JPS6325536A - 細胞内無機質濃度の定量方法 - Google Patents
細胞内無機質濃度の定量方法Info
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- JPS6325536A JPS6325536A JP62159505A JP15950587A JPS6325536A JP S6325536 A JPS6325536 A JP S6325536A JP 62159505 A JP62159505 A JP 62159505A JP 15950587 A JP15950587 A JP 15950587A JP S6325536 A JPS6325536 A JP S6325536A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の前頭
（１） 発明の分野
本発明は一般的には細胞内無機質溌度のエネルギー分散
性分析に関し、さらに詳しくは、比較的少量の組織検体
中の低分子量無改質の濃度を測定する方法、およびこの
ような濃度を疾患および代謝状態と関係づりる方法に関
する。
性分析に関し、さらに詳しくは、比較的少量の組織検体
中の低分子量無改質の濃度を測定する方法、およびこの
ような濃度を疾患および代謝状態と関係づりる方法に関
する。
組織が適切に成長、発達、機能するためには、様々な低
分子量無改質、たとえばカルシウム、リン、カリウム、
マグネシウム、ナトリウムおよび塩素イオンが必須であ
る。これまで、多くの研究者が、これらの無機質の血清
中レベルを、患者の疾患および代謝状態と関連づけるこ
とを試みてきた。しかしながら、無機質の血清中レベル
は必ずしも、ある与えられた時点における細胞内無機質
濃度を反映するとは限らない。実際、本発明の方法を用
いることにより、細胞内無機質レベルは、その血清レベ
ルに比べて、疾患状態や他のストレス因子にはるかによ
く応答するものであることが１２察されている。
分子量無改質、たとえばカルシウム、リン、カリウム、
マグネシウム、ナトリウムおよび塩素イオンが必須であ
る。これまで、多くの研究者が、これらの無機質の血清
中レベルを、患者の疾患および代謝状態と関連づけるこ
とを試みてきた。しかしながら、無機質の血清中レベル
は必ずしも、ある与えられた時点における細胞内無機質
濃度を反映するとは限らない。実際、本発明の方法を用
いることにより、細胞内無機質レベルは、その血清レベ
ルに比べて、疾患状態や他のストレス因子にはるかによ
く応答するものであることが１２察されている。
しかしながら、細胞内焦ａ質ｍａの定量には問題がある
。従来方法、たとえば原子吸光法を利用した場合、所望
の情報を得るには比較的人聞の組織サンプルを必要とす
る。しかも、このようなサンプルは外科的手法によって
のみ得ることが可能で、このような方向は無症状の患者
の定常的なスクリーニング方法としてはほとんど期待で
きない。
。従来方法、たとえば原子吸光法を利用した場合、所望
の情報を得るには比較的人聞の組織サンプルを必要とす
る。しかも、このようなサンプルは外科的手法によって
のみ得ることが可能で、このような方向は無症状の患者
の定常的なスクリーニング方法としてはほとんど期待で
きない。
一部の研究者は、細胞源として白血球を用いることによ
り、この問題点を回避することを試みてきた。残念なが
ら、白血球中の無機質の濃度は、生体組織中の濃度と必
ずしも対応せず、白血球の使用は一般に有用ではない。
り、この問題点を回避することを試みてきた。残念なが
ら、白血球中の無機質の濃度は、生体組織中の濃度と必
ずしも対応せず、白血球の使用は一般に有用ではない。
その上、白血球は核と細１質の比が大きい。しかも、白
血球の状態は感染の存在および免疫応答の状態によって
著しく影響される。さらに、白血球の単離技術が細胞内
焦ｌｆｉ質の測定値に影響するように思われる。
血球の状態は感染の存在および免疫応答の状態によって
著しく影響される。さらに、白血球の単離技術が細胞内
焦ｌｆｉ質の測定値に影響するように思われる。
これらの理由から、非侵襲的方法で得ることができる比
較的少量の組織サンプルにより細胞内無機質の濃度を測
定するための改良方法が望まれてきた。また、無機質の
値を相対的な比ではなく絶対濃度の測定値として与え、
しかも被検患者の疾患および代謝状態と相関する情報を
与えることができる、づ−べての問題の無機質のきわめ
て正確な測定値が１ｎられる方法が望まれていたのであ
る。
較的少量の組織サンプルにより細胞内無機質の濃度を測
定するための改良方法が望まれてきた。また、無機質の
値を相対的な比ではなく絶対濃度の測定値として与え、
しかも被検患者の疾患および代謝状態と相関する情報を
与えることができる、づ−べての問題の無機質のきわめ
て正確な測定値が１ｎられる方法が望まれていたのであ
る。
（２） 関係技術についての記述
細胞内焦ｎ質ＩＡ度は多くの疾患と関連することが知ら
れている。マグネシウムおよび他の無機質は、心脈管系
疾患、虚血、心筋壊死、心毒物に対する感受性に関係す
るのみでなく、冠血流、血液凝固および動脈形成に影響
する（Ｓｅｅｌｉｎｇ ＆１１ｅｇｇｔｖｅｉｔ ：
Ａｍｅｒ、 Ｊ 、 Ｃｌ１ｎ、 Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ
、 ２７ ：５９−７９．１９７４）。心脈管系疾患
と、血清、全面および組織分析によって確認された無機
質の関係は多くの研究者によって報告されている（たと
えば、八ｂｒａｈａｍ ： Ｎ 、 Ｅｎａ、Ｊ、Ｈａ
ｄ、、 ２９６ ： ８６２〜８６３．１９７７ ：
Ｄｙｃｋｎｅｒ ：Ａ 、１ｌｅａｒｔＪ、、９７：１
２〜Ｌ８，１９７９：貼ａｎｇ ：八ｃｔａ Ｈｅｄ
、 ５ｃａｎｄ 、 、 ６４７ ： １
３９ 〜１ ４４゜１９８１ ；Ｌｅｖｉｎｅ：Ｎ 、
Ｅｎｇ 、Ｊ 、 Ｈａｄ 、 、 ３１０ ： １２
５３〜１２５４，１９８４；およびＬｅｖｉｎ ： Ｃ
ａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｈｅｄ、 、 ０ｃｔｏ
ｖｅｒ ： ３７〜４２．１９８５参照） 。１ｌｏｏ
ｋ ら（Ｊ 、 Ａ１１ｌ。
れている。マグネシウムおよび他の無機質は、心脈管系
疾患、虚血、心筋壊死、心毒物に対する感受性に関係す
るのみでなく、冠血流、血液凝固および動脈形成に影響
する（Ｓｅｅｌｉｎｇ ＆１１ｅｇｇｔｖｅｉｔ ：
Ａｍｅｒ、 Ｊ 、 Ｃｌ１ｎ、 Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ
、 ２７ ：５９−７９．１９７４）。心脈管系疾患
と、血清、全面および組織分析によって確認された無機
質の関係は多くの研究者によって報告されている（たと
えば、八ｂｒａｈａｍ ： Ｎ 、 Ｅｎａ、Ｊ、Ｈａ
ｄ、、 ２９６ ： ８６２〜８６３．１９７７ ：
Ｄｙｃｋｎｅｒ ：Ａ 、１ｌｅａｒｔＪ、、９７：１
２〜Ｌ８，１９７９：貼ａｎｇ ：八ｃｔａ Ｈｅｄ
、 ５ｃａｎｄ 、 、 ６４７ ： １
３９ 〜１ ４４゜１９８１ ；Ｌｅｖｉｎｅ：Ｎ 、
