JPS63301831A - 相乗的免疫刺激組成物および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は一般に免疫刺激組成物と方法および特に相乗的
免疫刺激組成物と公知の免疫刺激剤１ｎｔｅｒｌｅｕｋ
ｉｎ−２とＦＫ　−５６５を用いる方法に関する。

インターリューキン（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２（Ｉ
Ｌ−２）　）はＴ細胞によってつくられるリンパ性物質
（ｌｙｍｐｈｏｋｊｎｅ）である。ルー２は成長および
分化−促進性の広スペクトルを有する。Ｉｎｔｅｒｌｅ
ｕｋｉｎ−２はＴ細胞を生体外で長期間生成させること
ができ、動物における細菌、寄生虫、真菌、原虫および
ウィルス性抗原に対する免疫反応を促進し、キラー細胞
の分化と増殖を増進する。ｉｎ　ｖｉｖｏでのＩＬ−２
の投与は異質遺伝子的な反応を促進し、ヌードマウスと
科学的に免疫抑制した動物において細胞毒性およびヘル
パーＴ細胞の誘導をもたらす。

Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｎ＋ｍｕｎｏ１ｏｇｙ、１３
１：８０６（１９８３）；Ｊｏｕｒｎａｌｏｒ　Ｉａ＋
ｍｕｎｏ１ｏｇｙ、１２３：２９２８（１９７９）、Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　１３０
：２２２（１９８３）　；およびＩｍｍｕｎｏｌｏｇｉ
ｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗ、５１：３３７（１９８０）参照
。

Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２は米国特許第４．４０１，
７５６号で明らかにされているように最初に人末梢血液
リンパ球あるいは他の１ｎＬｅｒｌｅｕｋｉｎ−２産生
細胞ラインを培養することによってつくられた。しかし
ながら。

有効量を入手することが困難なために、　１ｎｔｅｒｌ
ｅｕｋｉｎ−２の有効量を製造する代わりの方法を提供
するために組換えＤＮＡ法が開発された。Ｔａｎｉｇｕ
ｃｈｉ他、　Ｎａｔｕｒｅ　３（１２：３０５−３１０
（１９８３）およびＤｅｖｏｓ＋Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃ
１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　１１：４３０７−４３２３
（１９８３）　は人ＩＬ−２遺伝子にクローンを発生さ
せ、微生物でそれを表現すると報告している。

その後、　１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２同族体と置換、
削除。

および付加関係をもつ誘導体が開発された。これらの同
族体は１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２活性をもち、より精
製しやすいこと、より投与しやすいこと等のような他の
利点を与えた。例えば、　１９８３年１１月１４日に許
可されたベルギー特許第８９８，０１６号は、野生タイ
プまたは天然分子の１２５位に通常具られるシスティン
は削除されるかセリンのような中性アミノ酸で置換され
るＩＬ−２の変異体（ｍｕｔｅｉｎ）について述べてい
る。これらの変異体はＩＬ−２の生物学的活性をもつ。

ベルギー特許は、Ａｌ１換え変位体が作り出され、それ
を水性媒質と組み合わせ、それを静脈内、皮下などに注
入することによって天然のＩＬ−２のように投与される
と述べている。参照によって本発明に引用されている米
国特許第４，５８１゜５８４号（Ｍａｒｋ）は削除また
は置換システィン残留物をもつ大組換えＩＬ−２変異体
について発表している。参照により本発明に挿入されて
いる米国特許第４，５０８．８３３号（５（Ｈ１ｒｌｅ
ｂｏｒｎ他）はＩＬ−２を精製する方法について検討し
、ジマトリックスクロマトグラフィーを用いる精製法を
明らかにしている。

ＴＬ−２の性質と働らきはＳｍ１ｔｈ、Ｉｍｍｕｎｏｌ
ｏｇｉｃａｌ　Ｒｅｖｉｅｗｓ、５１：３３７（１９８
０）で検討されている。

ＦＫ−５６５は感染に対する宿主抵抗性を増し、大食細
胞における１ｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１産生を引き起し
、大食細胞の食細胞および殺作用を促進する。Ａｇｒｉ
ｃ。

Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、、４Ｂ（９）　：２３９３−２３
９４（１９８４）、ＦＫ−５６５は里ｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ　ｏｌｉｖａｃｅｏｇｒｉｓｅｕｓ　ｓｐ　ｎｏｖ
、および箪ｔｏＩＩｌｃｅｓ　ｖｉｏｌａｃｅｕｓの菌
株の培養濾液から単離された天然ペプチドＦＫ−１５６
の合成誘導体である。ＦＫ−１５６の単離、精製および
構造は文献の中で十分に検討されている：　Ｊ、Ａｎｔ
ｉｂｉｏｔｉｃｓ、３５：１２８０−８５（１９８２）
（産生菌株の分類学）；Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、
３５：１２８６−９２（１９８２）　（発酵、抽出およ
び化学的、生物学的特徴）；Ｊ、＾ｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｓ、３５：　１２９３−９９（１９８２）（構造解明）
；Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、３５：　１３００−１
１（１９８２）（ＦＫ−１５６の合成とその幾何学的異
性体）。参考文献で本発明に挿入されている米国特許第
４，３１１，６４０号（Ｋｕｒｏｄａ他）はＦＫ−１５
６およびその誘導体のいくつかを製造する方法を発表し
ている。参考文献として本発明に引用されている米国特
許第４．３２２，３４１号（Ｋｉｔａｕｒａ他）はＦＫ
−５６５を製造する方法を明らかにしている。参考文献
として本発明に引用されている米国特許第４，３４９，
４６６号（Ｋｉ　ｔａｕｒａ他）はＦＫ−５６５に関連
したいくつかの免疫刺激ペプチドを製造する方法を明ら
かにしている。

ＦＫ−１５６は次の構造をもつ。

Ｉ。

（Ｃ１１□）３ ＮＨｚＣｌｌＣＯＯＨ ＦＫ−５６５は次の構造をもつ。

口 ＨＪＣＨＣＯＯＨ ＩＬ−２およびＦＫ−５６５は免疫システムの成分を刺
激することによって侵入する抗原に対する免疫システム
の反応を別々に増加することが知られている免疫刺激剤
であるｉ　ＩＬ−２はＴ細胞、Ｂ細胞、および大食細胞
を刺激し、　ＦＫ−５６５は大食細胞と自然のキラー細
胞を刺激する。しかしながら、これらの。

