JPH03188098A - 抗生物質プラスバシン - Google Patents
抗生物質プラスバシンInfo
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- JPH03188098A JPH03188098A JP1262634A JP26263489A JPH03188098A JP H03188098 A JPH03188098 A JP H03188098A JP 1262634 A JP1262634 A JP 1262634A JP 26263489 A JP26263489 A JP 26263489A JP H03188098 A JPH03188098 A JP H03188098A
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- culture
- growth
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/02—Preparation of peptides or proteins having a known sequence of two or more amino acids, e.g. glutathione
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は式：
（式中、ＸはＬ−ＨｙＰｒｏまたはＬ−Ｐｒｏ。
Ｒは−ＣＨ５または−ＣＨ（ＣＨｓ）＊、ｎは９〜１２
の整数を表わす、） で示される化合物またはその塩。
の整数を表わす、） で示される化合物またはその塩。
（２）請求項１記載のｎが９．１０または１２である請
求項１記載の化合物またはその塩。
求項１記載の化合物またはその塩。
（式中、
ＸはＬ−ＨｙＰｒｏまたはＬ−Ｐｒｏ。
Ｒは−Ｃ１，または−ＣＨ（ＣＨｓ）ｍ、ｎは９〜１２
の整数を表わす、） で表わされる化合物またはその塩、その製造方法ならび
にその産生菌に関する。
の整数を表わす、） で表わされる化合物またはその塩、その製造方法ならび
にその産生菌に関する。
更米韮豊
最近の抗生物質汎用に伴って、多剤耐性菌、特に、メチ
シリン耐性菌が臨床上問題となってきている。このメチ
シリン耐性菌は、メチシリンに対して耐性を示すだけで
はなく、アミノグリコシド系抗生物質、テトラサイクリ
ン系抗生物質、セフェム系抗生物質、ペニシリン系抗生
物質、カルバペネム系抗生物質、マクロライド系抗生物
質など多くの抗生物質に対して耐性を示す、従って、こ
のメチシリン耐性菌に対してすぐれた抗菌作用を示す化
合物が待望されていた。
シリン耐性菌が臨床上問題となってきている。このメチ
シリン耐性菌は、メチシリンに対して耐性を示すだけで
はなく、アミノグリコシド系抗生物質、テトラサイクリ
ン系抗生物質、セフェム系抗生物質、ペニシリン系抗生
物質、カルバペネム系抗生物質、マクロライド系抗生物
質など多くの抗生物質に対して耐性を示す、従って、こ
のメチシリン耐性菌に対してすぐれた抗菌作用を示す化
合物が待望されていた。
本発明化合物のような、リボペプチド系構造をもつ抗生
物質としては、ダプトマイシン（特開昭５５−９２３５
３）が挙げられるが、構造的には異なる。
物質としては、ダプトマイシン（特開昭５５−９２３５
３）が挙げられるが、構造的には異なる。
明が しようとする
現在、臨床上メチシリン耐性菌による感染症が問題とな
ってきており、これらに対して優れた抗菌作用を持つ化
合物が求められていた０本発明化合物は、このメチシリ
ン耐性菌に、特にメチシリン耐性ブドウ球菌に対して強
い抗菌作用を有するので、医薬品の拡大に大きく貢献で
きる。
ってきており、これらに対して優れた抗菌作用を持つ化
合物が求められていた０本発明化合物は、このメチシリ
ン耐性菌に、特にメチシリン耐性ブドウ球菌に対して強
い抗菌作用を有するので、医薬品の拡大に大きく貢献で
きる。
するための 段
本発明者らは、シュードモナス属に属する菌株が式：
（式中、ＸはＬ−ＨｙＰｒｏまたはＬ−Ｐｒｏ、Ｒは−
ＣＨ５または−ＣＨ（ＣＨａ）イｎは９〜１２の整数を
表わす、） で示される、メチシリン耐性菌に対して強い抗菌活性を
有する化合物を産生ずることを見出した。
ＣＨ５または−ＣＨ（ＣＨａ）イｎは９〜１２の整数を
表わす、） で示される、メチシリン耐性菌に対して強い抗菌活性を
有する化合物を産生ずることを見出した。
メチシリン耐性黄色ブドウ球菌は多くの抗菌物質に交差
耐性を示すことから、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌に
確実に有効な抗菌物質を提供することは、極めて重要な
ことである０本物質はこの目的に沿うものであり、有用
性は高い。
耐性を示すことから、メチシリン耐性黄色ブドウ球菌に
確実に有効な抗菌物質を提供することは、極めて重要な
ことである０本物質はこの目的に沿うものであり、有用
性は高い。
上記化合物において、式中、ＸがＬ−ＨｙＰｒｏ、ｎが
１Ｏ１Ｒが−ＣＨ１である化合物をプラスバレンＡ１８
式中、ＸがＬ−ＨｙＰｒｏ、ｎが９、Ｒが−ＣＨ（ＣＨ
ｓ）ｍである化合物をブラスバシンＡ目式中、ＸがＬ−
ＨｙＰｒｏ、ｎが１０、Ｒが−ＣＩ（ＣＨｍ）＊である
化合物をブラスバシンＡｓ：式中、ＸがＬ−ＨｙＰｒｏ
、ｎが１２、Ｒが−ＣＨ，である化合物をブラスバシン
Ａ４；式中、ＸがＬ−ＰｒｏＳｎが１０、Ｒが−ＣＨａ
である化合物をブラスバシンＢｌ；式中、ＸがＬ−Ｐｒ
ｏｓｎが９、Ｒが−ＣＭ（ＣＨｓ）＊である化合物をブ
ラスバシンＢ、；式中、ＸがＬ−Ｐｒｏ、ｎが１０、Ｒ
が−ＣＩ（ＣＨｓ）＊である化合物をブラスバシンＢｓ
：式中、ＸがＬ−Ｐｒｏ、ｎが１２、Ｒが−ＣＬである
化合物をプラスバシンＢ、と命名した０本発明はこれら
の化合物だけでなく、その塩も包含する。
１Ｏ１Ｒが−ＣＨ１である化合物をプラスバレンＡ１８
式中、ＸがＬ−ＨｙＰｒｏ、ｎが９、Ｒが−ＣＨ（ＣＨ
ｓ）ｍである化合物をブラスバシンＡ目式中、ＸがＬ−
ＨｙＰｒｏ、ｎが１０、Ｒが−ＣＩ（ＣＨｍ）＊である
化合物をブラスバシンＡｓ：式中、ＸがＬ−ＨｙＰｒｏ
、ｎが１２、Ｒが−ＣＨ，である化合物をブラスバシン
Ａ４；式中、ＸがＬ−ＰｒｏＳｎが１０、Ｒが−ＣＨａ
