JPH0327200B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は抗生物質OA−6129B₂の新規な製造方
法に関し、さらに詳しくは発酵法による下記式 で示される抗生物質OA−6129B₂の選択的製造方
法に関する。 本発明者らは先に下記式 式中、Ｒは水素原子、−OH又は−OSO₃Hを表
わす、 で示される一連の新規な抗生物質がストレプトミ
セス・エスピーOA−6129（微工研条寄第11号）
の発酵により生産されることを見い出し、それぞ
れ抗生物質OA−6129A（Ｒ＝Ｈ）、OA−6129B₁
（Ｒ＝OH、５、６−cis体）、OA−6129B₂（Ｒ＝
OH、５、６−trans体）及びOA−6129C（Ｒ＝
OSO₃H）と命名し提案した（ヨーロツパ特許出
願公開明細書第48999A1号、特開昭57−62280号
公報、特開昭57−70890号公報及び特開昭57−
95987号公報参照）。 上記生産菌株は抗生物質OA−6129A、OA−
6129B₁及びOA−6129B₂も生産するが、抗生物質
OA−6129Cを多く生産する傾向がある。しかし、
上記式（）の化合物をさらに有用な他の抗生物
質に誘導する場合には、Ｒ＝OSO₃Hである場合
の式（）の化合物、即ち抗生物質OA−6129C
よりも、むしろＲ＝OHである場合の式（）の
化合物、即ち抗生物質OA−6129B₁又はOA−
6129B₂の方が利用範囲が大きいと思われる。 そこで本発明者らは、抗生物質OA−6129B₁及
び／又はOA−6129B₂を選択的に生産する能力の
ある菌株を求めて鋭意研究を行なつた結果、上記
ストレプトミセス・エスピーOA−6129
（Soreptomyces sp.OA−6129）を変異処理して
得られるストレプトミセスエスピーOA−6129−
3N−504（Streptomyces sp.OA−6129−3N−
504）が、前記式（）で示される抗生物質OA
−6129B₂を選択的に生産することを見い出し本
発明を完成するに至つた。 しかして、本発明によれば、ストレプトミセ
ス・エスピーOA−6129−3N−504を栄養培地で
培養し、その培養物から下記式 で示される抗生物質OA−6129B₂を採取すること
を特徴とする抗生物質OA−6129B₂の製造方法が
提供される。 本発明の方法において使用される菌株、ストレ
プトミセス・エスピーOA−6129−3N−504は、
従来の文献に未載の新規な菌株であり、その菌学
的性質を示せば次のとおりである。 (1) 形態 顕微鏡下でよく分枝した基中菌糸より、直状
〜曲状（Straight〜flexuous）の気菌糸を伸長
し、輪生枝はみとめられない。成熟した胞子鎖
は10個以上の楕円〜円筒形をした胞子から成
り、胞子のうは認められない。胞子の大きさは
0.6〜1.0×0.7〜2.5ミクロン位で、胞子の表面
は平滑である。鞭毛胞子はみとめられない。 (2) 各種培地における生育状態 培養は特記しないかぎり28°〜30℃で行つた。
また色調の記載は主としてエツチ・デイ・トレ
スナーとイー・ジエー・バカス（H.D.Tresner
and E.J.Backus）著、ジヤーナル・オブ・ア
プライド・ミクロビオロジイー（Journal of
Applied Microbiology）11巻、４号、（1963
年）335〜338頁の方法に従い、〔 〕内に示す
符号〔CHMコード（code）〕はコンテイナ
ー・コーポレーシヨン・オブ・アメリカのカラ
ー・ハーモニー・マニユアル（Container
Corporation of AmericaのColor Harmony
Manual）を用いた。 (1) シユークロース・硝酸塩寒天培地： 黄灰〔2dc〕〜明るい灰黄茶〔3ge〕の中
等度生育上に、黄灰〔2dc〕〜灰黄ピンク
〔5dc〕の気菌糸を着生し、溶解性色素はみ
とめられない。 (2) グルコース・アスパラギン寒天培地： うす黄〔2db〕明るいオリーブ茶〔2ge〕
の良好な生育上に、明るい灰〔ｄ〕の気菌糸
を着生する。尚この気菌糸はおくれて灰黄ピ
ンク〔5dc〕となる。溶解性色素はみとめら