Ｅｎｇ 、Ｊ 、 Ｈａｄ 、 、 ３１０ ： １２
５３〜１２５４，１９８４；およびＬｅｖｉｎ ： Ｃ
ａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ Ｈｅｄ、 、 ０ｃｔｏ
ｖｅｒ ： ３７〜４２．１９８５参照） 。１ｌｏｏ
ｋ ら（Ｊ 、 Ａ１１ｌ。
Ｃｏ１ｔ、 Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ ４ ：３２２．１９
８５゜Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃ０ＩＩＱ（１０ｏｆ Ｎｕ
ｔｒｉｔｏｎ 第２６回年会Ｊ３よび″マグネシウム
に関する第４回国際シンポジラム抄録２６）には、末梢
面単球中のマグネシウムの定量のための電子プローブ微
陽分析の利用が述べられている。
８５゜Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃ０ＩＩＱ（１０ｏｆ Ｎｕ
ｔｒｉｔｏｎ 第２６回年会Ｊ３よび″マグネシウム
に関する第４回国際シンポジラム抄録２６）には、末梢
面単球中のマグネシウムの定量のための電子プローブ微
陽分析の利用が述べられている。
細胞内マグネシウム／カルシウム比の定量およびこの比
と心脈管系疾患の診断との関係が初めて問題にされたの
は、Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ、 Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ
。
と心脈管系疾患の診断との関係が初めて問題にされたの
は、Ｆｅｄｅｒａｔｉｏｎ、 Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ
。
Ｖｏｌ、４２．１９８３年３月、および″マグネシウム
とその心脈管系、腎系および代謝性疾患との関係に関す
るシンポジウム、ＬｏｓＡｎａｅｌｃｓ。
とその心脈管系、腎系および代謝性疾患との関係に関す
るシンポジウム、ＬｏｓＡｎａｅｌｃｓ。
Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ、 １９８５年２月における本発
明者による報告である。この発表においては運動競技前
後の選手でのカルシウムとマグネシウムのレベルの変化
についても論じられている。前者の発表に基づく論文は
その後、Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ ： Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎ
ｔａｌａｎｄ Ｃ１１ｎｉｃａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ
、 ４ ： ２１０ 、２１１ 。
明者による報告である。この発表においては運動競技前
後の選手でのカルシウムとマグネシウムのレベルの変化
についても論じられている。前者の発表に基づく論文は
その後、Ｍａｇｎｅｓｉｕｍ ： Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎ
ｔａｌａｎｄ Ｃ１１ｎｉｃａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ
、 ４ ： ２１０ 、２１１ 。
１９８５年１１月に掲載された。
発明の要約
本発明は、組織検体の細胞内照■質′Ｑ度を定量的に測
定する非侵襲的方法を提供するものである。
定する非侵襲的方法を提供するものである。
さらに、本発明は、このような無機質の濃度と患者の疾
患ｄ３ 、Ｊ：び代謝状態、とくに心脈管系疾患、高血
圧症、ならびに骨粗野症のようｌよ代謝性疾患との関係
づけを提供するものである。細胞内無機質濃度は、わず
か１〜３個の細胞を含む９吊の組織１ナンブルに励起光
を照射し、蛍光寸なわち無機質が励起光の照射に＠１露
された結果放出される予め選択されたエネルギー帯内の
光を検知することによって測定される。各エネルギー帯
内の蛍光強度は特定の無機質の細胞内濃度に比例する。
患ｄ３ 、Ｊ：び代謝状態、とくに心脈管系疾患、高血
圧症、ならびに骨粗野症のようｌよ代謝性疾患との関係
づけを提供するものである。細胞内無機質濃度は、わず
か１〜３個の細胞を含む９吊の組織１ナンブルに励起光
を照射し、蛍光寸なわち無機質が励起光の照射に＠１露
された結果放出される予め選択されたエネルギー帯内の
光を検知することによって測定される。各エネルギー帯
内の蛍光強度は特定の無機質の細胞内濃度に比例する。
多くの対象について試験を実施した結果、上）本の細胞
内焦ａ質濃度とある種の疾患および代謝状態を関係づけ
ることが可能になった。
内焦ａ質濃度とある種の疾患および代謝状態を関係づけ
ることが可能になった。
特定の態様においては、舌下の細胞をかき取り、これを
適当なサブストレート上に固定する。ついで細胞に約８
〜１２ｋｅＶの範囲のエネルギーを有する励起光を照射
し、生成した蛍光を、所望の無機質、通常マグネシウム
、カルシウム、カリウム、ナトリウム、塩素イオン、お
よびリンに相当する複数個の特定のエネルギー帯におい
て測定する。
適当なサブストレート上に固定する。ついで細胞に約８
〜１２ｋｅＶの範囲のエネルギーを有する励起光を照射
し、生成した蛍光を、所望の無機質、通常マグネシウム
、カルシウム、カリウム、ナトリウム、塩素イオン、お
よびリンに相当する複数個の特定のエネルギー帯におい
て測定する。
次にこの測定された蛍光を期待された蛍光ピーク以外の
エネルギー帯における放出光を測定することによって通
常得られる蛍光バックグラウンドと比較することにより
、無機質濃度の標準化値を求める。標準化値は、無機質
のエネルギー帯内の蛍光とピークを含まないエネルギー
帯における蛍光との比である。
エネルギー帯における放出光を測定することによって通
常得られる蛍光バックグラウンドと比較することにより
、無機質濃度の標準化値を求める。標準化値は、無機質
のエネルギー帯内の蛍光とピークを含まないエネルギー
帯における蛍光との比である。
色り匹ｉ座二五ｊ
本発明によれば、心脈管系および代謝の状態の診断に使
用できる細胞内無機質溌度の定量方法が提供される。す
なわち、マグネシウム、カルシウム、リン、カリウム、
ナトリウムおよび塩素イオンを包含する生物学的に重要
な無鏝質の定量方法、さらに、これらの濃度を心脈管系
疾患、高血圧症、骨粗鬆症および歯根膜崩壊の存在また
は罹病性と関連づけた診断指針を提供するものである。
用できる細胞内無機質溌度の定量方法が提供される。す
なわち、マグネシウム、カルシウム、リン、カリウム、
ナトリウムおよび塩素イオンを包含する生物学的に重要
な無鏝質の定量方法、さらに、これらの濃度を心脈管系
疾患、高血圧症、骨粗鬆症および歯根膜崩壊の存在また
は罹病性と関連づけた診断指針を提供するものである。
本発明の方法はきわめて少量の組織検体たとえば舌下組
織塗抹等の使用に適しているが、実際には任意の起源の