である化合物をブラスバシンＢｌ；式中、ＸがＬ−Ｐｒ
ｏｓｎが９、Ｒが−ＣＭ（ＣＨｓ）＊である化合物をブ
ラスバシンＢ、；式中、ＸがＬ−Ｐｒｏ、ｎが１０、Ｒ
が−ＣＩ（ＣＨｓ）＊である化合物をブラスバシンＢｓ
：式中、ＸがＬ−Ｐｒｏ、ｎが１２、Ｒが−ＣＬである
化合物をプラスバシンＢ、と命名した０本発明はこれら
の化合物だけでなく、その塩も包含する。
塩としては、リチウム、カリウム、ナトリウムなどのア
ルカリ金属、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ
土類金属または塩酸、硫酸、硝。
ルカリ金属、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ
土類金属または塩酸、硫酸、硝。
醜、リン酸、臭化水素酸などの無機酸および酢酸、シュ
ウ酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸、リンゴ酸、ア
ジピン酸、フハク酸、フマル酸などの有機酸との塩が挙
げられる。
ウ酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸、リンゴ酸、ア
ジピン酸、フハク酸、フマル酸などの有機酸との塩が挙
げられる。
なお、本明細書中で言うブラスバシンとは、主に上記の
８化合物のうちのいずれか１つを意味するが、場合によ
り、全ての化合物を指す。
８化合物のうちのいずれか１つを意味するが、場合によ
り、全ての化合物を指す。
なお、上記で使用した略語について説明する。
Ｌ−Ｈｙ Ｐ ｒ ｏ ：Ｌ−トランス−３−ヒドロキ
シプロノン Ｄ−ＨｙＡｓｐ：Ｄ−トレオーβ−ヒドロキシアスパラ
ギン酸 Ｌ−ＨｙＡ＠ｐ：Ｌ−トレイ−β−ヒドロキシアスパラ
ギン酸 ａＴｈｒニアロートレオニン （以下余白） 以下に本発明の物理化学的性状を示す。
シプロノン Ｄ−ＨｙＡｓｐ：Ｄ−トレオーβ−ヒドロキシアスパラ
ギン酸 Ｌ−ＨｙＡ＠ｐ：Ｌ−トレイ−β−ヒドロキシアスパラ
ギン酸 ａＴｈｒニアロートレオニン （以下余白） 以下に本発明の物理化学的性状を示す。
・物理化学的性質
性質：ブラスバシンＡ、〜Ａ４およびＢ、〜Ｂ、はお互
いに極めて類似の性状を示し、両性物質で、塩酸塩が無
色の粉末として得られる。
いに極めて類似の性状を示し、両性物質で、塩酸塩が無
色の粉末として得られる。
溶解性：各塩酸塩はメタノール、ジメチルスルホキサイ
ドには易溶、エタノールには僅かに溶解し、アセトン、
酢酸エチル、クロロホルムなどには不溶である。また、
純水には難溶であるが、アルカリ性の水には可溶である
。
ドには易溶、エタノールには僅かに溶解し、アセトン、
酢酸エチル、クロロホルムなどには不溶である。また、
純水には難溶であるが、アルカリ性の水には可溶である
。
ＨＰＬＣ： ＰＢ−６２５０の各成分はＴＩ、Ｃ（薄層
クロマトグラフィー）では分離せず、ＨＰＬＣ（高速液
体クロマトグラフィー）によって分離される。ＨＰＬＣ
の条件および溶出容量を表１に示す。
クロマトグラフィー）では分離せず、ＨＰＬＣ（高速液
体クロマトグラフィー）によって分離される。ＨＰＬＣ
の条件および溶出容量を表１に示す。
ＨＰＬＣの分析条件
クロマトグラム１
カラム：ウルトロン７ＣＮ ４．８Ｘ２５０ｍ膳移動
層ニアセトニトリル−５０ｍＭ硫酸ナトリウムを含む５
０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ２，２（２５ニア５） 流速：１．５７５論１／分 検出：ＵＶ ２２０（Ｉｌｌ クロマトグラム２ カラム：ヌクレオシル５Ｃ１８４，６Ｘ１５０ｍｍ移動
層ニアセトニトリル−５〇−硫酸ナトリウムを含む５０
ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７，５（３４：６６） 流速： １．５７５ ｍｌ／分 検出：ＵＶ ２２０ｎｍ （以下余白） 呈色反応 ニンヒドリン反応：陰性 坂口反応：陽性 元素分析 プラスバシンＡ！の分子式はナトリウム塩の元素分析値
および塩酸塩についての高分解能質量分析により、Ｃ，
、Ｈ，、Ｎ、ＩＯ，。と決定きれた０元素分析の計算値
はＣａｓＨａ＊ＯｓｅＮ ａ ’ ＨｍＯとしてのもの
である。
層ニアセトニトリル−５０ｍＭ硫酸ナトリウムを含む５
０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ２，２（２５ニア５） 流速：１．５７５論１／分 検出：ＵＶ ２２０（Ｉｌｌ クロマトグラム２ カラム：ヌクレオシル５Ｃ１８４，６Ｘ１５０ｍｍ移動
層ニアセトニトリル−５〇−硫酸ナトリウムを含む５０
ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７，５（３４：６６） 流速： １．５７５ ｍｌ／分 検出：ＵＶ ２２０ｎｍ （以下余白） 呈色反応 ニンヒドリン反応：陰性 坂口反応：陽性 元素分析 プラスバシンＡ！の分子式はナトリウム塩の元素分析値
および塩酸塩についての高分解能質量分析により、Ｃ，
、Ｈ，、Ｎ、ＩＯ，。と決定きれた０元素分析の計算値
はＣａｓＨａ＊ＯｓｅＮ ａ ’ ＨｍＯとしてのもの
である。
分析値（Ｘ）： Ｃ，４９，５４； Ｈ，７，０９；
Ｎ、１２．７６； Ｎａ、１．９１計算値（Ｘ）’ Ｃ
，４９，７０； Ｈ，６，９８； Ｎ、１３．０１；
Ｎａ、１．９４質量分析： ｍ／ｚ １１４４．５７３
５ （ＭＨ”）プラスバシンＡ、以外の成分については
、高分解能質量分析の分析値から以下のように決定きれ
た。
Ｎ、１２．７６； Ｎａ、１．９１計算値（Ｘ）’ Ｃ
，４９，７０； Ｈ，６，９８； Ｎ、１３．０１；
Ｎａ、１．９４質量分析： ｍ／ｚ １１４４．５７３
５ （ＭＨ”）プラスバシンＡ、以外の成分については
、高分解能質量分析の分析値から以下のように決定きれ
た。
プラスバシンＡ。
分子式： Ｃａ５ＨｔｌＮｌｌＯ１１
質量分析： ｍ／ ｚ １１３０．５５６９ （ＭＨ”
）プラスバシンＢ。
）プラスバシンＢ。
分子式： ＣａａＨｔｅＮ＋＋Ｏ＋ｅ
質量分析： ｍ／ ｚ １１１４．５６１４ （ＭＷ”
）プラスバシンＢ。
）プラスバシンＢ。
分子式： Ｃ４１ＨａｌＮｌｌＯ１＊
質量分析： ｍ／ｚ １１２８．５７９６ （ＭＨ”）