れない。 (3) グリセリン・アスパラギン寒天培地（ISP
培地−５）： 穏やかな黄ピンク〔4gc〕〜明るい茶
〔4ie〕の良好な生育上に、明るい灰〔ｄ〕〜
明るい灰赤茶〔5fe〕の気菌糸を着生する。
溶解性色素はみとめられない。 (4) スターチ無機塩寒天培地（ISP培地−
４）： うす黄〔2db〕〜灰色〔2fe〕の良好な生育
上に明るい灰〔ｄ〕の気菌糸を着生する。溶
解性色素は生成しない。 (5) チロシン寒天培地（ISP培地−７）： 灰黄〔3ec〕〜明るい茶〔4ie〕の生育上
に、明るい灰〔ｄ〕〜明るい茶灰〔3fe〕の
気菌糸を着生する。培地は極く僅かに茶色を
帯びる。 (6) 栄養寒天培地： うす黄〔2db〕または明るい黄〔2fb〕〜
明るいオリーブ茶〔2ge〕の良好な生育上
に、明るい灰赤茶〔5fe〕の気菌糸を着生す
る。溶解性色素はみとめられない。 (7) イーストエキス・麦芽エキス寒天培地
（ISP培地−２）： 穏やかな黄ピンク〔4gc〕〜明るい茶
〔4ie〕の良好な生育上に、灰黄ピンク〔5dc〕
或いはややおくれて明るい灰〔ｄ〕の気菌糸
を着生する。溶解性色素はみとめられない。 (8) オートミール寒天培地（ISP培地−３）： 灰黄〔3ec〕〜明るいオレンジ黄〔3ea〕、
或いは明るい灰黄茶〔3ge〕の良好な生育上
に、明るい茶灰〔3fe〕〜明るい灰赤茶
〔5fe〕の気菌糸を着生し、菌集落の周辺の培
地は僅かに褐色を呈す。 (9) リンゴ酸石灰寒天培地： 暗色〜黄灰〔2dc〕の中等度の生育上に、
明るい灰〔ｄ〕〜明るい灰赤茶〔5fe〕の気
菌糸を着生し、溶解性色素はみとめられな
い。生育菌集落の周辺にカルシウム塩の溶解
帯が見られる。 (10) ゲルコース・ペプトン・ゲラチン培地（20
℃培養） うす黄〔2db〕〜茶色の良好な生育上に白
色〔ｂ〕〜灰黄ピンク〔5cb〕の気菌糸を着
生する。培養長期（約３週間以上）にわたる
と褐色の溶解性色素を生成した。 (3) 生理的性質 (1) 生育温度範囲 イーストエキス・麦芽エキス寒天培地
（ISP培地−２）を用いて10°、20°、25°、30°、
34°、37°、40°、45°、50℃の各温度で実験の
結果、37℃では殆んど発育出来ない。40℃以
上では全く発育しない。その他の各温度では
生育がみとめられた。最適生育温度範囲は20
〜30℃と思われる。 (2) ゲラチンの液化：液化する。 (3) スターチの加水分解：分解する。 (4) 脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：凝固はしな
いが、ペプトン化する。 (5) メラニン様色素の生成： ペプトン・イースト・鉄寒天培地（ISP培
地−５）及びトリプトン・イーストエキス・
ブロス培地（ISP培地−11）ではメラニン様
色素の生成は認められなかつた。チロシン寒
天培地で極く僅かに茶色を呈するも、メラニ
ンの生成は痕跡程度である。 (4) 各種炭素源の同化性（プリドハム・ゴトリ
ブ寒天培地使用） (1) Ｌ−アラビノース ＋ (2) Ｄ−キシロース ＋ (3) Ｄ−グルコース ＋ (4) Ｄ−フラクトース ＋ (5) シユークロース 疑わしい (6) イノシトール − (7) Ｌ−ラムノース ＋ (8) ラフイノース − (9) Ｄ−マンニツト ＋ ＋は同化する、−は同化しない。 以上の菌学的性質よりOA−6129菌株は
Streptomyces属に属する菌株であつて、気菌糸
の形状はセクシヨンRF（Section Recti‐
lexibiles）と考えられ、胞子表面平滑であつた。
気菌糸の色調は大多数の培地、即ちオートミール
寒天、グリセリン・アスパラギン寒天、スター
チ・無機塩寒天等の培地では明るい灰色〔ｄ〕
で、灰色系（Gray series）の菌株である。しか
しシユークローズ・硝酸塩寒天、イーストエキ
ス・麦芽エキス寒天、及びグルコース・アスパラ
ギン寒天培地では培養時期に依つては灰黄ピンク
〔5dc〕の赤色系（Red series）を呈する事があ
る。また、基中菌糸の色は培養初期はいづれの培
地でもうす黄〜灰黄で、培養を続けると黄茶〜灰
黄茶或いは茶色の色調を示す様になる。メラニン
