JPS63296696A - 天然型アブシジン酸の製造方法 - Google Patents
天然型アブシジン酸の製造方法Info
- Publication number
- JPS63296696A JPS63296696A JP62131087A JP13108787A JPS63296696A JP S63296696 A JPS63296696 A JP S63296696A JP 62131087 A JP62131087 A JP 62131087A JP 13108787 A JP13108787 A JP 13108787A JP S63296696 A JPS63296696 A JP S63296696A
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- culture medium
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は微生物の代謝機能を利用した天然型アブシジン
酸の製造法に関する。
酸の製造法に関する。
天然型アブシジン酸は１９６３年カルフォルニア大学の
アデイコットなどにより、綿の幼果の落果促進物質とし
て初めて単離され、それ以降植物に対する重要な生理作
用が見い出され、今日では植物ホルモンの一種であるこ
とも確認されている。
アデイコットなどにより、綿の幼果の落果促進物質とし
て初めて単離され、それ以降植物に対する重要な生理作
用が見い出され、今日では植物ホルモンの一種であるこ
とも確認されている。
天然型アブシジン酸の植物生理作用の特徴は、他の植物
ホルモンであるオーキシン、ジベレリン、サイトカイニ
ンなどと拮抗してそれらの作用を打ち消し、植物の生育
を抑制することにあるが、これらの作用のうち最も注目
すべきものは、植物の気孔の閉鎖作用である。将来、天
然型アブシジン酸はこのような生理作用を利用して、干
ばつ、冷害などの気候変化に対応できる物質として農業
生産への応用が期待されている。
ホルモンであるオーキシン、ジベレリン、サイトカイニ
ンなどと拮抗してそれらの作用を打ち消し、植物の生育
を抑制することにあるが、これらの作用のうち最も注目
すべきものは、植物の気孔の閉鎖作用である。将来、天
然型アブシジン酸はこのような生理作用を利用して、干
ばつ、冷害などの気候変化に対応できる物質として農業
生産への応用が期待されている。
さらに、ビール醸造における品質向上やコスト低下（特
開昭５８−１０１６７７号公報）などの醸造への利用、
医薬およびその中間体としての利用などが進められてい
る。
開昭５８−１０１６７７号公報）などの醸造への利用、
医薬およびその中間体としての利用などが進められてい
る。
従来、アブシジン酸の製造法としては、有機合成法が検
討されてきたが、この方法では光学活性の天然型アブシ
ジン酸を得ることは極めて困難であり、かつ製造コスト
が極めて高価であって上記農業や醸造には実質的に利用
不可能であった。
討されてきたが、この方法では光学活性の天然型アブシ
ジン酸を得ることは極めて困難であり、かつ製造コスト
が極めて高価であって上記農業や醸造には実質的に利用
不可能であった。
近年では、微生物の代謝機能を利用した発酵培養による
微生物法が有機合成法にかわる有力手法として検討され
るにいたり、ボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）菌による
製造法（特開昭５８−５１８９５号公報）およびセルコ
スポラ・ロシコラ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｒｏｓｉ
ｋｏｒａ）による製造法〔εχｐ１３ｒｉｅｎｔｉａ
３３．１５５６ （１９７７））、特開昭５８−３６３
９３号公報、特開昭５６−１６０９９６号公報などが公
知となっている。
微生物法が有機合成法にかわる有力手法として検討され