プラスバシンＡ。
プラスバシンＡ。
分子式： Ｃｓ ｍ Ｈａ ｓ Ｎ ＋ ＩＯｘ ＊質
量分析： ｍ／ ｚ １１５８．５８８３ （ＭＨ”）
プラスバシンＢ。
量分析： ｍ／ ｚ １１５８．５８８３ （ＭＨ”）
プラスバシンＢ。
分子式：Ｃ８゜ＨＩｊＮＩＩＯＩＩ
質量分析： ｍ／ ｚ １１４２．５９４３ （ＭＨ”
）ブラスバシンＡ４ 分子式： Ｃｓ ｅ Ｈａ ＊ Ｎ ＩＩＯｔ ｓ質量
分析： ｍ／ｚ １１５８．５８９３ （ＭＨ”）プラ
スバシンＢ４ 分子式： Ｃａ ｅ Ｈｓ ｓ Ｎ ＋ ｒ Ｏｒ ｅ
質量分析： ｍ／ ｚ １１４２．５９３４ （ＭＨ”
）プラスバシンＡ、以外の元素分析を行なっていないが
、これは高分解能質量分析による値から分子式が決定で
き、元素分析を行なう必要がない。
）ブラスバシンＡ４ 分子式： Ｃｓ ｅ Ｈａ ＊ Ｎ ＩＩＯｔ ｓ質量
分析： ｍ／ｚ １１５８．５８９３ （ＭＨ”）プラ
スバシンＢ４ 分子式： Ｃａ ｅ Ｈｓ ｓ Ｎ ＋ ｒ Ｏｒ ｅ
質量分析： ｍ／ ｚ １１４２．５９３４ （ＭＨ”
）プラスバシンＡ、以外の元素分析を行なっていないが
、これは高分解能質量分析による値から分子式が決定で
き、元素分析を行なう必要がない。
構成アミノ酸および構成脂肪酸：
各成分を定沸点塩酸、１１０℃、２０時間、加水分解し
、アミノ酸自動分析機で分析すると、表２に示すアミノ
酸が検出された。また、定沸点塩酸は１１０°Ｃ，４時
間の氷解物より、脂肪酸をエーテルで抽出する。トリメ
チルシリルジアゾメタンでメチルエステルとしてガスク
ロマトグラフィーによる分析を行い、標品との比較およ
び質量分析により表２に示きれる脂肪酸が見出された。
、アミノ酸自動分析機で分析すると、表２に示すアミノ
酸が検出された。また、定沸点塩酸は１１０°Ｃ，４時
間の氷解物より、脂肪酸をエーテルで抽出する。トリメ
チルシリルジアゾメタンでメチルエステルとしてガスク
ロマトグラフィーによる分析を行い、標品との比較およ
び質量分析により表２に示きれる脂肪酸が見出された。
（以下余白）
酉ス
アミノ
および
成
（）：モル比
ＨｙＡｓｐ ： β−ヒドロキシアスパラギン酸
ＨｙＰｒｏ ： Ｌ−トランス−３−ヒドロキシ
プロリンｎ−Ｃ，ａｈ’ ： ３−ヒドロキシ テトラ
デカン酸１−Ｃ１６ｈ” ’ ３−ヒドロキシ イソペ
ンタデカン酸ｎ−Ｃ１＠Ｉｎ’ ： ３−ヒドロキシ
ヘキサデカン酸ｉ−Ｃ，，ｈ３： ３−ヒドロキシ イ
ソヘキサデカン酸（以下余白） 紫外線吸収スペクトル：末端吸収 赤外線吸収スペクトル：赤外線吸収スペクトルにおいて
、それぞれの化合物は類似の吸収を示し、代表として、
ブラスバシンＡ、塩酸塩およびＢ！塩酸塩の赤外線吸収
スペクトルを第１図に示す。
ＨｙＰｒｏ ： Ｌ−トランス−３−ヒドロキシ
プロリンｎ−Ｃ，ａｈ’ ： ３−ヒドロキシ テトラ
デカン酸１−Ｃ１６ｈ” ’ ３−ヒドロキシ イソペ
ンタデカン酸ｎ−Ｃ１＠Ｉｎ’ ： ３−ヒドロキシ
ヘキサデカン酸ｉ−Ｃ，，ｈ３： ３−ヒドロキシ イ
ソヘキサデカン酸（以下余白） 紫外線吸収スペクトル：末端吸収 赤外線吸収スペクトル：赤外線吸収スペクトルにおいて
、それぞれの化合物は類似の吸収を示し、代表として、
ブラスバシンＡ、塩酸塩およびＢ！塩酸塩の赤外線吸収
スペクトルを第１図に示す。
（以下余白）
以上の物理化学的性状および諸種の化学的検討により、
本発明化合物プラスバシンは以下の構造式を有するもの
と推定きれる。
本発明化合物プラスバシンは以下の構造式を有するもの
と推定きれる。
（式中、ＸはＬ−ＨｙＰｒｏまたはＬ−Ｐｒｏ。
Ｒは−ＣＨ，または−ＣＨ（ＣＨｓ）ｎ、ｎは９〜１２
の整数を表わす）。
の整数を表わす）。
（以下余白）
以上のように、ブラスバシンは新規な構造からなるアシ
ルペプチドである。
ルペプチドである。
本発明のブラスバシンを産生ずる菌株の菌学的性状は次
に示す通りである。
に示す通りである。
（１）形態学的性状
２８°０１２４時間、Ｈｅａｒｔ １ｎｆｕｓｉｏｎ
ａｇａｒ（Ｄｉｆｃｏ）上に生育した若い菌体について
、走査電子顕微鏡で調べた。その結果、本菌は、やや細
長い桿菌で、大きさは２〜３（μｍ）Ｘｏ、５（μｍ）
である、菌体の先端は円形であり、ウィンナ−ソーセー
ジ様である。大部分の菌体には、鞭毛は着生していない
が、ごく少数の菌体については細長いデリケートな１本
以上の極鞭毛が存在し、このため、後述する様に、液体
培地中で培養した菌体には、ごく弱い運動性が認められ
た。
ａｇａｒ（Ｄｉｆｃｏ）上に生育した若い菌体について
、走査電子顕微鏡で調べた。その結果、本菌は、やや細
長い桿菌で、大きさは２〜３（μｍ）Ｘｏ、５（μｍ）
である、菌体の先端は円形であり、ウィンナ−ソーセー
ジ様である。大部分の菌体には、鞭毛は着生していない
が、ごく少数の菌体については細長いデリケートな１本
以上の極鞭毛が存在し、このため、後述する様に、液体
培地中で培養した菌体には、ごく弱い運動性が認められ
た。
（２）ダラム染色
ダラム陰性菌である。ダラム染色は、肉汁寒天斜面培地
上で２８℃、２４時間培養した若い菌体について行なっ
た。尚、芽胞形成能は認められなかった。
上で２８℃、２４時間培養した若い菌体について行なっ
た。尚、芽胞形成能は認められなかった。
（３）培養所見
■ 肉汁液体培養：生育は余り良くない、−様に混濁す
る。菌膜の形成は見られなかった。ガスの発生はない、
可溶性色素の生成も見られなかった。菌体には、ごく弱
い運動性が認められた。
る。菌膜の形成は見られなかった。ガスの発生はない、
可溶性色素の生成も見られなかった。菌体には、ごく弱
い運動性が認められた。
■ 肉汁寒天穿刺培養：穿刺線に沿って、糸状のごく弱
い生育が見られた。ガスの発生なし、可溶性色素の生成
なし、好気性である０表面の生育は、褐色を帯びた灰乳
色でにぷい光沢がある。
い生育が見られた。ガスの発生なし、可溶性色素の生成
なし、好気性である０表面の生育は、褐色を帯びた灰乳
色でにぷい光沢がある。
■ 肉汁寒天斜面培養：生育は旺盛で糸状の生育を示す
０周縁は大部分が金縁だが、一部で波状であった。隆起
は隆起状ないしは凸円状である。ガスの発生は見られな
かった。褐色の可溶性色素を作り、寒天斜面中に放出し
た。菌膜は褐色がかったクリーム色で光沢があり、湿潤