生存能のある、好ましくは有核の、好気性の細胞または
組織が使用できる。無態質は、細胞サンプルに励起光、
通常は高エネルギー電子ビームを照射し、測定する無は
質に特徴的な特定のエネルギー帯における蛍光の強度を
観察することにより測定される。本発明の試験を心脈管
系疾患および骨粗髭症／ｒＩＡ槽膿漏患者に実施し、試
験結果を無症候対照群の場合と比較することによって、
心脈管系疾患、骨粗鬆症および歯根膜崩壊に特徴的な細
胞内無機質のプロフィルが明らかにされた。
織塗抹等の使用に適しているが、実際には任意の起源の
生存能のある、好ましくは有核の、好気性の細胞または
組織が使用できる。無態質は、細胞サンプルに励起光、
通常は高エネルギー電子ビームを照射し、測定する無は
質に特徴的な特定のエネルギー帯における蛍光の強度を
観察することにより測定される。本発明の試験を心脈管
系疾患および骨粗髭症／ｒＩＡ槽膿漏患者に実施し、試
験結果を無症候対照群の場合と比較することによって、
心脈管系疾患、骨粗鬆症および歯根膜崩壊に特徴的な細
胞内無機質のプロフィルが明らかにされた。
本発明は、患者から得た各組繊細胞の試験に頼るもので
ある。各種の細胞源が本発明の目的に適しているが、主
たる条件は、細胞が生存能を有し、好ましくは有核で、
表面の微小構造または微絨毛を示していることである。
ある。各種の細胞源が本発明の目的に適しているが、主
たる条件は、細胞が生存能を有し、好ましくは有核で、
表面の微小構造または微絨毛を示していることである。
このような細胞は、通常、生検、腟垢、Ｉ’Ｓ痰、舌下
塗抹等から得られる。
塗抹等から得られる。
舌下塗抹は容易に得られ、患者の全細胞代謝の特徴をよ
く反映する細胞を与えるので好ましい。本発明の方法は
また、血清サンプルならびに白血球および赤血球中の細
胞内無機質濃度のａｌＩＩ定にも有用である。しかしな
がら、これらのサンプル中の無機質濃度は、患者の全身
性の疾患または代謝状態を代表するものではないと考え
られている。
く反映する細胞を与えるので好ましい。本発明の方法は
また、血清サンプルならびに白血球および赤血球中の細
胞内無機質濃度のａｌＩＩ定にも有用である。しかしな
がら、これらのサンプル中の無機質濃度は、患者の全身
性の疾患または代謝状態を代表するものではないと考え
られている。
舌下塗抹は、少繋帯に近接づる口の底部粘膜を強くかき
取ることにより、最近置換された有核の上皮細胞が得ら
れる。採取前に、口腔内を数回蒸溜水ですずぐ必要があ
る。試験前１時間には患者に食物を摂取させない。採取
に使用するスパーチルは、定量すべき無機質の測定に用
いられる電子蛍光を妨害するような痕跡の元素や他の物
質を放出するものであってはならない。（この点は以下
に詳述する）。必要な細胞（ナンブルを採取するために
は、スパーチルで強くこする必要があるが、痛みや出血
を伴うほど激しくする必要はない。
取ることにより、最近置換された有核の上皮細胞が得ら
れる。採取前に、口腔内を数回蒸溜水ですずぐ必要があ
る。試験前１時間には患者に食物を摂取させない。採取
に使用するスパーチルは、定量すべき無機質の測定に用
いられる電子蛍光を妨害するような痕跡の元素や他の物
質を放出するものであってはならない。（この点は以下
に詳述する）。必要な細胞（ナンブルを採取するために
は、スパーチルで強くこする必要があるが、痛みや出血
を伴うほど激しくする必要はない。
スパーチル上の細胞を接読サブストレートに移しく以下
により詳細に説明する）、塗抹標本を動かして細胞を予
め指定された領域に分布させる。
により詳細に説明する）、塗抹標本を動かして細胞を予
め指定された領域に分布させる。
塗抹がまだ新鮮な場合は、緩和な固定剤を細胞上に滴加
し、乾燥させる。適当な固定剤は、電子照射下に蛍光を
発し、試験を妨害するような物質を含まないことが重要
である。適当な固定剤のひとつはＭｅｄｉｃａｌ Ｐａ
ｃｋａｇｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｎ。
し、乾燥させる。適当な固定剤は、電子照射下に蛍光を
発し、試験を妨害するような物質を含まないことが重要
である。適当な固定剤のひとつはＭｅｄｉｃａｌ Ｐａ
ｃｋａｇｉｎｇ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｎ。
Ｐａｎｏｒａｍａ Ｃ１ｔｙ 、 Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉ
ａから” ＣｙｔｏｌｏｇｙＦｉＸｔｌｔｉＶｅ”の商
品名で市販されている９５％エチルアルコールと２，５
％のカーボワックスのＮ品がある。ほかに適当な固定剤
には８４．２％イソプロピルアルコール、６．４％ポリ
エチレングリコールからなり、残部は噴射剤の固定剤が
ある。
ａから” ＣｙｔｏｌｏｇｙＦｉＸｔｌｔｉＶｅ”の商
品名で市販されている９５％エチルアルコールと２，５
％のカーボワックスのＮ品がある。ほかに適当な固定剤
には８４．２％イソプロピルアルコール、６．４％ポリ
エチレングリコールからなり、残部は噴射剤の固定剤が
ある。
この固定剤は５ｐｒａｙ −ｃｙｔｅ ”の商品名でＣ
１ａｙΔｄａｍｓ 、 Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｂｅ
ｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ。
１ａｙΔｄａｍｓ 、 Ｄｉｖｉｓｉｏｎ ｏｆ Ｂｅ
ｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ。
ｐａｒｓｉｐｐａｎｙ、 Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｃｙから市
販されている。塗抹が乾燥したならば、保存しても、試
験のために中央検査苗に送っても、また直ちに試験して
もよい。
販されている。塗抹が乾燥したならば、保存しても、試
験のために中央検査苗に送っても、また直ちに試験して
もよい。
接鏡リブストレートは伝導性で、また細胞無改質から期
待される蛍光パターンを妨害する物’Ｃ２を含んでいて
はならない。とくに適当なものは高純度カーボンスライ
ドまたはブランセ゛ントであり、通常大きさは約１Ｘ２
インチである。スライドはＵｎｉｏｎ Ｃａｒｂｉｄｅ
Ｃｏｒｐ、、Ｄａｎｂｕｒｙ 、 Ｃｏｎｎｃｔｉｃ
ｕｔから入手できるＧＴＡ Ｇｒａｄｅ Ｇｒａｒｏ
ｉｌ■から調製してもよい。通常、小さな祝領滅が隆起
させてあったり、または他の方法で、スライド上の組織
標本を置く適当な位置が指示されている。接読サブスト
レートをガラスまたはプラスチックのような伯の材料で
製造することもできるが、表面に伝導層を沈着させ、以
下に述べる走査電子顕微鏡の操作が可能なようにする必
要がある。
待される蛍光パターンを妨害する物’Ｃ２を含んでいて
はならない。とくに適当なものは高純度カーボンスライ
ドまたはブランセ゛ントであり、通常大きさは約１Ｘ２
インチである。スライドはＵｎｉｏｎ Ｃａｒｂｉｄｅ