るにいたり、ボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）菌による
製造法（特開昭５８−５１８９５号公報）およびセルコ
スポラ・ロシコラ（Ｃｅｒｃｏｓｐｏｒａ ｒｏｓｉ
ｋｏｒａ）による製造法〔εχｐ１３ｒｉｅｎｔｉａ
３３．１５５６ （１９７７））、特開昭５８−３６３
９３号公報、特開昭５６−１６０９９６号公報などが公
知となっている。
しかし、上記微生物法の最大の欠点は発酵生産による天
然型アブシジン酸の蓄積量が極めて少量で、かつ発酵生
産速度も極めて遅く、工業的規模での生産手段としては
、極めて能率の悪い点であった。
然型アブシジン酸の蓄積量が極めて少量で、かつ発酵生
産速度も極めて遅く、工業的規模での生産手段としては
、極めて能率の悪い点であった。
〔問題点を解決するための手段および作用〕そこで本発
明者らは、天然型アブシジン酸を効率よく生産する方法
に関し、鋭意検討を進めた結果、不完全菌の一種である
ボトリチス（Ｂａｔｒ’／１ｉｓ）属に属し、天然型ア
ブシジン酸生産能を有する菌株を培養するにあたり、接
種する種胞子を培地中に過剰に存在させることにより、
培地中に蓄積する天然型アブシジン酸が著しく増加する
ことを見出し本発明を完成した。
明者らは、天然型アブシジン酸を効率よく生産する方法
に関し、鋭意検討を進めた結果、不完全菌の一種である
ボトリチス（Ｂａｔｒ’／１ｉｓ）属に属し、天然型ア
ブシジン酸生産能を有する菌株を培養するにあたり、接
種する種胞子を培地中に過剰に存在させることにより、
培地中に蓄積する天然型アブシジン酸が著しく増加する
ことを見出し本発明を完成した。
すなわち、本発明はボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔ ｉｓ）
属に属し、天然型アブシジン酸生産能を有する菌を培地
に接種、培養して、天然型アブシジン酸を生成蓄積せし
め、培養物より得られた天然型アブシジン酸を単離採取
するに際し、前記培地に種胞子を過剰に接種することを
特徴とする天然型アブシジン酸の製造方法である。
属に属し、天然型アブシジン酸生産能を有する菌を培地
に接種、培養して、天然型アブシジン酸を生成蓄積せし
め、培養物より得られた天然型アブシジン酸を単離採取
するに際し、前記培地に種胞子を過剰に接種することを
特徴とする天然型アブシジン酸の製造方法である。
以下本発明を詳述する。
本発明に使用される菌は、ボトリチス属に属する天然型
アブシジン酸生産菌であれば特に限定されず、通常の変
異菌や変異処理によって生じた菌をも含むものである。
アブシジン酸生産菌であれば特に限定されず、通常の変
異菌や変異処理によって生じた菌をも含むものである。
ボトリチス菌に属する天然型アブシジン酸生産菌の菌株
の具体例としてボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉ
ｓ ｃｉｎｅｒｅａ）ＦＥＲＭ Ｐ−６１５６が挙
げられる。この天然型アブシジン酸生産能を有するボト
リチス・シネレアの菌学的性質は、既に特開昭５８−５
１８９５号公報において検討されている。
の具体例としてボトリチス・シネレア（Ｂｏｔｒｙｔｉ
ｓ ｃｉｎｅｒｅａ）ＦＥＲＭ Ｐ−６１５６が挙
げられる。この天然型アブシジン酸生産能を有するボト
リチス・シネレアの菌学的性質は、既に特開昭５８−５
１８９５号公報において検討されている。
次に本発明において天然型アブシジン酸生産に使用され
る培地としては、フスマ、小麦、米、カンショ、バレイ
ショ、グルコース、麦芽糖、麦芽エキス、ショ糖、デキ
ストリン、廃糖蜜、澱粉などの炭素源、親指大豆粉、大
豆粉、グルテン、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、コ
ーンステイープリカーなどの窒素源を各々単独で、また
は二種以上混合した培地が用いられる。