゛および他の免疫刺激剤に対する免疫システムの反応は
病気、感染症、抗原、外傷などから動物を守るのに常に
十分とはかぎらない。その結果、免疫システムを刺激す
るための新しい、よりよい方法について研究が続けられ
ている。従って、以前の免疫刺激法より有効な免疫シス
テムを刺激し、ざらに、免疫システムに対する免疫刺激
剤の有益な効果を増加させる方法が必要となっている。

さらに１本発明の目的は、免疫システムを刺激する方法
と組成物を提供することである。

本発明の他の目的は、免疫システムを相乗的に刺激する
方法と組成物を提供することである。

本発明の他の目的は、免疫原に対する反応を促進する方
法を提供することである。

本発明の他の目的は、動物に投与されたワクチンの効力
を促進する方法を提供することである。

本発明の他の目的は、アジュバントとして働らく組成物
を提供することである。

本発明のさらに他の目的は１本発明の化合物を含む製品
の一つを提供することである。

これらのおよび他の目的は動物の免疫システムを刺激す
るためにＦＫ−５６５と（Ｌ−２を同時に投与すること
によって達成される。同時に投与されたＦＫ−５６５と
ＩＬ−２は転心筋炎ウィルスあるいは偽狂犬病ウィルス
の致死レベルに攻撃された動物で生存の付加的および相
乗的レベルをもたらす。さらに。

同時に投与したＦＫ−５６５とＩＬ−２は、増殖が相乗
的である。すなわち各化合物単独で見られるものの合計
よりも大きい、ネズミリンパ球の生体外増殖を引き起す
。この化合物は所望の投与法により適当に選ばれた容器
または投与型で提起される。

ここで用いられるいくつかの用語は次のように定義され
る。

ｒｌＬ−２Ｊは、天然および組換え１ｎｔｅｒｌｅｕｋ
ｉｎ−２分子とその変位体、同族体、および天然の１ｎ
ｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２活性をもつ削除、挿入、あるい
は別のように修正された配列をもつ誘導体を含むと定義
される。

ここで用いられるＩＬ−２の“ユニット゛は標準化され
た検定法においてｌＬ１２Ｌ１２線受性細胞ラインＩｅ
ｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ１１ｅｃ
ｔｉｏｎから入手できるＣＴＬＬ−２のような）による
トリチウム化チミジンの半最大の取込みを刺激するのに
十分な物質の量として定義される； Ｇ１１ｌｉｓ　　他、　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｉｍｍ
ｕｎｏｌｏｇｙ、１２０：２（１２７（１９７８）参照
。

「アジュバント」という用語は、抗原と一緒に投与した
時にその抗原に対する免疫反応を強めるかこの質に影響
を及ぼす物質を意味する。アジュバントは通常より高い
率の抗体生成あるいはその抗原に関する細胞介在免疫に
おけるより活発な反応を刺激するために抗原の免疫原性
を増す目的で投与される。

「ワクチン」という用語は、与えられた病原性あるいは
毒性薬品に関する受容体特異性免疫防御機序を刺激する
ために投与される免疫原性標品投与型を意味する。一般
に、ワクチン投与は、（ａ）腸チフスおよびコレラに対
するワクチンを接種するのに用いられるような不活性化
抗原、（ｂ）黄熱病および結核に対するワクチンを接種
するのに用いられる生きた減毒抗原、（Ｃ）特定抗原の
抗原性抽出物、　（ｃｌ）　ＭＥ換えＤＮＡ技術により
誘導されるサブユニットワクチン、および（ｅ）トキソ
イドを含む。技術的に知られているワクチンは一般的に
は動物の免疫システムを刺激する抗原の形体、つまり一
般的には減毒ウィルス、不活性化ウィルス。

殺した細菌、ウィルスまたは細菌のサブユニット「処理
された」生きたウィルスまたは細菌、あるいは生きた細
菌、ウィルス、または他の病原体の少量の形体である。

「同時に」という用語は、　ＦＫ−５６５とＩＬ−２が
（１）同一または別の投与ルートを用いて同一または別
の頻度で別々に、あるいは（２）薬剤学的に受容できる
組成物において一緒に、動物に投与されることを意味す
る。

「非経口的」という用語は、静脈内、皮下、筋肉内、あ
るいは腹腔内注入、または皮下移植による投与を意味す
る。

「相乗作用」という用語は１個々の化合物の間の協同効
果を意味し、全体の効果は個々に与えられた化合物の効
果の総計よりも大きいということである。

本発明の方法は免疫システムを相乗的に刺激するために
ＦＫ−５６５とＩＬ−２を同時に投与することから成る
。本発明の組成物は化合物ＩＬ−２とＦＫ−５６５ある
いは各種の賦形薬、アジュバント、補助薬および稀釈剤
のような薬剤学的に受容できる担体との組み合わせから
成る。本発明の製品は非経口的あるいは経口的投与に適
した薬剤学的に受容できる担体中にＦＫ−５６５の免疫
刺激量を含む第１容器と非経口的投与に適した薬剤学的
に受容できる担体中にＩＬ−２の免疫刺激量を含む第２
容器から成る。あるいは、製品はＩＬ−２，ＦＫ−５６
５，および非経口的投与に適した薬剤学的に受容できる
担体の免疫刺激量を含む容器から成る。

本発明によるＦＫ−５６５とＩＬ−２は栄養不良、外傷
。

感染症あるいは疾病により一般に引き起される免疫シス
テム機能の弱化した動物に投与されるが。

免疫システムを相乗的に刺激して、感染症や疾病に対す
る抵抗性を増して、負傷または他の外傷からの回復時間
を減少させるためにより健康な動物に投与するのが望ま
しい。従って１本発明の化合物は治療的あるいは予防的
に用いることができる。

化合物の相乗的な相互作用のために、化合物の用量は減
らすことができ、投与に関してより低価格ですますこと
ができ、また化合物の高用量による望ましくない副作用
を減少させることができる。

