JPS63253025A

JPS63253025A - ホスホリパ−ゼａ↓２阻害剤

Info

Publication number: JPS63253025A
Application number: JP8819387A
Authority: JP
Inventors: Teruaki Kozasa; 小篠　輝章; Kenichi Suzuki; 賢一鈴木; Shigeru Miyazaki; 宮崎　繁; Hiroichi Yamamoto; 博一山本; Narimasa Tsunoda; 角田　成正; Hisataka Shikama; 四釜　久隆; Akiko Ota; 明子太田
Original assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Yamanouchi Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1987-04-09
Filing date: 1987-04-09
Publication date: 1988-10-20

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】（産業上の利用分野）本発明は、一般式％式％（式中　Ｒ１は水素原子、塩形成１価カチオンまたは低
級アルキル基　Ｒ２は水素原子またはα−Ｌ−ラムノピ
ラノシル基で示されるラムノピラノシルデカン酸、そのエステルま
たはその塩を有効成分とするホスホリパーゼＡ２阻害剤
に関する。

（従来の技術）上記一般式に包含される化合物の５ちｙ　Ｒ１が水素原
子のものは、ザ　ジャーナル　オブ　アンティバイオテ
ィクス　第２４巻　８５５頁　１９７１年（Ｊ、　Ａｎ
ｔｉｂｉｏｔ、、　２４．８５５（１９７１））に記載
された公知物である。同文献には、これらの化合物が抗
菌活性および抗ウィルス活性を示すことを記載している
。

（解決しようとする問題点および解決手段）本発明者等
は、上記ラムノピラノシル　デカン酸、そのエステルま
たはその塩の薬理活性を検討したところ、上記一般式（
Ｉ）で示される化合物が、ホスホリパーゼＡ２阻害活性
を有し。

且つ毒性が低いことを見出した。したがって。

これらの化合物は、ホスホリパーゼＡ、阻害剤ホスホリ
パーゼ阻害活性に起因する抗炎油剤として使用できるも
のである。

なお、上記一般式に包含される化合物の代表的なものは
以下の通りである。

β−（β−（２−Ｏ−α−Ｌ−ラムノピラノシルオキシ
）デカノイルオキシ）デカン酸（化合物Ａ）　′ β−（β−（２−〇−α−Ｌ−ラムノピラノシルーα−
Ｌ−ラムノピラノシルオキシ）デカノイルオキシ）デカ
ン酸（化合物Ｂ） β−（β−（２−０−α−Ｌ−ラムノピラノシルオキシ
）デカノイルオキシ）デカン酸　メチルエステル（化合
物Ｃ） β−（β−（２−０−α−Ｌ−ラムノピラノシルーα−
Ｌ−ラムノピラノシルオキシ）デカノイルオキシ）デカ
ン酸　メチルエステル（化合物Ｄ）本発明者等は、上記化合物ＡおよびＢを沖縄県本部町附
近の海砂より採取したシュードモナス中エスピー（Ｐｓ
ｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ、　）　　Ｑ　　７４　（微
工研菌寄第９２２０号）株の培養液より分離し、また。

化合物ＣおよびＤを夫々化合物ＡおよびＢをエステル化
することにより製造した。これらの製造法を後述の製造
例で説明する。

（実施例）つぎに７本発明医薬の有効成分について、その薬理作用
および毒性等を試験方法と共に示す。

ホスホリパーゼＡ、阻害活性；ホスホリパーゼＡ、阻害活性；（イ）試験方法本発明化合物のホスホリパーゼＡ２　に対する阻害作用
はＢ、　Ｒｏｔｈｈｕｔらの方法に基づいて測定した　
（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｐｈｙｓｉ
ｃａｌ　ＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ
ｓ、１１７．Ｊ６３８７８　８８４（１９８３）参照）
。

測定方法は以下の通りである。ウシ血清アルブミン、塩
化カルシウムを含む１５０　ｍＭ　）　！Ｊス緩衝液（
ｐＨ８）に本化合物、ブタ膵臓より得たホスホリパーゼ
Ａ、、　３Ｈ−オレイン酸でラベルした大腸菌菌体を加
えて、６０℃１０分間反応させた。

本化合物のホスホリパーゼＡ２阻害活性を表１に示す。

（ロ）結果表１毒性試験：化合化ＡおよびＢ　　　　　　　　をマウス腹腔内に投
与した場合の急性毒性（ＬＤ５０）は。

夫々４００ｒｒ＠／ｋｇ以上および１１７．５　ｍｇ／
ｋｇ　−ｃ−ある。

（効果）本発明医薬は、ホスホリパーゼＡ、阻害活性を有してお
り、ホスホリパーゼＡ２阻害活性に基づき、抗炎症作用
、抗アレルギー作用を有するから、抗炎症剤２抗アレル
ギー剤あるいは急性膵炎治療剤等として有用である。

