JPS63258599A - ジペプチド及びトリペプチドに富んだ酵素タンパク質加水分解物の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は特に人工栄養及び食事療法に用いることができ
る、ジペプチド及びトリペプチドに冨んだタンパク質酵
素加水分解物を簡易かつ経済的に製造する方法に関する
。

ジペプチド及びトリペプチドが人工栄養や食事療法で実
際の価値を有することが今や知られかつ証明されている
。

人工栄養は物理的損傷（事故、外科手術、食道癌等）ゆ
えに又は通常の栄養補給をすることができない一般的な
生理的状態（昏睡、重度の感染症、外傷、火傷等）ゆえ
に通常の方法で食物を摂取することができない患者に適
用される技術である。

人工栄養は自然のルート（消化管）によって投与するこ
とができ、この場合経口又は経腸栄養と呼ぶ。又、人工
栄養は直接血流中に投与することもでき、この場合非経
口栄養と呼ぶ。

完全な栄養は脂質、炭水化物、無機質及びビタミンと混
合した、タンパク類（タンパク質、ペプチド、アミノ酸
）の形の窒素の投与を必要とする。

通常の栄養補給では消費する多くの窒素はタンパク質の
形で摂取され、消化管で酵素によって消化される。

しかしながら上記した人工栄養が用いられる場合は大抵
の場合、病気による酵素欠乏により、又は病気もしくは
外科的介入後腸の限られた部分しか機能しない事実によ
る酵素欠乏によりタンパク質は効率よく消化されない。

経口及び経腸栄養において、純粋なアミノ酸類がタンパ
ク供給として用いられる場合があるが、アミノ酸類は多
くの理論的及び実際的欠点を有している。

アミノ酸は腸から能動輸送方式によって輸送される。こ
の場合、異なるアミノ酸同志が輸送を競合し、経腸吸収
はこの競合によって制限される。

ある病的な状態はあるアミノ酸類の輸送を攪乱し、吸収
能力の減少を引き起こす。

最近になって、ペプチド結合によって結合した２〜３の
アミノ酸（ジペプチド又はトリペプチド）よりなるペプ
チド分子がアミノ酸の輸送のメカニズムとは異なったメ
カニズムにより、そっくりそのまま腸から吸収されるこ
とが明らかにされた（Ｄ、　　Ｂ、　Ａ、　５ｉｌｋ、
、　Ｐｅｐｔｉｄｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｉｎ　ｍ
ａｎ（ヒトにおけるペプチド吸収）　−Ｇｕｔ　　１５
．１９４（１９７４）　　；　　Ｄ、Ｍ、　ＭａＬｔｈ
ｅｗｓ、、　Ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌａｂｓｏｒｐｔｊｏ
ｎ　ｏｆ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　（ペプチドの経腸吸収）
−Ｐｈｙｓ、　　Ｒｅｖ、　　５　５−１５３７　　（
１’９７５）　　；　　Ｓ、八。

Ａｄｉｂｉ　ａｎｄ　　Ｙ、Ｓ、　Ｋｉｍ　％　Ｐｅｐ
ｔｉｄｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ａｎｄｈｙｄｒｏｌ
ｙｓｉｓ、　ｉｎ　Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｇａ
ｓｔｒｏ−４ｎｔｅｓｔｉｎａｌｔｒａｃｔ　　（胃腸
管の生理学におけるペプチド吸収及び加水分解）　、Ｅ
ｄ、　Ｌ、　Ｒ，Ｊｏｈｎｓｏｎ　、、Ｒａｖｅｎ　Ｐ
ｒｅｓｓＮｅｗ　Ｙｏｒｋ　ｌ　０７３）。

腸の表面細胞は明らかにジペプチド及びトリペプチドを
吸収し、その場でそれらをアミノ酸に加水分解し、その
アミノ酸を血液中に放出する。

タンパク質の酵素的消化は低級ペプチド又は小さなペプ
チド（ｓｍａｌｌ　ｐｅｐｔｉｄｅｓ　）を生産する手
段として広（用いられてきた。

ところがこれらの生産物は広範囲のペプチド鎖長を有し
ており（２〜２０以上のアミノ酸）、特に必要とされる
ジペプチド及びトリペプチドの含量は非常に低い（５〜
２０％のオーダーである）。