Ｃｏｒｐ、、Ｄａｎｂｕｒｙ 、 Ｃｏｎｎｃｔｉｃ
ｕｔから入手できるＧＴＡ Ｇｒａｄｅ Ｇｒａｒｏ
ｉｌ■から調製してもよい。通常、小さな祝領滅が隆起
させてあったり、または他の方法で、スライド上の組織
標本を置く適当な位置が指示されている。接読サブスト
レートをガラスまたはプラスチックのような伯の材料で
製造することもできるが、表面に伝導層を沈着させ、以
下に述べる走査電子顕微鏡の操作が可能なようにする必
要がある。
細胞内無殿質濃度の検知は、細胞サンプルの高エネルギ
ー照射線、通常、電子またはＸ線の照射に依存している
。この照射エネルギーは一部、問題の無機質を含めた標
本中の原子に遷移し、この相互作用の一部で遷移したエ
ネルギーが第二の放射線の蛍光、通常はＸ線を発生させ
る。特定の原子もしくは元素からの蛍光のエネルギー線
またはエネルギー帯はその特定の原子もしくは元素に特
徴的である。本発明は、細胞内に存在する無改質の温度
、これらの特性Ｘ線帯内の蛍光の測定によって定量する
。
ー照射線、通常、電子またはＸ線の照射に依存している
。この照射エネルギーは一部、問題の無機質を含めた標
本中の原子に遷移し、この相互作用の一部で遷移したエ
ネルギーが第二の放射線の蛍光、通常はＸ線を発生させ
る。特定の原子もしくは元素からの蛍光のエネルギー線
またはエネルギー帯はその特定の原子もしくは元素に特
徴的である。本発明は、細胞内に存在する無改質の温度
、これらの特性Ｘ線帯内の蛍光の測定によって定量する
。
エネルギー源は、問題の生物学的無機質を励起するため
に十分のエネルギーを有するものであり、また、周囲の
細胞を励起させないで単一の細胞のみを励起させること
が好ましいことから、集束可能である必要がある。電子
ビームまたはＸ線照年１の使用は、一般に、これらの要
求に合致する。
に十分のエネルギーを有するものであり、また、周囲の
細胞を励起させないで単一の細胞のみを励起させること
が好ましいことから、集束可能である必要がある。電子
ビームまたはＸ線照年１の使用は、一般に、これらの要
求に合致する。
本発明においては、さらに試験中に細胞を可視化できる
ことが要求される。このような可視化により、個々の細
胞を走査し、生存能のある、復古を受けていない細胞を
励起用に選択づることが可能になる。可視化の要求のた
め、本発明の方法の実施に際しては、市販の走査電子顕
微鏡を使用することがきわめて便利である。この種の顕
微鏡は、問題の範囲８〜１２ｋｃＶのエネルギーを有す
る電子ビームを与え、電子ビームの集束が可能で、また
、細胞サンプルを様々な倍率で可視化することができる
。
ことが要求される。このような可視化により、個々の細
胞を走査し、生存能のある、復古を受けていない細胞を
励起用に選択づることが可能になる。可視化の要求のた
め、本発明の方法の実施に際しては、市販の走査電子顕
微鏡を使用することがきわめて便利である。この種の顕
微鏡は、問題の範囲８〜１２ｋｃＶのエネルギーを有す
る電子ビームを与え、電子ビームの集束が可能で、また
、細胞サンプルを様々な倍率で可視化することができる
。
本発明はまた、組繊細胞が電子励起線で照射されたとき
に発光する蛍光を検知するためのシステムが必要になる
。検知システムは、問題のエネルギー帯の範囲内、通常
は約５００〜５０００ ｋｃＶを識別するものでなけれ
ばなない。適当な検知器としては、Ｐｒ１ｎｃｅｔｏｎ
Ｇａｍｍａ Ｔｅｃｈ、 Ｐｒ１ｎｃｅｒｏｎ 。
に発光する蛍光を検知するためのシステムが必要になる
。検知システムは、問題のエネルギー帯の範囲内、通常
は約５００〜５０００ ｋｃＶを識別するものでなけれ
ばなない。適当な検知器としては、Ｐｒ１ｎｃｅｔｏｎ
Ｇａｍｍａ Ｔｅｃｈ、 Ｐｒ１ｎｃｅｒｏｎ 。
Ｎｅｗ Ｊｅｒｃｙを含め多くの業者から市販されてい
るシリコン−リチウム検知管を挙げることができる。
るシリコン−リチウム検知管を挙げることができる。
認められる発光帯は一般に約５００〜５０００ｋｅＶの
範囲に入り、他の光源からの妨害がない特定のバンドを
選択できる。問題の６種の無ｄ質に相当する発光帯およ
び本試験の条件下で発光を認めないように選択された２
つのバックグラウンド発光帯を第１表に示した。一般に
、本発明の方法では、所望の各発光帯について、予め定
められた時間の組織サンプルからの集積発光カウントを
求める。以下にさらに詳細に述べるように、この発光を
バックグラウンド発光と比較すると、単一の細胞内の無
機質の絶対Ｑ度に正比例する値がＩ［７ら第１表 元素 バンド限界 広い限界 狭い限界 バックグラウンド ６８０−８１０ ６８７．５−８
０２．５マグネシウム １１７０−１３３０ １
１７９．８−１３２４．２リン １９０
０−２０９０ １９３５．１−２０８８．９ナトリウム
２２２０−２３９０ ２２２７．３−２３８４
．７塩素 ２５３０−２７１０ ２５３９
．５−２７００．５カリウム ３２２０−３４
００ ３２２７．６−３３９６．４カルシウム
３６００−３７８０ ３６０３．５−３７７６．５バ
ツクグラウンド ４１００−４２５０ ４１００−４２
５０れる。通常、多くの細胞について試験を行い、細胞
濃度を平均として求める。
範囲に入り、他の光源からの妨害がない特定のバンドを
選択できる。問題の６種の無ｄ質に相当する発光帯およ
び本試験の条件下で発光を認めないように選択された２
つのバックグラウンド発光帯を第１表に示した。一般に
、本発明の方法では、所望の各発光帯について、予め定
められた時間の組織サンプルからの集積発光カウントを
求める。以下にさらに詳細に述べるように、この発光を
バックグラウンド発光と比較すると、単一の細胞内の無
機質の絶対Ｑ度に正比例する値がＩ［７ら第１表 元素 バンド限界 広い限界 狭い限界 バックグラウンド ６８０−８１０ ６８７．５−８
０２．５マグネシウム １１７０−１３３０ １
１７９．８−１３２４．２リン １９０
０−２０９０ １９３５．１−２０８８．９ナトリウム
２２２０−２３９０ ２２２７．３−２３８４
．７塩素 ２５３０−２７１０ ２５３９
．５−２７００．５カリウム ３２２０−３４
００ ３２２７．６−３３９６．４カルシウム
３６００−３７８０ ３６０３．５−３７７６．５バ
ツクグラウンド ４１００−４２５０ ４１００−４２
５０れる。通常、多くの細胞について試験を行い、細胞
濃度を平均として求める。
所望の組織検体をカーボンスライド上に載せ、固定した
のち、カーボンスライドを走査電子顕微鏡の検体ホルダ
ーに位置させ、サンプル室内を真空にする。サンプルと
電子ビームの相対的角度が各細胞の可視化と励起に影響
することが明らかにされている。電子ビームとカーボン
スライドの間の結合の角度は約６０°以下に、好ましく
は約５０°以下に、さらに好ましくは約３０°以下と小
さくする。結合の角度が小さくなると、可視像の形成と
Ｘ線蛍光の誘導を行う二次的電子の放出が改善されるよ
うである。さらに、この角度は、全細胞への電子の透過
を最大とし、全体の無成質の濃度の測定を保証する。垂
直に電子ビームが入る慣用の電子顕微鏡を使用する場合
は、検体を水平から上方に傾けて、結合角を小さくする
。