る培地としては、フスマ、小麦、米、カンショ、バレイ
ショ、グルコース、麦芽糖、麦芽エキス、ショ糖、デキ
ストリン、廃糖蜜、澱粉などの炭素源、親指大豆粉、大
豆粉、グルテン、酵母エキス、ペプトン、肉エキス、コ
ーンステイープリカーなどの窒素源を各々単独で、また
は二種以上混合した培地が用いられる。
この他例えば、マグネシウム塩、カルシウム塩、カリウ
ム塩、ナトリウム塩、リン酸塩などの無機物質、さらに
ビタミン類、油脂類、その他を添加することができる。
ム塩、ナトリウム塩、リン酸塩などの無機物質、さらに
ビタミン類、油脂類、その他を添加することができる。
また、培養培地としては、固体培地、液体培地のいずれ
でもよいが、目的物の収率の点で固体培地を用いるのが
有利である。
でもよいが、目的物の収率の点で固体培地を用いるのが
有利である。
上記組成の培養培地を適切な方法を用いて滅菌操作を施
し、実質的な無菌培地を作成する。
し、実質的な無菌培地を作成する。
上記処理を行った培地に、前記ボトリチス属に属する天
然アブシジン酸生産菌株の胞子部分を含む滅菌水を用い
、培地中に均一に胞子を分散させる。この場合胞子以外
の菌糸体部分が混入してももちろんさしつかえない、従
来公知の通常の培地には、種胞子は１ｇの培地中に５０
０個程皮接種される。
然アブシジン酸生産菌株の胞子部分を含む滅菌水を用い
、培地中に均一に胞子を分散させる。この場合胞子以外
の菌糸体部分が混入してももちろんさしつかえない、従
来公知の通常の培地には、種胞子は１ｇの培地中に５０
０個程皮接種される。
本発明においては種胞子を培地中に過剰量接種すること
が重Ｉである。好ましくは培地中に実質的に胞子数が培
地１ｇあたり１．０Ｘ１０３個以上となるよう存在させ
る。かくして接種操作を完了させる。
が重Ｉである。好ましくは培地中に実質的に胞子数が培
地１ｇあたり１．０Ｘ１０３個以上となるよう存在させ
る。かくして接種操作を完了させる。
培地中に過剰量の種胞子を接種することにより、過剰量
の胞子存在下で培養を行うことができる。かかる条件下
で、天然アブシジン酸を高濃度に高速度で蓄積せしめる
ことができる。
の胞子存在下で培養を行うことができる。かかる条件下
で、天然アブシジン酸を高濃度に高速度で蓄積せしめる
ことができる。
培養条件は、培養温度が通常１０〜４０℃、好ましくは
２５〜３５℃、培地のｐＨが通常３〜１２、好ましくは
４〜８、培養期間が通常１〜１５日間、好ましくは３〜
９日間程度であり、雑菌の混入を排除した培養系を用い
培養する。
２５〜３５℃、培地のｐＨが通常３〜１２、好ましくは
４〜８、培養期間が通常１〜１５日間、好ましくは３〜
９日間程度であり、雑菌の混入を排除した培養系を用い
培養する。
次に培養終了後、培養物より天然型アブシジン酸を単離
するには、通常の方法を採用することができ、例えば以
下に述べる方法を用いる。
するには、通常の方法を採用することができ、例えば以
下に述べる方法を用いる。
まず、培養物を抽出溶剤を用いて抽出する。
この場合の抽出溶剤としては、例えばアセトン、酢酸エ
チル、ベンゼン、クロロホルム、ジエチルエーテル、メ
タノール、エタノールなどの溶剤が用いられる。抽出液
中に移入した天然型アブシジン酸は、通常の分別抽出、
吸着、薄層クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフ
ィー、蒸溜などの一般的な精製法および通常の有機化合
物の精製法を応用することによって単離、精製が可能で
ある。
チル、ベンゼン、クロロホルム、ジエチルエーテル、メ
タノール、エタノールなどの溶剤が用いられる。抽出液
中に移入した天然型アブシジン酸は、通常の分別抽出、
吸着、薄層クロマトグラフィー、カラムクロマトグラフ
ィー、蒸溜などの一般的な精製法および通常の有機化合
物の精製法を応用することによって単離、精製が可能で
ある。
以下実施例により本発明を具体的に示す。
