−３−
チエタニル； (b) 次式のジ（シクロプロピル）メチル；または (c) 次式の１，１−ジオキソ−２，２，４，４−
テトラメチル−３−チエタニル である〕 のＬ−アスパルチル−Ｄ−アミノ酸ジペプチドの
単離および精製の方法に関し、この方法は式

【式】または

【式】 （式中、R¹は水素、塩素またはメチル基であ
り、そしてR²は水素またはメチル基である） の芳香族スルホン酸との塩の形の、上記Ｌ−アス
パルチル−Ｄ−アミノ酸ジペプチドアミドを、水
性溶媒から選択的に結晶化させることより成る。
この結果生ずる塩は一般に水和されている。無水
の塩が望ましいときは、水和の水は、五酸化燐上
で真空で加熱することによつて除去される。 本発明はまた、こうして得られる、無水または
水和された塩をも包含し、この塩は、式（）の
Ｌ−アスパルチル−Ｄ−アミノ酸ジペプチドアミ
ドおよび上に定義したような芳香族スルホン酸か
ら成つている。 第３に、本発明は、精製された、上に定義した
ような芳香族スルホン酸との酸付加塩の形の式
（）のＬ−アスパルチル−Ｄ−アミノ酸ジペプ
チドアミド類の改良製造法をも包含し、この方法
は： (a) 水性溶媒中、塩基性PHで、式 のＬ−アスパルチルＮ−チオカルボン酸無水物
を式 （式中、ＡおよびＲは先に定義した通りであ
る）のＤ−アミノ酸アミドと反応させ；そして
その結果生ずる中間体の標準的な脱チオカルボ
キシル化を行なうために酸性化した後、 (b) 得られるＬ−アスパルチル−Ｄ−アミノ酸ジ
ペプチドを上記芳香族スルホン酸で結晶化させ
ること より成る。 最後に、本発明は、精製された、上に定義した
ような芳香族スルホン酸との酸付加塩の形の、式
（）の化合物の新規な製法を包含し、この方法
は： (a) 反応に不活性な溶媒中で、式 の無水Ｌ−アスパラギン酸の酸付加塩を、式
（）のＤ−アミノ酸アミドと反応させるこ
と；および、標準的な反応の停止と生成物の水
中への移動の後に、 (b) 得られるＬ−アスパルチル−Ｄ−アミノ酸ジ
ペプチドを上記スルホン酸で結晶させること；
より成る。 無水Ｌ−アスパラギン酸に適用されたとき「酸
付加塩」という表現は、一般に、その無水物を安
定化し、その重合を妨げる、塩酸のような強酸を
指している。 「反応に不活性な溶媒」という表現は、出発物
質または生成物と、所望の生成物の収率を有意に
低下させるようには反応しないような溶媒を包含
しようとするものである。この規準を満足させる
典型的な溶媒は後で詳しく示される。 上で構造的に限定した芳香族スルホン酸の典型
例は、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホ
ン酸、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸、３，４−
キシレンスルホン酸、２，５−キシレンスルホン
酸、アルフアーナフタレンスルホン酸およびベー
タ−ナフタレンスルホン酸である。 好適なＡは水素である。最も好適な塩は、ｐ−
クロロベンゼンスルホン酸、３，４−ジメチルベ
ンゼンスルホン酸、アルフア−ナフタレンスルホ
ン酸またはベータ−ナフタレンスルホン酸との塩
である。 これらの好適性は、それらの結晶化工程が特に
たやすくて分析的純度の結晶性生成物を容易に生
成するという事実と同様に、その結果生ずるジペ
プチドの甘味が特に強いということに基づいてい
る。 本発明の方法は容易に実施される。式（）の
Ｌ−アスパルチル−Ｄ−アミノ酸ジペプチドアミ
ドを含有する水溶液を、通常は激しくかくはんし
ながら上に定義したような芳香族スルホン酸少な
くとも１モル当量で何度かに分けて処理する。収
率は一般に、過剰のスルホン酸（好適には２当量
より少ない）、比較的高濃度ではあるが不純物の
同時沈でんをひきおこすほど高くない濃度の上記