色素はペプトン・イーストエキス・鉄寒天培地中
及びトリプトン・イーストエキス・ブロス中にみ
とめられず、またその他の水溶性色素も多くの培
地で生成しなかつた。しかしチロシン寒天培地、
グルコース・ペプトン・ゲラチン培地及びオート
ミール寒天培地中に僅かに茶色の色素をみとめ
た。 本発明者等は本菌株をストレプトミセス・エス
ピーOA−6129−3N−504（Streptomyces sp.OA
−6129−3N−504）として、工業技術院微生物工
業技術研究所に、特許手続上の微生物の寄託に関
するブタペスト条約による国際寄託として昭和58
年８月５日に微工研条寄第334号（FERM BP−
334）として寄記した。 本菌株は前述のヨーロツパ特許出願公開明細書
や公開公報に記載され公知のストプトミセスエス
ピーOA−6129の変異処理により創製することが
できる。以下その変異処理法についてさらに詳し
く説明する。 すなわち、ストレプトミセス・エスピーOA−
6129を紫外線照射、放射線照射、化学変異誘起剤
処理等の通常の変異誘導方法によつて処理するこ
とにより、抗生物質OA−6129Cの生合成系が欠
失し、抗生物質OA−6129B₂を選択的に生産しう
る菌株を取得することができる。ここでは、化学
変異誘起剤処理法のうち、Ｎ−メチル−N′−ニ
トロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（NTG）を用い
た処理によつて変異を行つた場合について以下さ
らに詳細に説明するが、他の変異誘導方法によつ
ても目的の変異菌株を得ることができる。 (1) 変異処理 イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（ISP
培地−２）上で28℃、２週間培養したストレプ
トミセス エスピーOA−6129の斜面培養１本
の表面からかきとつた胞子をPH7.5の0.01Mリ
ン酸ナトリウム緩衝液９mlに懸濁し、ガラスフ
イルター（No.２）で過し、この液１mlに９
mlの前記リン酸バツフアーで希釈したのち、
NTGを最終濃度1000μｇ／mlになるように添
加し28℃で１時間保つ。このとき90％の殺胞子
効果があつた。NTG処理胞子液を2500×ｇで
20分間遠心分離し、胞子を0.85％生理食塩水に
懸濁し、適当に希釈して、その胞子懸濁希釈液
をISP培地−２上に塗布し、28℃で２ないし、
３週間培養を行いコロニーを形成させた。 (2) 変異菌株の単離法 上記の如くISP培地−２上に形成したコロニ
ーを捨い、ISP培地−２斜面培地上に移し28℃
で２週間培養を行つた。これらの各菌株の斜面
培地から１白金耳をSE−４種母培地〔牛肉エ
キス0.3％、バクトトリプトン0.5％、グルコー
ス0.1％、可溶性でんぷん2.4％、酵母エキス0.5
％、炭酸カルシウム0.4％、大豆粉（味の素(株)
製ミート特等）0.5％、PH7.0〕３mlを含む試験
管培地へ接種し、28℃で２日間振とう培養し
た。つぎにこの培養液0.5mlをG.M.培地（大豆
粉4.5％、グリセリン10％、K₂HPO₄0.2％、
MgSO₄・7H₂O0.1％、CaCO₃0.3％、CoCl₂5r／
ml、PH7.0）10mlを含む250ml三角フラスコに接
種し、28℃でロータリーシエーカー上４日間培
養した。 この培養上澄みを5μシリカゲル60F₂₅₄（メ
ルク社）にスポツトし、真空デシケーター中で
約10分間乾燥したのち、クロロホルム：メタノ
ール：Ｍ／100リン酸緩衝液（PH7.5）＝８：
６：１の展開溶媒で展開後、冷風で溶媒を除去
したのちエールリツヒ試薬にひたし、105℃で
５分間加熱して発色させ、抗生物質OA−
6129Cのスポツトが消失し、抗生物質OA−
6129B₂のスポツトを示した変異菌株を分離し
た。 これにより、当業者は本発明の目的に適合し
た微生物を容易に検索することができる。 本発明の方法によれば、抗生物質OA−6129B₂
は、上記菌株ストレプトミセス エスピー
OA6129−3N−504の胞子または菌糸を栄養源含
有培地に接種して、好気的に増殖させることによ