ＦＫ−５６５とＩＬ−２は大体同時に投与されることが
望ましいが、投与が困難な場合には、これらの化合物は
同時に投与した場合には免疫刺激剤として有効である。

例えば、　ＦＫ−５６５は経口的に、つまり錠剤、カプ
セル剤、飼料および水組成物の形で投与され、　ＩＬ−
２は短時間内に、一般的には４８時間以内に、望ましい
のは２４時間以内、最も望ましいのは１〜８時間以内に
、動物に注入される。

ＦＫ−５６５とＩＬ−２は単一量で投与されるかあるい
はある期間にわたって多用量で、一般に注入により。

またはＦＫ−５６５については動物の飼料の中に投与さ
れる。例えば、　ＦＫ−５６５は単一用量として経口的
に投与され、　ＩＬ−２は数日間に及ぶ毎日の注入によ
って投与される。同様に、　ＦＫ−５６５は経口的に、
望ましいのは動物の飼料中に、数日間にわたって多用量
で投与され、　ＩＬ−２は数日間に及ぶ毎日の注入によ
って投与される。このような多くの投与パターンはこの
分野の技術者には明白であろう。

投与されたＩＬ−２とＦＫ−５６５の量は動物の個々の
タイプ、動物の成熟度、動物の大きさ、投与パターン、
およびその用量が治療的に働くか予防的に働（かどうか
によって変化する。一般に、　ＦＫ−５６５とＩＬ−２
は本発明によるとｏ、ｏｏｔ−ｉｏｏｏμｇ　ＦＫ−５
６５／一体重、望ましくは、　０．０１−１０μｇＦＫ
一５６５／ｋｇ体重の用量で、および約１０１　−１０
８ユニットＩＬ−２／動物、望ましくは約１０８　−１
０１ユニツト／動物。

の用量で動物に投与される。

ＦＫ−５６５とＩＬ−２は化合物として、あるいは化合
物の薬剤学的に受容できる塩として単独で１組み合わせ
で、あるいは薬剤学的に受容できる担体、稀釈剤および
賦形薬と組み合わせて投与される。その担体は抗生物質
、他の免疫刺激剤、不活性担体等でありうる。最ものぞ
ましいのは、　ＦＫ−５６５とＩＬ−２は単独かあるい
は薬剤学的に受容できる担体と組み合わせて混合され１
筒車な投与法に備えた組成物を生成する。

本発明のＦＫ−５６５およびＩＬ−２組成物は注入によ
ったり、移植を用いたりなどの受容できるやり方で動物
に投与される。注入と移植が好ましいのは。

それらがタイミングや投与に用いられる用量レベルの正
確な調整を可能にしているからであり、その中でも注入
が最も好ましい。本発明によるＦＫ−５６５とＩＬ−２
組成物は非経口的に投与するのが望ましい。

本発明によるＦＫ−５６５は経口的、注入により、移植
を用いて、経鼻的等の受容できるやり方で動物に投与さ
れる。経口投与は本発明の組成物を錠剤。

懸濁剤、移植片、溶液、乳剤、カプセル剤、粉剤。

シロップ剤、水組成物、飼料組成物等で投与することを
含む、経鼻投与は１本発明の組成物をスプレー剤、溶液
等で投与することを含む。注入と移植が好ましいのは、
それらがタイミングや投与に用いられる用量レベルの正
確な調整ができるからであり、その中でも注入が最も好
ましい。ＦＫ−５６５は非経口的に投与するのが望まし
い。

本発明によるＩＬ−２は、注入により、移植を用いる等
の受容できるやり方で動物に投与される。注入と移植が
好まれるのは、タイミングと投与に用いられる用量レベ
ルの正確な調整ができるからであり、注入が最も好まし
い。ＩＬ−２は非経口的に投与するのが望ましい。経口
投与が望ましくないのは、　ＩＬ−２の生物活性が消化
管の中の酵素によって破壊されるからである。

ＦＫ−５６５，ＩＬ−２，およびＦＫ−５６５とＩＬ−
２の組成物は投与型として用いることのできる組成物を
得るために各種の賦形薬、アジュバント添加剤および稀
釈剤のようなＩＬ−２およびＦＫ一５６５適合性および
生物適合性担体を含む注入できる形で動物に投与される
。　ＦＫ−５６５は注入した特約０．００１〜１０００
μｇ　ＦＫ−５６５／ｋｇ体重を動物に与えるのに十分
な量が担体に添加される。ＩＬ−２は注入した特約１０
１　−１０８ユニットを動物に与えるのに十分な量で担
体に添加される。これらの化合物は、約０．０１〜１０
μｇＦＫ−５６５／ｋｇ体重および約１０８　−１０１
ユニットＩＬ−２７動物を与えるのに十分な量で担体に
添加されることが望ましい。

非運発性発熱物質、無菌水、および制菌水をもたない水
のような水性賦形薬も注入できるＩＬ−２およびＦＫ−
５６５処方をつくるのに適している。これらの型におい
て、水の他に、いくつかの他の水性賦形薬を用いること
ができる。これらは燐酸緩衝塩類、塩化ナトリウム、リ
ンゲル液、デキストロース、デキストロースと塩化ナト
リウム、ゼラチンおよび乳酸加リンゲル液のような滅菌
できる等張注入組成物を含む。メタノール、エタノール
、あるいはプロピレングリコールのような水混和性溶媒
の添加は一般にこれらの賦形集中の化合物の溶解性と安
定性を増加する。

綿実油、スクアレン、ごま油、あるいはピーナツ油およ
びミリスチン酸イソプロピルエステルのようなエステル
類のような非水性賦形薬もＩＬ−２とＦＫ−５６５に対
する溶媒システムとして用いられる。

その他に、抗微使物性防腐剤、抗酸化剤、キレート剤、
ゼラチンおよび緩衝液を含む組成物の安定性、無菌状態
および等張性を促進する各種の添加剤を添加することが
できる。しかしながら、使用される賦形薬、稀釈剤、あ
るいは添加剤は本発明の化合物と適合していなければな
らない。