粗製化合物（好適には約５−10％ｗ／ｖの範囲
内）の使用：および好適には約０−25℃の範囲へ
の冷却；によつて改良される。純度は、一般に、
ゆつくりした結晶化（ゆつくりした酸の添加、徐
冷）および熟成（すなわち最初の結晶化が完了し
た後数時間以下のかくはん）によつて改良され
る。溶媒は実質的に水性であることが好適である
が、少量の有機溶媒が溶液中に存在しても重大な
不利益はおこらない。 粗製の式（）のＬ−アスパルチル−Ｄ−アミ
ノ酸ジペプチドアミドは、特定的にＤ−アラニン
アミド誘導体に関連している。上記ヨーロツパ特
許文書中に示された方法に従つて製造される。ヨ
ーロツパ特許文書のＤ−アラニン誘導体を適当な
Ｄ−セリン誘導体で置き換えたＤ−セリンアミド
同類体に対しては、上記の未決の米国特許出願の
中で詳しく述べられたように、同じ方法が用いら
れる。これらの方法のうちの一つで製造された粗
製のジペプチドアミドは、約５−20％という水準
で水に溶解させられ、そして、本発明の結晶化工
程に使用するために必要ならば濾過によつて透明
にされる。別法として、脱保護段階後に、ジペプ
チドアミドは、前もつて粗生成物を単離すること
なく直接水性流から結晶化される。 本発明によつて具体化されたように、式（）
の化合物に対する、特に好適な全工程の一つは、
上記のヨーロツパ特許文書および未決の米国特許
出願中に示された方法の一つにおける明確な改良
を表わしている。式（）のＤ−アミノ酸アミド
はＬ−アスパルチルＮ−チオカルボン酸無水物と
反応して直接、式（）の化合物を与える。この
方法を実施するには、適当な溶媒中のアミド
（）を、穏やかなアルカリ性PHで、温度約−25
ないし10℃で、等モル量のＬ−アスパルチルＮ−
チオカルボン酸無水物と接触させて、式（）の
化合物とする。この反応のためのアルカリ性PH
は、強塩基、例えば水酸化ナトリウムまたは炭酸
カリウムによつて得られる。この反応に適する溶
媒は、使用される反応条件下で、いずれかの反応
体とそれと認められるほど反応することなしに少
なくとも反応体の一部を溶解させ、しかも反応中
に形成された生成物が比較的簡単に単離されるよ
うなものである。その例は、水、テトラヒドロフ
ラン、1.1−ジメトキシエタン、またはその種々
の混合物である。本発明の場合、好適な溶媒は水
である。これは、有機溶媒の消費を避けるばかり
でなく、生成物の単純な、回りくどくない単離を
得させる溶媒であつて；もしも０℃よりはるかに
低い温度で操作したいならば、好適な希釈剤はテ
トラヒドロフランである。この反応は好適なアル
カリ性PH領域は約８ないし10であつて、PH約９が
特に好適である。特に好適な温度は約−２から５
℃の範囲で：一般に純粋な生成物が生成され、そ
して有機溶媒に対する必要性が除かれる。 上述の好適条件下で、反応は普通、１または２
時間で完了する。その後式（）の生成物は、PH
をやや酸性側に調整し（これによつて中間体） の脱チオカルボキシル化がおこる）；存在するな
らば、有機溶媒を除去するかまたは水で置き換
え；そして適当な芳香族スルホン酸を加える；こ
とによつて単離される。所望ならば、酸性化は、
生成物を結晶化するのに用いる同じスルホン酸を
用いて行なわれる。スルホン酸の添加は通常、何
部かに分けて、所望の生成物の結晶化をひきおこ
すために必要に応じて任意に冷却または濃縮を行
ないながら、実施される。結晶性の塩は、通常は
数分から24時間まで、あるいは必要ならばそれ以
上にわたつて混合物を冷却および熟成した後、濾
過または遠心分離によつて、普通のやり方で回収
される。 第二の特に好適な全工程（この場合にはそれは
すべての段階で新規であるか）は、同じ式（）
のＤ−アミノ酸アミドと無水Ｌ−アスパラギン酸
の酸付加塩との反応を含んでいる。この場合に