つて生産させる。 その栄養源としては、放線菌の栄養源として通
常使用されるもの、例えば炭水化物、窒素源、無
機塩などの同化できる栄養源を使用できる。例え
ば、ぶどう糖、グリセリン、麦芽糖、蔗糖、糖
蜜、デキストリン、テンプンなどの炭水化物や、
大豆油、落花生油、ラードなどの油脂、脂肪類の
如き炭素源；ペプトン、肉エキス、大豆粉、綿実
粉、乾燥酵母、コーンスチープリカー、酵母エキ
ス、脱脂乳、カゼイン、硝酸ナトリウム、硝酸ア
ンモニウム、硫酸アンモニウムなどの窒素源：燐
酸二カリウム、食塩、炭酸カルシウム、硫酸マグ
ネシウムなどの無機塩が使用でき、必要により微
量金属例えばコバルト、マンガンなどを添加する
ことができる。栄養源としては、その他、抗生物
質OA−6129B₂の生産を阻害しないものであれ
ば、いずれの栄養源でも使用でき、公知の放線菌
の培養材料はいずれも使用できる。また、加熱殺
菌時及び培養中における発泡を抑えるため、シリ
コン、植物油などの消泡剤を添加することもでき
る。 上記の如き栄養源の配合割合は特に制約される
ものではなく、広範囲に亘つて変えることがで
き、使用する前記菌株にとつて好適な栄養源の組
成及び配合割合は、当業者であれば簡単な小規模
実験により容易に決定することができる。 また、栄養培地は培養に先立ち殺菌することが
でき、この殺菌の前又は後で、培地のPHを４〜９
の範囲、特にPH６〜８の範囲に調節するのが有利
である。 かかる栄養培地でのストレプトミセスエスピー
OA−6129−3N−504の培養は原則的には、一般
の放線菌による抗生物質の製造において通常使用
されている方法に準じて行なうことができる。通
常好気的条件下に培養するのが好適であり、通常
撹拌しながら及び／又は通気しながら行なうこと
ができる。また、培養方法としては静置培養、振
盪培養、通気撹拌をともなう液内培養のいずれも
使用可能であるが、液内培養で有利である。 使用しうる培養温度は菌株OA−6129−3N−
504の発育が実質的に阻害されず抗生物質OA−
6129B₂を生産し得る範囲であれば特に制限され
るものではないが、一般に20〜40℃好ましくは25
〜35℃の範囲内の温度が好適である。 また、培養を好適に行なうため、必要に応じ
て、培養中に培養物のPHを４〜９、特に６〜８の
範囲に調節することができる。 大規模な大量培養の場合、適宜種母培養を行な
い、これを栄養培地に接種し、液体培養するのが
有利である。 培養は通常抗生物質OA−6129B₂が充分に蓄積
するまで継続することができる。その培養時間
は、培地の組成や培養温度、使用生産株等により
異なるが、通常30〜90時間の範囲である。 培養中の抗生物質OA−6129B₂の蓄積量は前述
のシリカゲルを用いる薄層クロマトグラフイーに
より定量することができ、それにより最適蓄積量
を容易に知ることができる。 かくして、培養物中に蓄積された抗生物質OA
−6129B₂は水溶性であり、主として菌体外に存
在するので、有利には、培養後、過、遠心分
離、抽出などのそれ自体公知の分離法によつて菌
体を除去し、その液、上澄液、抽出液などより
回収される。 回収はそれ自体公知の種々の方法で行なうこと
ができ、特にカルボン酸型抗生物質の回収のため
に屡々利用される方法が有利に適用される。例え
ば、低PHにおける酢酸エチル、ｎ−ブタノール等
での溶媒抽出及びその溶媒層から高PH水層への転
溶；活性炭、アンバーライトXAD（ローム・アン
ド・ハース社製）、ダイヤイオンHP−20（三菱化
成社製）等による吸着と、メタノール水、アセト
ン水等による溶出；ダウエツクス１×２（ダウケ
ミカル社製）、QAE−セフアデツクスＡ−25（フ
アルマシア社製）、DEAE−セルローズワツトマ
ンDE−32（ワツトマン社製）、DEAE−セフアデ
ツクスＡ−25（フアルマシア社製）等のイオン交
換樹脂による吸着及び溶出；セフアデツクスＧ−
10（フアルマシア社製）、バイオ・ゲルＰ−２（バ
イオ・ラツド社製）、等によるゲル過；セルロ
ーズ、アビセルSF（アメリカン・ビスコース社
製）等のカラムクロマトグラフイー；アセトン等
の溶剤添加による強制沈殿法；凍結乾燥法、等を
