JPS632921A - リポソ−ム製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は下記−般式（１）で示されるＮ−高級アシルア
ミノ酸を基剤とするリボソーム製剤ニ関する。

Ｒ１Ｃ０−Ａ（Ｔ） （式中、　Ｒ１は炭素数が１１乃至１７個のアルキル基
を、Ａはアミノ酸残基を意味する。但し、アミノ酸残基
が２個以上のアミノ基を有するときはＲ１ＣＯ−基は１
個乃至全てのアミノ基に結合する） （従来の技術とその問題点） リボソーム（ｌｉｐｏｓｏｍｅ　）は、生体膜の研究に
用いられてきた脂質人工膜の一種で、脂質を少くとも５
０％（ｗ／ｗ）以上の水に、その脂質固有のゲル−液晶
相転移温度以上で懸濁した際に形成される脂質２分子膜
よりなる閉鎖小胞である。

リボソームは、その内部の水層や脂質２分子層に種々の
薬物を保持すること、生体で分解可能で毒性の低い特定
の脂質がリボソーム形成能を有すること、薬物吸収に関
与する生体膜に親和性を有することから、近年薬物の吸
収性の改善、活性増強、安定化、徐放持続化の他、薬物
を目的組織に直接到達させるための担体としても注目さ
れ、その製剤化研究が盛んである。

従来リボソーム形成に用いられている脂質は。

ホスファチジルコリンなどのリン脂質が一般的であり、
まれにグリセロ糖脂質も用いられている。

しかしながら、これらのリン脂質やグリセロ糖脂質を膜
成分とするリボソームは、目的組織への薬物到達性改善
の点において未だ不十分であり、かつその内部に保持す
る薬物の量に自ら限界があるため、所期の薬理効果を達
成することが出来な（・という問題があり、実用化され
るには到っていな−・。

（問題点を解決する手段） 本発明者らは、以前より目的組織への薬物到達性改善を
目的として、従来専ら用（・られてきたリン脂質殊にホ
スファチジルコリン、卵黄レシチ／。

大豆レシチン等のリン脂質や水素添加リン脂質に代わる
リボソーム基剤を探索し、先にアルキルグリコサイドが
リボソーム様小胞な形成することを見出し、ドラックキ
ャリアとしての応用について検討してきたが、今般Ｎ−
高級アシルアミノ酸類（■）、殊ＫＮ−バルミトイルア
ミノ酸類がリボソーム形成能を有し、かつ組織到達性改
善においてもリン脂質を遥かに上回る選択的蓄積性を有
することを見出し本発明を完成した。

すなわち１本発明は頭記−般式（Ｉ）で示されるＮ−高
級アシルアミノ酸を基剤とするリボソーム製剤である。

頭記−般式にお−・てＲ１は具体的にはウンデシル基、
ドデシル基、トリデシル基、テトラデシル基、ベンタテ
シル基、ヘキサデシル基、ヘプタデシル基等が挙げられ
る。中でもＲ１ＣＯ−としては、ラウロイル基、ミリス
トイル基、パ二１トイル基、ステアロイル基が好ましい
。

Ａは、天然又は合成のアミノ酸残基を意味し。

殊にα−アミノ酸、至適には天然のα−アミノ酸の残基
が好ましい。中でも、ヒドロキシ−α−アミノ酸、殊に
セリン、硫黄含有アミノ酸。

殊にシスチン、塩基性アミノ酸、殊にリジン。

酸性アミノ酸、殊にグルタミン酸や、グリシンの残基が
好適である。

ここに、シスチンやリジンの如くアミノ基が２個以上存
在するときは９本発明の化合物（Ｉ）はその全てのアミ
ノ基がＲ１ＣＯ−基で置換されている化合物をも包含す
る。

従って２本発明の化合物（ｉ）はこれらの具体的な基の
種々の組合せによって構成される全ての化合物を含むが
１代表的化合物としては以下のものが例示される。

Ｎ−パルミトイルグリシン Ｎ−パルミトイルセリン、 Ｎ、Ｎ−シハルミトイルシスチン Ｎ、−Ｎ−ジパルミトイルリジン Ｎ−パルミトイルグルタミン酸 これらの化合物には立体異性体の存在するものが含まれ
ており２本発明の化合物（Ｉ）は立体異性体の分離され
たもの及びその混合物を包含する。特に本発明化合物は
天然型の立体異性体が好まし℃・。