も、式（）の化合物は直接得られる。この反応
は好適には過剰のアミドを用いて実施され、そし
てこのアミドは抽出によつて回収されて再循環さ
せられる。この反応は塩化メチレンまたは塩化エ
チレンにような水と混和しない反応に不活性な溶
媒中、少量の、酢酸のような弱酸の存在におい
て、そして所望ならば、少量の、メタノールのよ
うな低級アルカノールの存在において、低温、例
えば、−40℃ないし０℃、好適には約−15℃ない
し−25℃、で実施される。反応が完了した後（−
20℃で約0.5時間）、反応を水中で停止させ、PHを
塩基性側（例えば９ないし11.5）に調整する。出
発物質のアミドは、有機層および水性層の抽出物
から回収される。それから、水性層を強鉱酸で酸
性化し、そして、上記の条件下で少なくとも１当
量のスルホン酸を添加することによつて所望のＬ
−アスパルチル−Ｄ−アミノ酸ジペプチドアミド
を芳香族スルホン酸塩として回収する。望ましく
ないベータ−異性体（一般に所望異性体の約半分
の濃度で存在する）および他の汚染物、特にトリ
ペプチド（Ｌ−アスパルチル−Ｌ−アスパルチル
−Ｄ−アミノ酸アミド）は溶液中に残留する。 出発物質として用いられる式（）のアミド
は、上で引用したヨーロツパ特許文書（これは特
定的にアラニン同族体を述べている）中に詳しく
示された方法に従つて製造される。Ｄ−セリンの
ヒドロキシメチル基が当然Ｄ−アラニンのメチル
基の代りに入つているけれども、上述の米国特許
には同じように、セリン同族体の製法が示されて
いる。 遊離の、式（）のＬ−アスパルチル−Ｄ−ア
ミノ酸ジペプチドアミドは、中和および抽出とい
う標準的な方法によつて、または好適には、スル
ホン酸を溶解させる塩基性イオン交換樹脂を用い
る中和によつて、本発明の芳香族スルホン酸塩か
ら容易に再生される。所望ならば、遊離塩基は単
離される必要はなく、「その位置で」薬学的に許
容し得る酸付加または陽イオン性塩に変えられた
後塩として単離されることができる。 芳香族スルホン酸塩を遊離塩基に変えるために
交換樹脂を使用するときは、弱塩基性イオン交換
樹脂が好適である。最も好適なのは、アンバーラ
イト（Amberlite）LA−１のような弱塩基性液
体陰イオン交換樹脂である。このアンバーライト
LA−１は、その中の各第二アミンが式 （式中、R^X，R^YおよびR^Zの各々は脂肪族炭化
水素基であつて、R^X，R^YおよびR^Zは総計で11か
ら14個までの炭素原子を含有している）を有して
いる第二アミンの混合物であつて；時として「液
体アミン混合物第一号（Liquid Amine Mixture
No.１）」と呼ばれるこの特殊な第二アミン混合物
は、次の物理的特性を有する透明なこはく色の液
体である：25℃での粘度70cps：20℃での比重
0.845；25℃での屈折率1.467；10mmでの蒸留範
囲：160℃まで−４％、160゜ないし210℃−５％、
210゜ないし220℃−74％、220℃より上−17％。 これらの化合物の甘味能力は、それらの甘味料
としての使用法と同じく、上に引用されたヨーロ
ツパ特許文書に記載された方法によつて決定され
る。 本発明は、以下の実施例によつて具体的に説明
される。しかしながら、本発明はこれらの実施例
の特定の細部に限定はされないことは理解されね
ばならない。 これらの実施例において言及されたHPLC（高
性能液体クロマトグラフイー）法には、3.9mm×
30cm、マイクローボンダパツク（micro−
Bondapak）C₁₈カラム〔マサチユーセツツ州
01757ミルフオード市、ウオターズ・アソシエイ
ツ社（Waters Associates，Inc.〕を使用した。
移動相は、９：１酢酸でPH4.8に調整した0.02M
酢酸アンモニウム：アセトニトリルであり；流量