実施例１
蒸溜水１１およびバレイショ２００ｇを１時間煮沸し、
液をガーゼで一過した。濾過した液に水を加えて１１と
し、これにブドウ糖２０ｇ、寒天２Ｏｒを加え１００℃
で２０分間加熱処理を行ってバレイショ寒天培地液を得
た。
液をガーゼで一過した。濾過した液に水を加えて１１と
し、これにブドウ糖２０ｇ、寒天２Ｏｒを加え１００℃
で２０分間加熱処理を行ってバレイショ寒天培地液を得
た。
（ボトリチス・シネレア種胞子の調製法）前記バレイシ
ョ寒天培地２０ｍ１を含むベトリ皿に保存用種菌を接種
し、２８゛Ｃで静置培養した。この場合接種後４日間は
暗所に置き、これに続く２日間は３６０ｒ＋ｎ＋に極大
値を有する波長光に照射させながら培養し、さらにこれ
に絖く１日間を再び暗所で静置培養した。この培養菌体
を滅菌水中に懸濁させ、濾過を行い実質的にボトリチス
菌の胞子だけを含む水溶液を得た。
ョ寒天培地２０ｍ１を含むベトリ皿に保存用種菌を接種
し、２８゛Ｃで静置培養した。この場合接種後４日間は
暗所に置き、これに続く２日間は３６０ｒ＋ｎ＋に極大
値を有する波長光に照射させながら培養し、さらにこれ
に絖く１日間を再び暗所で静置培養した。この培養菌体
を滅菌水中に懸濁させ、濾過を行い実質的にボトリチス
菌の胞子だけを含む水溶液を得た。
実施例１
（天然型アブシジン酸の生産）
滅菌した上記バレイショ寒天培地をベトリ皿に２０の１
つづ分注し、固体平板培地をつくった。
つづ分注し、固体平板培地をつくった。
次いでこの平板培地に上記に示す滅菌的な操作で調製し
たボトリチス・シネレア（ＦＥＲＭＰ−６１５６＞の胞
子水溶液を表−１に示す数量散布し接種を完了した。
たボトリチス・シネレア（ＦＥＲＭＰ−６１５６＞の胞
子水溶液を表−１に示す数量散布し接種を完了した。
このペトリ皿を２８℃で７日間静置培養した。
培養終了後、各培養物を破砕したのち、アセトンに浸漬
し生成物を抽出しな、アセトン油田を２回繰り返したの
ち、抽出液を濃縮、一定量（１［１１１＞としシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィー上に標品をともに分注し、酢
酸エチル１：ｎ−ヘキサン１の溶媒で展開し、天然型ア
ブシジン酸の蓄積量を定量した。
し生成物を抽出しな、アセトン油田を２回繰り返したの
ち、抽出液を濃縮、一定量（１［１１１＞としシリカゲ
ル薄層クロマトグラフィー上に標品をともに分注し、酢
酸エチル１：ｎ−ヘキサン１の溶媒で展開し、天然型ア
ブシジン酸の蓄積量を定量した。
結果を表−１に示す。
表 −ｌ
※）接種胞子数は一定量溶液中に存在する胞子の個数を
光学顕微鏡で数え、換算して得た値である。
光学顕微鏡で数え、換算して得た値である。
実施例２
実施例１で示したバレイショ寒天培地を、フスマ培地（
フスマ１：水１）に変え、同様な実験を行った。
フスマ１：水１）に変え、同様な実験を行った。
結果を表−２に示す。
表 −２
実施例３
実施例１と同様のバレイショ寒天培地２１に胞子水溶液
（胞子添加ＪＬ１．５Ｘ１０’個／ｇ培地）培養後、培
養物をアセトンで抽出した。
（胞子添加ＪＬ１．５Ｘ１０’個／ｇ培地）培養後、培
養物をアセトンで抽出した。
このアセトン液を減圧濃縮し、水溶性残渣をｐＨ９，０
に調節し、酢酸エチルで抽出洗浄した。
に調節し、酢酸エチルで抽出洗浄した。
残った水溶液をｐＨ３，０に調節したにち、酢酸エチル
で抽出し、得られた＃酸エチル液を無水芒硝で乾燥後、
濃縮し、酢酸エチル可溶性酸性区分を得な、（天然型ア
ブシジン酸狙精製物）このものをシリカゲルクロマトグ
ラフィーにかけ、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（ｎ−ヘキ
サン：＃酸エチルが５：１ を最初にして１：１が最終
となるよう順次比率を変えて）溶媒で留出した。精製さ
れた天然型アブシジン酸区分を分別し、濃縮後純粋な天
然型アブシジン酸（結晶＞０．３ｇを得た。