なお、これらの化合物はそのほとんどが公知であり、　
　Ｌａｐｉｄｏｔらの方法［Ｊ、Ｉ、ＩＰＩＤ　ＲＥＳ
ＥＡＲＣＨ。

互、　１４２−　（１９６７）　］　Ｋ準じて合成でき
る。

重の同心円状のラメラすなわち脂質２分子膜を有する小
胞（多重ラメラ小胞、　ＭＬＶ、　ｍｕｌｔｉｌａｍｅ
ｌｌａｒｖｅｓｉｃｌｅ　）、小さな一重膜の小胞（小
さな単ラメラ小胞、　ＳＵＶ、　　ｓｍａｌｌ　ｕｎｉ
ｌａｍｅｌｌａｒ　ｖｅｓｉｃｌｅ　）。

大きな一重膜の小胞（大きな単ラメラ小胞、　ＬＵＶ。

ｌａｒｇｅ　ｕｎＮａｍｅｌｌａｒ　ｖｅｓｉｃｌｅ　
）がある◇本発明の化合物（Ｉ）を基剤とするリボソー
ムはいずれの構造にすることも可能である。

本発明のリボソームは、少くともＮ−高級アシルアミノ
酸を膜形成物質の基剤の膜成分として含有する。膜形成
物質としてＮ−高級アシルアミノ酸は１０％（ｗ／ｗ　
）以上、好ましくは４０〜１００％（すなわちＮ−高級
アシルアミノ酸単品）用（・るのが有利である。

混合系の基剤である場合に添加される化合物（Ｉ）以外
の膜形成基剤としては、ホスファチジルコリン、ホスフ
ァチジルエタノールアミノ。

ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、
リソホスファチジルコリン、スフィンコミニリン、卵黄
レシチン、大豆レシチン等の天然若しくは合成のリン脂
質又は水素添加リン脂質、グリセロ糖脂質、セチルガラ
クトサイドの如きアルキルグリコサイド、ジアルキル型
合成界面活性剤、Ｎ−高級アシルグルタチオンの１種又
は２梯以上の混合物が挙げられる。

本発明のリボソームは、コレステロールヤコレスタン等
のステロール類を膜安定化剤として。

ステアリルアミノ、ジセチルホスフエート、ホスファチ
ジン酸、ガングリオシド等を荷電物質として。

ビタミンＥなどのトコフェロール等を抗酸化剤として膜
形成成分に加えるのが有利である。

ステロール類は、基剤１部に対し、０〜２部の範囲内、
殊に基剤とほぼ同量添加するのが有利である。また荷電
物置は基剤１部に対してＯ〜０．５部の範囲内、殊Ｋ　
Ｏ，２５％（ｗ／ｗ　）程度添加するのが好適である。

本発明のリボソームに担持させる薬剤としては、特に制
限はなし・が、殊に肝臓に蓄積することにより、薬理効
果を高めることが可能な薬剤。

例えばグルタチオン等の肝臓疾患治療剤、解毒剤等々が
好ましい。

本発明のリボソーム調製法には特に制限はなく、これま
で知られている種々のリボソーム調製法が利用できる。

例えば、Ｎ−高級アシルアミノ酸、必要によりその他の
膜形成基剤、膜安定化剤、荷電物質。

その他の親指質性添加物、及び脂質２分子膜に保持され
る親脂質性薬物である場合には該薬物を、クロロホルム
、エタノール等の有機溶媒に溶解し、溶媒を減圧留去し
て薄膜を形成させ。

これに親水性薬物である場合には該薬物を加えた水溶液
、好ましくは緩衝液を加え、得られた混液を振盪、好ま
しくは超音波振盪し、懸濁液となし２次いで溶媒を除去
して薬物封入リボソームを得る。