は２ml／分であり；検出器は紫外線、220nmであ
つた。 実施例 １ ３−（Ｌ−アスパルチル−Ｄアラニンアミド）−
２，２，４，４−テトラメチルエタンｐ−トル
エンスルホン酸塩 ３−（Ｄアラニンアミド）２，２，４，４−テ
トラメチルエタン（300g、1.39モル）を、０−５
℃で水（2.5リツトル）に溶解させ、この溶液の
PHを、12N塩酸で9.0に調整した。それから、Ｌ
−アスパルチルＮ−チオカルボンン酸無水物
（292.2g，1.62モル）を、激しくかくはんしなが
ら数回に分けて加え；必要に応じて50％水酸化ナ
トリウム水溶液を添加して、PHを8.5−9.5に保持
した。PHが9.0で安定する間（約90分）、かくはん
と水酸化物の添加を続けた。その後、12N塩酸で
PHを5.0−5.5に調整した。反応混合物をHPLCで
分析すると、約５％の３−（Ｄ−アスパルチル−
Ｄ−アラニンアミド）−２，２，４，４−テトラ
メチルチエタン（保持時間：12.9分）および約５
％の３−（Ｌ−アスパルチル−Ｌ−アスパルチル
−Ｄ−アラニンアミド）−２，２，４，４−テト
ラメチルエタン（保持時間：8.7分）で汚染され
た。90％収率の表題生成物の遊離塩基（保持時
間：15分）、を含有することがわかつた。それか
ら、ｐ−トルエンスルホン酸１水和物（285.3g、
1.5モル）を、１時間にわたつて、数部に分けて
加えた。沈でんした結晶性の１水和物としての表
題生成物を、濾過によつて集め、少量の水で洗浄
し、乾燥させた。単離した純粋な生成物の収量は
567g（78.2％）；融点182−６，であつた。 分析 C₂₁H₃₃O₇N₃S₂・H₂Oとしての 計算値：Ｃ，48.35；Ｈ，6.76；Ｎ，8.05； H₂O，3.45 実測値：Ｃ，47.55；Ｈ，6.48；Ｎ，7.98； H₂O，3.99 ３−（Ｄ−アスパルチル−Ｄ−アラニンアミド）
−２，２，４，４−テトラメチルエタンの10％水
溶液を、１当量のｐ−トルエンスルホン酸１水和
物で処理したときは、２日間冷蔵したときでさ
え、溶液は透明なままであつた。こうして、表題
の塩は、たとえ高濃度で存在したとしても、この
実施例の工程に従つて、水から結晶化させること
によりこの異性体から分離される。 所望ならば、水和物の形の表題塩は、高真空中
五酸化燐上で、脱水が事実上完了するまで（都合
よくは、約16時間）、80゜に加熱することによつて
無水形に変えられる。 実施例 ２ ３−（Ｌ−アスパルチル−Ｄ−アラニンアミド）
−２，２，４，４−テトラメチルエタンベータ
−ナフタレンスルホン酸塩 ｐ−トルエンスルホン酸の代りにベータ−ナフ
タレンスルホン酸を用いて、実施例１の工程を行
なうと、結晶性の表題生成物（１水和物として）
が、71.8％収率；融点178−180で得られた。 分析 C₂₄H₃₃N₃O₇S₂・H₂Oとしての 計算値：Ｃ，51.69；Ｈ，6.33；Ｎ，7.53； H₂O，3.23 実測値：Ｃ，50.83；Ｈ，6.06；Ｎ，7.07； H₂O，3.52 実施例 ３ ３−（Ｌ−アスパルチル−Ｄ−アラニンアミド）
−２，２，４，４−テトラメチルエタンアルフ
ア−ナフタレンスルホン酸塩 ｐ−トルエンスルホン酸の代りに、アルフアナ
フタレンスルホン酸を用いて、実施例１の工程を
行なつて、結晶性表題生成物を、50％収率；融点
200−１で得た。 分析 C₂₄H₃₃N₃O₇S₂としての 計算値：Ｃ，53.41；Ｈ，6.16；Ｎ，7.79 実測値：Ｃ，52.95；Ｈ，6.16；Ｎ，7.61 実施例 ４ ３−（Ｌ−アスパルチル−Ｄ−アラニンアミド）
−２，２，４，４−テトラメチルエタンベンゼ
ンスルホン酸塩 ベンゼンスルホン酸１水和物（2.64g，15ミリ
モル）を、数部に分けて、はげしくかくはんしな
がら30分にわたつて、遊離塩基の形の表題生成物
4.75gを含有する水溶液50mlに加えた。混合物を
