JPS6331446B2 - - Google Patents
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- JPS6331446B2 JPS6331446B2 JP57191820A JP19182082A JPS6331446B2 JP S6331446 B2 JPS6331446 B2 JP S6331446B2 JP 57191820 A JP57191820 A JP 57191820A JP 19182082 A JP19182082 A JP 19182082A JP S6331446 B2 JPS6331446 B2 JP S6331446B2
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Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
本発明は、安定化したウレアーゼ製剤に関する
ものである。 ウレアーゼは特異的に尿素をアンモニアと二酸
化炭素に分解する酵素として、これまで広く利用
されてきたが、近年、特に、腎機能疾患の重要な
指標のひとつである生体成分中の尿素の測定に多
く使われ、その重要性が高まつている。 しかし、高度に精製されたウレアーゼは、非常
に不安定であり、これまで種々の安定化の試みが
なされているが、いづれも満足できる結果は得ら
れていない。例えば、安定剤としてグルタチオ
ン、エチレンジアミンテトラ酢酸塩（以下、
EDTAと略す）及びクエン酸塩の一定重量比に
よる混合物を含有する調製物（特開昭52−11748
号）あるいは、チオール化合物、キレート試薬、
及び有機二塩基酸またはその塩の混合物を含有す
るウレアーゼ組成分（特開昭57−138389号）など
が提案されているが十分な効果は上がつていな
い。 本発明者らは、鋭意、研究した結果、Ｎ−アセ
チルステイン（以下、NACと略す）EDTA、お
よびシユークロース等の二糖類を加えることによ
り、従来の安定化法に比し、著しく安定なウレア
ーゼ製剤が得られることを見出し、本発明を完成
した。 本発明の特徴のひとつは、ウレアーゼの安定化
剤として、シユークロース、ラクトース等の二糖
類を用いることにある。これによつて後述の試験
例２に示すように37℃に２ケ月保存後も溶解直後
のウレアーゼ活性についてはチオール化合物の有
無あるいは種類に関係なくほゞ100％のウレアー
ゼ残存活性率を示す安定な製剤が得られた。 又、一般にチオール化合物が、ウレアーゼの安
定化に効果があることは古くから知られており、
なかでもグルタチオンがよく使われているが、
（特開昭52−117488号特開昭57−138389号）本発
明者らの詳細な検討の結果、試験例２に示すよう
に、NACが最もすぐれていることが判明した。 本発明における安定なウレアーゼ製剤とは、例
えば、緩衝液に安定化剤を加えて溶解し、PHを調
整（望ましくはPH6.5）した後、ウレアーゼを溶
解した溶液を凍結乾燥して得られるものである。 次に、実施例について説明するが本発明はこれ
によつて限定されるものではない。 実施例 １ リン酸カリウム 50ｍＭ EDTA 100ｍＭ NAC 20ｍＭ シユークロース ２ｇ／dl ラクトース ２ｇ／dl 以上の溶液のPHを6.5に調整した後ウレアーゼ
90u／mlを加え凍結乾燥して安定なウレアーゼ製
剤を得る。 実施例 ２ リン酸カリウム 25ｍＭ EDTA 25ｍＭ NAC ５ｍＭ シユークロース ２ｇ／dl 以上の溶液のPHを6.5に調整した後ウレアーゼ
22.5u／mlを加え凍結乾燥して安定なウレアーゼ
製剤を得る。 次に試験例により本発明の効果について説明す
る。 試験例 １ リン酸カリウム10ｍＭ、NAC4ｍＭ、EDTA40
ｍＭの溶液のPHを6.5に調整後、ウレアーゼを
40u／mlとなるように加え、更に、表１に示す安
定化剤(1)シユークロース、(2)フイコール（フアル
マシア社製品名）、(3)KClをそれぞれ２ｇ／dlと
なるよう加え、凍結乾燥後そのウレアーゼ活性を
凍結乾燥直後および一定期間（95日）37℃に保存
したものについて測定した結果を表１に示す。
こゝで溶解には緩衝液20ｍＭ BESにサリチル
酸ナトリウム２％、ニトロプルシツドナトリウム
0.15％、ポリビニルアルコール0.4％を添加した
溶液を用いた。数値はそれぞれ凍結乾燥前のウレ
アーゼ活性を100とした場合の残存活性率を表わ
す。 表１から安定化剤としてシユークロースが最も
すぐれていることが分る。
ものである。 ウレアーゼは特異的に尿素をアンモニアと二酸
化炭素に分解する酵素として、これまで広く利用
されてきたが、近年、特に、腎機能疾患の重要な
指標のひとつである生体成分中の尿素の測定に多
く使われ、その重要性が高まつている。 しかし、高度に精製されたウレアーゼは、非常
に不安定であり、これまで種々の安定化の試みが