それぞれ単独で或いは適宜組合せて、さらに場合
によつては反復して使用される。 回収精製工程中の抗生物質OA−6129B₂の挙動
もまた、前述の薄層クロマトグラフイーにより定
量測定することができ、かくして、抗生物質OA
−6129B₂が得られる。 本発明の方法によれば、培養条件によつて、培
養物中に抗生物質OA−6129Aが少量生産される
こともあるが、抗生物質OA−6129B₁やOA−
6129Cは実際上生産されることがなく、抗生物質
OA−6129B₂が選択的に生産される。 本抗生物質OA−6129B₂は、一般に遊離形のも
のよりも塩の形の方がより安定であるから、後述
する医薬用途に使用したり、さらに誘導体に転換
する場合の中間体として使用したり、或いは前記
した精製工程に付する場合等においては、塩の形
で処理することが好適である。 抗生物質OA−6129B₂のその塩形への転化はそ
れ自知の方法に従い、該抗生物質OA−6129B₂を
無機又は有機の塩基で処理することにより行なう
ことができる。この造塩反応に使用し得る無機又
は有機の塩基としては、例えば、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム、水酸化リチウムの如きアル
カリ金属の水酸化物；水酸化カルシウム、水酸化
マグネシウムの如きアルカリ土類金属の水酸化
物；モノエチルアミン、ジメチルアミン、トリメ
チルアミン、モノエタノールアミン、ジエタノー
ルアミン、ベンザチン、プロカインの如き第一
級、第二級又は第三級の有機アミン等が挙げられ
る。 本発明の方法により製造される抗生物質OA−
6129B₂は、前述のヨーロツパ特許出願公開明細
書に記載されているように広範囲の抗菌活性を有
しており抗菌剤としての用途が考えられると共
に、さらに有用な抗生物質に誘導体に導くための
合成中間体としての用途も考えられる。 次に実施例により本発明をさらに説明する。な
お、以下の実施例において用いる抗菌活性物質の
定量分析は、それ自体公知の抗生物質を指標とし
て、前述の薄層クロマトグラフイーにより行つ
た。 実施例 〔Ａ〕 500ml容エルレンマイヤー・フラスコに
100mlの下記組成の種母培地（SE−４）を入
れ、常法により、121℃で15分間殺菌した。一
方、ストレプトミセス・エスピーOA−6129
（Streptomyces sp.OA−6129）（FERM BP−
11）から得られた変異株3N−504株（FERM
BP−334）を胞子を充分着生させ、この１白金
耳を上記種母培地に接種し、28℃で48時間ロー
タリーシエーカー（200rpm、振幅７cm）で振
とう培養した。この種母培地100mlを、下記組
成の生産培地（GM−３）5.0を入れた10
容ジヤー・フアーメンターに接種し、溶存酸素
計で培養液中の溶存酸素濃度（％飽和）が10％
以下とならぬように回転数を制御して、通気量
５／min、温度28℃で90時間通気撹拌培養し
た。消泡剤としてシリコンKM−75〔信越化学
(株)製〕を0.1％使用した。経時的に培養液をサ
ンプリングし、遠心分離した上澄液について抗
生物質OA−6129化合物の定量を前述の薄層ク
ロマトグラフイーを使つておこなつた。各培養
時間における分析結果を下記の表に示す。

【表】 種母培地（SE−４）の組成： （ｗ／ｖ） グルコース 0.1％ 可溶性澱粉 2.4％ 牛肉エキス 0.3％ ミート 0.5％ バクトトリプトン 0.5％ CaCO₃ 0.2％ 水道水 生産培地（GM−３）の組成： グリセリン 8.0％ 大豆粉 3.0％ 台湾酵母 1.0％ MgSO₄ 0.2％ K₂HPO₄ 0.2％ CaCO₃ 0.3％ CoCl₂ 5μｇ／ml 〔Ｂ〕 上記〔Ａ〕で得られた90時間培養後の発
酵液4.5に水道水を加えて6.0とし、トプコ
パーライトNo.34（東興パーライト(株)製）を添加
したのち、ヌツチエで固型物を分離し、4.0
の液（）を得た。次いで固型物を再び水道
水に溶かして4.0とし、ヌツチエで過をし
て2.0の液（）を得た。液（）と
（）をあわせ、ダイヤイオンHP20レジンを
400ml充てんしたガラスカラム（40mm×320mm）