さらに３時間かくはんした。分離した表題生成物
（１水和物として）の結晶を、濾過によつて集め
て、少量の水で洗浄し、乾燥させた。収量は、
4.5g（65％）；融点185−８、であつた。 分析 C₂₀H₃₁N₃O₇S₂・H₂Oとしての 計算値：Ｃ，47.32；Ｈ，6.16；Ｎ，8.28； H₂O，3.55 実測値：Ｃ，47.51；Ｈ，6.51；Ｎ，8.31； H₂O，3.70 実施例 ５ ｐ−トルエンスルホン酸塩からの３−（Ｌ−ア
スパルチル−Ｄ−アラニンアミド）−２，２，
４，４−テトラメチルエタンの再生 アンバーライトLA−１（液体陰イオン交換樹
脂；49.2ml）、塩化メチレン（73.8ml）、脱イオン
水（115ml）、および実施例１の表題の塩（１水和
物；23g、44ミリモル）の混合物を１時間かくは
んすると、２つの透明な層が生じた。水性層を炭
素で処理し、濾過によつて透明にし、濃縮して約
32mlとし、０−５℃に冷却して表題生成物を結晶
させた。この結晶を濾過によつて集めて乾燥させ
た。単離された純粋な生成物の収量は、11.3g（70
％）であつた。 実施例 ６ ３−（Ｌ−アスパルチル−Ｄ−アラニンアミド）
−２，２，４，４−テトラメチルエタンｐ−ト
ルエンスルホン酸塩 ３−（Ｄ−アラニンアミド）−２，２，４，４−
テトラメチルエタン（2.25g、10.4ミリモル）を、
塩化メチレン（20ml）に溶解させ；氷酢酸
（0.24g）およびメタノール（0.21ml）を加えた。
この混合物を−20℃まで冷却し、激しくかくはん
しながら、無水Ｌ−アスパラギン酸塩酸塩〔アリ
ヨシ（Ariyoshi）外、Bull.Chem.Soc.Japan，
45，第2208−2209ページ（1973）；0.4g、2.6ミリ
モル〕を加えた。−20℃で30分かくはんした後、
混合物を水（10ml）で反応停止させ、水酸化ナト
リウムの50％水溶液の添加によつてPHを11.0に調
整し、そして各層を分離した。その水性層を塩化
メチレン（10ml）で抽出して未反応のアミドを除
去した。溶液をHPLCで分析すると、表題生成物
（保持時間、15分）とベータ−アスパルチル異性
体（保持時間、14.4分）とを70：30の比率で含有
することがわかつた。この溶液のPHを、12N塩酸
を用いて6.0に調整した後、ｐ−トルエンスルホ
ン酸１水和物（0.5g、3.6ミリモル）を数部に分
けて加え、そして混合物を３時間かくはんした。
分離した結晶性物質（濾過によつて集め、少量の
水で洗浄して乾燥させた）は、実施例１に従つて
製造された物質の性質と一致する性質を有してい
た。HPLC分析は、この生成物が遊離のベータ−
異性体であることを示した。 実施例 ７ １−（Ｌ−アスパルチル−Ｄ−アラニンアミド）
−１，１−ジシクロプロピルメタンｐ−クロロ
ベンゼンスルホン酸塩 ｐ−クロロベンゼンスルホン酸（1.92g，10ミ
リモル）を数部に分け、激しくかくはんしなが
ら、約300mlの水中の粗製の、遊離塩基の形の表
題生成物（3.15g、10ミリモル）の溶液に加えた。
この混合物を炭素で30分間処理し濾過して透明に
し、少容量（〜40ml）まで濃縮し、そして16時間
冷蔵庫内においた。分離した１水和物としての結
晶性表題生成物を濾過によつて集め、少量の氷水
で洗浄し、乾燥させた。収量は、1.6g（32.6％）；
融点146−９℃であつた。 分析 C₂₀H₂₈O₇N₃SCl・H₂Oとしての 計算値：Ｃ，47.29；Ｈ，5.95；Ｎ，8.27； H₂O，3.54 実測値：Ｃ，47.30；Ｈ，5.79；Ｎ，8.41； H₂O，3.59 実施例 ８ １−（Ｌ−アスパルチル−Ｄ−アラニンアミド）
−１，１−ジシクロプロピルメタン３，４−キ
シレンスルホン酸塩 ｐ−クロロベンゼンスルホン酸の代りに３，４