ジペプチド及びトリペプチドより大きなペプチドは上記
の運動性吸収（ｋｔｎｅｔｉｃ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ
　）の利点を示さず、従ってこれらの有意義でないこと
が明らかにされたペプチド混合物は臨床使用において最
適の窒素吸収を与えない。

酸性媒体中で用いることができる酵素の助けでタンパク
質加水分解物を製造することも提案されたが、消化時間
が８〜７２時間の長時間に亘る。

これらの加水分解物は７００ダルトンより小さい分子量
のペプチドを含有し得る。しかしながら、用いる酵素は
食料品及び栄養品業界で通常用いられるものでなく、無
害であると合意して認識されているものではない。さら
に、加水分解時間の関係から加水分解は殺菌状態で行う
か（実質的に設備コストを増大させる）、又は防腐剤（
その後の除去が困難である）の存在下に行わなければな
らない。

従って一般に行われているタンパク質の酵素的加水分解
法は主としてジペプチドとトリペプチドを含む混合物を
生産するのに適当でない。

ジペプチド及びトリペプチドは又化学合成によっても製
造することができ、人工栄養として有効に用いることが
できることがジペプチド混合物について示されている（
　Ｐ、Ｆ［ＪＲＳＴ　５Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　１ｎｐａｒ
ｅｎｔｅｒａｌ　ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　（非経口栄養に
おけるペプチド）　　−Ｃ１１ｎｉｃａｌ　Ｎｕｔｒｉ
ｔｉｏｎ　　４　　（５ｕｐｉ１．　１９８５）　　、
ｐ、　　　１　０　５　　；　　Ｂ、Ａ、　　ＫＲＺＹ
ＳＩＫ　　ａｎｄ　　Ｓ、Ａ、　　八〇ＩＢＩ、Ｃｏｍ
ｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　
ｇｌｙｃｉｎｅ　１ｎｊｅｃｔｅｄｉｎｔｒａｖｅｎｉ
ｏｕｓｌｙ　ｉｎ　ｆｒｅｅ　ａｎｄ　ｄｉｐｅｐｔｉ
ｄｅ　ｆｏｒｍｓ（遊離及びジペプチド形態で静脈内注
射したグリシンの代謝の比較）　　；　　Ｈ，Ｊ、　５
ＴＥＩＮＩＩＡＴＲＤＴ　、　Ｇ、八。

ＰＡＬＥＯ５，Ｍ、　　ＢＲＡＮＤＬ　　、Ｗル、　　
ＦＥＫＬ　　ａｎｄ　　Ｓ、八、　１旧Ｂｌ。

Ｅｆｆｉｃａｃｙ　ｏｆ　５ｙｎｔｈｅｔｔｃ　ｄｉｐ
ｅｐｔｉｄｅ　ｍ１ｘｔｕｒｅ　ａｓｔｈｅ　５ｏｕｒ
ｃｅ　ｏｆ　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｆｏｒ　ｔｏｔ
ａｌ　ｐａｒｅｎｔｅｒａｌｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　ｉｎ
　ａ　ｓｕｂｈｕｍａｎ　ｐｒｉｍａｔｅ　（類人猿に
おける全非経栄養用のアミノ酸源としての合成ジペプチ
ド混合物の効能）〕。

しかしながら、この方法も欠点を有している。

第１に可能なすべての数のジペプチド（４００）をほど
よく合成することができない。ゆえに実験は限られた数
のグリシンを含有するジペプチド（すなわちグリシン−
ＸＳＸは他のアミノ酸）について行われている。

この方法は利用し得るジペプチドの数を制限しており、
グリシンの過剰による不均衡に帰結する。

第２に化学的合成法の別の制限はジペプチドの生産コス
トである。すなわち生産コストは栄養的使用には高すぎ
る。

本発明は上記一般的方法の欠点を克服することを可能に
するものであり、主としてジペプチド及びトリペプチド
を含有するペプチド混合物の生産のためのタンパク質の
酵素的加水分解物のための方法に関する。