本発明の医薬は２通常製剤用担体、賦形剤などと混合し
、経口的または非経口的に投与される。投与量は、投与
対象、投与ルート、症状等によって異なるが９通常成人
−日当り経口投与で１００〜１０００　ｒｆｌｇである
。

（製造例）つぎに２本発明医薬の有効成分の製造例を参考として示
す。

化合物ＡおよびＢの製造例；（イ）培養液の調製クルコース１％、ポテトスターチ２．０％。

イーストエクストラクト０．５％、ポリペプトン０．５
％、炭酸カルシウム０．４％を含む培地（滅菌前ｐＨ７
，０）　６０　ｍｌを５００　ｍｌ容三角フラスコに分
注し、常法により滅菌した後、ベネット寒天培地上に生
育させたシュードモナス・エスピーＱ−７４（微工研菌
寄第９２２０号）株の菌体をかきとって、接種し、毎分
２００回転のロータリーシェーカーで２８°Ｃ２７２時
間振盪培養を行う。

この培養液２　ｍｌずつを、同様に調製、滅菌した培地
１０本に接種し、同様に調製、滅菌した培地１２を分に
、上記培養液を２　ｒｎｌずつ接種し、同条件で６４時
間振盪培養を行う。得られた培養液はｐＨ８，７を示す
。

なお１本培饗液の調製に使用したＱ−７４株は、沖縄県
本部町附近の海砂より分離された細菌で、その菌学的性
状はつぎの通りである。

（１）形態肉汁寒天平板上で３３°Ｇ、　５日間培養した細胞は、
０．４〜１．０　Ｘ　０．８〜１．８μｍの桿菌で、多
形成は特に認められない。胞子を形成せず、鞭毛（極単
毛）による運動性が認められる。ダラム染色は陰性で、
抗酸性は示さない。

（２）　　各種培地における生育状態 ■　肉汁寒天培地：コロニーは半球形でなめらかに隆起
し９辺縁は、平滑で円形を呈す。顕著な粘調性および遊走性は認められず、拡散性色素の生成も認められない。

■　肉汁液体培養：培地全体が濁る。沈殿も認められる
が、菌膜は形成しない。

■　肉汁ゼラチン穿刺培養：　生育は良い方である。

明白な液化作用を示す。

■　リドマスミルク：凝固、ペプトン化共に陽性、培地
は酸性となる。

（３）生理的性質 ■硝酸塩の還元：陽性 ■脱　窒　反　応：陰性 ■　ＭＲテ　　ス　　ト　：　陰性 ■　ｖｐ　　　テ　　ス　　ト　：　陰性３）インドー
ルの生成：陰性 ■硫化水素の生成：陰性 ■デンプンの加水分解：陽性 ■クエン酸の利用：陽性（シモンズの培地） ■無機窒素源の利用（ａｌ硝酸カリウム二二階陽性ｂ）　　硫酸アンモニウム二階陽性［相］色素の生成キングＡ培地：陰性キングＢ培地：螢光性水溶性色素の産生が認められる。

０　ウ　　し　　ア　　−　　ゼ：　陰性０オキシダー
ゼ：陽性０　　カ　　　タ　　　ラ　　　−　　　ゼ　：　陽性
■　生　　育　　温　　度：　１０℃〜４０’Ｃ至適温
度：１５至適子°Ｃ［相］　生　　　育　　　　ｐＨ：５〜８．０至　　適
　　ｐＨ：６〜７，０［相］嫌気条件での生育：生育できない＠　ＯＦ　テ　
ス　ト：酸化的に糖を分解する。

［相］栄養要求性：なし ◎アルギニン分解反応：陰性［相］　ポリβ−ハイドロキシブチレートの菌体内蓄積：陰性＠　　ＮａＣ１加肉汁培地での生育：　６％で生育する
が９％で生育しない。

■炭素源の利用性Ｌ−アラビノース　　　　　＋　　　　　　　−Ｄ−キ
シロース　　　　　　＋　　　　　　　−Ｄ−グルコー
ス　　　　　　＋　　　　　　＋Ｄ−マンノース　　　
　　　　　　　　　　　士り−フラクトース　　　　　
＋　　　　　　　−Ｄ−ガラクトース　　　　　−− マルトース　　　　　　　　＋　　　　　　−シュクロ
ース　　　　　　　＋　　　　　　−ラクトース　　　
　　　　　＋　　　　　　　−トレハトース　　　　　
　　　＋　　　　　　　−Ｄ−マンニット　　　　　　
　十　　　　　　　−グリセリン　　　　　　　十　　
　　　−デンプン　　　　　　　　　＋　　　　　　　
−サリシン　　　　　　　　　十　　　　　　　−以上
の菌学的性質を有するＱ−７４株について。