本発明によるＦＫ−５６５，ＩＬ−２，およびＦＫ−５
６５とＩＬ−２組成物は、動物の皮膚の下に挿入される
緩放出皮下移植の形で動物に投与することができる。移
植は動物に移植された後でゆっくりと溶解するペレット
の形あるいはその分野に熟知した者にはよく知られてい
る生物適合性およびＩＬ−２とｐＫ−５６５適合性放出
モジュールを取ることができる。このようなよく知られ
た投与型は活性成分が数日から数週間にわたってゆっく
り放出されるように設定される。移植は動物に対し約０
．００１〜１００ＯｔＩｇ１００ＯｔＩ／ｋｇ体重７日
、望ましイノハ約０．０１〜１０　ｕ　ｇ　ＦＫ−５６
５／ｋｇ体重／日、および約１０１−１０１ユニット／
ＩＬ−２／動物／日、望ましいのは約１０８　−１０１
ユニット／動物／日５を放出するように設定される。

本発明によるＦＫ−５６５は動物に経口投与することが
できる。例えば、　ＦＫ−５６５は通常の飼料組成物と
混合されるかあるいは動物の免疫システムを刺激するの
に十分な量が飲料水に添加される。ＦＫ−５６５を飼料
中に投与しなければならない場合には１本発明に従って
ＦＫ−５６５と一緒に炭水化物、蛋白質。

ビタミンおよびミネラルを大量に含む通常の栄養的にバ
ランスのとれた飼料を含む動物の飼料組成物が製造され
る。動物の飼料組成物中に含まれる通常の食要素のいく
つかは、ひいた穀物および穀物副産物のような穀類、魚
粉や肉片の中に見られるような動物蛋白質、大豆粉来泊
かすまたはピーナツ粉来泊かすのような野菜蛋白質、ビ
タミンおよびビタミン含有物質２例えば、ビタミンＡと
Ｄ混合物、リボフラビン・サブルメントおよび他のビタ
ミンＢ複合体類、およびミネラルを供給する骨粉や石灰
岩である。家畜で用いられる一般的な飼料材料のタイプ
は望まれる場合には補助的ビタミンやビタミン含有物質
と一緒にアルファルファ枯草やひいたトウモロコシ穂軸
を含む。本発明によるＦＫ−５６５は約０．００１〜１
０００７７ｇ／ｋｇ体重／日、一般的には１−１００ｇ
／ｌｏｎ飼料、を動物に与えるのに十分な量が飼料と混
合される。

本発明によるＦＫ−５６５，ＩＬ−２およびＦＫ−５６
５とＩＬ−２組成物は、偽狂犬病、透過性胃腸炎、　ｒ
ＢＲ，ＢＶＤ、　ＰＩ３゜輸送熱、インフルエンザ、口
締病等のような各種の感染症や疾病、これらに限定され
るわけではないけれども、にかかりやすいが、これにが
がっている動物の免疫システムを刺激するのに有用であ
る。従って、　ＦＫ−５６５とＩＬ−２は外科手術、ｈ
４傷、ストレス、感染症あるいは他の外傷から回復して
いる動物の免疫システムを刺激するのに有用である。

免疫システムを刺激することは、生存のチャンスや回復
時間を改善し、感染症や疾病に対する抵抗性を増進する
。

免疫システムをもっている動物種は１本発明によってＦ
Ｋ−５６５，ＩＬ−２およびＦＫ−５６５とＩＬ−２組
成物を投与することができる。人、牛、豚、犬、猫、馬
。

、７％　類および羊が望ましいが、牛、豚、羊、８およ
び七面鳥のような家畜類や家きん類が最も望ましい。

ＦＫ−５６５，ＩＬ−２およびＦＫ−５６５とＩＬ−２
組成物はインフルエンザ、ロ蹄病、肝炎、狂犬病、ジス
テンパー、髄膜炎、コレラ、腸炎、ジフテリア、麻ｉ。

おたふくかぜ等に対するワクチンのようなワクチンと一
緒に、しかしこれに限定されるわけではないけれども、
用いた場合注入できるワクチンアジュバントとしても有
用である。これらの化合物は約０．００１〜１００μｇ
　ＦＫ−５６５（７）ｉｔが、約０．０１〜１０ｕｇが
好ましい、またワクチンの用量当りのＩＬ−２約１０Ｉ
−１Ｏｓユニットカ、１０ｔ−ＩＯ？ユニットカ好まし
い、ワクチンの用量中に取り込まれるが、脂肪または脂
質懸濁液あるいはグリセロールのような薬剤学的に受容
できる賦形薬または担体と一緒に用いるのが好ましい。

動物は特定のワクチンに一般に用いられているやり方で
ワクチン−アジュバント用量を動物に投与することによ
ってワクチン接種される。

あるいは、動物はワクチンとは別にこれらの化合物を組
み合わせて投与することによってもワクチン接種される
。化合物はワクチン投与の前、同時期あるいは後に投与
されるが、ワクチンの投与前約８−２４時間が望ましい
。化合物は免疫システムを刺激してワクチンに対する反
応を改善する。

理論に拘束されることは望まないが９本発明によるＦＫ
−５６５とＩＬ−２は、免疫システムにおける大食細胞
とＴ細胞を刺激すると信じられている。ＦＫ−５６５と
ＩＬ−２はまた免疫システムを相乗的に刺激して、致死
的な細菌およびウィルス攻撃でみられる試験動物の生存
性を増す。

非経口的あるいは経口的投与に適した薬剤学的に受容的
できる担体中にＦＫ−５６５の免疫刺激量を含む第１容
器と非経口的投与に適した薬剤学的に受容できる担体中
にＩＬ−２の免疫刺激量を含む第２容器から成る製品が
本発明により提供される。その製品は第１容器中に約０
．００１〜１０００μｇ　ＦＫ−５６５／一体重を、第
２容器中に約１０１−１０８ユニットｌし＝２を含む。

また、　ＩＬ−２，ＦＫ−５６５，および薬剤学的に受
容できる担体の免疫刺激量を含む容器から成る製品が本
発明により提供される。製品は約０．００１〜１０００
　ａ　ｇ　ＦＫ−５６５／　ｋｇ体重と約１０１−１０
８ユニットＩＬ−２を含む。

本発明を一般的に説明したが１次の実施例が発明の特定
の具体例として、その実施と利点を証明するために与え
られる。実施例は実例として与えられており、どんなや
り方でも明細書または請求の範囲を限定することを意図
するものではないことは理解されよう。