し、不透明である。
０周縁は大部分が金縁だが、一部で波状であった。隆起
は隆起状ないしは凸円状である。ガスの発生は見られな
かった。褐色の可溶性色素を作り、寒天斜面中に放出し
た。菌膜は褐色がかったクリーム色で光沢があり、湿潤
し、不透明である。
■ 肉汁寒天平板培養：コロニーは円形、不透明、周縁
は金縁である。隆起は凸円状である。ガスの発生はない
が、褐色の可溶性色素を生成して培地中に放出する。菌
膜の色は、褐色を帯びたクリーム色で光沢があり、湿潤
している。
は金縁である。隆起は凸円状である。ガスの発生はない
が、褐色の可溶性色素を生成して培地中に放出する。菌
膜の色は、褐色を帯びたクリーム色で光沢があり、湿潤
している。
■ リドマスミルク：酸を生成する。ペプトン化は強い
０表面に灰赤紫色のやや厚い菌膜と、表面の管壁に灰色
のリングとを作る。上層は、赤紫色半透明で、下層は赤
橙色半透明である。橙黄色の沈殿を少量生成する。ガス
の発生は見られなかった。
０表面に灰赤紫色のやや厚い菌膜と、表面の管壁に灰色
のリングとを作る。上層は、赤紫色半透明で、下層は赤
橙色半透明である。橙黄色の沈殿を少量生成する。ガス
の発生は見られなかった。
■ マツフンキー寒天平板培地：生育は可能であり、良
好な生育を示す、暗褐色の可溶性色素を培地中に放出す
る。
好な生育を示す、暗褐色の可溶性色素を培地中に放出す
る。
■ ０．２％（Ｗ／Ｖ）セトリミド含有トリプトン、ソ
イトン寒天平板上での生育：生育は全く見られない、セ
トリミド（セチルトリメチルアンモニウム・ブロマイド
）により生育を阻止される。
イトン寒天平板上での生育：生育は全く見られない、セ
トリミド（セチルトリメチルアンモニウム・ブロマイド
）により生育を阻止される。
■ ６．５％（Ｗ／Ｖ）塩化ナトリウム含有トリプトン
、ソイトン寒天平板上での生育：生育は全く見られなか
った。６，５％（Ｗ／Ｖ）濃度の塩化ナトリウムにより
生育を阻止きれた。
、ソイトン寒天平板上での生育：生育は全く見られなか
った。６，５％（Ｗ／Ｖ）濃度の塩化ナトリウムにより
生育を阻止きれた。
■ １％（ｗ／ｖ）ＴＴＣ含有トリプトン、ソイトン寒
天平板上での生育：生育は全く認められなかった。ＴＴ
Ｃ（）リフェニルテトラソリウム・クロライド）により
生育を阻止された。
天平板上での生育：生育は全く認められなかった。ＴＴ
Ｃ（）リフェニルテトラソリウム・クロライド）により
生育を阻止された。
（４）生理学的、生化学的諸性状
１、 ８１１体内におけるＰＨＢの蓄積、ＰＨＢ（Ｐｏ
１ｙ−β−ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ ）の蓄積
は認められなかった。
１ｙ−β−ｈｙｄｒｏｘｙｂｕｔｙｒａｔｅ ）の蓄積
は認められなかった。
２、 カタラーゼ・テスト：弱陽性
３、 オキシダーゼ・テスト二強陽性
４、 ０−Ｆ−テスト：ｏｘｉｄａｔｉｖｅ（Ｏ型）、
グルコースを酸化型に責化する。
グルコースを酸化型に責化する。
５、 デオキシリボヌクレアーゼ・テスト：陰性６、
ウレアーゼ・テスト：陰性 ７、 オルニチン・デカルボキシラーゼ・テスト：陰性 ８、 リジン・デカルボキシラーゼ・テスト：陰性９、
アルギニン・デヒドロラーゼ・テスト：陰性１０、ア
シルアミダーゼ・テスト：陰性１１、ゼラチンの液化能
：陽性、肉汁ゼラチン穿刺培養を室温（２２〜２５℃）
で行なった。
ウレアーゼ・テスト：陰性 ７、 オルニチン・デカルボキシラーゼ・テスト：陰性 ８、 リジン・デカルボキシラーゼ・テスト：陰性９、
アルギニン・デヒドロラーゼ・テスト：陰性１０、ア
シルアミダーゼ・テスト：陰性１１、ゼラチンの液化能
：陽性、肉汁ゼラチン穿刺培養を室温（２２〜２５℃）
で行なった。
１２、澱粉の加水分解能：陰性
１３、リパーゼ・テスト（Ｔｗａｅｎ８０の加水分解能
）：陽性 １４、クエン酸の利用能：陽性（シモンズ培地によりテ
スト） １５、硝酸塩の還元能：陰性 １６、脱窒反応：陰性 １７、 ）１．ｓの生成：＃性 １８、インドールの生成：陰性 １９、螢光性色素の生成：陰性 ２０、ＶＰ・テスト：陰性 ２１、ＭＲ・テスト：陰性 ２２、エスクリンの加水分解能：陽性 ２３．０ＮＰＧ・テスト：陰性（β−ガラクトシダーゼ
は存在しない） ２４、フェニルアラニンの脱アミノ・テスト：陰性２５
、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、マルトース、ト
レハロースから酸を生成する。しかし、ガスは発生しな
い、Ｌ−アラビノース、ラクトース、Ｄ−マンニット、
シュクロース、Ｄ−キシロースからは酸およびガスを生
成しない。
）：陽性 １４、クエン酸の利用能：陽性（シモンズ培地によりテ
スト） １５、硝酸塩の還元能：陰性 １６、脱窒反応：陰性 １７、 ）１．ｓの生成：＃性 １８、インドールの生成：陰性 １９、螢光性色素の生成：陰性 ２０、ＶＰ・テスト：陰性 ２１、ＭＲ・テスト：陰性 ２２、エスクリンの加水分解能：陽性 ２３．０ＮＰＧ・テスト：陰性（β−ガラクトシダーゼ
は存在しない） ２４、フェニルアラニンの脱アミノ・テスト：陰性２５
、Ｄ−グルコース、Ｄ−フルクトース、マルトース、ト
レハロースから酸を生成する。しかし、ガスは発生しな
い、Ｌ−アラビノース、ラクトース、Ｄ−マンニット、
シュクロース、Ｄ−キシロースからは酸およびガスを生
成しない。
２６、Ｇ＋Ｃモル％：６９．４％（ＤＮＡのＧ＋Ｃモル
％） 以上の諸性状により、本ブラスバシン産生菌は次の様に
判断きれる菌株である。即ち、本ブラスバシン産生菌は
ダラム陰性の好気性桿菌で、沖縄県下にて採集したー土
壌試料から分離きれた０本菌はカタラーゼ陽性であり、
芽胞形成能は認められず、オキシダーゼ陽性である点か
らｐｓｅｕｄｏ−ｍｏｎａｄａｃａａ＠あるいはＦｌａ
ｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍに帰属されるが、Ｆｌａｖｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍについてはＢｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎ
ｕａｌｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ １ （１９８４）の記載に従えば、ＤＮＡの
Ｇ＋Ｃモル％が３１〜４２％（Ｔｍ法）とあり、来園の
それが６９．４％（ＨＰＬＣ法）と桁外れに高いことを
考えると、Ｆｌａｖｏ−ｂａｃｔｅｒｉｕｍに帰属させ
るのは妥当ではない、それに、来園は弱いながらも運動
性を有し、ごく少数ではあるが一部の菌体に鞭毛が認め
られた。それゆえ、来園はＰｓｅｕｄｏｍａｎａｄａｃ
ｅａｅに帰属させるのが妥当である。
％） 以上の諸性状により、本ブラスバシン産生菌は次の様に
判断きれる菌株である。即ち、本ブラスバシン産生菌は
ダラム陰性の好気性桿菌で、沖縄県下にて採集したー土
壌試料から分離きれた０本菌はカタラーゼ陽性であり、
芽胞形成能は認められず、オキシダーゼ陽性である点か
らｐｓｅｕｄｏ−ｍｏｎａｄａｃａａ＠あるいはＦｌａ
ｖｏｂａｃｔｅｒｉｕｍに帰属されるが、Ｆｌａｖｏｂ
ａｃｔｅｒｉｕｍについてはＢｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎ
ｕａｌｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏ
ｌｏｇｙ １ （１９８４）の記載に従えば、ＤＮＡの
Ｇ＋Ｃモル％が３１〜４２％（Ｔｍ法）とあり、来園の
それが６９．４％（ＨＰＬＣ法）と桁外れに高いことを
考えると、Ｆｌａｖｏ−ｂａｃｔｅｒｉｕｍに帰属させ
るのは妥当ではない、それに、来園は弱いながらも運動
性を有し、ごく少数ではあるが一部の菌体に鞭毛が認め
られた。それゆえ、来園はＰｓｅｕｄｏｍａｎａｄａｃ
ｅａｅに帰属させるのが妥当である。
次に、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｄａｃａａｅの中でも、来
園が帰属されると考えられる属としては、Ｐｓ＠ｕｄｏ
ｍｏｎａｓまたはＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓがある。この
うち、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓは、−本の極鞭毛により
運動し、オキシダーゼテストが陰性、もしくは弱陽性を
示すと上記のＢｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ １
（１９８４）に記載があり、また、菌体の大きさも０゜
７〜１．８Ｃμｍ）Ｘｏ、４＝０．７ （μｍ）と短桿
菌である点が異なっている。 Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
のＤＮＡのＣ＋Ｃモル％は８３〜７１％（Ｔｍ、Ｂｄ法
）であり、来園のそれは６９．４％であるので、ＤＮＡ
のＧ＋Ｃモル％について見れば、来園はＸａｎｔｈｏｍ
ｏｎａｓに近いといえる。しかし、前述の菌体の大きき
、オキシダーゼ・テストの強陽性、運動性などについて
考えると、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓに帰属させるのも妥
当ではない、残ったＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓについて考
えると、来園は前記のＢｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕ−ａ
ｌ ｏｆ Ｓｙｓｔａｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ ｉ （１９８４）に記載のある種に該当するも
のがない、敢えて近似のものを挙げれば、Ｐｓａｕｄｏ
ｍａｎａｓ ｐａｕｃｉｍｏｂｉｌｉｓがあるが、生化
学的諸性状において明らかに異なっている。
園が帰属されると考えられる属としては、Ｐｓ＠ｕｄｏ
ｍｏｎａｓまたはＸａｎｔｈｏｍｏｎａｓがある。この
うち、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓは、−本の極鞭毛により
運動し、オキシダーゼテストが陰性、もしくは弱陽性を
示すと上記のＢｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ
Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ １
（１９８４）に記載があり、また、菌体の大きさも０゜
７〜１．８Ｃμｍ）Ｘｏ、４＝０．７ （μｍ）と短桿
菌である点が異なっている。 Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓ
のＤＮＡのＣ＋Ｃモル％は８３〜７１％（Ｔｍ、Ｂｄ法
）であり、来園のそれは６９．４％であるので、ＤＮＡ
のＧ＋Ｃモル％について見れば、来園はＸａｎｔｈｏｍ
ｏｎａｓに近いといえる。しかし、前述の菌体の大きき
、オキシダーゼ・テストの強陽性、運動性などについて
考えると、Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓに帰属させるのも妥
当ではない、残ったＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓについて考
えると、来園は前記のＢｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｕ−ａ
ｌ ｏｆ Ｓｙｓｔａｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ
ｏｇｙ ｉ （１９８４）に記載のある種に該当するも
のがない、敢えて近似のものを挙げれば、Ｐｓａｕｄｏ
ｍａｎａｓ ｐａｕｃｉｍｏｂｉｌｉｓがあるが、生化
学的諸性状において明らかに異なっている。
一方、ＤＮＡ（７）Ｇ＋Ｃモル％について見ると、５８
〜７０％（Ｂｄ法）とあり、来園のそれが６９．４％と
高い点を見ても、来園をＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓに帰属
させるのが良いと思われる。
〜７０％（Ｂｄ法）とあり、来園のそれが６９．４％と