すでに上記したごとく、経口又は経腸栄養補給において
ジペプチド及びトリペプチドは通常の栄養分く高分子栄
養ともいわれる）及び成分的食物（ｅｌｅｌｅｍｅｎｔ
ａｒｙ　ｄｉｅｔｓ　）（アミノ酸形態のタンパク質を
含有する）に対しいくつかの利点を有する。

第１の利点は運動的性質（ａ　ｋｉｎｅｔｉｃ　ｎａｔ
ｕｒｅ　）についてである。すなわち腸においてはタン
パク類が成分的もしくはオリゴマー的形／Ｌｉ（胃及び
膵臓消化の産物）にある場合より、ジペプチド及びトリ
ペプチドの形態にある場合の方が、窒素供給はより迅速
である。

第２の利点はジペプチド及びトリペプチドは吸収につい
てアミノ酸と競合しないことから導かれる。

第３の利点は窒素に対する容量オスモル濃度（ｏｓｍｏ
ｌａｒｉｔｙ　）の比が低いことと関連している（アミ
ノ酸溶液の当該比より２〜３倍低い；このことは溶液を
窒素に富んだものとすることを可能にする；この溶液の
容量オスモル濃度は生理的値３００〜５００　ｍｉｓ／
　１２と大差ない）。

ゆえにアミノ酸輸送系が撹乱されるような病的な状態の
下でもジペプチド及びトリペプチドの吸収は変化するこ
とな（残ることが起こり得る。

本発明の方法は以下の３つの酵素と同時に又は引き続い
て添加してタンパク質を７〜１ｏの中性〜アルカリ性の
ｐＨ１温度２０〜７０℃、好ましくは３０〜５０℃及び
加水分解時間好ましくは３００分以内の加水分解条件で
酵素的に加水分解する工程を含むことを限外濾過する ：ａ）　ほぼ中性のｐＨ（ｐＨ５〜８）の媒体中で用い
ることができ、一般にバチルス・ズブチリス菌株から抽
出され、かツＮｏｖｏ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ　Ｂｎｚｙ
−ｍｅｓ　Ｓ、Ａ、社からのＮｅｕｔｒａｓｅ■、Ｒａ
ｐｉｄａｓｅ（Ｔｉ５ｔ　Ｂｒｏｃａｄｅｓ社からのＰ
ｒｏｔｇａｓｅ　Ｂ　５００■及びＭｉｌｅｓ社からの
ＨｏＴ、Ｐｒｏｔ６ｏ１ｙｔｉｑｕｅ　”よりなる群か
ら選ばれる細菌プロテアーゼ、ｂ）　アルカリ性媒体（
ｐＨ７〜１１）中で用いることができ、例えばバチルス
・リケニホルミス又はバチルス・ズブチリス菌株から抽
出され、かつＮｏｖａ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ　Ｅｎｚｙ
ｍｅｓ　　Ｓ、＾１社からのＡｌｃａｌａｓｅ■、Ｒａ
ｐｉｄａｓｅ　Ｇ１５ｔ　Ｂｒｏｃａｄｅｓ　　社から
のＰｒｏｔｅａｓｅ　　Ａ２■及びＭｉｌｅｓ社からの
Ｏｐｔ　ｉｍａｓｅ■よりなる群から選ばれる細菌プロ
テアーゼ、及び Ｃ））［プシン、トリプシン濃縮物又はＰＢＭ■なる名
称のＮｅｖｏ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅ　Ｅｎｚｙｍｅｓ　
　Ｓ、Ａ、社からの市販品をはじめとする動物起源の膵
臓の酵素。