パーシーズ−マニュアル嗜オプ・デターミネイティブ・
バクテリオロジー第８版（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓＭａｎｎａ
ｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒ
ｉＯ！ｏｇｙ、　８　ｔｈ　ｅｄ、。

１９７５）、バーシーズ・マニュアルｅオプ・システマ
ティック・バクテリオロジー第１巻（Ｂｅｒｇｅ＾Ｍａ
ｎｕａｌ　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ　Ｂａｃｔｒｉ
ｏｌｎｇｙ　ｖｏｌ　１．　１９８４　）およびその他
の文献により検索すると、Ｑ−７４株は、ダラム陰性で
、胞子を形成せず、単極系により運動し、螢光性の水溶
性色素（フルオレッセイン）を産生じ、絶対好気性で。

カタラーゼ陽性、かつＯＦテストが酸化型（０型）であ
ることなどから、シュドモナス（Ｐｓｅｎｄｏｍｏｎａ
ｓ　）属に属すると同定された。しかし既知菌種のうち
２本菌株と性質の一致する菌種は見あたらないため２本
菌株をシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　）属
の新菌種と認め、シュードモナス・エスピー（Ｐｓｅｕ
ｄｏｍｏｎａｓ　ｓｐ、　）　Ｑ　−７４株と命名した
。なお２本菌株は、工業技術院微生物工業技術研究所（
ＦＢＩ）に受託番号微工研菌寄第９２２０号として寄託
されている。

（ロ）化合物ＡおよびＢの分離培溶液１２１を遠心分離し、上澄液を希塩酸でｐＨ２，
８に調整層、酢酸エチル１８ｔで抽出する。抽出液を５
６の水で洗浄后、酢酸エチル層を減圧下濃縮する。濃縮
液をシリカゲルカラムクＯマドグラフィー　（Ｍｅｒｋ
社、　Ｋｉｅｓｅ１ｇｅ１６０　）　５００　ｍｌに供
０．クロロホルム：メタノール酢酸（４０：　１　：　
０．２　）で溶出する。活性画分（Ｉ）及び（ｎ）画分
を各々集め濃縮する。活性画分（Ｉ）は、　　ＬＨ−２
０（１４０ｍｌ　）クロマトグラフィーに供し活性画分
を集める。更にシリカゲル（Ｍｅｒｋ社、　Ｋｉｅｓｅ
ｌｇｃｌ　６０　）　１３０　ｍｌのカラムクロマトグ
ラフィーに供し、活性画分を集め純粋な化合物Ａ１．５
３ｇを得た。活性画分（ＩＩ）をメタノールに溶かし、
エーテルを加えて沈殿を得る。この沈殿を沢取し、酢酸
エチル−ｎ−ヘキサンより結晶化させる。結晶を沢取し
、減圧上乾燥させると、純粋な化合物８１．５８ｇを得
た。

化合物ＡおよびＢの物理化学的性質化合物Ａ　　　化合物Ｂ ■融点　　　　　油状物　　　８６℃ ■分子量　　　　　　５０４　　　　６５０■分子式　
　　　　ＣｚｅＨ４ｓＯｏ　　　Ｃ５ｘＨｓｔｒＯ＋ｓ
■　紫外部吸収スペクトル末端吸収　　　末端吸収（メ
タノール） ■呈色反応陽性　　ナフトレゾルシン−燐酸　　　同左陰性　ニン
ヒドリン　　　　同左フェーリング　　　　同左 ■　赤外吸収スペクトル（ＩＲ）　　　第１図　　第４
図■　水素−核磁気共鳴スペクトル　第２図　　第５図
（’Ｈ−ＮＭＲ）　　　　　　　　　（重り０ＲｄｙＬ
ｊａ中）（重ンタノーツ沖）■　炭素−核磁気共鳴スペ
））ル　第３図　　　第６図（重りロ叶し４）（重メタ
ノーツＬ４’）以上の物理化学的性質より化合物Ａおよ
びＢの構造は次の通りである。