のち、カーボンスライドを走査電子顕微鏡の検体ホルダ
ーに位置させ、サンプル室内を真空にする。サンプルと
電子ビームの相対的角度が各細胞の可視化と励起に影響
することが明らかにされている。電子ビームとカーボン
スライドの間の結合の角度は約６０°以下に、好ましく
は約５０°以下に、さらに好ましくは約３０°以下と小
さくする。結合の角度が小さくなると、可視像の形成と
Ｘ線蛍光の誘導を行う二次的電子の放出が改善されるよ
うである。さらに、この角度は、全細胞への電子の透過
を最大とし、全体の無成質の濃度の測定を保証する。垂
直に電子ビームが入る慣用の電子顕微鏡を使用する場合
は、検体を水平から上方に傾けて、結合角を小さくする
。
細胞検体を保持したスライドを配置し、真空にしたのち
、顕微鏡の倍率を約２５０〜３００倍の範囲に調整する
。通常これで数百の細胞が視野に現れる。次に、有核の
、傷害を受けていない、微絨毛または膜の微小構造が明
瞭な細胞を選択する。
、顕微鏡の倍率を約２５０〜３００倍の範囲に調整する
。通常これで数百の細胞が視野に現れる。次に、有核の
、傷害を受けていない、微絨毛または膜の微小構造が明
瞭な細胞を選択する。
１個の細胞を選択したのち、倍率を上げて、顕微鏡の視
野にその細胞だけが見えるようにする。顕微鏡の性質に
より、電子ビームはその１個の細胞のみに限定され、ス
ライド上の他の細胞には照射が行われない。
野にその細胞だけが見えるようにする。顕微鏡の性質に
より、電子ビームはその１個の細胞のみに限定され、ス
ライド上の他の細胞には照射が行われない。
１個の細胞に集束されたらば、Ｘ線蛍光検知器のスイッ
チを入れ、予め定められた時間、通常は約１００Ｐ？間
、発光パターンを観察する。検知器をカウンター、通常
はコンピューター制御カウンターに接続し、問題の各エ
ネルギー帯についての照射カウントを記録する。予め定
められた試験用量後に、各バンドの総照射の測定値が得
られる。
チを入れ、予め定められた時間、通常は約１００Ｐ？間
、発光パターンを観察する。検知器をカウンター、通常
はコンピューター制御カウンターに接続し、問題の各エ
ネルギー帯についての照射カウントを記録する。予め定
められた試験用量後に、各バンドの総照射の測定値が得
られる。
この操作を所望の数だけの細胞について反復する。
通常は１０〜１００個の範囲、とくに１５〜２０個の範
囲で反復される。全データが蓄積されたならば、細胞あ
たりのエネルギー放出の平均を計算する。問題の各エネ
ルギー帯についての平均エネルギー放出が得られたなら
ば、細胞内の無機質温度を計算する必要がある。
囲で反復される。全データが蓄積されたならば、細胞あ
たりのエネルギー放出の平均を計算する。問題の各エネ
ルギー帯についての平均エネルギー放出が得られたなら
ば、細胞内の無機質温度を計算する必要がある。
システムの性質によっては、濃度を慣用の単位たとえば
ＨｅΩ／［て直接計算することが可能である。各標準の
検饋線と比較すれば、同一の測定時条件たとえば細胞あ
たりの重量または８吊に対して濃度を直接、次のように
計算できる。
ＨｅΩ／［て直接計算することが可能である。各標準の
検饋線と比較すれば、同一の測定時条件たとえば細胞あ
たりの重量または８吊に対して濃度を直接、次のように
計算できる。
５ＴＤ
Ｃ：未知無様質港度
ＳＰ：検体のカウント＊
ＳＴＤ ：標準のカウント＊
ｔ（ｅａ （ＳＴＤ） ：標準の無機質濃度＊バック
グラウンドを差し引いて標準化後の値別法として、本発
明は、単位容量あたりの蛍光カウントとして定義される
任意の濃度単位を用いることもできる。単位容ｆ行は単
一細胞の容量、約８００μｍ３とする。
グラウンドを差し引いて標準化後の値別法として、本発
明は、単位容量あたりの蛍光カウントとして定義される
任意の濃度単位を用いることもできる。単位容ｆ行は単
一細胞の容量、約８００μｍ３とする。
電子顕微鏡の電子ガンの電圧制御は、約５〜１５ｋｅＶ
、好ましくは約８〜１２ｋａＶの範囲に調整される。こ
れは問題の生物学的無機質の励起範囲に相当する。電圧
を上げれば、原子量の大きい元素からのＸ線放出が容易
になるが、原子量の小さい元素、ナトリウムやマグネシ
ウムの効果的な刺激が行われない。５ ｋｅＶ未満の電
圧では、原子量の大ぎい生物学的無機質の適当な励起は
不可能である。励起電圧は１２ｋｅＶを選択するのが便
利である。励起′１を圧を変更した場合には、システム
の再検吊が必要になることに留意すべきである。
、好ましくは約８〜１２ｋａＶの範囲に調整される。こ
れは問題の生物学的無機質の励起範囲に相当する。電圧
を上げれば、原子量の大きい元素からのＸ線放出が容易
になるが、原子量の小さい元素、ナトリウムやマグネシ
ウムの効果的な刺激が行われない。５ ｋｅＶ未満の電
圧では、原子量の大ぎい生物学的無機質の適当な励起は
不可能である。励起電圧は１２ｋｅＶを選択するのが便
利である。励起′１を圧を変更した場合には、システム
の再検吊が必要になることに留意すべきである。
本発明の方法を実施するに際しては、放出エネルギー検
知器を組織スライド上の細胞塗抹に可能な限り接近さ往
て置き、放出Ｘ線の部分をできるだけ高度に捕集すべき
である。検知器はサンプルから５０ｍの範囲内に、好ま
しくはサンプルから２０ｍの範囲内に、さらに好ましく
はサンプルから１０＃Ｉもしくはそれ以下の範囲内に置
かれる。
知器を組織スライド上の細胞塗抹に可能な限り接近さ往
て置き、放出Ｘ線の部分をできるだけ高度に捕集すべき
である。検知器はサンプルから５０ｍの範囲内に、好ま
しくはサンプルから２０ｍの範囲内に、さらに好ましく
はサンプルから１０＃Ｉもしくはそれ以下の範囲内に置
かれる。
スライド面に対する検知器の角度にはとくに限定はない
が約６０°の角が適当で、９０°がとくに好ましいこと
が明らかにされている。これらのパラメータのどれかを
変更した場合には、システムの再検呈が必要なことに留
意すべきである。さらに重要なことは、以下に述べる心
脈管系および代謝の状態に関するデータは、特定の配置
を右する特定のシステムにのみ相関する。システムに実
質的な何らかの変更を行った場合には、このような変更
を反映するようにデータを補正しなＣづればならない。
が約６０°の角が適当で、９０°がとくに好ましいこと
が明らかにされている。これらのパラメータのどれかを
変更した場合には、システムの再検呈が必要なことに留
意すべきである。さらに重要なことは、以下に述べる心
脈管系および代謝の状態に関するデータは、特定の配置
を右する特定のシステムにのみ相関する。システムに実
質的な何らかの変更を行った場合には、このような変更
を反映するようにデータを補正しなＣづればならない。
すでに述べたように、本発明の方法を用いて、心脈管系
疾患および骨粗髭症を有する大群の患者について、マグ
ネシウム、カルシウム、リン、ナトリウム、塩素および
リンの細胞内濃度を測定し、スクリーニングを行った。
疾患および骨粗髭症を有する大群の患者について、マグ
ネシウム、カルシウム、リン、ナトリウム、塩素および
リンの細胞内濃度を測定し、スクリーニングを行った。
患者について認められた濃度を、等しく多数の外見上健