加水分解するタンパク質物質の水性懸濁液中の濃度は好
ましくは５〜２０ｗ／ｖ％である。

酵素的加水分解工程は例えば９５〜１００℃で１０〜１
５分加熱することによって酵素活性を破壊することによ
って停止する。

得られるタンパク質酵素加水分解物は必要に応じ限外濾
過によっそ精製する。

この加水分解物を製造するのに用いることができるタン
パク質は、工業的観点から例えば以下のものを包含する
： 卯白（オポアルブミン）；牛乳タンパク質（ラクトアル
ブミン及びカゼイン）；屠殺場からのタンパク！（血清
アルブミン、脱色ヘモグロビン）：漁業及び魚缶詰工業
からの産物；及び植物起源の産物（大豆及びアルファル
ファタンパク質）。

Ｎｅｕ　ｔｒａｓｅ■（Ｎｏｖｏ　）はバチルス・ズブ
チリスの純粋培養によって製造される淡褐色液体とじて
存在する。そのタンパク質分解活性はＱ、　５　Ａｎｓ
ｏｎｕｎｉｔ／ｇである（Ａｎｓｏｎ単位は実験条件下
で１分間に１ｍｍｏｌ　のフォリン陽性（ｆｏｌｉｎ　
−ｐｏｓｉｔｉｖｅ）アミノ酸（チロシンとして表わす
）を放出する酵素の量に対応する酵素単位である］。

＾１ｃａｌａｓｅ■（Ｎｏｖｏ　）　　はバチルス・リ
ケニホルミスの培養液の精製、濃縮によって生産され、
暗褐色液体の形態で存在する。そのタンパク質分解活性
は０．６Ａｎｓｏｎ　ｕｎｉｔ／　ｇ又は２．４Ａｎｓ
ｏｎ　ｕｎｉｔ／ｇである。

ＰＧＭ■（豚起源のトリプシン濃縮物と牛起源のトリプ
シン濃縮物の標準化混合によって生産され、黄色がかっ
た粉末の形態で存在する。そのタンパク質分解活性は、
トリプシン活性について少なくとも１８００　ＮＦ　／
ＵＳＰ単位、キモトリプシン活性について少なくとも３
５０　ＮＦ　／ＵＳＰであり、又トリプシン／キモトリ
プシン比は３，７５〜６である。

基質に対する酵素の比率はＡＩｃａｌａｓｅ又はＮｅｕ
ｔｒａｓｅについて５〜１０％、ＰＢＭについて０．５
〜１％である。

本発明の方法は、殺菌装置又は遠心分離装置を要さない
限り経済的に行うことができる。

さらに選ばれた酵素はすべて、すでに食料品工業で使用
されているよく知られた微生物に由来し問題なく無害で
ある。

本発明は１つの工程でタンパク質を分解して、その組成
が高ジペプチド及び］・リベプチド含量と低遊離アミノ
酸含量によって特徴づけられる低分子量タンパク類の混
合物とすることができるプロテアーゼの組合せの、本発
明者らによる発見に基づいている。

本発明の酵素消化は塩基性又は中性媒体中、ナトリウム
及びカリウムの供給を目的とする使用のために望まる量
に制限し、加水分解時間を、簡単な操作条件下での外界
からの細菌の混入を防止すべく、好ましくは３００分を
越えないようにして行う。