なされているが、いづれも満足できる結果は得ら
れていない。例えば、安定剤としてグルタチオ
ン、エチレンジアミンテトラ酢酸塩（以下、
EDTAと略す）及びクエン酸塩の一定重量比に
よる混合物を含有する調製物（特開昭52−11748
号）あるいは、チオール化合物、キレート試薬、
及び有機二塩基酸またはその塩の混合物を含有す
るウレアーゼ組成分（特開昭57−138389号）など
が提案されているが十分な効果は上がつていな
い。 本発明者らは、鋭意、研究した結果、Ｎ−アセ
チルステイン（以下、NACと略す）EDTA、お
よびシユークロース等の二糖類を加えることによ
り、従来の安定化法に比し、著しく安定なウレア
ーゼ製剤が得られることを見出し、本発明を完成
した。 本発明の特徴のひとつは、ウレアーゼの安定化
剤として、シユークロース、ラクトース等の二糖
類を用いることにある。これによつて後述の試験
例２に示すように37℃に２ケ月保存後も溶解直後
のウレアーゼ活性についてはチオール化合物の有
無あるいは種類に関係なくほゞ100％のウレアー
ゼ残存活性率を示す安定な製剤が得られた。 又、一般にチオール化合物が、ウレアーゼの安
定化に効果があることは古くから知られており、
なかでもグルタチオンがよく使われているが、
（特開昭52−117488号特開昭57−138389号）本発
明者らの詳細な検討の結果、試験例２に示すよう
に、NACが最もすぐれていることが判明した。 本発明における安定なウレアーゼ製剤とは、例
えば、緩衝液に安定化剤を加えて溶解し、PHを調
整（望ましくはPH6.5）した後、ウレアーゼを溶
解した溶液を凍結乾燥して得られるものである。 次に、実施例について説明するが本発明はこれ
によつて限定されるものではない。 実施例 １ リン酸カリウム 50ｍＭ EDTA 100ｍＭ NAC 20ｍＭ シユークロース ２ｇ／dl ラクトース ２ｇ／dl 以上の溶液のPHを6.5に調整した後ウレアーゼ
90u／mlを加え凍結乾燥して安定なウレアーゼ製
剤を得る。 実施例 ２ リン酸カリウム 25ｍＭ EDTA 25ｍＭ NAC ５ｍＭ シユークロース ２ｇ／dl 以上の溶液のPHを6.5に調整した後ウレアーゼ
22.5u／mlを加え凍結乾燥して安定なウレアーゼ
製剤を得る。 次に試験例により本発明の効果について説明す
る。 試験例 １ リン酸カリウム10ｍＭ、NAC4ｍＭ、EDTA40
ｍＭの溶液のPHを6.5に調整後、ウレアーゼを
40u／mlとなるように加え、更に、表１に示す安
定化剤(1)シユークロース、(2)フイコール（フアル
マシア社製品名）、(3)KClをそれぞれ２ｇ／dlと
なるよう加え、凍結乾燥後そのウレアーゼ活性を
凍結乾燥直後および一定期間（95日）37℃に保存
したものについて測定した結果を表１に示す。
こゝで溶解には緩衝液20ｍＭ BESにサリチル
酸ナトリウム２％、ニトロプルシツドナトリウム
0.15％、ポリビニルアルコール0.4％を添加した
溶液を用いた。数値はそれぞれ凍結乾燥前のウレ
アーゼ活性を100とした場合の残存活性率を表わ
す。 表１から安定化剤としてシユークロースが最も
すぐれていることが分る。
【表】
試験例 ２
実施例２のウレアーゼ製剤および比較のためチ
オール化合物として実施例２のNACの替りにグ
ルタチオン、システインをそれぞれ同量（５ｍ
Ｍ）用いた場合及び無添加の場合について試験例
１と同様ウレアーゼ活性を測定した結果を表２に
示す。こゝで溶解には緩衝液20ｍＭ HEPESに
サリチル酸ナトリウム1.6％、ニトロプルシツド
ナトリウム0.12％、ポリビニルアルコール0.4％
を添加した溶液（PH6.8）を用いた。 数値はそれぞれ凍結乾燥前のウレアーゼ活性を
100とした場合の残存活性率を表わす
オール化合物として実施例２のNACの替りにグ
ルタチオン、システインをそれぞれ同量（５ｍ
Ｍ）用いた場合及び無添加の場合について試験例
１と同様ウレアーゼ活性を測定した結果を表２に
示す。こゝで溶解には緩衝液20ｍＭ HEPESに
サリチル酸ナトリウム1.6％、ニトロプルシツド
ナトリウム0.12％、ポリビニルアルコール0.4％
を添加した溶液（PH6.8）を用いた。 数値はそれぞれ凍結乾燥前のウレアーゼ活性を
100とした場合の残存活性率を表わす
【表】
この表から明らかなように溶解直後のウレアー
ゼ活性はいずれもほゞ100％であるがこれはシユ
ークロース、EDTAの効果によるものと考えら
れる。これに反し37℃で２ケ月保存したものは溶
解後の溶液でのウレアーゼの安定性が添加するチ
オール化合物によつて著しく差があり、グルタチ
オン、システインの場合はNACに較べ劣化して
いる。すなわちNACの場合は溶液として30℃７
日保存後の残存活性率が凍結乾燥直後のものでは
69.4％、凍結乾燥後37℃で63日保存したものでは
67.4％とその低下がほとんど変らない。グルタチ