高い点を見ても、来園をＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓに帰属
させるのが良いと思われる。
来園はＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓの新種であるかも知れな
いが、一応Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ、 Ｆ Ｂ
−６２５０と称することにした０本菌株は、平成１年
６月２７日から茨城系つくば南東１丁目１番３号の微生
物工業技術研究所にＰｓｅｕｄｏａ＋ｏｎａｓ ｓｐ、
Ｆ Ｂ −６２５０（微工研菌寄第１０７９４号）と
して寄託されている。
いが、一応Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｐ、 Ｆ Ｂ
−６２５０と称することにした０本菌株は、平成１年
６月２７日から茨城系つくば南東１丁目１番３号の微生
物工業技術研究所にＰｓｅｕｄｏａ＋ｏｎａｓ ｓｐ、
Ｆ Ｂ −６２５０（微工研菌寄第１０７９４号）と
して寄託されている。
なお、本明細書においては、上記Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ
ｓｓｐ、ＦＢ−６２５０株ならびにその天然および人工
変異株は勿論のこと、シュードモナス属に属し、ブラス
バシンＡ、〜Ａ、およびＢ、−Ｂ、のうち少なくとも一
種の化合物を産生ずる菌株はすべて使用でき本発明の範
囲内とする。
ｓｓｐ、ＦＢ−６２５０株ならびにその天然および人工
変異株は勿論のこと、シュードモナス属に属し、ブラス
バシンＡ、〜Ａ、およびＢ、−Ｂ、のうち少なくとも一
種の化合物を産生ずる菌株はすべて使用でき本発明の範
囲内とする。
プラスバシンの生産はプラスバシン生産株を栄養培地に
好気的条件下で培養し、培養終了後、培養物からプラス
バシンを分離することにより行なう。
好気的条件下で培養し、培養終了後、培養物からプラス
バシンを分離することにより行なう。
以下にブラスバシンの一般的製造方法を記載する。
培地組成、培地条件などは抗生物質の生産に一般に用い
られているものを用いるとよい、培地は原則として、炭
素源、窒素源、無機塩などを含む、必要に応じて、ビタ
ミン類、先駆物資などを加えてもよい、炭素源としては
、例えば、グルコース、澱粉、デキストリン、グリセリ
ン、糖蜜、有機酸などが単独でまたは混合物として用い
られる。窒素源としては、例えば、大豆粉、フーンスチ
ープリカー、肉エキス、酵母エキス、綿実粉、ペプトン
、小麦胚芽、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなと
が単独または、混合物として用いられる。無機塩として
は、例えば、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カ
リウム、硫酸マグネシウム、硫酸鋼、塩化マンガン、硫
酸亜鉛、塩化コバルト、各種リン酸塩などがあげられ、
必要に応じて培地に添加する。
られているものを用いるとよい、培地は原則として、炭
素源、窒素源、無機塩などを含む、必要に応じて、ビタ
ミン類、先駆物資などを加えてもよい、炭素源としては
、例えば、グルコース、澱粉、デキストリン、グリセリ
ン、糖蜜、有機酸などが単独でまたは混合物として用い
られる。窒素源としては、例えば、大豆粉、フーンスチ
ープリカー、肉エキス、酵母エキス、綿実粉、ペプトン
、小麦胚芽、硫酸アンモニウム、硝酸アンモニウムなと
が単独または、混合物として用いられる。無機塩として
は、例えば、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カ
リウム、硫酸マグネシウム、硫酸鋼、塩化マンガン、硫
酸亜鉛、塩化コバルト、各種リン酸塩などがあげられ、
必要に応じて培地に添加する。
培養は一般に抗生物質の製造に用いられる方法に準じて
行なえばよく、好ましくは液体培養が、大量生産を行な
う場合は、深部通気培養がよい。
行なえばよく、好ましくは液体培養が、大量生産を行な
う場合は、深部通気培養がよい。
培地のｐＨが変動しうる場合には、培地にＪｊ２ＷＩ！
カルシウムなどの緩衝剤を加えてもよい、培養は約２０
〜４０℃で行なうとよく、特に２５〜３２℃が好ましい
、培養時間は発酵の規模に大きく左右きれるが、約１日
〜７日が大量生産を行なう場合に要する培養時間である
。培養中に激しい発泡が起こる場合には、培養前または
培養中に例えば、植物油、ラード、ポリプロピレングリ
コールなどの消泡剤を適宜添加するとよい。
カルシウムなどの緩衝剤を加えてもよい、培養は約２０
〜４０℃で行なうとよく、特に２５〜３２℃が好ましい
、培養時間は発酵の規模に大きく左右きれるが、約１日
〜７日が大量生産を行なう場合に要する培養時間である
。培養中に激しい発泡が起こる場合には、培養前または
培養中に例えば、植物油、ラード、ポリプロピレングリ
コールなどの消泡剤を適宜添加するとよい。
培養終了後、培養物からプラスバシンを分離採取するに
は、通常の発酵生産物を分離採取する方法を適宜用いる
０例えば濾過、遠心分離、各種イオン交換樹脂やその他
の活性吸着剤による吸脱着やクロマトグラフィー、各種
有機溶媒による抽出などを適当に組み合わせるとよい。
は、通常の発酵生産物を分離採取する方法を適宜用いる
０例えば濾過、遠心分離、各種イオン交換樹脂やその他
の活性吸着剤による吸脱着やクロマトグラフィー、各種
有機溶媒による抽出などを適当に組み合わせるとよい。
プラスバシンは分離操作のため、また医薬、動物薬とし
て使用する便宜上、塩とするのが望ましいことがある。
て使用する便宜上、塩とするのが望ましいことがある。
プラスバシンと塩を形成しうる塩としてはリチウム、カ
リウム、ナトリウムなどのアルカリ金属、マグネシウム
、カルシウムなどのアルカリ土類金属または塩酸、硫酸
、硝酸、リン酸、臭化水素酸などの無機酸および酢酸、
シュウ酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸、リンゴ酸
、アジピン酸、コハク酸、フマル酸などの有機酸が挙げ
られる。
リウム、ナトリウムなどのアルカリ金属、マグネシウム