すでに上述したごとく、本発明の新規性は相乗的及び相
補的態様で継続的に又は同等に働く３つの酵素の組合せ
の選択にある。

以下のテストはタンパク質の酵素的加水分解においてこ
れらの酵素を個々に又はペアで用いた場合に比し、すべ
て組合せて用いた場合の優位性を示すものである。

表−■は研究対称の酵素及びそれらを用いた加水分解条
件（ｐＨ１温度、濃度）をリストしたものである。

表−■はこれらの酵素を個々に、ペアで又は３つとも用
いて、噴霧乾燥した製品形態の鶏卵白味又は牛乳カゼイ
ンについて行った酵素的加水分解１５例の結果を示す。

表−■にリストした１５のテストを行うのに用いた特定
の方法は以下の工程を含む： ａ）　　ｌｌ拌機及びｐＨ維持装置を備えた、定温にコ
ントロールされたタンク中で１．タンパク質出発物質を
濃度１５％（１５０ｇ／ｌ）で蒸留水に懸濁し、 ｂ）　　ｐＨを８、温度を４５℃（ペプシン加水分解の
場合は［］Ｈ２，０１４０℃）に調整、維持し、Ｃ）酵
素標品を表−■に示す用量で加え、ｄ）３００分を越え
ない時間加水分解し、加水分解の進行を用いたＯＨ−イ
オン（ペプシンでばＨ°イオン）の量で追跡し、目的と
する分解に達したら反応を停止し、 ｅ）１００℃で１０分加熱して酵素活性を失活させ、つ
いで、 ｆ）加水分解物を限外濾過して、限外濾過液を回収する
（カットオフ点１０．０００又は１５，０００ダルトン
）。

限外濾過した加水分解物を分析して以下のことを測定す
る： 加水分解率（又はその逆、加水分解生産物の平均サイズ
）、遊離アミノ酸比率、及び限外濾過した加水分解物中
のジペプチドとトリペプチドの比率。

表−■から以上のことが分る： （１）　　反応器に同時に又は数分間隔で導入した３つ
の酵素の組合せにより、単−酵素又は２つの酵素の組合
せによって得られた場合よりつねにより大きな加水分解
率が得られる。

（２）　　得られるペプチドの平均サイズに関する限り
酵素の性質は決定的要因となる。

（３）　　ある場合には得られる生産物に影響を与える
ことなく酵素の添加順序を変えることができる。

しかしながら他の場合にはこの順序が加水分解条件の重
要な面となる。

（４）第３の酵素の使用はつねに遊離アミノ酸の比率の
有意な増加を伴わない（テスト８．９と１０、及び１４
と１５との比較）。

（５）研究したこれらの酵素の種々の組合せの中で１つ
のカテゴリーが高度の加水分解率と低比率の遊離アミノ
酸の面からもっともよく機能するようである。その組合
せとはＡｌｃａｌａｓｅ■／Ｎｅｕ　ｔｒａｓｅ■／　
ＰＥＭ■（テスト１２及び１５）及びトリプシン／　Ａ
ｌｃａｌａｓｅ■／　Ｎｅｕｔｒａｓｅ■（テスト１０
及び１１）である。

（６）　　Ａｌｃａｌａｓｅ■／　Ｎｅｕｔｒａｓｅ■
／　ＰＥＭ■（又はトリプシン／　Ａｌｃａｌａｓｅ　
／　Ｎｅｕｔｒａｓｅ　）の組合せは他のタンパク質出
発物質〔ウシ及びブタの血清アルブミン、大豆及びアル
ファルファタンパク質、ラクトアルブミン、牛乳、脱色
ヘモグロビン及び漁業の高品質化製品（廃棄魚製品）〕
にも用いることができる。これらの物質のすべての場合
において、加水分解率は同じ大きさの程度であり、遊離
アミノ酸の比率は出発物質がすでに加水分解物である場
合（脱色ヘモグロビン及び漁業の高品質化製品）を除き
５％程度である。例外とした２つの場合においては遊離
アミノ酸の比率は１０〜１５重量％である。

（７）酵素標品ＰＥＭ■／　Ａｌｃａｌａｓｓ■／　Ｎ
ｅｕｔｒａｓｅ■は同等の特性の、特に他の会社によっ
て製造された他の酵素標品によって代替できる。それら
の他の酵素標品はＲａｐｉｄａｓｅ　Ｇ１５ｔ　Ｂｒｏ
ｃａｄｅｓ社からのＰｒｏｔｅａｓｅ　Ｂ　５００　　
、Ｍｉｌｅｓ社からのＨｌＴ、　Ｐｒｏｔ６ｏ１ｙｔｉ
ｑｕｅ■、Ｒａｐｉｄａｓｅ　Ｇ１５ｔＢｒｏｃａｄｅ
ｓ社からのＰｒｏｔ６ａｓｅ　Ａｌ及びＭｉｌｅｓ社か
らのＯｐｔｉｍａｓｅ　Ｏを包含する。