実−ｉ−二桝 偽狂犬病ウィルス（ＡＴＣＣＶＲ−１３５）と脳心筋炎
ウィルス（ＡＴＣＣＶＲ−１２９）のＡｕｊｅｓｋｙ菌
株はＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅ　Ｃｕ１ｔｕｒｅ　Ｃｏ
１１ｅｃｔｉｏ’ｎから入手された。

６週令の雌ＣＦ、マウス４匹を各研究の前７〜１゜日間
馴化させた。この期間および全研究期間、これらのマウ
スに任意量の食物と水を与えた。

ＦＫ−５６５とＩＬ−２を３日続けて１日につき１同各
種の用量（表１−４）で投与した；これはマウスにウィ
ルスを感染させる３日前に開始した（−３，−２゜−１
日）。０日日には、マウスＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ　Ｍｏ
ｄｉｆｉｅｄ　Ｅｅｇｌｅ’ｓ　Ｍｅｄｉｕｓ＋、　０
．２　！Ｉｄｌ〜０．４　ｔｎｌ中の偽狂犬病ウィルス
（ＰｒＶ）あるいは脳心筋炎ウィルス（ＥＭＣ）の腹腔
内注入を受けた。用いられたウィルスの用量は未処理マ
ウスで８０％致死を引き起すように前取て決められた用
量であった。死亡率レベルは１０〜１４日間毎日監視し
た。

生存率データは二項分布表を用いてと中間生存時間によ
って分析した。組み合せ処置として投与された化合物間
の相互作用はイソボログラムの作製によって分析された
。結果は表１−４の中で要約される。イソボログラムは
第１図および第２図に示される。

表１について述べると、　ｆ！ＭＣウィルス感染マウス
においては、　ＦＫ−５６５およびＩＬ−２の組み合せ
による処置は各化合物単独の場合に見られるよりも生存
率を大きくした。い（らかの組合せ処置後の生存率レベ
ルは未処置動物とは統計学的に異なっていたが、各化合
物単独による処置では統計学的な差は見られなかった。

表２について述べると１Ｍｉ合せ処置はまた各化合物単
独で見られる場合よりも中間生存時間を増した。実験３
においては、　ＦＫ−５６５５００μｇ／ｋｇの処置は
７日の中間生存時間をもたらした。ＩＬ−２単独の１０
００ユニツトによる処置は５日の中間生存時間をもたら
した。ＦＫ−５６５５００μｇ／ｋｇとＩＬ−２１００
０ユニツトの組合せによる処置は１０日の中間生存時間
をもたらした。

表３について述べると、偽狂犬病ウィルス感染マウスに
与えられる組合せ処置はより劇的な効果さえももってい
た。組み合せて投与されたＦＫ−５６５とＩＬ−２は中
間生存時間の劇的な増加と同様に生存率に対して相加的
よりもよい（相乗的）効果をもたらした。ＦＫ−５６５
とｒＬ−２組合せによる治療後の生存率は各化合物単独
による処置とは統計学的に異なっていた。

表４について述べると、　ＦＫ−５６５ｔｏｏ　＊るい
は５００μｇ／ｋｇおよびＩＬ−２１００あるいは１　
、０００ユニツトを含む組合せ剤は中間生存時間に２倍
以上の増加をもたらす。

この分野でよく知られているように、イソボログラム分
析が、抗生物質の相互作用を分析するために広く用いら
れている。この技術はＦＫ−５６５とＩＬ−２の間の相
互作用の分析に応用された。２つの化合物の間の考えら
れる相互作用の別の種類の理論的描写は第１図に示され
る。所望の結果（５０％有効用量、８０％死亡など）を
もたらすのに必要な２つの化合物の各々の濃度は各化合
物単独の場合および他の化合物のいろいろな量が存在す
る場合について計算した。ＦＫ−５６５とＩＬ−２につ
いては、その濃度は各化合物単独の各種用量で、あるい
は他の化合物の異なった用量と組合せて処置したマウス
の生存曲線の回帰分析によって決定された。結果は他の
化合物が存在しない場合の有効用量の百分率としてプロ
ットされた。

２つの仮説的化合物ＡとＢが他の化合物に対して促進的
でもなく、また阻害的でもないならば。

それは相加的と命名され、その結果は第１図において「
相加的」として分類されている直線である。

化合物Ａが化合物Ｂの作用を阻害するならば、Ａのどん
な濃度でも、Ａが存在しない場合に見られる効果を得る
ためにはＢのより大きい濃度（有効用量のパーセントと
して）が必要とされる。これは第１図において「拮抗作
用」と呼ばれる線をもたらす。同様に、化合物Ａが化合
物Ｂに対して刺激的作用をもつならば、Ａが存在しない
場合に認められるのと同じ結果をＡが存在する場合に得
るためには、Ｂはより少量であることが必要であろう。

これは第１図において「相乗作用」と呼ばれる。

この分析をＦＫ−５６５とＩＬ−２の組み合せに応用す
ると、第２図で示される結果が得られる。これらの結果
は明らかにＦＫ−５６５とＩＬ−２の驚くべき相乗的相
互作用を示している。

大−族一貫一主 異なった時間に化合物を投与する効果を試験するために
、偽狂犬病ウィルスによる感染前３日間ＦＫ−５６５と
ＩＬ−２の組み合せによりマウスを処理した。

感染の前日に始まる３日間と感染後１日または２白目に
始まる３日間、その結果は５表に示す。

５表について述べると、処理を感染１日前に開始した場
合、　ＦＫ−５６５あるいはＦＫ−５６５とＴＬ−２１
，０００ユニツトの組み合せによる処理は生存率の統計
学的に重大な増進をもたらした。処理を感染２日後に開
始した場合には、生存率には統計学的に重大な変化は見
られなかった。これらの結果は、　ＦＫ−５６５とＩＬ
−２は所期の効果をあげるためには、予防的かあるいは
ウィルスに露出後すぐに用いるのが望ましいことを示し
ている。最大の生存レベルは感染３日前に処置を始めた
時に見られた。

実−１−」Ｌ」− 感染７日前と３日前に始める処置の有効性を試験した。

マウスを３日間続けてＦＫ−５６５およびＩＬ−２のい
ろいろな組み合せで処理し、処理を中止してから１日後
または４日後に感染させた。その結果を表６に示す。

表６から考えると、処理は感染３日前に投与を開始した
場合に生存率を増すのに最も有効であった。相乗作用は
感染７日前に始めた多くの組み合せ処置により明白であ
るが、一般的には、処置は感染３日前に始めた場合の方
が有効であった。