−キシレンスルホン酸を用いて、実施例７の工程
を行なつて、半水和物としての結晶性表題生成物
を14％収率：融点184−９、で得た。 分析 C₂₂H₃₃O₇N₃S・0.5H₂Oとしての 計算値：Ｃ，53.64；Ｈ，6.96；Ｎ，8.53； H₂O，1.83 実測値：Ｃ，53.66；Ｈ，7.01；Ｎ，8.88； H₂O，1.86 実施例 ９ １−（Ｌ−アスパルチル−Ｄ−アラニンアミド）
−１，１−ジシクロプロピルメタン アルフア
−ナフタレンスルホン酸塩 ｐ−クロロベンゼンスルホン酸の代りに、アル
フア−ナフタレンスルホン酸を用いて、実施例７
の工程を行なつて、結晶性の表題生成物を、65％
収率；融点195−８、で得た。 分析 C₂₄H₃₁N₃O₇Sとしての 計算値：Ｃ，57.01；Ｈ，6.18；Ｎ，8.31； H₂O，0.00 実測値：Ｃ，56.44；Ｈ，6.06；Ｎ，8.40； H₂O，0.73 10％の異性体１−（Ｄ−アスパルチル−Ｄ−ア
ラニンアミド）−１，１−ジシクロプロピルメタ
ンで汚染された遊離塩基の形の表題生成物3.0g
を、100mlの水に溶解させた。アルフア−ナフタ
レンスルホン酸（2.3g）を、数部に分け、激しく
かくはんしながら１時間にわたつて加えた。この
結果生ずる溶液を、16時間冷蔵し、結晶性生成物
を濾過によつて回収し、少量の水で洗浄し乾燥さ
せた。HPLC分析は、この表題生成物が、汚染異
性体（表題生成物の保持時間は8.3分であり；ジ
アステレオマーに対する保持時間は6.1分であつ
た）を含まないことを示した。 実施例 10 １−（Ｌ−アスパルチル−Ｄ−アラニンアミド）
−１，１−ジシクロプロピルメタン ベータ−
ナフタレンスルホン酸塩 ｐ−クロロベンゼンスルホン酸に代えて、ベー
タ−ナフタレンスルホン酸を用いて、実施例７の
工程を行なうと、１水和物としての結晶性表題生
成物が、52％収率；融点167−170、で得られた。 分析 C₂₄H₃₁N₃O₇S・H₂Oとしての 計算値：Ｃ，55.05；Ｈ，6.35；Ｎ，8.04； H₂O，3.44 実測値：Ｃ，54.92；Ｈ，6.16；Ｎ，8.09； H₂O，3.45 実施例 11 ３−（Ｌ−アスパルチル−Ｄ−セリンアミド）−
２，２，４，４−テトラメチルエタン ｐ−ト
ルエンスルホン酸塩 ３−（Ｄ−アラニンアミド）−２，２，４，４−
テトラメチルエタンの代わりに、３−（Ｄ−セリ
ンアミド）−２，２，４，４−テトラメチルエタ
ンを用いて実施例１の工程を行なつて、半水和物
としての表題生成物を、78.3％；融点208−210℃
で得た。 分析 C₂₁H₃₃O₈N₃S₂・0.5H₂Oとしての 計算値：Ｃ，47.71；Ｈ，6.48；Ｎ，7.95； H₂O，1.70 実測値：Ｃ，47.48；Ｈ，6.46；Ｎ，8.21； H₂O，1.70 実施例 12 ３−（Ｌ−アスパルチル−Ｄ−アラニンアミド）
−２，２，４，４−テトラメチルエタン１，１
−ジオキシド ｐ−トルエンスルホン酸塩 ｐ−トルエンスルホン酸１水和物（2.1g、11ミ
リモル）を数部に分けて、激しくかくはんしなが
ら、50℃で、水10ml中に遊離塩基の形の表題生成
物（4.0g）、10ミリモル）を含有する溶液に加え
た。その後この混合物を室温まで徐冷した。１水
和物としての表題生成物の結晶化は数分内に始ま
つた。混合物を０℃まで冷却し、約10時間かくは
んして結晶化を完了させた。生成物を濾過によつ
て集め、少量の氷水で洗浄し、そして乾燥させ
た。収量は3.21g（58％）；融点166−９、であつ
た。 分析 C₂₁H₃₃O₉N₃S₂・H₂Oとしての 計算値：Ｃ，45.56；Ｈ，6.37；Ｎ，7.59； H₂O，3.25 実測値：Ｃ，45.60；Ｈ，6.15；Ｎ，7.84； H₂O，3.07 ３−（Ｄ−アラニンアミド）−２，２，４，４−
テトラメチルエタンの代りに、３−（Ｄ−アラニ