（８）テスト１２及び１５に関する限り、加水分解媒体
中のタンパク質出発物質の濃度は臨界的意義を有さない
。

酵素標品を表−■で示した一定の酵素／基質比で用いる
条件下で、タンパク質出発物質濃度５〜２０Ｗ／Ｖ％で
行ったテストは加水分解率又はペプチドサイズに有意の
変化を与えなかった。

タンパク質分解物は一般に、タンパク質に存在するペプ
チド結合の数に対する切断ペプチド結合の数の、パーセ
ントとしての比率である加水分解率（ｄｅｇ、ｒｅｅ　
ｏｆ　ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　）　（Ｄ　Ｈ）によって
性格づけられる。

もしＤＨ及び遊離アミノ酸の比率が分っていればペプチ
ドの平均サイズを測定できる。（しかしながらアミノ酸
の比率が低いならば加水分解物の平均サイズとペプチド
の平均サイズは実際上等しくなる。

ＤＨ（又は加水分解の平均サイズ）は酵素加水分解物の
全化学的加水分解の前後で一般アミン基の数を測定する
ことができる定量分析に付することによって計算できる
。

遊離アミノ酸の比率はＡＦＮＯＲ技術（ＮＥＶ７６−１
１５）をタンパク質酵素加水分解物に適用することによ
って決定できる。

ジペプチドとトリペプチドの比率は分析的配位子交換ク
ロマトグラフ　イー　（ａｎａｌｙｔｉｃａｌ　ｌｉｇ
ａｎｄｅｘｃｈａｎｇｅ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ
ｙ　）によって査定できる。

静止相はＢ、　ＲＯＴＨＢＮＢＵＨＬＥＲの技術（Ａｎ
ａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ。

１９７９、■−３８７−７５）によってつくられたセフ
ァデックス−銅よりなる。クロマトグラフィーは平均サ
イズの減少する順にオリゴペプチドが溶出する条件で行
う。

以下のことが得られた７つの画分について決定される：
平均値（Ｎ）及び加水分解物に含有されるサイズ（Ｎ）
のペプチドの比率。

テスト１２及び１５にそれぞれ関する表−■及び■はト
リペプチドより大きなオリゴペプチドが°少なくとも５
に等しい平均サイズを有しているいることを示しており
、このことはジペプチド及びトリペプチド含量が５０重
量％以上であることを意味する。

本発明を以下の非制限的実施例によって説明する。

実施例１ １、変性及び加水分解 微粒化した卵白６００　ｋｇを蒸留水４０００１に懸濁
する。ｐＨをリン酸で６に調整する。タンクを窒素１ｂ
ａｒ、攪拌下４０分で１０５℃にする。

攪拌下、この温度で１時間保持した後、懸濁液を４５℃
に冷却する。ｐＨを２５％石灰懸濁液で８．００に調整
する。ついで以下のものを継続的に加える：　　ＰＥＭ
■　６　ｋｇＳＮｅｕｔｒａｓｅ■６０１及び八１ｃａ
ｌａｓｅ■　　６（１゜ 温度４７℃、ｐＨ７，８で５時間保持する。

２、固液分離 ｐＨをリン酸で７に調整する。温度を１時間かけて１０
０℃とする。不溶物質を真空中Ｄｉｃａｌｉｔｅ社から
のＤｉｃａｌｉｔｅ■４１４６の存在下回転濾過機で濾
去する。

３、脱色 上記工程で得られる液相にＮｏｒｉｔ■Ｅｘｔｒａ　Ｓ
Ｘ活性炭２０ｋｇ／ｎ（を加える。処理は窒素雰囲気下
７０℃で１時間行う。

ついで活性炭をＤｉｃａｌｉｔｅ社のＤｉｃａｌｉｔｅ
■４１４６の存在下垂直な針金の網を有する濾過器ご除
去する。この操作は５０°Ｃで行う。

４、限外濾過 上記工程で得られた濾液を１５，０００ダルトンの分離
点（ａ　ｃｕｔ−ｏｆｆ　ｐｏｉｎｔ　）を存するＩｒ
１ｓ■３０３８膜を備えた、ＰＨ０ＮＥ　−ＰＯＵＬＥ
ＮＣ社のＰＬＥＩＡＤＥ装置を用いて限外濾過する。こ
の操作は４５℃で行う。