、カルシウムなどのアルカリ土類金属または塩酸、硫酸
、硝酸、リン酸、臭化水素酸などの無機酸および酢酸、
シュウ酸、マレイン酸、フマル酸、クエン酸、リンゴ酸
、アジピン酸、コハク酸、フマル酸などの有機酸が挙げ
られる。
プラスバシンおよびその塩は抗菌剤の活性成分として経
口的にまたは非経口的にヒトまたは動物に投与できる。
口的にまたは非経口的にヒトまたは動物に投与できる。
汎用される賦形剤、安定化剤、保存剤、湿潤剤、界面活
性剤などを用いて、錠剤、カプセル剤、粉剤として経口
投与することができ、注射剤、塗布剤、坐剤として非経
口的に投与することもできる。その投与量は治療目的、
患者の年齢、症状などによって異なるが、静脈注射する
場合には成人に対して１日おおよそ０．０１〜１０ｇで
ある。
性剤などを用いて、錠剤、カプセル剤、粉剤として経口
投与することができ、注射剤、塗布剤、坐剤として非経
口的に投与することもできる。その投与量は治療目的、
患者の年齢、症状などによって異なるが、静脈注射する
場合には成人に対して１日おおよそ０．０１〜１０ｇで
ある。
（以下余白）
以下に実施例によって本発明を詳述するが、本発明を何
ら限定するものではない。
ら限定するものではない。
Ｘ臭■ユ
（ａ）発酵生産工程ニ
ゲルコース１０ｇ５酵母エキス５ｇ１水道水１０００ｍ
１００Ｏ無調製）よりなる培地ｉｆｔを含む２２容エル
レンマイヤーフラスコにシュードモナス種（Ｐｓｅｕｄ
ｏａ＋ｏｎａｓ ｓｐ、 ） Ｐ Ｂ −６２５０（微
工研菌寄第１０７９４号）の培養スラントの菌体を無菌
的に懸濁きせる。これを毎分２５０回転で、２８°Ｃ１
１８時間振盪培養を行なう、この培養物７１を、コーン
スターチ１０ｇ、ポテトスターチ１０ｇ、ＣＡ−１（動
物飼料）２０ｇ、水道水１０００ｎ＋１（ｐＨ無調製）
からなる培地２００ｆｆｉを含む５０ＯＮタンクに接種
し、通気量２００１７分で、毎分２５０回転、２８°Ｃ
１７２時間培養する。
１００Ｏ無調製）よりなる培地ｉｆｔを含む２２容エル
レンマイヤーフラスコにシュードモナス種（Ｐｓｅｕｄ
ｏａ＋ｏｎａｓ ｓｐ、 ） Ｐ Ｂ −６２５０（微
工研菌寄第１０７９４号）の培養スラントの菌体を無菌
的に懸濁きせる。これを毎分２５０回転で、２８°Ｃ１
１８時間振盪培養を行なう、この培養物７１を、コーン
スターチ１０ｇ、ポテトスターチ１０ｇ、ＣＡ−１（動
物飼料）２０ｇ、水道水１０００ｎ＋１（ｐＨ無調製）
からなる培地２００ｆｆｉを含む５０ＯＮタンクに接種
し、通気量２００１７分で、毎分２５０回転、２８°Ｃ
１７２時間培養する。
（ｂ）抽出、精製工程
（１）上記の培養液約２００１に食塩２５ｋｇを加え、
希塩酸でｐＨ３，０に調製し、シャープレス遠心機で遠
心分離する。菌体部分を７０％アセトン５４Ｎで２回抽
出し、抽出液を減圧下で濃縮し、大部分のアセトンを留
去する。残った水性溶液（１５ｊ２）に水１０！を加え
、希水酸化ナトリウムでｐＨ８，０に調製し、ダイヤイ
オンＨＰ−２０（三菱化成社製）のカラム（１０ｊ）に
通過せしめ、抗生物質を吸着させる。カラムを水洗後、
３０％アセトンから１００％アセトンまでの濃度勾配溶
出法により溶出する。活性のある溶出分画を集め（１１
１）、減圧下、大部分のアセトンを留去した後、ｐＨ２
，５（希塩酸により調製）でブタノール５にで抽出する
。ブタノール抽出液を減圧下で濃縮し、アセトンを加え
ることにより抗生物質を含む粗粉末２３．９ ｇを得た
。
希塩酸でｐＨ３，０に調製し、シャープレス遠心機で遠
心分離する。菌体部分を７０％アセトン５４Ｎで２回抽
出し、抽出液を減圧下で濃縮し、大部分のアセトンを留
去する。残った水性溶液（１５ｊ２）に水１０！を加え
、希水酸化ナトリウムでｐＨ８，０に調製し、ダイヤイ
オンＨＰ−２０（三菱化成社製）のカラム（１０ｊ）に
通過せしめ、抗生物質を吸着させる。カラムを水洗後、
３０％アセトンから１００％アセトンまでの濃度勾配溶
出法により溶出する。活性のある溶出分画を集め（１１
１）、減圧下、大部分のアセトンを留去した後、ｐＨ２
，５（希塩酸により調製）でブタノール５にで抽出する
。ブタノール抽出液を減圧下で濃縮し、アセトンを加え
ることにより抗生物質を含む粗粉末２３．９ ｇを得た
。
（２） ９０ロホルムーエタノール−１０％酢酸（４ニ
ア：２）溶媒で充填したシリカゲルカラム（メルク社製
、７０−２３０メツシユ、１０１００Ｏに、上記の粗粉
末（２３ｇ）を上記溶媒で溶解した溶液を載せ、同溶媒
で展開溶出する。活性のある溶出分画を集め、減圧下、
水およびブタノ−ルを加えながら濃縮する。濃縮液より
抗生物質をｐＨ２，０でブタノールで抽出し、この抽出
液を水洗し、減圧下で濃縮し、アセトンを加えることに
より、抗生物質の粗粉末６．３４ ｇを得た。
ア：２）溶媒で充填したシリカゲルカラム（メルク社製
、７０−２３０メツシユ、１０１００Ｏに、上記の粗粉
末（２３ｇ）を上記溶媒で溶解した溶液を載せ、同溶媒
で展開溶出する。活性のある溶出分画を集め、減圧下、
水およびブタノ−ルを加えながら濃縮する。濃縮液より
抗生物質をｐＨ２，０でブタノールで抽出し、この抽出
液を水洗し、減圧下で濃縮し、アセトンを加えることに
より、抗生物質の粗粉末６．３４ ｇを得た。
（３）上記粗粉末を、下記の条件による高速液体クロマ
トグラフィーに付し、精製分画を得た。
トグラフィーに付し、精製分画を得た。
カラム：ＹＭＣＡＰ−３２４８１５／３０ ３００Ａ
０ＤＳ（山村化学社製） 移動層ニアセトニトリル−５０ｍＭ硫酸ナトリウムを含
む５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７，５（３６：６４） 流速：１００ｍ１／分 紫外線吸収検出機により２２０ｎｍで検出、試料はｐＨ
８，０の水に溶解し、１回につき５００ｍｇを注入した
。
０ＤＳ（山村化学社製） 移動層ニアセトニトリル−５０ｍＭ硫酸ナトリウムを含
む５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ７，５（３６：６４） 流速：１００ｍ１／分 紫外線吸収検出機により２２０ｎｍで検出、試料はｐＨ
８，０の水に溶解し、１回につき５００ｍｇを注入した
。
上記のクロマトグラフィーにより、最初に成分Ａ１およ
びＢ１を含む分画が、次に、成分Ａ、およびＢ、を含む