ＣＨ５ＣＣＨ２）６ＣＨＣＨ２ＣＯＯＨδＨ３化合物Ａ δＨ３化合物Ｂ０→　化合物Ｃの製造例ＣＨｓ　（ＣＨ２）ａ　ＣＨＣＨ２Ｃｏｏ　ＣＨ３Ｃ＝
０さＨ２ＣＨ−０−Ｒｈａｍ（ＣＨ２）ａ化合物Ａ１２５■を酢酸エチル５ｍｌに溶かしジアゾメ
タンのエーテル溶液を加える。反応終了後反応液を希重
ソウ溶液次いで水で洗浄後。

減圧乾固するＯこれをＰｒｅｐａｒａｌｉｖｅ　５ｉ０
２　（ＭｅｒｋＫｉｅｓｅｌｇｓｌ　６０　）に戻し、
クロロホルム−メタノール：酢酸で展開する。目的画分
を掻きとり。

メタノールで溶出する。溶出液を減圧濃縮後酢酸エチル
に溶解し水洗する。酢酸エチル層を減圧乾固するとβ−
（β−（２−〇−α−Ｌ−ラムノピラノシルオキシ）デ
カノイル）デカン酸メチルエステル７３ｍｇを得た。

■　分子量　　５１８　（ＦＡＢ　−Ｍｅｓｓ　）■分
子式　　Ｃ２□１（５００゜ ■　ｌｌ（（ＫＢｒ錠）　’、　　１７３５　　ｃｒｒ
ｒ’■　１Ｈ−ＮＭＲ（重クロロホルム中）５．２４ｐ
ｐｍ（ＩＨ）、４．９０ｐｐｍ（ＩＨ）、４．１９ｐｐ
ｍ（ＩＨ）。

３．８６ｐｐｍ（ＬＨ）、３．８６〜３．７２ｐｐｍ（
２Ｈ）。

３．６９ｐｐｍ（３Ｈ）、３．３６ｐｐｍ（ＩＨ）、２
．７６〜２．４１ｐｐｍ（４Ｈ）、１．６６〜１．２７
ｐｐｍ、０．８８ｐｐｍ（６Ｈ）に）化合物りの製造例ＣＩ（、（ＣＨＩ）、　ＣＨＣＨ，Ｃ０ＯＨ−ＯＣＨ２ＣＨ−０−Ｒｈａｍ　−０−Ｒｈａｍ（ＣＨ２）６さＨ３化合物Ｂ】７０■をメタノール−酢酸エチル（１：１０
）５ｍ４に溶解し、ジアゾメタンのエーテル溶液を加え
る。反応終了後、希重曹溶液で２回洗浄する。次いで水
洗する。酢酸エチル層を減圧下濃縮する。濃縮液をプレ
パラティブ　シリカゲルクロマトグラフィー（展開溶媒
クロロホルム：メタノール６：１）に供す。目的画分を
掻きとり、メタノールで溶出する。溶出液を減圧下濃縮
する。濃縮液を酢酸エチルで抽出する。酢酸エチル抽出
液を減圧濃縮乾固すると純粋な（ＩＩ）のメチルエチル
１１４　ｆｆ１ｇを得た。

■分子量　　６６４ ■分子式　　Ｃｓ５ＨｅｏＯ＋ｓ ■　’Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ、中）５．２５ｐｐｍ（ＩＨ）、４．９９ｐｐｒｎ（ＩＨ）、
４．９５ｐｐｒｎ（ＩＨ）。

４．２２ｐｐｍ（ＩＨ）、４．１２ｐｐｍ（ＩＨ）、３
．８３〜３．６５ｐｐｒｎ（３Ｈ）、３．７４ｐｐｍ（
３Ｈ）、３．５５ｐｐｍ（ＩＨ）。

３．４２ｐｐｍ（ＩＨ）、２．７０〜２．４８ｐｐｍ（
４Ｈ）。

１．６７〜１．３２ｐｐｍ（３０Ｈ）、０．９５ｐｐｍ
（６Ｈ）なお、化合物ＡおよびＢを下記方法で加水分解
すると、３−オキシデカン酸１個が除去された対応する
化合物が得られる。

化合物への加水分解物：ＣＨｓ　（ＣＨ２）６　ＣＨ−ＣＨ２Ｃ０ＯＨ化合物Ａ
１００ｍｇをＩＮ−苛性ソーダ２ｍｌ、メタノール１　
ｍｌに溶解し、５０℃２時間反応させる。メタノールを
除去後１反応物を塩酸酸性とし、エーテル５　ｒｎｌで
２回抽出する。抽出液を水洗後、濃縮する。濃縮液をプ
レバラティプＴＬＣ（Ｍｅｒｋ　Ｋｉｅｓｅｌｇｅｌ　
６０　）に供しりｏｏホルム：メタノール：酢酸（１２
：Ｉ：０．２）目的画分を掻きとりメタノールで溶出す
る。メタノールを減圧下濃縮后、残渣を酢酸エチルに溶
解し、水洗する。酢酸エチル層を減圧下濃縮すると、β
−（２−０−α−Ｌ−ラムノピラノシルオキシ）デカン
酸２３ｍｇを得た。