得られる限外濾過液はそのまま又は希釈後もしくは蒸発
器又は平面蒸発器（ｐｌａｔｅ　ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ
　）による濃縮後、又は噴霧乾燥後、経腸食品（ｅｎｔ
ｅｒａｌ　ｆｏｏｄ　）製造の出発物質として用いるこ
とができる。

表−■は窒素１５ｇ／Ｉ！を含有する加水分解物の性質
を示す。

表−■は出発卵白及び限外濾液のアミノ酸組成を示す。

表−■ 表−■ 出発物質及び限外濾過したオボアルブミン加水分解物の
アミノ酸組成（残渣％）実施例２ １、加水分解 乳カゼイン１５００　ｋｇを水ｔｏ、ｏｏｏＩｌに懸濁
する。懸濁液のｐＨを５Ｎ水酸化ナトリウム又は水酸化
カリウム溶液で９．０に調整する。この溶液の組成は最
終産物に望まれるナトリウム又はカリウム含量によって
決定する。

Ａ　ｌｃａ　１ａｓｅ■　、、　Ｎｅｕｔｒａｓｅ■　
及びＰＥＭ■　を表−■に記述した濃度で順に５分間隔
で加える。最初の１時間はアルカリ溶液の添加によって
ｐＨを８に維持し、その後はｐＨが約７．６まで変化す
るにまかせる。加水分解時間は２７０分とする。

２、酸素活性の破壊−加熱−冷却 加水分解物をスチームに対する平面熱交換器上を通して
９５〜９８℃に加熱する。該生産物を同温度で１５分維
持する。

ついで生産物を、１５℃の水に対する平面熱交換器上を
通して５０℃に冷却する。

３、限外濾過 冷却した加水分解物をＰＩＩＯＮＥ　−ｒ’０ＵＬＥＮ
ｃ社のＰＬＥＩＡＤＥ装置を用い４９°Ｃで限外濾過す
る。限外濾過膜はＰＩＩＯＮＥ　−ＰＯＵＬＥＮＣ社の
Ｔｒｉｓ３０３８を用いる（これらは１５，０００ダル
トンの分離点を有する）。

限外濾液をついで実施例１と同様にして希釈もしくは濃
縮する。

表−■は窒素１１ｇ／ｌを含有する加水分解物の性質を
示し、表−■は出発乳カゼイン及び本発明によって得ら
れた限外濾液のアミノ酸組成を示す。

表−■ 表−■ 実施例３ この実施例は腸内栄養補給のための、そのまま使用でき
る食事療法用食品としての医薬組成物に関する。

以下のものを実施例１又は２で得られる限外濾過した加
水分解物に加える： マルトデキストリンの形態の炭化水素、植物油の形態の
脂質、ビタミン類、無機塩、少量成分、及び最終製品を
乳化状に保持するためのいくつかの技術的添加剤。

このようにして調整した腸内用食品をＵＨＴ（Ｕｌｔｒ
ａ　Ｈｉｇｈ　Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　）（超高温）
技術で殺菌し、２００〜１０１００Ｏの容積で缶やボー
ル紙包装に入れる。