康な、無症状の対照者から得られた濃度と比較し、正常
および非正常無機質濃度を誘導した。この範囲を第２表
に示ず。
康な、無症状の対照者から得られた濃度と比較し、正常
および非正常無機質濃度を誘導した。この範囲を第２表
に示ず。
第２表
マグネシウム ８００−１０００ ６００−８００
カルシウム ５０−８０ ８０−２００カ
リウム １００−４００ ５０−１００ナト
リウム １０−１４ １４−３０塩索
１１−２５ ２５− Ｓ。
カルシウム ５０−８０ ８０−２００カ
リウム １００−４００ ５０−１００ナト
リウム １０−１４ １４−３０塩索
１１−２５ ２５− Ｓ。
＊単位：蛍九強度（ビーク／バックグラウンド）／細胞
容ｆｆ１（８００μ３） 第２表に示した値は、もちろん、患者および対照被検者
のスクリーニングに使用した装買に特異的なものである
。しかしながら、これらの２疾患に関連して確認された
マグネシウムおよびカリウムレベルの低下、ならびにカ
ルシウム、ナトリウム、塩素およびリンの上昇のパター
ンは、どのようなシステムを用いても酋崩的なものと考
えられる。示さなかった疾患も含めて、特定の疾患にお
ける関係を第３表に示す。
容ｆｆ１（８００μ３） 第２表に示した値は、もちろん、患者および対照被検者
のスクリーニングに使用した装買に特異的なものである
。しかしながら、これらの２疾患に関連して確認された
マグネシウムおよびカリウムレベルの低下、ならびにカ
ルシウム、ナトリウム、塩素およびリンの上昇のパター
ンは、どのようなシステムを用いても酋崩的なものと考
えられる。示さなかった疾患も含めて、特定の疾患にお
ける関係を第３表に示す。
第３表
疾患 ＭＱ Ｃａ Ｋ Ｎａ ＣＩ Ｐ心
脈管系疾患 Ｄ Ｅ Ｄ Ｅ Ｎ Ｅ高血
圧症 ＤＥＤＥＮＥ 骨粗髭症／ 歯根膜崩壊 ＤＥＥＮＥＥ Ｄ：低下、Ｅ：上昇、Ｎ：正常 本発明はとくに、心脈管系疾患および／または骨粗髭症
の罹病性のある患者を同定するためのスクリーニング方
法として有用である。本発明の方法を用いれば、患者の
細胞内無改質のプロフィルがＶＩられ、これを第３表の
表示または将来、無機質分析法を用いて作成される相関
と比べることができる。患者がいずれかの無機質濃度に
おいて、とくにマグネシウム、カルシウム、カリウムお
よびリンの濃度に危険因子を示ずことが明らかにされた
場合、その患者が実際、心脈管系疾患、高血圧症、骨粗
鬆症、および／または歯根腹骨崩壊の危険があるかどう
かを確認するため、ざらに診断的調査を行うことができ
る。
脈管系疾患 Ｄ Ｅ Ｄ Ｅ Ｎ Ｅ高血
圧症 ＤＥＤＥＮＥ 骨粗髭症／ 歯根膜崩壊 ＤＥＥＮＥＥ Ｄ：低下、Ｅ：上昇、Ｎ：正常 本発明はとくに、心脈管系疾患および／または骨粗髭症
の罹病性のある患者を同定するためのスクリーニング方
法として有用である。本発明の方法を用いれば、患者の
細胞内無改質のプロフィルがＶＩられ、これを第３表の
表示または将来、無機質分析法を用いて作成される相関
と比べることができる。患者がいずれかの無機質濃度に
おいて、とくにマグネシウム、カルシウム、カリウムお
よびリンの濃度に危険因子を示ずことが明らかにされた
場合、その患者が実際、心脈管系疾患、高血圧症、骨粗
鬆症、および／または歯根腹骨崩壊の危険があるかどう
かを確認するため、ざらに診断的調査を行うことができ
る。
次に、本発明を実験結果によって例示するが、これはい
かなる意味においても本発明を限定するものではない。
かなる意味においても本発明を限定するものではない。
実験の部
材料および方法
ヒト対象から舌下部分を蒸留水で完全にすすいだのち、
舌下細胞塗抹を採取した。化学的に洗浄した木製のスパ
ーチルを用いて細胞を激しくかき取り、塗抹を純粋なカ
ーボンスライドサブストレート上に置いた。まだ湿って
いる間に塗抹を、上述のように、使い捨て包装の液体細
胞固定剤または細胞スプレー固定剤のいずれかを用いて
固定した。スライドを放謬して風乾したのち、走査電子
顕微ｇｆｌ （Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ５ｃ
ｉｅｎｔｉｆｉｃ ［ｎｓｔｒｕｍｅＭｓ。
舌下細胞塗抹を採取した。化学的に洗浄した木製のスパ
ーチルを用いて細胞を激しくかき取り、塗抹を純粋なカ
ーボンスライドサブストレート上に置いた。まだ湿って
いる間に塗抹を、上述のように、使い捨て包装の液体細
胞固定剤または細胞スプレー固定剤のいずれかを用いて
固定した。スライドを放謬して風乾したのち、走査電子
顕微ｇｆｌ （Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ５ｃ
ｉｅｎｔｉｆｉｃ ［ｎｓｔｒｕｍｅＭｓ。
５ａｎｔａ Ｃ１ａｒａ 、 Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ、
ＩＩＩＡ型）で、サイズ、分布および細胞の特徴、す
なわち、核、細胞膜成分、均一部分、重複などを調べた
。電子ビームの結合角度は５５°とし、蛍光Ｘ線をエネ
ルギー分数Ｘ線分析装置（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ Ｇａｍ
ｍａ Ｔｅｃｈ、 ＳｙｓｔｅｍＩ［［，３０００Ｔ型
）を用いて検知した。細胞容量あたりの各元素について
のＸ線強度の計算は、上述のように予め定められたエネ
ルギー帯内の各元素について認められたピークとバック
グラウンド照射の比に基づいて実施した。このピーク対
バックグラウンド値を、多数の有症状および無症状対象
のスクリーニングで得られた正常および異常状態と対比
させた。
ＩＩＩＡ型）で、サイズ、分布および細胞の特徴、す
なわち、核、細胞膜成分、均一部分、重複などを調べた
。電子ビームの結合角度は５５°とし、蛍光Ｘ線をエネ
ルギー分数Ｘ線分析装置（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ Ｇａｍ
ｍａ Ｔｅｃｈ、 ＳｙｓｔｅｍＩ［［，３０００Ｔ型
）を用いて検知した。細胞容量あたりの各元素について
のＸ線強度の計算は、上述のように予め定められたエネ
ルギー帯内の各元素について認められたピークとバック
グラウンド照射の比に基づいて実施した。このピーク対
バックグラウンド値を、多数の有症状および無症状対象
のスクリーニングで得られた正常および異常状態と対比
させた。
３群の健康、無症状対照群について試験を行った。第１
の群は１１例の年齢が一致する運ｔｌ＋選手からなる。
の群は１１例の年齢が一致する運ｔｌ＋選手からなる。
第２の群は疾患の明らかな徴候のない１０例の混合対照
である。第３群は４例の混合対照は、疾患の明らかな徴
候を示さず、さらに血管造影で冠動脈疾患（ＣＡＤ）の
ないことが明らかにされた群である。
である。第３群は４例の混合対照は、疾患の明らかな徴
候を示さず、さらに血管造影で冠動脈疾患（ＣＡＤ）の
ないことが明らかにされた群である。
患者についても４群の試験を実施した。第１群は血管造
影で心脈管系疾患と診断され、バイパス手術を受けた１
１例の患者である。第２群は動脈硬化性心疾患（△５Ｈ