夫−施一例−↓ 一方的なネズミ混合リンパ球反応 に対するＩＬ−２とＦＫ−５６５の作用混合リンパ球反
応（ＭＬＲ）は別の動物からの細胞に対する非自己決定
因子を認識するＴ−細胞の能力を示している。ｒｌＬ−
２は主にＴ−細胞成長因子として作用するので、この化
合物はこの反応を調節するはづであると考えられる。肺
臓細胞が２つの遺伝学的に異った種（主な組織適合性複
合体■−領域抗原に関して）のマウスから単離され、こ
の検定法において応答物および刺激物として用いられた
。Ｃ５７ＢＬ／６マウスから単離された細胞は応答物母
集団として役立つが、　Ｂａ１ｂ／ｃマウスから単離さ
れたマウスは刺激物母集団として役立つ。刺激細胞はト
リチウム化チミジンをＤＮＡに取り込むのを防ぐために
マイトマイシン−Ｃかまたは放射線（３３００ｒａｄ）
で前処理された。このように、トリチウム化チミジンの
取込みにより測定される増殖は応答細胞からくると考え
られる。この検定における２つの細胞母集団の一つだけ
が刺激に反応することができるので、これは一方的なＭ
ＬＲとして考えられる。その結果は表７に示される。

表７から考えると、一方的なＭＬＲは細胞培養培地とイ
ンキュベーションの時間に関して最適条件にされた。　
ｒｌＬ−２単独のいろいろな量の追加は。

たとえあったとしても少しの影響しかもたない。

しかしながら１反応性強化をもたらすｒｌＬ−２とＦＫ
−５６５の相互作用的効果は最適培養条件下でも明らか
であった。　ｒｌＬ−２の１グラム当り１０ナノグラム
（ｎｇ／ｄ）とＦＫ−５６５０，１あるいは１．Ｏａｇ
／−の組合せは各化合物単独で達成されるより大きい驚
くべき相乗反応をもたらした。

叉−施一奥一足 生体外でのネズミ肺臓細胞の１次的 免疫化に対するＩＬ−２とＦＫ−５６５の作用Ｍｉｓｈ
ｅｌｌ−Ｄｕｔｔｏｎ培養システムとしてしばしば考え
られるネズミ牌臓細胞（生体外）の１次的免疫化は抗原
（生体外）に対する１次的抗体反応に対する優れたモデ
ルである。検定システムはＪｅｒｎｅ斑点検定のスライ
ド変法において斑点生成細胞を数えることによって肺臓
中の抗体産生細胞を、また血球凝集検定法を用いて血清
抗体価を測定する。

用いられたモデル抗原はヒツジ赤血球（ＳＲＢＣまたは
５ｈｅ）であった。個々の供給体ヒツジから採取される
血液サンプル（Ｃｏ１ｏｒａｄｏ　５ｅｒｕ＋ｓ　Ｃｏ
ｍｐａｎｙ）が得られ、スクリーンされた。全ての検定
は単一供給体動物から単離された赤血球を用いて行われ
た。

結果は表８に示される。

表８について述べると、最初に肺臓細胞に加えられると
、　ｒＩＬ〜２は用量依存的に斑点生成細胞（ＰＦＣｓ
　）の生成を増大させた。ＰＦＣｓは３日目に処理培地
中に容易に検出され、　ＡＰＣ３は対照培地中には検出
されなかった。４日目と５日目には。

処理培地は未処理培地よりは実質的により多くのＰＦＣ
，を産生じた。処理培地における最適反応は４日目に起
ったが、未処理培地における最適反応は５日目まで起ら
なかった。肺臓細胞培地のＰＦＣ反応に対してｒｌＬ−
２とＦＫ−５６５の間に相互作用的効果が認められた。

　ＰＦＣの動力学は用量により変化した：　ＦＫ−５６
５の濃度を増すとｒｌＬ−２の１０ｍｇ／−に対するＰ
ＦＣ反応の動力学を変化させ、最大反応は４日目よりは
５日目に起った。驚いたことには、ｒＩＬ−２とＦＫ−
５６５の両方を与えられた培地中の最大反応の大きさも
ｒｌＬ−２単独を与えられた培地よりも増加した。

実−」１−例一」− 肺臓をＯｖ＾−ＦＩＴＣ（オバルブミンおよびイソチオ
シアン酸フルオレスセインから成る蛋白質配合体）免疫
化マウスから無菌的に取り出し、単一細胞懸濁液がＨａ
ｎｋｓ　Ｂａ１ａｎｃｅｄ　５ａｌｔ　５ｏｌｕｔｉｏ
ｎ（ＨＢＳＳ）中でつくられた。細胞は３回洗浄し、抗
生物質、Ｌ−グルタミン、２−メルカプトエタノール、
ＨＥＰＥ’４衝液および１０％こうし胎児血清を含むＲ
ＰＭ１１６４０細胞培養培地中で最終一度を２．５Ｘ１
０８細胞／Ｉｄにした。

０、２．５．５あるいは１０μｇ／ＩｄＯＶＡ−ＦＩＴ
Ｃを含む三重培養が９６の健康な組織培養プレートにお
いて開始された。三重培養の各くぼみはＦＫ−５６５０
，０，０１あるいは０．１ｕｇ／ｍｌとｒｌＬ−２０，
０，３あるいは０．６μｇ７ｍｌも含んでいた。〔３〕
■−チミジン１ｔＩｆを各くぼみに加えた時、培養は３
７°Ｃで空気中５χｃｏ２中に３日間維持した。２４時
間後に、培養はＳｋａ　ｔｒ。

ｎ　Ｃｅ１ｌ　ｌ１ａｒｖｅｓｔｅｒを用いて取り入れ
られた。サンプルはシンチレーションカウンターの中に
置き。

データはカウント７分の数として記録した（ＣＰＭ）　
。

その結果を表９に示す。

表９について述べると、　ＦＫ−５６５単独は４日の培
養期間に及ぶ〔３〕Ｈ−チミジン取り込みによって測定
した低レベルの生体外細胞増殖を刺激する。

ＦＫ−５６５０，１μｇ／ｒｎｌの添加はＦＫ−５６５
を含まない培養液について見られる反応以上にその反応
を大体３倍にする。培養液にｒｌＬ−２の増加濃度を加
えると。