この薬物封入リボソームは、そのまま使用することもで
きるが２通常は生理食塩水等で洗浄後、必要により凍結
乾燥し９種々の製剤形態。

例えば怒濁液剤２錠剤、カプセル剤、ペレット。

顆粒剤、粉末剤等に調製される。

［実験例］ 本発明のＮ−高級アシルアミノ酸がリボソーム様小胞形
成能を有し、臓器選択的蓄積性に優れていることは、以
下の実験によって確認された。

（リボソーム調製法） 実験方法 １）Ｎ−高級アシルアミノ酸の合成 ナス型コルベン中に、Ｌ−セリン５２５　ｍｇ（５ｍｒ
ｎｏｌｅ　）　、炭酸水素ナトリウム４２０１ｆｔｇ（
５ｍｍｏｌｅ　）　、精製水５０ｍ１を加え、十分攪拌
して完全に溶解させ、あらかじめ合成したパルミチン酸
のＮ−ヒドロキシスクシンイミドとの活性エステル１．
８ｇ　（５ｍｍｏｌｅ　）をテトラヒドロフラン５０ｍ
１Ｋ溶解させたものを少量ずつ添加し、−夜攪拌した。

この溶液を１規定塩酸でｐＨ２に調整し、濃縮乾固した
ものに、精製水５０ｍ１を加えてｒ取した。乾燥後薄層
クロマトグラフィーで１スポツトニなるまでクロロホル
ムで再結晶を繰り返し、Ｎ−バルミトイル−し−セリン
を得た。収率５２．３％、融点９５〜９６℃。

Ｎ−パルミトイルグリシン、Ｎ−バルミトイル−し−グ
ルタミン酸は、同様な操作を行（・。

収率２７．３％、　　１５．８％、融点１２０°Ｇ、　
　１５０℃であり。

Ｎ、Ｎ−ジパルミトイル−Ｌ−ＩＪコリン炭酸水素ナト
リウムをバルミトイル基１に対して２倍モルとして同様
の操作を行い、収率５９．２％、融点１０１〜１０２℃
、　　Ｎ、Ｎ−ジパルミトイル−し−シスチンにおいて
は、炭酸水素ナトリウムの代りニハルミトイル基ＩＫ対
して等モルの０．２規定水酸化ナトリウムを用し・、２
倍モルの活性エステルを用いて同様の操作を行し・、収
率６２％。

融点１０５〜１０７°Ｃであった。

ｉｉ）製剤化と取り込み率の測定 ナス型コルベン中に、先に合成したＮ−バルミトイル−
Ｌ−セリン２７．４４　ｍｇ　（８０μｍｏｌｅ　）＋
コレステロール１６．２　ｍｇ　（４０μｍｏｌｅ　）
およびクロロホルム２０　ｍｌを加え、エバポレートし
た。

ナス型コルベンの表面に半透明の膜ができた後、　　３
０００　ｄｐｍｌｏ、１　ｍｌシュクロース緩衝液２　
ｍｌを添加し、攪拌した。溶液が一様となった後。

透析チューブに入れ、リン酸緩衝液（ＰＢＳ　）で２昼
夜透析し、透析前後の放射活性を測定した。

コレステロールヲ添加しないものについても同様の操作
を、またＮ、Ｎ−ジパルミトイル−Ｌ−リジン、　　Ｎ
、Ｎ−ジパルミトイル−し−シスチン、ホスファチジル
コリンにつ（・ては各々４０μｍｏｌｅスつとし、クロ
ロホルムの代りにメタノールを用し・同様の操作を行℃
・、取り込み率を測定した。

実験結果 実験結果を下表に示す。

表１　取り込み率（％） 基剤　　　　　　　十コレステロール　　　コレステロ
ールなし＊／′７ｙチジ／′　　　　　　　１５．４±
４．１　　　　　１３．６±２．７コリン ゞ−′９′ミ１イ”　　　　　　　　１３．０±１．８
’　　　　　　０．０２セリン Ｎ−″ルミトイル　　　　　１８．８　：１ｍ　１．５
　　　　　　０．０３グリシン ゞ・ゞ−ジ′＜′ミトイ“　　　１３３±２．４　　　
　　　　０．０３シスチン ゞ・Ｎ−ジ″″ミトイ”　　　　　１５．０±３．４　
　　　　　　０．０５リジン 一般的なリボソーム製剤において専ら用いられているリ
ン脂質であるホスファチジルコリンを基剤とし、コレス
テロールを膜安定化剤とするリボソームは、１５％程度
の取り込み率を示すことはよく知られて℃・る。