に通液速度400ml／hrの速度で吸着させた。400
mlの蒸留水でカラムを水洗したのち、５％
（ｖ／ｖ）、10％（ｖ／ｖ）及び15％（ｖ／ｖ）
のアセトン水で段階的にアセトン濃度をあげな
がら溶出した。１区分を15mlとし、その溶出液
を分画し、薄層クロマトグラフイー法で分析し
てOA−6129B₂を主とする画分33〜画分57の区
分を集め430mlを得た。OA−6129B₂と共に少
量生産されたOA−6129Aは画分59から画分66
に含有されていた。 次に前記OA−6129B₂画分を予め0.01Mのリ
ン酸緩衝液（PH8.0）で平衡化したダイヤイオ
ンPA306Sを充填したカラム（17.5mm×250mm）
に吸着させ、100mlの蒸留水で充分水洗したの
ち、食塩濃度が０から４％まで直線的に変化す
る食塩水合計1.0で溶出した。１区分を５ml
として分画した。各画分を薄層クロマトグラフ
イー法で分析し、OA−6129B₂を含有する画分
33から画分55までを集め130mlを得た。この画
分を0.01Mリン酸緩衝液（PH8.0）で予め平衡
化したダイヤイオンPH20カラム（15.0mm×430
mm）に吸着させ、この溶出液をアセトン濃度が
０から20％まで直線的に変化するアセトン水合
計600mlで溶出した。１区分を５mlとして、そ
の溶出液を分画した。各分画を薄層クロマトグ
ラフイー法で分析し、OA−6129B₂を含有する
画分41から画分61までの画分を集め200mlを得
た。これを常法に従つて凍結乾燥し、180mgの
淡黄色粉末を得た。この粉末の純度は薄層クロ
マトグラフイー法で51％であつた。 〔Ｃ〕 前記〔Ｂ〕で得た凍結乾燥品のうち150
mgを約10mlの蒸留水にとかしたのち、予め、
0.01Mリン酸緩衝液で平衡化したQAEセフア
デツクスA25レジンカラム（10mm×900mm）に
吸着させた。蒸留水約100mlで水洗したのち、
食塩濃度が０から２％まで直線的に変化する食
塩水合計600mlで溶出した。１区分を５mlづつ
分画し、その溶出液を分画した。各画分を薄層
クロマトグラフイー法で分析することにより、
画分37から画分47までのOA−6129B₂画分100
mlを得た。このOA−6129B₂画分を予め0.01M
リン酸緩衝液（PH8.0）で平衡化したダイヤイ
オンCHP20カラム（10mm×90mm）に吸着させ、
カラムを少量の蒸留水で洗つたのち、アセトン
濃度が０から10％まで直線的に変化するアセト
ン水、合計800mlで溶出した。１区分を５mlづ
つ分画し、その溶出液を分画した。各画分を薄
層クロマトグラフイー法で分析し、エーリツヒ
試薬で発包する画分89〜画分119あわせて180ml
を得た。これを凍結乾燥し、39mgの淡黄色粉末
を得た。この粉末は、バイオオートグラフイー
及び下記のNMR、UV、IRの測定値より、抗
生物質OA−6129B₂であることを確認した。な
お、UVの吸光度から求めたこの物質の純度は
約98％であつた。 NMRスペクトル（溶媒：D₂O、内部標準
DSS） 〓ppm： 0.87（3H、ｓ、

【式】）、 0.92（3H、ｓ、

【式】）、 1.28（3H、ｄ、Ｊ＝7.0Hz、

【式】）、 2.45（2H、ｔ、Ｊ＝6.5Hz、NH−CH₂−CH₂−
CO）、 2.75−3.60（11H、ｍ、Ｃ−4H₂、４−6H、 Ｓ−CH₂−CH₂−NH、NH−CH₂−CH₂−
CO、

【式】）、 3.94（1H、ｓ、

【式】）、 3.95−4.35（2H、ｍ、Ｃ−5H、

【式】）。 UV吸収スペクトル 0.01Mリン酸緩衝液（PH8.4） max ｎｍ（ε）＝300（5400） IR吸収スペクトルν^KBy _naxcm^-1 1760（β−ラクタム） 1660（アミド） 1600（ガルボキシレート）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ ストレプトミセス・エスピ−OA−6129−3N
   −504を栄養培地で培養し、その培養物から下記
   式 で示される抗生物質OA−6129B₂を採取すること
   を特徴とする抗生物質OA−6129B₂の製造方法。