オンの場合は前者は69.3％、後者は15.1％と著し
く低下が大きい。またシステインの場合は前者は
18.6％、後者は10.3％と双方とも残存活性率は低
い。 このことはNAC添加のものは凍結乾燥直後と、
37℃、63日保存後とで品質的に変化がないことを
示し、グルタチオンの場合は37℃、63日保存中に
品質が劣化したとを示している。システインの場
合は溶液保存中の劣化が大きく凍結乾燥品の保存
中の変化は問題にならない。 試験例 ３ 実施例１のウレアーゼ製剤を37℃で保存した場
合のウレアーゼ活性の安定性を測定した結果を表
３に示す。 ここで溶解液には試験例２と同様のものを用
い、数値の表示も同様とする。
ゼ活性はいずれもほゞ100％であるがこれはシユ
ークロース、EDTAの効果によるものと考えら
れる。これに反し37℃で２ケ月保存したものは溶
解後の溶液でのウレアーゼの安定性が添加するチ
オール化合物によつて著しく差があり、グルタチ
オン、システインの場合はNACに較べ劣化して
いる。すなわちNACの場合は溶液として30℃７
日保存後の残存活性率が凍結乾燥直後のものでは
69.4％、凍結乾燥後37℃で63日保存したものでは
67.4％とその低下がほとんど変らない。グルタチ
オンの場合は前者は69.3％、後者は15.1％と著し
く低下が大きい。またシステインの場合は前者は
18.6％、後者は10.3％と双方とも残存活性率は低
い。 このことはNAC添加のものは凍結乾燥直後と、
37℃、63日保存後とで品質的に変化がないことを
示し、グルタチオンの場合は37℃、63日保存中に
品質が劣化したとを示している。システインの場
合は溶液保存中の劣化が大きく凍結乾燥品の保存
中の変化は問題にならない。 試験例 ３ 実施例１のウレアーゼ製剤を37℃で保存した場
合のウレアーゼ活性の安定性を測定した結果を表
３に示す。 ここで溶解液には試験例２と同様のものを用
い、数値の表示も同様とする。
【表】
この表３から本発明のウレアーゼ製剤は37℃、
約６ケ月保存後においてもなお溶解直後のウレア
ーゼ活性は勿論、溶解後の保存性についても、凍
結乾燥直後とほとんど品質に変わりがなく非常に
安定である。
約６ケ月保存後においてもなお溶解直後のウレア
ーゼ活性は勿論、溶解後の保存性についても、凍
結乾燥直後とほとんど品質に変わりがなく非常に
安定である。
Claims (1)
- １ ウレアーゼの安定剤としてＮ−アセチルシス
テイン、エチレンジアミンテトラ酢酸塩、および
二糖類を含有することを特徴とする安定なウレア
ーゼ製剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57191820A JPS5982318A (ja) | 1982-11-02 | 1982-11-02 | 安定なウレア−ゼ製剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57191820A JPS5982318A (ja) | 1982-11-02 | 1982-11-02 | 安定なウレア−ゼ製剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5982318A JPS5982318A (ja) | 1984-05-12 |
| JPS6331446B2 true JPS6331446B2 (ja) | 1988-06-23 |
Family
ID=16281062
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57191820A Granted JPS5982318A (ja) | 1982-11-02 | 1982-11-02 | 安定なウレア−ゼ製剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5982318A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20200040323A1 (en) * | 2018-07-31 | 2020-02-06 | Fresenius Medical Care Holdings, Inc. | Urease Purification And Purified Urease Products Thereof And Sorbent Cartridges, Systems And Methods Using The Same |
-
1982
- 1982-11-02 JP JP57191820A patent/JPS5982318A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5982318A (ja) | 1984-05-12 |
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