■分子量＝３３４ ■分子式　Ｃｌ６Ｈ３００？ ■　ＩＲ（ＫＢｒ−Ｄｉｓｋ　）　：　１７０５ｃｍ７
’　（ＣＯＯＨ）。

１０４３ｃｍ″−’（ｃ−ｏ変角）４．１４ｐｐｍ（ＩＨ）、　３．８９ｐｐｍｌＨ３，６
８〜３．７３ｐｐｍ（２Ｈ）　＋　３．８４ｐｐｍ（Ｉ
Ｈ）　＋２．４０〜２．５５ｐｐｍ（２Ｈ）　、　１．
６８〜１．２８ｐｐｍ（１５Ｈ）、　０．８８ｐｐｍ　
ｔｒｊｐ、　（３Ｈ）■　［α］甘せ６５°Ｃ（Ｃ＝１
．　　メタノール）化合物Ｂの加水分解物：ＯＲ化合物Ｂ１２５■をＩＮ−苛性ンーダ３　ｍｌに溶解し
、室温２０時間反応させる。ＴＨＦを減圧除去後、酢酸
エチルを加え酢酸エチル可溶分を除去する。水層をＤｏ
ｗｅｘ　５０　（Ｈ”）　３　ｍｌに通導させる。

次いで水６　ｍｌで洗浄する。通過液洗浄液を合わせ凍
乾すると、β−（２−０−α−Ｌ−ラムノピラノシルー
α−Ｌ−ラムノピラノシルオキシ）デカン酸の白色粉末
２８ｒｒ＠を得た。

■分子量　４８０　（ＦＡＢ　−Ｍａｓｓ　）■分子式
　Ｃｏ）Ｌｏｏ、Ｉ ■　［α］Ｄ　　−５６（Ｃ＝１．メタノール）■Ｈ−
ＮＭＲ：　（重メタノール）４．９３ｐｐｍ（ＩＨ）、　４．８９ｐｐｍ（ＩＨ）、
　４．０９ｐｐｍ（ＩＨ）ｔ３．９７ｐｐｍ（ＩＨ）　
＊　３．７５〜３．６３ｐｐｍ（４Ｈ）　＋３．４０〜
３．３０ｐｐｍ（２Ｈ）　、　２．５０〜２．４８ｐｐ
ｍ（２Ｈ）　。

１．７０〜１．２２ｐｐｍ（］　８Ｈ）　、　０．９０
ｐｐｍ（３Ｈ）■ＩＲ（ＫＢｒ錠）　：　　１７１０ｃ
ｍ−’こうして得られた゛化合物ＡおよびＢの加水分解
物のホスホリパーゼＡ２阻害活性（試験方法は前記と同
じ）は次表２の通りであった。

表　　　２

【図面の簡単な説明】

第１図は、化合物Ａの赤外線吸収スペクトルを示す。第２図は、化合物Ａの水素−核磁気共鳴スペクトルを示
す。第３図は、化合物Ａの炭素−核磁気共鳴スペクトルを示
す。第４図は、化合物Ｂの赤外線吸収スペクトルを示す。第５図は、化合物Ｂの水素核磁気共鳴スペクトルを示す。第６図は、化合物Ｂの炭素核磁気共鳴スペクトルを示す。第１図ａ　ｍ　３０００２５００２０００１８００１６００１
４００１２００１ＱＯＯ８００６００４００２００９８
７６５４３２１Ｑ第３図第４図４αＸ）３５００３ＣＯＯ２５００２０００１８）０１
６００１４００　＋２００１αＸ）ＥＸχ）６００４０
０第５図

Claims

【特許請求の範囲】１、一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒ＾１はは水素原子、塩形成１価カチオンまた
は低級アルキル基を、Ｒ＾２は水素原子またはα−Ｌ−ラムノピラノシル基を意味する。）で示されるラムノピラノシルデカン酸、そのエステルま
たはその塩を有効成分とするホスホリパーゼＡ＿２阻害
剤。２、抗炎消剤である特許請求の範囲第１項記載のホスホ
リパーゼＡ＿２阻害剤。