ＣＰＨの驚くべき８倍の増加がある。　ＦＫ−５６５を
含む培養液に加えたｒｌＬ−２は相乗的な相互作用をも
たらし、増殖はバックグラウンドレベルの２４倍である
。抗原を含む培養液に加えたＦＫ−５６５は抗原刺激細
胞の増殖を増加しない。０ＶＡ−ＦＩＴＣ５μｇ／−を
含む培養液に加えたｒｌＬ−２はバックグラウンドＣＰ
Ｈの２，５倍の増加をもたらす。ｒｌＬ−２０，６ｕ　
ｇ／ｄｉおよび１４−５６５０．１μｇ／ｍｌを加える
と、チミジン取込みによって測定される細胞増殖はバッ
クグラウンドの６倍のレベルに増大する。

実−」１−例−ｊ− 牛の編層固有のリンパ球は絶えず撹拌しながらＨＤＴＡ
　０．５ｇ／リットルを含むカルシウムとマグネシウム
のない（ＣＭＦ）Ｈａｎｋｓ　Ｂａ１ａｎｃｅｄ　５ａ
ｌｔ　５ｏｌｕｔｉｏｎ（ＨＢＳＳ）を含むフラスコ中
に牛の腸片を置くことによって得られた。上澄液はこれ
に混ざり物がなくなるまで１５分毎に除去した。その切
片を洗浄し。

ＣＭＦ　ｌｌＢｓ５中で３７°Ｃで振盪水浴中において
９０分間５χＰｅｔａｌ　Ｃａ１ｆ　５ｅｒｕａ＋（Ｆ
ＣＳ）（こうし胎児血清）、コラゲナーゼｌＯユニット
／ｄおよび大豆トリプシン阻害剤の同重量とインキュベ
ートした。細胞はＨＢＳＳ中で５χｐｃｓで２度洗浄し
、５Ｘ１０ｂｌｌ胞／ｄの濃度で培養液中に置いた。

３倍培養液はｒｌＬ−２３，７５，１５，あるいは３０
ナノグラム（ｎｇ）／ｄのある場合、ない場合について
ＦＫ−５６５０，０，０３１２，０，０６２５，０，１
２５，０，２５，０，５，１あるいは２μｇ／ｄを含ん
でいた。培養液は３７°Ｃで空気中５χＣ（１９）の中
に４日間維持しこの時、〔３〕トチミジンｌｕｌを各く
ぼみに加えた。２４時間後。

培養液は５ｋａｔｒｏｎ　Ｃｅ１ｌ　Ｈａｒｖｅｓｔｅ
ｒを用いて取り入れた。サンプルはシンチレーションカ
ウンター中に置き、データはカウント７分の数字として
記録した（ＣＰＭ）。その結果を表１０に示す。

表１Ｏから考えると、細胞はＦＫ−５６５のどんな濃度
による処理に対する反応でも増殖せず、また増殖が１５
あるいは３０μｇ／ｍｌで起るにもかかわらず、ｒｌＬ
−２３，７５μｇ／ｄ！にも反応しなかった。　ＦＫ−
５６５とｒＩＬ−２３，７５μｇ／Ｉ１１による刺激は
増殖をもたらさなかった。しかしながら、　ＦＫ−５６
５２μｇ／ｚｄｌと併用したｒＩＬ−２１５μｇ／ｒｔ
ｄｌはバックグラウンドレベルの５倍の増加を刺激した
。ｒｌＬ−２３０μｇ／−による処理はＦＫ−５６５が
ない場合でも最大の増殖をもたらした。

表　　　　　　１ カッコ内の数字は、下記の二項およびＰｏｌｓｓｏｎ分
布表から測定された統計学的有意性を示す。

１、　Ｐ　＜０．０３；　　　　４．　Ｐ　＜０．（１
２コ２、　Ｐ　＜０．００３：　　　　ｓ、　Ｐ　＜０
．０００１；３、　Ｐ　＜０．０９ｉ　　　　６．偶然
性の確立なし表　　　　　２ 表　　　　　　３ 表　　　　　４ 生存時間は日数で表わされている。

表　　　　　　５ 感染の前と後の異った時期にＦＫ−５６５と組換えＩＬ
−２との組み合せにより処理した偽゛　ウィルス感賞マ
ウスの　　２ カッコ内の数字は、下記の二項およびＰｏｌｓｓｏｎ分
布表から測定された統計額敵有意性を示す。

１、偶然性の確率なし； ２、Ｐ＜０．（１２゜ Ｎ、Ｄ、　＝測定されず。

表　　　　　６ ５．偶然江の帷牟ｔし 表　　　　　７ ＳムＦｌ　　−＋巧１６の慄準咲左 表　　　　　　８ ３　　日　　　　４　　日　　　　　　５　　日ｎｇは
ナノグラムを表す。

結果は１−の培養液当りの斑点生成細胞（ＰＦＣ）とし
て表される。

ｐｐｃはＪ８ｒｎｅ斑点生成細胞検定のスライド変法を
用いて墳養３０後、４日後および５日後に測定した。実
験グループからの結果は正の対照グループの百分率とし
ても表わされる。

５ｇ　　；　　　　　　　“′　　′″″“リ　　ＬＩ
Ｊ　　　Ｉ′Ｌ′　　　”　　−へ！の−りり一寸■ 表　　　　１０ 各三つ組の１分間当　のカウント数 ＦＫ−５６５ＦＫ−５６５ＩＬ−２＋ＦＫ−５６５１Ｌ
−２＋ＦＫ−５６５μｇ／ｍｌ　　Ｃｏｕｎｔｓ　　　
１５　ｎｇ／ｍｌ　　　　　３０　ｎｇ／ｍ１０　　　
　７４７　　　２２３２６±４１１８　　９７５（１２
±１３３１Ｏ，０３１２５２３２７７６３±１５８５　
　８７１３９±２６４００．１２５　　８８３　　　３
６２９５±４８１　　　９４５６５±１６５３０．２５
　　　６４１　　　４００７７±２７１０　　　９００
３５±３１１６０．５　　　４８０　　　３８０３９±
２７５９　　９８２（１２±４２３１．０　　　８７４
　　　７９６０７±３３６８　　９８８９６±２６１４
２．０　　　７８４　　　９２１４７±１５６６　　１
０６３８１±１４５８ｎｇはナノグラムを表わす。