Ｄ）、末梢性血管疾患および高血圧症（カリウム投与は
行われている者もいない否も含む）と診断された３４例
の患者からなる。第３群は心房細動（ΔＦ）と診断され
た患者である。第４群は骨粗鬆症および／または歯根腹
骨崩壊と診断された１６例の患者からなる。
影で心脈管系疾患と診断され、バイパス手術を受けた１
１例の患者である。第２群は動脈硬化性心疾患（△５Ｈ
Ｄ）、末梢性血管疾患および高血圧症（カリウム投与は
行われている者もいない否も含む）と診断された３４例
の患者からなる。第３群は心房細動（ΔＦ）と診断され
た患者である。第４群は骨粗鬆症および／または歯根腹
骨崩壊と診断された１６例の患者からなる。
結 果
各試験および対照群について認められた細胞内無磯質濶
度を第４表に示す。濃度の単位は１、蛍光（ビーク／バ
ックグラウンド）／細胞容量（８００μ３）である。
度を第４表に示す。濃度の単位は１、蛍光（ビーク／バ
ックグラウンド）／細胞容量（８００μ３）である。
バイパス手術を施行された患者については、手術時に採
取された凍結された右心房、動脈パンチおよび伏在静脈
の凍結乾燥生検標本の分析も行い、評価した。生検標本
の評価にも、舌下塗抹の場合と同じ方法を用いた。結果
は、舌下細胞内の細胞内イオンレベルと外）１的サンプ
ルにおけるレベルとに高い相関のあることを示した。１
１ ＶＡの舌下細胞中のマグネシウムレベルは、対照の
８０６゜６に対して７０８．８であった。カルシウムは
舌下細胞でも、また心房組織および動脈組織のいずれに
おいても上昇していた。伏在静脈では、カルシウムもマ
グネシウムも対照レベルにあった。カリ・クムの静脈内
投与を受けた患茜では、舌Ｆ剣胞のカリウムも塩素イオ
ンも上述のように正常範囲にあった。
取された凍結された右心房、動脈パンチおよび伏在静脈
の凍結乾燥生検標本の分析も行い、評価した。生検標本
の評価にも、舌下塗抹の場合と同じ方法を用いた。結果
は、舌下細胞内の細胞内イオンレベルと外）１的サンプ
ルにおけるレベルとに高い相関のあることを示した。１
１ ＶＡの舌下細胞中のマグネシウムレベルは、対照の
８０６゜６に対して７０８．８であった。カルシウムは
舌下細胞でも、また心房組織および動脈組織のいずれに
おいても上昇していた。伏在静脈では、カルシウムもマ
グネシウムも対照レベルにあった。カリ・クムの静脈内
投与を受けた患茜では、舌Ｆ剣胞のカリウムも塩素イオ
ンも上述のように正常範囲にあった。
本発明にＪ：れば、カルシウム、マグネシウム、リン、
カリウム、ナトリウムおよび塩素の細胞内濃度を検出す
るための正確かつ高感度の定量法が提供される。このよ
うな濃度は、骨疾患、心脈管系疾患および関連疾患に診
断的価値を有する。
カリウム、ナトリウムおよび塩素の細胞内濃度を検出す
るための正確かつ高感度の定量法が提供される。このよ
うな濃度は、骨疾患、心脈管系疾患および関連疾患に診
断的価値を有する。
以上述べたように、本発明を、その理解を容易にするた
めに、例示を用いて詳細に説明したが、その改変および
変更が本発明の範囲内に包含されるものであることは当
然である。
めに、例示を用いて詳細に説明したが、その改変および
変更が本発明の範囲内に包含されるものであることは当
然である。
Claims (10)
- （１）無機質の細胞内濃度を定量するにあたり、組織検
体に第一の予め選択されたエネルギーの励起光を照射し
、特定の無機質に特徴的な少なくとも１種のエネルギー
帯の範囲内で組織検体からの蛍光の強度を測定し、測定
された蛍光強度を第二のエネルギー帯における蛍光バッ
クグラウンドと比較して無機質の細胞内濃度を決定する
ことを特徴とする方法。 - （２）照射励起光は８〜１２ｋｅＶの範囲のエネルギー
を有する集束電子ビームである特許請求の範囲第１項に
記載の方法。 - （３）照射励起光は組織検体の単一の細胞に向けられる
特許請求の範囲第１項に記載の方法。 - （４）無機質の細胞内濃度を定量するにあたり、組織細
胞塗抹に第一の予め選択されたエネルギーの走査電子ビ
ームを照射し、副次的電子検知器を用いて塗抹中の各細
胞を可視化し、予め定められた選択特性に基づいて少な
くとも１個の生存能のある細胞を確定し、その１個の生
存能のある細胞を電子ビームで走査し、特定の無機質に
特徴的な少なくとも１種のエネルギー帯の範囲内でその
１個の生存能ある細胞から放射される蛍光の強度を測定
し、測定された蛍光強度を第二のエネルギー帯における
蛍光バックグラウンドと比較して無機質の細胞内濃度を
決定することを特徴とする方法。 - （５）核、微絨毛、および膜の微細構造の存在に基づい
て１個の生存能のある細胞を選択する特許請求の範囲第
４項に記載の方法。 - （６）無機質に特徴的な蛍光を約５００〜５０００ｋｅ
Ｖの範囲のエネルギーを有する放射光の測定が可能なＸ
線検知器によつて測定する特許請求の範囲第４項に記載
の方法。 - （７）複数個の細胞内無機質の細胞内濃度を測定し、こ
の細胞内無機質濃度を予め決定された正常濃度と比較し
て上昇、低下、および正常濃度のパターンを調べ、その
特徴に基づいて、疾患、疾患罹病性または代謝状態を診
断することを特徴とする疾患、疾患罹病性、および代謝
状態の診断方法。 - （８）細胞内無機質の細胞内濃度は、組繊細胞検体に第
一の予め選択されたエネルギーの励起光を照射し、細胞
内無機質に特徴的な複数個のエネルギー帯の範囲内で組
織検体からの蛍光の強度を測定し、この蛍光強度を第二
のエネルギー帯における蛍光バックグラウンドと比較し
て細胞無機質の細胞内濃度を決定することにより求める
特許請求の範囲第７項に記載の診断方法。 - （９）組織検体は組織塗抹である特許請求の範囲第８項
に記載の診断方法。 - （１０）組織塗抹は舌下組織塗抹である特許請求の範囲
第９項に記載の診断方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/878,936 US4717826A (en) | 1986-06-26 | 1986-06-26 | Method for determining intracellular mineral levels |
| US878936 | 1986-06-26 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6325536A true JPS6325536A (ja) | 1988-02-03 |
| JPH083468B2 JPH083468B2 (ja) | 1996-01-17 |
Family
ID=25373118
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62159505A Expired - Lifetime JPH083468B2 (ja) | 1986-06-26 | 1987-06-26 | 細胞内無機質濃度の定量方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4717826A (ja) |
| EP (1) | EP0254864B1 (ja) |