で抽出し、得られた＃酸エチル液を無水芒硝で乾燥後、
濃縮し、酢酸エチル可溶性酸性区分を得な、（天然型ア
ブシジン酸狙精製物）このものをシリカゲルクロマトグ
ラフィーにかけ、ｎ−ヘキサン／酢酸エチル（ｎ−ヘキ
サン：＃酸エチルが５：１ を最初にして１：１が最終
となるよう順次比率を変えて）溶媒で留出した。精製さ
れた天然型アブシジン酸区分を分別し、濃縮後純粋な天
然型アブシジン酸（結晶＞０．３ｇを得た。
得られた天然型アブシジン酸の結晶の旋光度は〔α）２
５＝＋４３２±２’ （Ｃ＝０．２３、エタノール）
であった。
５＝＋４３２±２’ （Ｃ＝０．２３、エタノール）
であった。
本発明によれば、微生物を利用した発酵培養により、天
然型アブシジン酸を高い蓄積量かつ遠い発酵生産速度で
得ることができ、工業的規模での生産を可能にすること
ができる。
然型アブシジン酸を高い蓄積量かつ遠い発酵生産速度で
得ることができ、工業的規模での生産を可能にすること
ができる。
特許出願人 東 し 株 式 会 社
新日本化学工業株式会社
Claims (1)
- ボトリチス（Ｂｏｔｒｙｔｉｓ）属に属し、天然型アブ
シジン酸生産能を有する菌を培地に接種、培養して、天
然型アブシジン酸を生成蓄積せしめ、培養物より得られ
た天然型アブシジン酸を単離採取するに際し、前記培地
に種胞子を過剰に接種することを特徴とする天然型アブ
シジン酸の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62131087A JPS63296696A (ja) | 1987-05-29 | 1987-05-29 | 天然型アブシジン酸の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62131087A JPS63296696A (ja) | 1987-05-29 | 1987-05-29 | 天然型アブシジン酸の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63296696A true JPS63296696A (ja) | 1988-12-02 |
Family
ID=15049674
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62131087A Pending JPS63296696A (ja) | 1987-05-29 | 1987-05-29 | 天然型アブシジン酸の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63296696A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020534815A (ja) * | 2017-09-18 | 2020-12-03 | エウロメッド・エセ・ア | アブシジン酸の植物抽出物の調製方法 |
| CN113981016A (zh) * | 2021-12-17 | 2022-01-28 | 四川龙蟒福生科技有限责任公司 | 一种降低发酵生产s-aba杂质的发酵配方 |
-
1987
- 1987-05-29 JP JP62131087A patent/JPS63296696A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2020534815A (ja) * | 2017-09-18 | 2020-12-03 | エウロメッド・エセ・ア | アブシジン酸の植物抽出物の調製方法 |
| CN113981016A (zh) * | 2021-12-17 | 2022-01-28 | 四川龙蟒福生科技有限责任公司 | 一种降低发酵生产s-aba杂质的发酵配方 |
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