ンアミド）−２，２，４，４−テトラメチルエタ
ン１，１−ジオキシドを用いて、実施例１の工程
に従つて同一の結晶性表題生成物を29.3％収率で
得た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式【式】または 【式】 （式中、R₁は水素、塩素またはメチル基であ
   り、R²は水素またはメチル基である） の芳香族スルホン酸との塩の形で、下記のＬ−ア
   スパルチル−Ｄ−アミノ酸ジペプチドアミドを水
   性溶媒から選択的に結晶させることより成る、式 〔式中、Ａは水素またはヒドロキシ基であり、
   Ｒは、 (a) 次式の２，２，４，４−テトラメチル−３−
   チエタニル； (b) 次式のジ（シクロプロピル）メチル；または (c) 次式の１，１−ジオキソ−２，２，４，４−
   テトラメチル−３−チエタニル である〕 のＬ−アスパルチル−Ｄ−アミノ酸ジペプチドア
   ミドの精製または単離方法。 ２ 式 〔式中、Ａは水素またはヒドロキシ基であり、
   Ｒは (a) 次式の２，２，４，４−テトラメチル−３−
   チエタニル； (b) 次式のジ（シクロプロピル）メチル；または (c) 次式の１，１−ジオキソ−２，２，４，４−
   テトラメチル−３−チエタニル である〕 のＬ−アスパルチル−Ｄ−アミノ酸ジペプチドア
   ミドおよび式【式】または 【式】 （式中、R¹は水素、塩素またはメチル基であ
   り、R²は水素またはメチル基である） の芳香族スルホン酸の無水または水和塩。 ３ 芳香族スルホン酸が、ｐ−トルエンスルホン
   酸、ベーターナフタレンスルホン酸、アルフアー
   ナフタレンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸また
   は３，４−ジメチルベンゼンスルホン酸である特
   許請求の範囲第２項に記載の塩。 ４ (a)式 の無水Ｌ−アスパラギン酸の酸付加塩を、式 〔式中、Ａは水素またはヒドロキシ基であつ
   て、Ｒは、 (a) 次式の２，２，４，４−テトラメチル−３−
   チエタニル； (b) 次式のジ（シクロプロピル）メチル；または (c) 次式の１，１−ジオキソ−２，２，４，４−
   テトラメチル−３−チエタニル である〕 のＤ−アミノ酸アミドと反応させること；および (b) この結果生ずるＬ−アスパルチル−Ｄ−アミ
   ノ酸ジペプチドを、式 【式】または【式】 （式中、R¹は水素、メチル基または塩素であ
   りそしてR²は水素またはメチル基である） の芳香族スルホン酸を用いて結晶化させること；
   より成る、上記スルホン酸との酸付加塩の形の、
   式 （式中、ＡおよびＲは先に定義した通りであ
   る） のＬ−アスパルチル−Ｄ−アミノ酸ジペプチドア
   ミドの製造方法。 ５ (a)式 のＬ−アスパルチル Ｎ−チオカルボン酸無水物
   を、水性溶媒中塩基性PHで、式 〔式中、Ａは水素またはヒドロキシ基であり、
   Ｒは、 (a) 次式の２，２，４，４−テトラメチル−３−
   チエタニル； (b) 次式のジ（シクロプロピル）メチル；または (c) 次式の１，１−ジオキソ−２，２，４，４−
   テトラメチル−３−チエタニル である〕 のＤ−アミノ酸アミドと反応させること；および (b) こうして生ずるＬ−アスパルチル−Ｄ−アミ
   ノ酸ジペプチドを、式 【式】または【式】 （式中、R¹は水素、メチル基または塩素であ
   り、R²は水素またはメチル基である） の芳香族スルホン酸で結晶化させること； より成る、上記芳香族スルホン酸との酸付加塩の
   形の、式 （式中、ＡおよびＲは先に定義した通りであ
   る） のＬ−アスパルチル−Ｄ−アミノ酸ジペプチドア
   ミドの製造方法。