| JP (1) | JPH083468B2 (ja) |
| AT (1) | ATE106144T1 (ja) |
| DE (1) | DE3789884T2 (ja) |
| DK (1) | DK165931C (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63205545A (ja) * | 1987-02-20 | 1988-08-25 | Japan Spectroscopic Co | 細胞内カルシウム測定装置 |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5210414A (en) * | 1991-03-29 | 1993-05-11 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Differential surface composition analysis by multiple-voltage electron beam X-ray spectroscopy |
| DE19547042A1 (de) * | 1994-12-21 | 1996-06-27 | Thomas Dr Ing Loeser | Verfahren zur Klassifikation von Erkrankungen einer Person |
| DE19702774C2 (de) * | 1997-01-27 | 2002-04-18 | Pe Diagnostik Gmbh | Verfahren zur Ermittlung von Daten für eine Wissensbank und ihre Verwendung bei der Analyse von Gleichgewichtssituationen der in Wechselwirkung befindlichen Mineralien und Spurenelemente in Körperflüssigkeiten |
| US8804897B2 (en) * | 2006-07-21 | 2014-08-12 | Areva Inc. | Integrated method to analyze crystals in deposits |
| WO2012050620A1 (en) | 2010-10-14 | 2012-04-19 | Caldera Pharmaceuticals, Inc. | Method for analysis using x-ray flourescence |
| WO2017184564A1 (en) | 2016-04-18 | 2017-10-26 | Icagen, Inc. | Sensors and sensor arrays for detection of analytes |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3525863A (en) * | 1967-12-28 | 1970-08-25 | Minnesota Mining & Mfg | Differential emission x-ray gauging apparatus and method using two monochromatic x-ray beams of balanced intensity |
| JPS51119289A (en) * | 1974-11-29 | 1976-10-19 | Agency Of Ind Science & Technol | Method of determining the heterogenous sample of micro-particles |
| US3984683A (en) * | 1975-05-27 | 1976-10-05 | Rca Corporation | Apparatus and method for analyzing biological cells for malignancy |
| JPS5780649A (en) * | 1980-11-10 | 1982-05-20 | Hitachi Ltd | Electron ray energy analyzer |
| JPS57113697A (en) * | 1981-01-05 | 1982-07-15 | Murata Mfg Co Ltd | Piezoelectric type speaker |
-
1986
- 1986-06-26 US US06/878,936 patent/US4717826A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-06-22 DE DE3789884T patent/DE3789884T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-22 EP EP87108922A patent/EP0254864B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-22 AT AT87108922T patent/ATE106144T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-06-25 DK DK323287A patent/DK165931C/da not_active IP Right Cessation
- 1987-06-26 JP JP62159505A patent/JPH083468B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS63205545A (ja) * | 1987-02-20 | 1988-08-25 | Japan Spectroscopic Co | 細胞内カルシウム測定装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ATE106144T1 (de) | 1994-06-15 |
| US4717826A (en) | 1988-01-05 |
| EP0254864B1 (en) | 1994-05-25 |
| DK323287D0 (da) | 1987-06-25 |
| JPH083468B2 (ja) | 1996-01-17 |
| DK165931B (da) | 1993-02-08 |
| DK323287A (da) | 1988-02-12 |
| EP0254864A3 (en) | 1990-09-12 |
| DE3789884D1 (de) | 1994-06-30 |
| DK165931C (da) | 1993-06-28 |
| EP0254864A2 (en) | 1988-02-03 |
| DE3789884T2 (de) | 1994-10-20 |
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