これに対し、各種Ｎ−高級アシルアミノ酸を基剤とし、
コレステロールを膜安定化剤とじて同様ニ操作したもの
は、ホスファチジルコリン＋コレステロールのりポンー
ムとほぼ同程度の取り込み率を示して（・る。

従って、各種Ｎ−高級アシルアミノ酸もホスファチジル
コリンと同様に脂質２分子膜からなる多重ラメラ小胞Ｍ
ＬＶを形成しているものと考えられる。

（臓器選択的蓄積性） 実験方法 １）製剤化 基剤；（１）　　ホスファチジルコリン濃度；　２０　
μｍｏｌ　／ｍｌ タイプ；小さな単ラメラ小胞（ＳＵＶ　）マーカ；　３
Ｈ−イ　ヌ　リ　ン ナス型コルベンＫ　Ｎ　−バルミトイル−Ｌ−セリン６
８．５　ｍｇ　（２００μｍｏｌｅ　）、コレステロー
ル（１００ｚｌｍｏｌｅ　）およびメタノール２０　ｍ
ｌを加え。

一１２＝ エバボレートした。ナス型コルベンの表面にし、攪拌し
た後パース型ソニヶーターで２時間超音波振盪し、ポア
サイズ０．０５μの透析膜を用いて３昼夜透析した。

＋＋）組織分布の測定 得られたリボソームをラットに静注し、４時間の血液及
び尿の採取後、ラットを殺し。

各臓器を摘出し、各臓器に残存する放射活性を測定し９
組織分布を投与量の百分率で求めた。

実験結果 実験結果を表２に示す。

ＩＡ− 表２　組織分布（投与量の％） 肝臓　３０．１４±２．６５　　２３．５７±４．７３
腎臓　０．３６±０．０４　　０．５８±０．１５肺臓
　０．３７±０．０４　　０．７６±ｏ、２５牌臓　１
．８３±０．４８　　８．７１±３．０７ホスフアチジ
ルコリンの組織分布は、従来知られている値とほぼ−致
し、肝臓に対して投与量の２３７％、ｌ１ｌｉ！臓に対
して８．７１％蓄積している。

これに対し、Ｎ−パルミトイルセリン、のリボソームは
、肝臓に対して３０１４％蓄積する反面。

牌臓には１．８３％しか蓄積しな（・。

従って、Ｎ−高級アシルアミノ酸のリボソームは、従来
のホスファチジルコリンのリボソームよりも選択的に肝
臓に蓄積することが判明した。

なお、腎臓及び肺覧には各リボソームともほとんど蓄積
しなし・０ ［発明の効果］ 本発明のＮ−高級アシルアミノ酸（Ｉ）は。

リボソーム様小胞を形成し、臓器選択的蓄積性を示すこ
とから、薬物の目的組織到達性改善を図るためのリボソ
ーム製剤の基剤として有用である。特に化合物（Ｉ）を
基剤とするリボソームは、肝臓選択的蓄積性を目標とす
る薬剤を封入するためのリボソーム製剤として有用であ
る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、一般式 Ｒ＾１ＣＯ−Ａ （式中、Ｒ＾１は炭素数が１１乃至１７個のアルキル基
   を、Ａはアミノ酸残基を意味する。但し、アミノ酸残基
   が２個以上のアミノ基を有するときは、Ｒ＾１ＣＯ−基
   は１個乃至全てのアミノ基に結合する。） で示されるＮ−高級アシルアミノ酸を基剤とするリボソ
   ーム製剤。 ２、Ｎ−パルミトイルセリン、Ｎ−パルミトイルグリシ
   ン、Ｎ，Ｎ−ジパルミトイルシスチンＮ，Ｎ−ジパルミ
   トイルリジン及びＮ−パルミトイルグルタミン酸の群よ
   り選択された１種又は２種以上を基剤とする特許請求の
   範囲第１項記載のリボソーム製剤。