例えば、４１８０ＫＪ／ｌすなわち１０００Ｋｃａｌ　
／β）を含有し、３００〜４５０　ｍｉｓ／ｋｇの容積
オスモル濃度を有する製剤は以下の組成を有する： マルトデキストリ’／　　　　　　　　６０　　　　ｇ
デンプン　　　　　　　　　　　　１０　　　　ｇ中級
鎖トリグリセロール類　　　　８．７ｇビタミン混合物
　　　　　　　　　０．１　　ｇ硫酸マグネシウム　　
　　　　　　０．７　　ｇ塩化カルシウム　　　　　　
　　　０．２ｇグリ七ロリン酸化カルシウ　　　　０．
８ｇム 硫酸鉄（第一鉄）　　　　　　　　　０．０１　　ｇ炭
酸マグネシウム　　　　　　　　０．００３　ｇ硫酸亜
鉛　　　　　　　　　　　　０．００８　ｇ硫酸銅　　
　　　　　　　　　　　０．００２　ｇコラ化カリウム
　　　　　　　　　　０．０５　　ｇ乳化剤　　　　　
　　　　　　　　１．３ｇ油酸化防止剤　　　　　　　
　　　０．００３　ｇ蒸留水を加えて　　　　　　　　
５００　　ｍｊ！実施例４ この実施例は使用に際して水に希釈する（５００Ｋｃａ
１１５００ｍｊ２）粉末の形態の、腸内栄養補給食品と
しての医薬組成物に関する。

以下のものを噴霧乾燥させた加水分解物に加える：マル
トデキストリン、脂質類、少量成分及びビタミン、及び
粉末を水中でよく乳化状に保たせるための技術的添加物
。懸瑞されるべき香粉（５ａｃｈｅｔ　）の組成は実施
例３におけると同様であるが、ただ３％程度の残存水分
を含んでいることを除き水を含まない。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. （１）以下の３つの酵素を同時に又は引き続いて添加し
   てタンパク質を７〜１０の中性〜アルカリ性のｐＨ、温
   度２０〜７０℃、好ましくは３０〜５０℃及び加水分解
   時間好ましくは３００分以内の加水分解条件で酵素的に
   加水分解する工程を含むことを特徴とする、特に人工栄
   養及び食事療法に用いることができる、ジペプチド及び
   トリペプチドに富み遊離アミノ酸含量の少ない、タンパ
   ク質酵素加水分解物の製造法： ａ）ほぼ中性のｐＨ（ｐＨ５〜８）の媒体中で用いるこ
   とができ、一般にバチルス・ズブチリス菌株から抽出さ
   れ、かつＮｅｕｔｒａｓｅ＾■、Ｐｒｏｔ’ｅａｓｅＢ
   ５００＾■及びＨ．Ｔ．Ｐｒｏｔ’ｅｏｌｙｔｉｑｕｅ
   ＾■よりなる群から選ばれる細菌プロテアーゼ、ｂ）ア
   ルカリ性媒体（ｐＨ７〜１１）中で用いることができ、
   バチルス・リケニホルミス又はバチルス・ズブチリス菌
   株から抽出され、かつＡｌｃａｌａｓｅ＾■、ｐｒｏｔ
   ’ｅａｓｅＡ＿２＾■及びＯｐｔｉｍａｓｅ＾■よりな
   る群から選ばれる細菌プロテアーゼ、及び ｃ）トリプシン、トリプシン濃縮物又はＰＥＭ＾■なる
   名称の市販品をはじめとする動物起源の膵臓の酵素。
2. （２）酵素の組合せがＮｅｕｔｒａｓｅ＾■、Ａｌｃａ
   ｌａｓｅ＾■及びＰＥＭ＾■よりなる特許請求の範囲第
   １項記載の製造法。
3. （３）加水分解すべきタンパク質物質の懸濁液のタンパ
   ク質濃度が５〜２０ｗ／ｖ％である特許請求の範囲第１
   又は２項記載の製造法。
4. （４）酵素／物質の比がＡｌｃａｌａｓｅ＾■又はＮｅ
   ｕｔｒａｓｅ＾■について５〜１０％、ＰＥＭ＾■につ
   いて０．５〜１％である特許請求の範囲第２又は３項記
   載の製造法。
5. （５）出発タンパク質が卵白又はカゼインである特許請
   求の範囲第１〜４項のいずれかに記載の製造法。
6. （６）得られたタンパク質酵素加水分解物を９５〜１０
   ０℃で１０〜１５分加熱して不活性化する特許請求の範
   囲第１〜５項のいずれかに記載の製造法。
7. （７）不活性化した酵素加水分解物を限外濾過する特許
   請求の範囲第６項記載の製造法。