分画が、最後に成分Ａ、、Ａ４、Ｂ、およびＢ４を含む
分画が溶出される。各々の分画を分取して集め、減圧下
で濃縮後、ｐＨ２，５でブタノールで抽出する。この抽
出液を０、ＩＮ塩酸、次いで水で洗浄する。更に、減圧
下濃縮し、アセトンを加えることにより、Ａ、およびＢ
、塩酸塩混合物１５０ ｍｇｓ Ａ ＊およびＢ、塩酸
塩混合物２．１４ｇおよびＡ１、ＡいＢ、およびＢ、塩
酸塩混合物１．０ｇが得られた。
びＢ１を含む分画が、次に、成分Ａ、およびＢ、を含む
分画が、最後に成分Ａ、、Ａ４、Ｂ、およびＢ４を含む
分画が溶出される。各々の分画を分取して集め、減圧下
で濃縮後、ｐＨ２，５でブタノールで抽出する。この抽
出液を０、ＩＮ塩酸、次いで水で洗浄する。更に、減圧
下濃縮し、アセトンを加えることにより、Ａ、およびＢ
、塩酸塩混合物１５０ ｍｇｓ Ａ ＊およびＢ、塩酸
塩混合物２．１４ｇおよびＡ１、ＡいＢ、およびＢ、塩
酸塩混合物１．０ｇが得られた。
（４）Ａｌ−Ａ４およびＢ ＋−Ｂ ａ各成分は、上記
の各々の混合物から、下記の条件による高速液体クロム
トゲラフイーを再び行なって分離した。
の各々の混合物から、下記の条件による高速液体クロム
トゲラフイーを再び行なって分離した。
カラム：ウルトロン７ＣＮ ２０Ｘ２５０ｍｍ（信相
化工社製） 移動層ニアセトニトリル−５０ｍＭ硫酸ナトリウムを含
む５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ２，２（Ａ、およびＢ、
の分離の場合、２６：７４；ＡｍおよびＢ３、Ａ１、Ｂ
１、Ａ、およびＢ、の場合、２８ ： ７２） 流速：１１．２５ｍ１／分 紫外線吸収検出機により２２０ｎｍで検出、試料は５０
％メタノールに溶解し、１回につき５ｍｇを注入した。
化工社製） 移動層ニアセトニトリル−５０ｍＭ硫酸ナトリウムを含
む５０ｍＭリン酸緩衝液、ｐＨ２，２（Ａ、およびＢ、
の分離の場合、２６：７４；ＡｍおよびＢ３、Ａ１、Ｂ
１、Ａ、およびＢ、の場合、２８ ： ７２） 流速：１１．２５ｍ１／分 紫外線吸収検出機により２２０ｎｍで検出、試料は５０
％メタノールに溶解し、１回につき５ｍｇを注入した。
各成分の分画を分取し、減圧下、濃縮し、ｐＨ２，５で
ブタノールで抽出し、その抽出液を０．ＩＮ塩酸、次い
で、水で洗浄後、更に減圧下濃縮し、アセトンを加える
ことにより、各成分の塩酸塩を得た。
ブタノールで抽出し、その抽出液を０．ＩＮ塩酸、次い
で、水で洗浄後、更に減圧下濃縮し、アセトンを加える
ことにより、各成分の塩酸塩を得た。
Ａ、およびＢ、の混合物７７ｍｇからＡ、塩酸塩２３ｍ
ｇおよびＢ、塩酸塩６ｍｇが得られた。
ｇおよびＢ、塩酸塩６ｍｇが得られた。
Ａ、およびＢ、の混合＃１００ｍｇからＡ、塩酸塩６８
ｍｇおよびＢ、塩酸塩４ｍｇが得られた。
ｍｇおよびＢ、塩酸塩４ｍｇが得られた。
Ａ３、Ａ４、Ｂ、およびＢ４の混合物１５０ｍｇからＡ
、塩酸塩５２ｍｇ、Ａａ塩酸塩１０ｍｇ％Ｂｓ塩酸塩５
ｍｇおよびＢ４塩酸塩２ｍｇが得られた。
、塩酸塩５２ｍｇ、Ａａ塩酸塩１０ｍｇ％Ｂｓ塩酸塩５
ｍｇおよびＢ４塩酸塩２ｍｇが得られた。
（以下余白）
へ１発明の効果
ブラスバシンＡ、〜Ａ４およびＢ Ｉ” Ｂ ａの１ｎ
ｖｉｔｒｏでの抗菌力を日本化学療法学会所定の方法に
準じ、以下の条件下で測定した。
ｖｉｔｒｏでの抗菌力を日本化学療法学会所定の方法に
準じ、以下の条件下で測定した。
■ 菌体懸濁液の調製
斜面培地上の被検菌株１白金耳（１０″ＣＦＵ／ｍｌ）
を成育培地（感受性ディスク用寒天培地、ニツスイ（株
））ｔｍｌに接種し、３７°Ｃで１８〜２０時間培養す
る。培養物の１００倍希釈物を接種用画体懸濁液として
使用する。
を成育培地（感受性ディスク用寒天培地、ニツスイ（株
））ｔｍｌに接種し、３７°Ｃで１８〜２０時間培養す
る。培養物の１００倍希釈物を接種用画体懸濁液として
使用する。
■ サンプル溶液
サンプルを９−１０ｍｇ正確に秤量し、蒸留水に２ ｍ
ｇ／ｍｌとなるように溶解する。
ｇ／ｍｌとなるように溶解する。
■ 寒天平板
サンプル溶液を滅菌水で段階倍数希釈する（２０００〜
０．２５ μｓ／ｍｌ）、希釈サンプル溶液それぞれの
０ 、５ ａｌｌを滅菌プラスチックペトリ皿（直径９
ｃｍ）に移し、そこへ９ 、５ ｍｌの寒天培地（感受
性試験培地、栄研化学（株））を注ぎ、緩やかに攪拌し
た後、凝固させる。
０．２５ μｓ／ｍｌ）、希釈サンプル溶液それぞれの
０ 、５ ａｌｌを滅菌プラスチックペトリ皿（直径９
ｃｍ）に移し、そこへ９ 、５ ｍｌの寒天培地（感受
性試験培地、栄研化学（株））を注ぎ、緩やかに攪拌し
た後、凝固させる。
■ ＭＩＣ値の測定接種用懸濁液１白金耳（０゜５−１
μｌ）を上記方法で調整した様々な濃度のサンプルを含
む寒天平板の表面に移す、３７℃で１８−２０時間培養
した後、寒天表面での菌の成育を観察する。菌の成育が
完全に阻止きれたと観察きれる最低濃度をＭＩＣとしμ
ｇ／ｖａｌで表わす。
μｌ）を上記方法で調整した様々な濃度のサンプルを含
む寒天平板の表面に移す、３７℃で１８−２０時間培養
した後、寒天表面での菌の成育を観察する。菌の成育が
完全に阻止きれたと観察きれる最低濃度をＭＩＣとしμ
ｇ／ｖａｌで表わす。
結果は表３に示す。
（以下余白）
第１図はブラスバシンＡ３およびＢ、の塩酸塩の赤外線
吸収スペクトラムを示す。
吸収スペクトラムを示す。
Claims (4)
- （１）一般式： ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、ＸはＬ−ＨｙＰｒｏまたはＬ−Ｐｒｏ、Ｒは−
ＣＨ＿３または−ＣＨ（ＣＨ＿３）＿２、ｎは９〜１２
の整数を表わす。） で示される化合物またはその塩。 - （２）請求項１記載のｎが９、１０または１２である請
求項１記載の化合物またはその塩。 - （３）請求項１記載の化合物を産生するシュウドモナス
属に属する菌株を培地に培養し、該培養培地から請求項
１記載の化合物またはその塩を採取することを特徴とす
る請求項１記載の化合物またはその塩の製造方法。 - （４）請求項１記載の化合物を産生するシュウドモナス
ｓｐ．ＰＢ−６２５０。
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