【図面の簡単な説明】

第１図はイソボログラム分析後の仮説的反応曲線を示す
図である。 第２図は偽狂犬病ウィルス感染マウスにおけるＦＫ−５
６５とＩＬ−２の相互作用のイソボログラム分析結果を
示す図である。 特許出願人　インターナショナル・ミネラルズ・アンド
・ケミカル・ コーポレイション 代理人　弁理士　１）　澤　　博　　昭（外２名） 化合鞠Ｂ

Claims (25)

【特許請求の範囲】
1. （１）免疫刺激量のＦＫ−５６５とＩＬ−２とを組み合
   せて動物に投与することから成る動物の免疫システムを
   相乗的に刺激する方法。
2. （２）ＦＫ−５６５が約０．００１〜１０００μｇ／ｋ
   ｇ体重の量で前記動物に投与され、ＩＬ−２が約１０＾
   １−１０＾８ユニットの量で前記動物に投与され請求項
   １記載の方法。
3. （３）ＦＫ−５６５が経口的に投与され、ＩＬ−２が非
   経口的に投与され請求項１記載の方法。
4. （４）前記経口投与法が、前記化合物を前記動物に錠剤
   、懸濁剤、溶液、乳剤、カプセル剤、粉末、シロップ、
   飲料水組成物、および飼料組成物の形態で投与すること
   から成る群から選ばれる請求項３記載の方法。
5. （５）ＦＫ−５６５が飼料組成物中に投与され、前記飼
   料組成物はさらに栄養学的にバランスのとれた飼料およ
   び前記飼料と混合されたＦＫ−５６５の免疫刺激量から
   成る請求項４記載の方法。
6. （６）ＦＫ−５６５が経鼻的に投与され、ＩＬ−２が非
   経口的に投与される請求項１記載の方法。
7. （７）ＦＫ−５６５とＩＬ−２が非経口的に投与される
   請求項１記載の方法。
8. （８）ＦＫ−５６５とＩＬ−２が組成物において投与さ
   れ、前記組成物がＩＬ−２、ＦＫ−５６５、および薬剤
   学的に受容できる担体から成る請求項７記載の方法。
9. （９）ＦＫ−５６５とＩＬ−２が移植を用いて投与され
   、前記移植はさらに生物適合性およびＦＫ−５６５とＩ
   Ｌ−２適合性移植物質から成る請求項７記載の方法。
10. （１０）ＦＫ−５６５が前記動物に約０．００１−１０
    ００μｇ／ｋｇ体重／日の量で投与され、ＩＬ−２が前
    記動物に約１０＾１−１０＾８ユニット／日の量で投与
    される請求項９記載の方法。
11. （１１）ＦＫ−５６５とＩＬ−２が注入できる処方で投
    与され、前記の注入できる処方は生物適合性およびＦＫ
    −５６５とＩＬ−２適合性賦形剤、および前記賦形剤と
    混合されたＦＫ−５６５およびＩＬ−２の免疫刺激量か
    ら成る請求項７記載の方法。
12. （１２）前記動物が人、牛、豚、犬、猫、馬、鳥類およ
    び羊類から成るグループから選ばれる請求項１記載の方
    法。
13. （１３）前記動物が牛、豚、羊、鶏および七面鳥のよう
    な家畜類および家きん類から成るグループから選ばれる
    請求項１２記載の方法。
14. （１４）ＩＬ−２、ＦＫ−５６５および薬剤学的に受容
    できる担体から成る動物の免疫システムを相乗的に刺激
    し、あるいはアジュバントとしてはたらくのに適した免
    疫刺激組成物。
15. （１５）前記組成物中のＦＫ−５６５の量が約０．００
    １−１０００μｇ／ｋｇ体重であり、前記組成物中のＩ
    Ｌ−２の量が約１０＾１−１０＾８ユニットである請求
    項１４記載の組成物。
16. （１６）ＦＫ−５６５とＩＬ−２から成るアジュバント
    とワクチンを組み合わせて投与することから成る動物に
    投与されたワクチンの有効性を促進するための方法。
17. （１７）前記ＦＫ−５６５が約０．００１−１０００μ
    ｇ／ｋｇ体重の用量で投与され、ＩＬ−２が約１０＾１
    −１０＾８ユニットの用量で投与される請求項１６記載
    の方法。
18. （１８）前記アジュバントが前記ワクチン投与の前に、
    同時に、あるいは後に前記ワクチンとは別に投与される
    請求項１６記載の方法。
19. （１９）前記アジュバントが前記ワクチン中に取り込ま
    れる請求項１６記載の方法。
20. （２０）前記アジュバントが０．００１−１０００μｇ
    ／ｋｇ体重の量で前記ワクチン中に取り込まれ、ＩＬ−
    ２が約１０＾１−１０＾８ユニットの量で前記動物に投
    与される請求項１７記載の方法。
21. （２１）非経口的あるいは経口的投与に適した薬剤学的
    に受容できる担体中にＦＫ−５６５の免疫刺激量を含む
    第１容器、および非経口的投与に適した薬剤学的に受容
    できる担体中にＩＬ−２の免疫刺激量を含む第２容器、
    から成るＦＫ−５６５とＩＬ−２により免疫システムを
    相乗的に刺激する製品。
22. （２２）第１容器が約０．００１−１０００μｇＦＫ−
    ５６５／ｋｇ体重を含む請求項２１記載の製品。
23. （２３）第２容器が約１０＾１−１０＾８ユニットＩＬ
    −２を含む請求項２１記載の製品。
24. （２４）ＩＬ−２、ＦＫ−５６５および薬剤学的に受容
    できる担体の免疫刺激量を含む容器から成るＦＫ−５６
    ５およびＩＬ−２により免疫システムを相乗的に刺激す
    るための製品。
25. （２５）容器が約０．００１−１０００μｇＦＫ−５６
    ５／ｋｇ体重と約１０＾１−１０＾８ユニットＩＬ−２
    を含む請求項２５記載の製品。